（外科学专业论文）弹性蛋白、原纤维蛋白1及胶原在腹股沟疝腹横筋膜中的表达与分布.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文弹性蛋白、原纤维蛋白1 及胶原在腹股沟疝腹横筋膜中的表达 与分布 前言6 刚舌。 材料与方法6 结果9 附图、附表1 0 讨 仑18 参考文献2 3 综j 盔2 6 致谢3 5 个人简历3 6 中文摘要 弹性蛋白、原纤维蛋白一1 及胶原在腹股沟疝腹横筋膜中的表达 与分布 摘要 目的：比较弹性蛋白( e l a s t i n ) 、原纤维蛋白一l ( f i b r i l l i n 一1 ) 与 胶原在腹股沟直疝及斜疝患者腹横筋膜的表达与分布，以期获得对腹股沟 疝尤其直疝病理生理的进一步认识。 方法：3 0 例腹横筋膜组织取自2 0 0 8 年1 2 月至2 0 0 9 年1 0 月在承德 医学院附属医院行无张力疝修补术患者。其中直疝1 3 例( 男l l 例，女2 例) ，斜疝1 7 例( 男1 3 例，女4 例) 。患者年龄2 8 - 6 7 岁，并排除其他系 统疾病( 如糖尿病，系统感染，恶性肿瘤等) 及吸烟患者。腹横筋膜取材 在远离疝囊的相对正常的内侧腹横筋膜处切取标本o 7 一l c m 2 ，标本切取后 放入1 0 0 m m o l l 中性福尔马林溶液中固定备用。所用标本经1 0 0 m m o l l 福尔马林溶液固定2 4 小时，修整组织块常规方法制成蜡块。蜡块连续切 片后用h e 染色法观察所取组织情况。分别应用鼠抗人弹性蛋白单克隆抗 体及兔抗人f i b r i l l i n - 1 多克隆抗体进行免疫组化，检测腹横筋膜组织中 弹性蛋白及f i b r i l l i n - 1 的表达与分布情况。以p b s 溶液代替一抗做空白 对照。切片经脱蜡后p b s 冲洗，用过氧化氢阻断内源性过氧化物酶的活性， 微波抗原修复冲洗后滴加5 0ul 一抗，室温下孵育6 0m i n 。应用即用型 m a x v i s i o n 佃试剂盒，按其说明书操作。应用d a b 显色法。显色后采用 o l y m p u sb x 51 型光学显微镜观察并摄片。应用m a s s o n 三色法对胶原进行 染色。染色后用显微镜观察，摄取图像。图像采用i m a g e p r op l u s6 0 软件进行分析，每张切片随机取1 0 个4 0 l o 倍视野，测定每个视野累计 光密度( i o d ) 值，以1 0 个视野的平均值来表示。采用s p s s l1 5 统计软件 进行统计，两组间比较采用t 检验，p o 0 5 为差异有统计学意义。 结果：h e 染色显示所取组织为腹横筋膜。免疫组化染色显示：直疝 患者腹横筋膜弹性蛋白排列紊乱，断裂，部分区域聚集。斜疝患者腹横筋 膜弹性蛋白和直疝相比排列较整齐，呈连续分布。原纤维蛋白一1 在直疝 和斜疝患者腹横筋膜的分布情况和弹性蛋白相似。m a s s o n 三色法显示胶 原在直疝患者腹横筋膜排列较斜疝紊乱，且含量减低。 中文摘要 用图像分析系统测得累计光密度( i o d ) 值显示直疝患者腹横筋膜弹 性蛋白含量( 2 5 2 6 7 6 7 0 1 7 4 ) 明显低于斜疝( 3 0 3 5 1 0 6 4 8 0 2 ) 患者， 差异具有显著性( p o 0 5 ) ；f i b r i l l i n 一1 的含量( 2 2 6 5 2 2 5 7 4 5 6 ) 在 直疝患者腹横筋膜明显低于斜疝( 2 7 3 5 1 0 6 3 9 7 3 ) 患者，差异具有显 著性( p o 0 5 ) 。胶原含量( 6 4 4 6 6 4 0 i1 9 0 2 2 1 7 ) 在直疝患者腹横筋膜 也明显低于斜疝( 8 2 7 9 2 2 0 2 6 7 0 6 0 8 ) 患者，差异具有显著性( p o 0 5 ) 。 结论：腹股沟直疝患者腹横筋膜弹性蛋白、f i b r i l l i n 一1 及胶原的含 量明显低于斜疝，且分布异常，导致了直疝腹横筋膜弹性及韧性较斜疝下 降，影响其抗击腹内生理和病理压力的能力，可能是腹股沟直疝发病原因 之，一。 关键词：弹性蛋白；原纤维蛋白一1 ；胶原；腹股沟疝；腹横筋膜 a n dc o l l a g e ni nt h et r a n s v e r s a l i sf a s c i ao fd i r e c ta n di n d i r e c ti n g u i n a lh e r n i a w i t hav i e wt oo b t a i naf u r t h e ra n db e t t e ru n d e r s t a n d i n go fp a t h o p h y s i o l o g yo f i n g u i n a lh e r n i a ，t h ed i r e c to n e i np a r t i c u l a r m e t h o d s ：t ot a k e3 0t r a n s v e r s a l i sf a s c i at i s s u e sf r o m3 0c a s e sw h ow e r e c a r r i e do u tt e n s i o n - f l e eh e r i n i p l a s t y , h o s p i t a l i z e df r o md e c e m b e r2 0 0 8t o o c t o b e r2 0 0 9 a m o n gt h e3 0c a s e sa g e df r o m2 8t o6 7 ，13 c a s e sa r ed i r e c t h e r n i a ( 11m a l e sa n d2f e m a l e s ) ，17c a s e sa r ei n d i r e c th e r n i a ( 1 3m a l e sa n d4 f e m a l e s ) i th a sb e e np r o v e dt h a tt h e yh a v en oo t h e rd i s e a s e s ( s u c ha sd i a b e t e s ， i n f e c t i o n s ，c a n c e r , e t c ) a n da r en o ts m o k i n gp a t i e n t s t h es p e c i m e n s ( o 7 1c m 2e a c h ) w e r ec u tf r o mr e l a t i v l yn o r m a lt r a n s v e r s a l i sf a s c i af a ra w a yf r o m h e r n i a ls a c ，t h e np u tt h e mi n t o10 0 m m o l ln e u t r a lf o r m a l i ns o l u t i o na n d f i x e dt h e mf o ru s e a f t e rf i x i n gt h es p e c i m e n si nt h es o l u t i o nf o r2 4h o u r s ，t h e n r e p a i rt h et i s s u e sa n dp r o d u c ew a xb l o c k sb yu s i n gc o n v e n t i o n a lm e t h o d s e r i a ls e c t i o n i n go ft h ew a xb l o c k sa n du s i n gh es t a i n i n gm e t h o dt oo b s e r v e t h et i s s u e s b yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r y ( u s i n gm o u s em o n o c l o n a la g a i n s t h u m a ne l a s t i na n t i b o d ya n dr a b b i ta n t i h u m a nf i b r i l l i n - 1p o l y c l o n a la n t i b o d y r e s p e c t i v e l y ) t od e t e c tt h ee x p r e s s i o na n dd i s t r i b u t i o no ff i b r i l l i n 一1a n de l a s t i n i nt h et r a n s v e r s a l i sf a s c i at i s s u e s e c t i o n s ，a f t e rd e w a x i n g ，w e r ew a s h e dw i t h p b s ，u s i n gh y d r o g e np e r o x i d et ob l o c ke n d o g e n o u sp e r o x i d a s ea c t i v i t y a f t e r m i c r o w a v ea n t i g e nr e t r i e v a lw a s h i n g ，d r o p5 0 山o fa n t i 一1 ，i n c u b a t ef o r6 0 m i n sa tr o o mt e m p e r a t u r e a p p l i c a t i o n t o u s em a x v i s i o n t mk i ta c c o r d i n gt o i t sm a n u a lo p e r a t i o n a p p l i c a t i o no fd a bc h r o m o g e n i cm e t h o d a f t e r s e c t i o n sw e r em a d ei nac o n v e n t i o n a lw a y , u s i n go l y m p u sb x 51 o p t i c a l m i c r o s c o p et oo b s e r v ea n dt a k er a d i o g r a p h y c o l l a g e ni nt h r e e c o l o rs t a i n i n g 3 英文摘要 w i t hm a s s o n s t a i n i n go b s e r v e dw i t ha m i c r o s c o p e ，u p t a k eo f t h e i m a g e a f t e rt h ep h o t ow e r et a k e n ，u s ei m a g e p r op l u s6 0s o f t w a r ef o ra n a l y s i s ， e a c hs l i c er a n d o m l yf r o m104 0 10 一f o l dv i s i o na n dd e t e r m i n et o t a lo p t i c a l d e n s i t yo fe a c hh o r i z o n ( i o d ) v a l u et ot h ea v e r a g eo f10t or e p r e s e n tt h e v i s i o n t h r o u g hs p s s 11 5s t a t i s t i c a ls o f t w a r e ，c o m p a r et w og r o u p su s i n gtt e s t ， p o 0 5f o rd i f f e r e n c eh a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n c e r e s u l t s ：i ti ss h o w nt h a tc u tt i s s u ew a sf r o mt r a n s v e r s a l i sf a s c i ab yh e s t a i n i n g i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n gs h o w e s ：t h ee l a s t i ni nd i r e c th e r n i a p a t i e n t s st r a n s v e r s a l i sf a s c i aw a si r r e g u l a r l ya r r a n g e d ，f r a c t u r e ，p a r to ft h e r e g i o n a la g g r e g a t i o n c o m p a r e dw i t hd i r e c ti n g u i n a lh e r n i ap a t i e n t s ，t h e e l a s t i n i ni n d i r e c th e r n i ap a t i e n t s st r a n s v e r s a l i sf a s c i aw a sm o r en e a t l y a r r a n g e d ，s h o w i n gac o n t i n u o u sd i s t r i b u t i o n n ed i s t r i b u t i o no ff i b r i l i n 一1i n t h ed i r e c th e r n i aa n di n d i r e c th e r n i ai np a t i e n t st r a n s v e r s a l i sf a s c i aw a ss i m i l a r w i t he l a s t i n m a s s o nt r i c h r o m es t a i n i n gs h o w st h ec o l l a g e ni nd i r e c th e m i a p a t i e n t s w i t ht r a n s v e r s a l i sf a s c i aw a sm o r ec o n f u s e dt h a nt h ei n d i r e c t h e r n i a ，a n dt h ec o n t e n tw a s1 0 w e r t h ev a l u em e a s u r e db yi m a g ea n a l y s i ss y s t e mt o t a lo p t i c a ld e n s i t y ( i o d ) s h o w st h a tt h ee l a s t i nc o n t e n t ( 2 5 2 6 7 6 + 7 0 1 7 4 ) i nd i r e c th e m i ap a t i e n t s s t r a n s v e r s a l i sf a s c i aw a s s i g n i f i c a n t l y l o w e rt h a nt h a ti n i n d i r e c t h e r n i a p a t i e n t s ( 3 0 3 5 1 04 - 6 4 8 0 2 ) ( p o 0 5 ) t h ef i b r i l l i n 一1c o n t e n t ( 2 2 6 5 2 2 4 - 5 7 4 5 6 ) i nd i r e c th e r n i ap a t i e n t sw a ss i g n i f i c a n t l yl o w e rt h a ni n d i r e c th e r n i a p a t i e n t s ( 2 7 3 5 1 0 - 土6 3 9 7 3 ) i nt r a n s v e r s a l i sf a s c i a ，t h ed i f f e r e n c ew a ss i g n i f i c a n t ( p o 0 5 ) t h es a m ea st h ec o l l a g e nc o n t e n t i nd i r e c th e r n i a ( 6 4 4 6 6 4 0 4 - 19 0 2 2 17 ) a n di ni n d i r e c t h e r n i a ( 8 2 7 9 2 2 0 士2 6 7 0 6 0 8 ) ，t h ed i f f e r e n c ew a s s i g n i f i c a n t ( p o 0 5 ) c o n c l u s i o n s ：c o m p a r e dw i t hi n d i r e c ti n g u i n a lh e r n i a ，t h ec o n t e n t so f e l a s t i n ，f i b r i l l i n - 1a n dc o l l a g e nw e r es i n g n i f i c a n t l yl o w e ri nd i r e c ti n g u i n a l h e r n i a ，a n dt h ed i s t i l b u t i o nw a sa b n o r m a l ，w h i c h1 e a dt ot h ef l e x i b i l i t yi n d i r e c ti n g u i n a lh e r n i al o w e rt h a nt h a ti ni n d i r e c to n e ，a n di m p a c ti t sc a p a b i l i t y o f a g a i n s ti n t r a - a b d o m i n a lp h y s i o l o g i c a la n dp a t h o l o g i c a lp r e s s u r e i tm i g h t b eo n eo ft h er e a s o n so ft h ed e v e l o p m e n to fd i r e c ti n g u i n a lh e r n i a 4 英文摘要 k e yw o r d s ：e l a s t i n ；f i b r i l i n - l ；c o l l a g e n ；i n g u i n a lh e n i a ；t r a n s v e r s a l i sf a s c i a 研究论文 弹性蛋白( e ia s tin ) 、原纤维蛋白一1 ( fi b r ii - n - 1 ) 及胶原在 腹股沟疝腹横筋膜中的表达与分布 * 鱼 匍罱 人们对腹股沟疝的诊治已有近5 0 0 年历史，然而其发生和修补后复发 的确切原因仍未完全明了。目前认为腹股沟斜疝主要原因为先天性鞘状突 未闭及腹股沟内环处的嵌闭机制削弱或丧失。关于腹股沟直疝近年来国 内外学者从间质结缔组织方面对其进行研究，发现腹股沟直疝患者腹横筋 膜胶原含量明显低于正常人和斜疝。认为腹壁组织弹性及张力的下降为直 疝发病主要原因瞳3 1 。弹性纤维是腹横筋膜中一个主要的不溶性细胞外基 质组分，它允许大范围的可变形性和被动反冲力，赋予结缔组织弹性，与 胶原的韧性互补。弹性纤维的中心由无定型的弹性蛋白构成，在弹性蛋白 外围包绕一层微原纤维壳套。现已证明弹性蛋白的变化与多种疾病有关， 如动脉瘤、盆底器官脱垂和应力性尿失禁等。f i b r i l l i n 一1 是微纤维主要 成分之一，参与组成弹性纤维。f i b r i l l i n - 1 在人体组织内广泛存在，其 基因的缺陷和敲除可以降低组织稳定性，导致马凡综合症h ，副。关于弹性 蛋白及f i b r i l l i n - 1 在腹股沟疝中的表达与分布的研究，尚未见文献报 道。本研究应用免疫组化方法对腹股沟直疝患者及斜疝患者腹横筋膜中弹 性蛋白、f i b r i l l i n - 1 及胶原的表达与分布进行研究，以期获得对腹股沟 疝尤其是直疝病理生理的进一步认识。 材料与方法 1 标本收集 3 0 例腹横筋膜组织取自2 0 0 8 年1 2 月至2 0 0 9 年1 0 月在承德医学院 附属医院行无张力疝修补术患者。其中直疝1 3 例( 男1 1 例，女2 例) ， 斜疝1 7 例( 男1 3 例，女4 例) 。患者年龄2 8 - 6 7 岁，并排除其他系统疾 病( 如糖尿病，系统感染，恶性肿瘤等) 及吸烟患者。腹横筋膜取材在远 离疝囊的相对正常的内侧腹横筋膜处切取标本0 7 1 c m 2 ，标本切取后放 入l o o m m o l l 中性福尔马林溶液中固定备用。 研究论文 2 蜡块制作 所用标本经l o o m m o l l 福尔马林溶液固定2 4 小时，修整组织块，依 次放入a f 液6 小时、9 5 乙醇1 2 小时、9 5 乙醇2 小时、1 0 0 乙醇2 小时、 1 0 0 乙醇2 小时脱水，二甲苯中透明共2 0 分钟，浸蜡4 5 小时，包埋， 休整蜡块，备用。 3 主要试剂 鼠抗人弹性蛋白单克隆抗体购自武汉博士德生物工程有限公司，兔抗 人f i b r i l li n 一1 多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司， m a x v i s i o n 俅即用型免疫组化试剂盒、d a b 显色试剂盒购于福建迈新生物技 术开发有限公司，m a s s o n 染色所需试剂购自北京天合力恩化学试剂公司。 4 主要仪器设备 4 1w m k 一0 8 型电热恒温鼓风干燥箱( 山东) 4 2l e i c ar m - 2 1 3 5 型石蜡切片机( 德国) 4 3o l y m p u sb x 5 1 型电子显微镜( 日本) 4 4 删一w 2 卜6 0 0 型电热恒温水浴箱( 上海) 4 5w z s - i i i a 型微量震荡器( 锡山) 4 6e l e c t r o l u xb c d - 2 8 0 e 型冰箱( 长沙) 4 7g i ls o n 微量移液器一套( 法国) 4 8g a l a n zw d 7 5 0 a s l 2 3 型微波炉( 广东) 4 9z p j 一1 型展片机( 天津) 5h e 染色 5 1 蜡块4 m 连续切片，贴于预先涂有a p e s 的载波片上，5 6 烘烤2 4 h 备用。 5 2 切片经二甲苯脱蜡( 5 分钟3 ) ，梯度酒精( 1 0 0 、9 5 i 、9 5 i i 各 5 分钟) 至水。 5 3 用吸水纸吸干水分，切片用苏木素染色5 m i n 后自来水稍洗 5 4l 盐酸水溶液分化5 - 1 0 秒。 5 5 自来水浸泡1 5 m i n 或温水( 约5 0 。c ) 5 m i n 。 5 6 置伊红液中2 m i n 。 5 7 常规脱水，透明，封片 6 弹性蛋白及原纤维蛋白一1 免疫组化方法 研究论文 6 1 切片经脱蜡后p b s 冲洗5 分钟。 6 2 以3 过氧化氢溶液室温( 1 5 - 2 0 ) 氧化物酶的活性。 6 3 组织切片置于枸橼酸盐缓冲液( o 1 m ， 保持9 2 * c - 9 8 1 6 分钟，行抗原修复。 孵育1 5 分钟以阻断内源性过 p h6 0 ) 中，用微波炉加热并 6 4 滴加一抗5 0u1 ( 弹性蛋白，1 ：1 0 0 ；原纤维蛋白一1 ，1 ：8 0 ) ，室温下 孵育6 0m i n 。以p b s 溶液代替一抗做空白对照。 6 5 每张切片加5 0u1 即用型m a x v i s i o n w 试剂，室温下孵育1 0 一1 5 分钟。 6 6d a b h 2 0 2 显色；苏木精复染核，常规脱水，透明，封片。 7m a s s o n 染色 7 i 切片在z e n k e r 液固定一晚，流水冲洗至无色。 7 2h a r r i s 苏木素染色5 分钟。 7 31 盐酸酒精分化。 7 4 流水冲洗数分钟。 7 5 丽春红酸性品红液染5 1 0 分钟。 7 6 蒸馏水稍冲洗； 7 71 磷钼酸水溶液处理5 分钟。 7 8 直接用亮绿染色5 分钟。 7 91 冰醋酸处理5 分钟 7 1 09 5 酒精脱水多次。 7 1 1 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 8 结果观察及分析 采用o l y m p u sb x 5 1 型光学显微镜观察并摄片。摄取图像后采用 i m a g e p r op l u s6 0 软件进行分析，每张切片随机取1 0 个4 0 1 0 倍视野，测 定每个视野累计光密度( i o d ) 值，以1 0 个视野的平均值来表示。 9 统计学处理 采用s p s s l l 5 统计软件，两组间比较采用t 检验，p o 0 5 为差异有 统计学意义。 研究论文 结果 患者情况及用图像分析系统测得腹横筋膜弹性蛋白与f i b r i i i i n 一1 及胶原累计光密度( i o d ) 值见表1 。直疝患者年龄偏大，但两组相比无 统计学差异。h e 染色显示所取组织为腹横筋膜( 图1 ) 。免疫组化染色显 示：直疝患者腹横筋膜弹性蛋白排列紊乱，断裂，部分区域聚集。斜疝患 者腹横筋膜弹性蛋白和直疝相比排列较整齐，呈连续分布( 图2 ) 。直疝 患者腹横筋膜f i b r i l l i n - i 与弹性蛋白相似排列紊乱，断裂。斜疝患者腹 横筋膜f i b r i l l i n - l 排列较整齐。( 图3 ) 。胶原在直疝患者腹横筋排列 较斜疝紊乱( 图4 ) 。 用图像分析系统测得累计光密度( i o d ) 值显示直疝患者腹横筋膜弹 性蛋白含量( 2 5 2 6 7 6 7 0 1 7 4 ) 明显低于斜疝( 3 0 3 5 1 0 6 4 8 0 2 ) 患者， 差异具有显著性( p o 0 5 ) ；f i b r i l l i n 一1 的含量( 2 2 6 5 2 2 5 7 4 5 6 ) 在 直疝患者腹横筋膜明显低于斜疝( 2 7 3 5 i 0 6 3 9 7 3 ) 患者，差异具有显 著性( p o 0 5 ) ；胶原含量( 6 4 4 6 6 4 0 1 9 0 2 2 1 7 ) 在直疝患者腹横筋膜 也明显低于斜疝( 8 2 7 9 2 2 0 2 6 7 0 6 0 8 ) 患者，差异具有显著性( p o 0 5 ) ( 表2 ，图5 ) 。 研究论文 附图 f i g 1t r a n s v e r s a l i sf a s c i ah es t a i n i n g ( 2 0 0 ) 研究论文 _ _ 一 a b f i g 2e x p r e s s i o no fe l a s t i ni n t h et r a n s v e r s a l i sf a s c i ao fd i r e c th e r n i aa n d i n d i r e c th e r n i a ( 4 0 0 ) ( ad i r e c th e r n i a ，bi n d i r e c th e r n i a ) 研究论文 a b f i g 3e x p r e s s i o no ff i b r i l l i n - 1i nt h et r a n s v e r s a l i sf a s c i ao fd i r e c th e r n i aa n d i n d i r e c th e r n i a ( 4 0 0 ) ( ad i r e c th e r n i a , bi n d i r e c th e r n i a ) 1 2 研究论文 a b f i g 4e x p r e s s i o no fc o l l a g e ni nt h et r a n s v e r s a l i sf a s c i ao fd i r e c th e r n i aa n d i n d i r e c th e r n i a ( 4 0 0 ) ( ad i r e c th e r n i a ，bi n d i r e c th e r n i a ) 1 3 研究论文 4 0 0 0 3 5 0 0 3 0 0 0 鸯2 5 0 0 2 0 0 0 1 5 0 0 1 0 0 0 3 5 0 0 3 0 0 0 。2 5 0 0 o 2 0 0 0 1 5 0 0 1 0 0 0 d i r e c ti n g u i n a lh e r n i ai n d i r e c ti n g u i n a l h e r n i a g r o u p a d i r e c ti n g u i n a lh e r n i ai n d i r e c ti n g u i n a l h e r n i a g r o u p b 1 4 研究论文 1 2 0 0 0 0 1 1 0 0 0 0 1 0 0 0 0 0 9 0 0 0 0 昌8 0 0 0 0 7 0 0 0 0 6 0 0 0 0 5 0 0 0 0 4 0 0 0 0 3 0 0 0 0 d i r e c ti n g u i n a lh e r n i a i n d i r e c ti n g u i n a l h e r n i a c g r o u p f i g 5e x p r e s s i o no fe l a s t i n ，f i b r i l l i n 一1a n dc o l l a g e ni nt h et r a n s v e r s a l i sf a s c i a o fd i r e c th e r n i aa n di n d i r e c th e m i a ( 宰p o 0 5 ) ( ae l a s t i n ，bf i b r i l l i n - 1 ，c c o l l a g e n ) 1 5 研究论文 附表 t a b l e1 e x p r e s s i o no fe l a s t i n ，f i b r i l l i n - 1 a n dc o l l a g e ni nt h et r a n s v e r s a l i s f a s c i ao fd i r e c th e r n i aa n di n d i r e c th e r n i ai na l ls p e c i m e n s 橐 性年 筌 别龄 l 男 6 7 2男鼹 3男5 2 4 男 5 7 5 男 6 男 撕 7 男 “ 8 男 钳 9 男 5 7 l o 男 “ l l男6 l 1 2女 酷 1 3女 豁 1 4 1 5 1 6 直疝组 弹性 蛋白 訇 f ： = 暑 胶 原 5 n 3 2 1 3 6 1 5 4 4 6 3 1 5 4 4 6 36 2 1 2 3 6 5 2 9 3 2 , 5 1 2 1 3 2 5 16 眇3 2 弛 2 8 4 4 _ 3 l2 5 6 3 2 15 8 9 7 6 3 3 3 0 4 9 7 02 4 4 9 7 05 6 9 3 2 1 1 斜疝组 性年 弹性蛋 别 龄 白 男 勰 男 酷 男 勰 男 “ 男 科 男 3 3 男 拍 男 “ 男3 男6 7 吗 f _ = = 暑 胶 原 2 9 3 6 72 n 3 6 71 0 8 髓5 7 3 3 7 5 9 6 42 7 5 9 6 4 0 8 6 5 3 7 3 3 9 5 4 42 4 9 5 4 4l1 5 6 3 7 8 6 3 0 4 5 6 41 7 4 s 3 3 7 7 5 92 9 7 7 5 98 s 5 4 7 2 l 2 s 9 8 4 42 s 9 8 4 4 3 1 6 5 2 13 1 6 5 2 1 2 9 9 6 4 02 7 9 6 舶 3 4 4 2 9 83 1 4 2 螺 6 9 1 5 6 1 4 l 0 0 2 7 1 6 9 4 9 8 6 3 2 5 蝴9 6 2 1 0 8 1 6 3 2 2 4 5 9 92 4 5 9 9 0 男 6 32 9 4 42 q 44 7 8 5 2 4 8 5 3 4 1 3 32 8 1 3 3 25 7 2 2 1 锄男4 4 3 2 9 5 4 73 2 9 5 4 7 男 5 33 8 9 5 6 03 8 9 5 6 0 女5 7 1 8 9 4 7 0l 搠7 女3 5 3 5 6 7 9 63 5 6 7 9 6 6 昭5 7 8 9 螂郧 4 鳃5 6 4 2 髓9 靳3 8 女5 9 2 9 5 4 6 32 9 5 4 6 31 0 0 6 2 3 1 2 1 7女6 2 1 2 5 9 4 31 6 5 9 4 31 2 7 1 2 5 9 8 1 6 研究论文 t a b l e2 e x p r e s s i o no fe l a s t i n ，f i b r i l l i n 一1 a n dc o l l a g e ni nt h et r a n s v e r s a l i s f a s c i ao fd i r e c th e m i aa n di n d i r e c th e r n i a ( 六c o m p a r e dw i t hi n d i r e c th e r n i a g r o u p ，p o 0 5 ) 组别 直疝斜疝 年龄 弹性蛋白( i o d ) 5 7 2 3 ：战i 7 7 5 0 0 6 4 - 1 2 8 4 2 5 2 6 7 6 4 - 7 0 1 7 4 3 0 3 5 1 0 士6 4 8 0 2 f i b r i l l i n 一1 ( i o d ) 2 2 6 5 2 2 士5 7 4 5 6 2 7 3 5 1 0 士6 3 9 7 3 胶原( i o d ) 6 4 4 6 6 4 0 4 - 1 9 0 2 2 1 7 8 2 7 9 2 2 0 4 - 2 6 7 0 6 0 8 1 7 研究论文 讨论 腹股沟疝是外科常见的疾病之一，全世界每年约2 0 0 0 万例病例，在 我国约2 0 0 4 0 0 万例。人们对腹股沟疝的诊治已有近5 0 0 年历史，然而关 于其发生和修补后复发的确切原因仍未完全明了。 腹股沟疝分为直疝和斜疝。腹股沟直疝是指从腹壁下动脉内侧、经 直疝三角突出的腹股沟疝。其发病率较斜疝为低，约占腹股沟疝的 5 ，多见于老年男性体弱者。一般并无明显症状，只在疝块外突时有 轻微酸胀感。体格检查令患者站立，疝块即在耻骨结节外上方突出， 呈半球状隆起。回纳后用手按压直疝三角区能阻挡疝块复出。腹股沟 直疝绝大多数属后天性，主要病因是腹壁发育不健全、腹股沟三角区 肌肉和筋膜薄弱。老年人因肌肉萎缩退化，使腹股沟管的间隙变得宽 大，同时腹内斜肌、腹横肌和联合肌腱的支持保护作用也减弱，当有 慢性咳嗽、习惯性便秘或排尿困难而致腹内压增高时，腹横筋膜反复 遭受腹内压力的冲击，造成损伤、变薄、腹腔内脏即逐渐向前推动而 突出，形成直疝。腹股沟斜疝是指疝囊从腹壁下动脉外侧的内环突出， 向内、向下进入腹股沟管，再穿出腹股沟管皮下环，可突入阴囊内或 大阴唇前端的疝。腹股沟斜疝是最常见的腹外疝，发病率约占全部腹外 疝的9 0 ，或占腹股沟疝的9 5 。男性占绝大多数，右侧比左侧多见。 腹股沟斜疝有先天性和后天性两种。前者的发病原因为腹膜鞘状突未闭即 先天性发育不良导致腹股沟管生理嵌闭机制缺陷。胚胎早期，睾丸位 于腹膜后第2 3 腰椎旁，以后逐渐下降，同时在未来的腹股沟管深环处 带动腹膜、腹横筋膜并经腹股沟管逐渐下移，并推动皮肤而形成阴囊。随 之下移的腹膜形成一鞘突，睾丸则紧贴在其后壁。鞘突下段在婴儿出生后 不久成为睾丸固有鞘膜，其余部分即自行萎缩闭锁而遗留一纤维索带。如 鞘突不闭锁或闭锁不完全，就成为先天性斜疝的疝囊。右侧睾丸下降比左 侧略晚，鞘突闭锁也较迟，故右侧腹股沟疝较多。腹股沟斜疝的发病原因 除了腹股沟部有先天性缺损外，腹内斜肌和腹横肌的发育不全也起主要作 用。腹股沟管外环处出现可复性肿块是腹股沟斜疝最重要的临床表 现。 手术是迄今为止治疗腹股沟疝最有效的方法，但其术后复发率较高的 研究论文 问题至今尚未完全解决。传统的腹股沟疝修补术常有较高的复发率和并发 症，文献报道其术后复发率高达1 0 1 5 【6 】，无张力疝修补术的复发率 l 左右 7 1 。无张力疝修补术是以人工材料作为补片，用以加强腹股沟管 后壁，做到正常解剖层次的对合。虽然无张力疝修补术有效地降低了腹股 沟疝复发率，但疝修补材料会引发一些并发症。如：腹股沟区疼痛、使用 补片的局部区域僵硬不适、浆液肿和补片感染、缺血性睾丸炎和睾丸萎缩 等。充分利用了不同材料特点的各种复合型材料补片的出现大大减少了并 发症的发生。生物材料的发展又使疝的补片材料学出现了一个新的领域 【8 】。探讨腹股沟疝的发病机制，改善修补材料以降低腹股沟疝术后复发率 已成为目前的热点话题。近年来国内外学者从间质结缔组织方面对其进行 了大量研究，以探讨腹股沟疝发生和复发的生化因素，为减少其发病率与 复发率提供理论基础。 腹股沟疝在一些先天性结缔组织异常的疾病中发病率较高，如成骨不 全、皮肤松弛、埃勒斯当洛斯( e h l e r s d a n l o s ) 综合症、胡尔勒亨特 ( h u r l e r - h u n t e r ) 综合症和马凡( m a r f a n s ) 综合症等。在患有先天性髋关 节脱位的儿童中，腹股沟疝的发病率分别高于正常男女儿童的5 倍和3 倍。另外，腹股沟斜疝病人容易合并关节活动过度1 9 。结缔组织特别是弹 性蛋白破坏增加是腹主动脉瘤的重要致病因素，腹主动脉瘤患者腹股沟疝 的发病率与术后复发率均较高，结缔组织代谢缺陷既是腹主动脉瘤也是疝 的发生与复发原因 10 1 。吸烟者存在异常的结缔组织代谢。排除其他影响因 素，吸烟者2 年后疝复发率较未吸烟者高出2 倍。目前认为可能是吸烟诱 导了蛋白水解酶和抗蛋白水解酶系统的不平衡，从而改变了腹股沟区结缔 组织结构。吸烟是疝发生和复发的一个重要因素】。 由于腹股沟疝和结缔组织异常性疾病有密切关系，近年来国内外学者 从间质结缔组织，特别是胶原代谢异常等生化因素方面对其进行了研究。 腹横筋膜是维持腹股沟区腹壁张力的重要成分，该组织层抗击腹内生理和 病理压力的能力依赖于其组织中所含胶原纤维的状况和强度。p a n s 等 1 2 】 对6 3 例不同类型的腹股沟疝病人进行研究，发现其双侧腹横筋膜的伸展 性和弹性都明显低于非疝病人，胶原染色可见胶原架构稀疏、分离。陈双 等 2 】发现，在各型疝病人中，腹横筋膜胶原含量降低最为明显的是复发疝 组，其次为直疝组和斜疝组。胶原水平的下降可导致腹横筋膜张力的降低， 研究论文 成为腹股沟疝的危险因素。胶原分子中的脯氨酸和赖氨酸通过羟基化在胶 原分子内及分子间产生大量的交联和胶原糖基化，在胶原的稳定性上具有 重要作用。与斜疝和对照组相比，直疝病人腹横筋膜及疝囊组织中脯氨酸 和赖氨酸的羟基化比率明显降低【13 1 。并有研究表明直疝病人血浆及疝囊组 织中铜的含量明显低于对照组 14 1 。铜是赖氨酰氧化酶的重要辅助因子，而 赖氨酰氧化酶是催化胶原纤维的共价连接的重要酶类。体内缺铜时，赖氨 酸氧化酶的催化活性大大减弱，胶原纤维交联不全，影响细胞外基质的结 构和功能。动物实验进一步证实了胶原完整性在疝预防中的作用。在大鼠， 1 3 氨基丙晴能阻断赖氨酰氧化酶。全身应用1 3 氨基丙晴和切断内环可有 9 0 以上的雄性大鼠发生疝，单独应用1 3 氨基丙晴有6 一1 0 发生疝， 而行内环切断的有2 0 会发生疝【15 1 。该结果表明疝是在存在解剖学的缺 陷，同时有胶原交联异常的情况下发生的。 本研究结果显示直疝患者腹横筋膜胶原排列紊乱。斜疝患者腹横筋膜 胶原和直疝相比排列较整齐，呈连续分布。直疝患者腹横筋膜胶原含量明 显低于斜疝患者。该结果和国内外学者研究结果相一致，表明胶原含量及 完整