（预防兽医学专业论文）山羊三种病原行性研究与pcrrflp分析.pdf

学位论 本 研究成 了特别 仁在文 学位论 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院( 筹) 可以将学位 论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩 印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至年月止) 学位论文作者签名：“钆鞠 签字日期：7 , - oi1 年月占日 导师签名：r 签字日期：y - 订1 年易月8 日 、 3 2 方法1 7 3 3 结果2 0 3 3 1 菌株分离情况2 0 3 3 2 生化试验2 0 3 3 3 动物试验2 0 3 3 4 药敏试验2 3 3 3 5p c r 鉴定2 3 3 q l 讨论2 4 第4 章山羊奇异变形杆菌的分离鉴定及克隆测序2 7 4 1 材料2 7 4 2 方法2 8 4 3 结果3 2 4 3 1 病原分离3 2 4 3 2 游散行为分析3 2 4 3 3 生化鉴定3 4 4 3 4 小鼠l d s o 3 5 4 3 5 药敏试验3 5 4 3 6p c r 扩增。3 6 4 3 7 重组质粒的鉴定3 7 4 3 8 序列分析及系统发育树的构建。3 8 4 4 讨论3 9 第5 章 山羊奇异变形杆菌毒力因子z a p a 基因的克隆及蛋白结构预测4 1 5 1 材料z 1 1 5 2 方法4 1 5 3 结果4 3 5 3 1p c r 扩增4 3 5 3 2p c r 产物的回收4 4 5 3 3 重组质粒的鉴定4 4 5 3 4 序列分析4 5 5 3 5 生物信息学分析4 5 5 4 讨论4 8 第6 章山羊奇异变形杆菌1 6 sr d n a 和z a p a 基因的p c r r f l p 分析。5 1 摘要 山羊三种病原特性研究与p c r r f l p 分析 预防兽医学专业硕士研究生倪莉 指导教师王豪举副教授 摘要 山羊传染性胸膜肺炎( c o n t a g i o u sc a p r i n ep l e u r o p n e u m o n i a ，c c p p ) 是山羊特 有的急性或慢性高度接触性传染病，该疾病感染不同年龄阶段的山羊，常弓l 起胸 腔的病变，其临床特征为高热、咳嗽、呼吸困难、纤维素性胸膜肺炎、肺肝变和 胸腔积液，具有很高的发病率和死亡率。本试验从重庆渝北、北碚，西藏山南等 地区的病死山羊采集病料，采集部位主要为肺脏、鼻腔拭子、胸腔积液，其次为 心血、肝脏、脾脏、肾脏和淋巴结等；采用改良型h a r t l e y s 培养基，普通琼脂、鲜 血琼脂和l b 琼脂培养基分离培养病原，从6 8 只病死山羊分离到1 4 株病原菌，其 中4 株支原体，5 株山羊奇异变形杆菌，5 株大肠杆菌；本试验对山羊传染性胸膜 肺炎等病原进行分离鉴定、克隆测序、动物试验、药敏试验及部分生物学特性研 究，为c c p p 的诊断和预防提供理论基础。 1 山羊支原体的分离鉴定 为了研究c c p p 病原，采用改良型h a r t l e y s 培养基，从病羊肺脏分离病原。对 分离株进行糖发酵、精氨酸水解、尿素分解、四氮唑还原、膜斑形成、固醇需要 等生化试验，动物试验及药敏试验；根据丝状支原体簇成员共有的1 6 sr d n a 特异 性片段设计引物，进行p c r 扩增。分离到4 株病原，编号分别为b b 3 、b b 7 、b b 4 2 、 y b 2 ；生化试验结果表明分离株b b 7 、b b 4 2 生化特性与标准株p g 3 相同，分离株 b b 3 、y b 2 生化特性与p g 3 存在差异；b b 7 、y b 2 对小鼠有致病性，b b 3 、b b 4 2 对小鼠无致病性；分离株对头孢噻呋钠的m i c 值最低，说明分离株对头孢噻呋钠 最敏感，其次为泰乐菌素、红霉素、氟苯尼考等，而对林可霉素不敏感；分离株 和标准株均扩增出5 4 8b p 片段。结果表明分离株属于丝状支原体簇。 2 山羊奇异变形杆菌的分离鉴定及克隆测序 两南大学硕十学位论文 为了分离鉴定病原，采用普通琼脂、鲜血琼脂和l b 琼脂培养基，从病死山羊 肺脏等分离病原菌，对分离株进行游散行为分析、生化鉴定、动物试验和药敏试 验；根据细菌1 6 sr d n a 序列设计引物，对分离株进行p c r 扩增和克隆测序。分 离到5 株病原菌；分离株培养2 5h 3 5h 开始迁徙，迁徙距离主要随培养时间的延 长而增加，迁徙速度2 5h 4 5h 呈增长趋势，5h 5 5h 呈下降趋势；在相同的培养 时间下，分离株在o 5 琼脂的培养基上迁徙距离最远，其次为1 o 、1 5 、2 0 琼脂，说明迁徙距离与琼脂浓度呈负相关关系；分离株具有奇异变形杆菌的基本 生化特性；分离株均对小鼠有致病性，l d 5 0 为2 5 0 0 0 1 0 7c f u m l 1 4 4 4 5 3x1 0 7 c f u m l - 1 ；分离株对丁胺卡那霉素、头孢他啶敏感，对环丙沙星、恩诺沙星、诺氟 沙星、卡那霉素、庆大霉素、氟苯尼考等药物不敏感；分离株扩增出15 3 5b p 条 带，与奇异变形杆菌的同源率为9 9 5 9 9 8 。分离株鉴定为奇异变形杆菌。 3 山羊奇异变形杆菌毒力因子z a p a 基因的克隆及蛋白结构预测 为了研究山羊奇异变形杆菌的毒力因子，克隆z a p a 基因和预测推导的蛋白结 构。采用p c r 方法，对山羊奇异变形杆菌毒力因子z a p a 基因进行扩增、克隆及序 列测定；利用生物信息学软件预测z a p a 蛋白的信号肽、跨膜区、二级结构及b 细胞抗原表位。结果表明，z a p a 基因长为14 7 6b p ，编码4 9 1 个氨基酸，与参考 株的核苷酸序列同源性为9 9 5 9 ，氨基酸同源性为9 9 5 9 ；z a p a 蛋白存在信号 肽，无跨膜区；b 细胞表位可能位于6 9 7 1 ，7 8 8 4 ，1 3 6 1 3 9 ，1 9 7 1 9 9 ，3 5 3 3 5 6 ，3 7 1 3 7 3 ， 4 7 2 4 7 4 氨基酸区域内或附近。山羊奇异变形杆菌存在毒力因子z a p a 基因，z a p a 蛋白结构的预测为蛋白的表达及基因工程疫苗的研制提供理论基础。 4 山羊奇异变形杆菌p c r r f l p 分析 为了研究山羊奇异变形杆菌的多态性，对分离株1 6 sr d n a 和z a p a 基因进行 r f l p 分析。采用p c r 方法，分别扩增分离株的1 6 sr d n a 和z a p a 基因，胶回收 p c r 扩增产物；选用限制性内切酶e c o r i 、h i n d l i i 对1 6 sr d n a 基因进行r f l p 分析，选用内切酶b a l l 、d r a i 、v s p i 对z a p a 基因进行r f l p 分析；e c o r i 酶切产 生8 6 8b p 、6 6 7b p 片段，h i n d i i i 酶切产生14 6 2b p 、7 3b p 片段，月切z i 酶切产生6 3 3 b p 、4 7 4b p 、3 6 9b p 片段，d r a i 酶切产生7 9 6b p 、6 2 7b p 、4 9b p 、4b p 片段，v s p i 酶切产生8 6 4b p 、4 1 1b p 、1 1 5b p 、8 6b p 片段，均与电子酶切结果相符。结果表明 分离株1 6 sr d n a 和z a p a 基因均未产生限制性片段长度多态性，酶切位点未发生 改变，说明1 6 sr d n a 和z a p a 基因在一定程度上具有很高的保守性。 5山羊大肠杆菌的分离鉴定及克隆测序 m 两南大学硕十学位论文 i v a b s t r a c t s t u d yo n t h r e e e t i o l o g i cc h a r a c t e r i s t i co f i n f e c e dg oa t sa n da m 五1 v s i so fpc r r f l p d i s c i p l i n e ：p r e v e n t i v ev e t e r i n a r ym e d i c i n e c a n d i d a t e ：l in i a d v i s o r ：a s s o p r o f h a o j uw a n g a b s t r a c t c o n t a g i o u sc a p r i n ep l e u r o p n e u m o n i a ( c c p p ) ，as e v e r e ，a c u t e ，a n dh i g h l y c o n t a g i o u sr e s p i r a t o r yd i s e a s e ，a f f e c t sa l la g e sa n di sc h a r a c t e r i z e db yh i g l lf e v e r , c o u g h i n g ，h i g hm o r b i d i t ya n dm o r t a l i t y ，r e s p i r a t i o ni sa c c e l e r a t e da n dp a i n f u l t h e g r o s sl e s i o n so ft h ed i s e a s ea r et y p i c a l l yl i m i t e dt ot h et h o r a c i cc a v i t ya n dc h a r a c t e r i z e d b yf i b r i n o u sp l e u r o p n e u m o n i a , l u n gh e p a t i z a t i o n ，a n da c c u m u l a t i o no fp l e u r a lf l u i d i n t h i ss t u d y , s a m p l e sw e r et a k e nf r o mi n f e c t e dg o a t si nt h ea r e ao fy u b e ia n db e i b e ii n c h o n g q i n ga n ds h a n n a ni nt i b e t t h el u n g ，n a s a lc a v i t ya n dp l e u r a lf l u i dw e r et h em a i n c o l l e c t e dp o s i t i o n ，f o l l o w e db yh e a r t - b l o o d , l i v e r , s p l e e n ，k i d n e ya n dl y m p hn o d e s s o m ep a t h o g e n sw e r ei s o l a t e du s i n gm o d i f i e dh a r t l e y sm e d i u m ，o r d i n a r yc u l t u r e m e d i u m ，c u l t u r em e d i u mc o n t a i n i n gc o n yb l o o da n dl bm e d i u m f o u r t e e ns t r a i n so f p a t h o g e n sw e r ei s o l a t e df r o m6 89 0 a t sd i e df r o mc c p p , o fw h i c ht h e r ew e r ef o u rs t r a i n s o fm y c o p l a s m a ，f i v es t r a i n so f 只m i r a b i l i sa n df i v es t r a i n so fe c o l i t h ep a t h o g e n so f c c p pa n ds e c o n d a r yi n f e c t i o nw e r ei s o l a t e da n di d e n t i f i e df r o mt h ei n f e c t e dg o a t s ； c l o n i n ga n ds e q u e n c i n g , a n i m a lt e s t , a n t i b i o t i cs u s c e p t i b i l i t yt e s ta n db i o l o g i c a l c h a r a c t e r i s t i c so fp a t h o g e n sw e r ea l s oc a r r i e do u t , w h i c hp r o v i d et h e o r e t i c a lb a s i sf o r t h ep r e v e n t i o na n dc o n t r o lo fc c p p 1i s o l a t i o na n di d e n t i f i c a t i o no fm y c o p l a s m a t os t u d yt h ee t i o l o g i ca g e n to fc c p p , t h ep a t h o g e n sh a db e e ni s o l a t e df r o mt h e l u n g so ft h ei n f e c t e dg o a t su s i n gm o d i f i e dh a r t l e y sm e d i u m ，n l cb i o c h e m i c a lt e s t s i n c l u d i n gc a r b o h y d r a t et e r m e n t a t i o n ，a r g i n i n eh y d r o l y s i s ，t e t r a z o l i u m ，f i l ma n ds p o t , r e q u i r e m e n to fs t e r i n ，a n i m a lt e s ta n d 柚t i b i o t i cs u s c e p t i b i l i t yt e s tw e r ec a r r i e do u t f o l l o w e db yt h ep c ra m p l i f i c a t i o na n da n a l y s i so fas p e c i f i cf r a g m e n to f1 6 sr d n a r e f e r r i n gt ot h em e m b e r so ft h e 肛m y c o i d e sc l u s t e r f o u rf i e l ds t r a i n s ，n a m e db b 3 ， b b 7 、b b 4 2a n dy b 2r e s p e c t i v e l y , w e r ei s o l a t e df r o mt h ei n f e c t e dg o a t s n er e s u l t s v 荫南大学硕七学位论文 s h o w e dt h a tt h es t r a i n sb b 7a n db b 4 2s h a r e dt h es a m eb i o c h e m i c a lp r o p e r t i e sw i t h t y p e s t r a i np g 3 ，w h e r e a sb b 3a n dy b 2w e r ed i s t i n c tf r o mp g 3i nb i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c s ；，n l ef i e l ds t r a i n sb b 7a n dy b 2h a dc e r t a i np a t h o g e n i c i t yt om i c e w h e r e a st h es t r a i n sb b 3a n db b 4 2s h o w e dn op a t h o g e n i c i t y ；n ef i e l ds t r a i n sw e r e m o s ts e n s i t i v et oc e f l i o f u rs o d i u m ，m o r es e n s i t i v et ot y l o s i n ，e r y t h r o m y c i na n d f l o r f e n i c o l ，b u tl e a s ts e n s i t i v et ol i n c o m y c i n ；p c rp r o d u c t sw i t h5 4 8b pi nl e n g t hw e r e a c q u i r e df r o mb o t hf i e l d s t r a i n sa n dt h et y p es t r a i n ，i n d i c a t i n gt h ef i e l ds t r a i n s f i e m e m b e r so ft h em m y c o i d e sc l u s t e r 2 i s o l a t i o n ，i d e n t i f c a t i o n ，c l o n i n ga n ds e q u e n c i n go f p m i r a b i l i sf r o mg o a t t oi s o l a t ea n di d e n t i f yp a t h o g e n s ，w h i c hw e r ei s o l a t e df r o mt h ei n f e c t e dg o a t s u s i n go r d i n a r yc u l t u r em e d i u m ，c u l t u r em e d i u mc o n t a i n i n gc o n yb l o o da n dl bm e d i u m s w a r m i n gb e h a v i o ra s s a y , b i o c h e m i c a lt e s t ，a n i m a lt e s ta n da n t i b i o t i cs u s c e p t i b i l i t yt e s t w e r ec a r d e do u t 1 6 sr d n ag e n e so ff i e l ds t r a i n sw e r ea m p l i f i e db yp e r , c l o n e da n d s e q u e n c e d t h e r ew e r ef i v es t r a i n si s o l a t e df r o mt h ei n f e c t e dg o a t s t h er e s u l t ss h o w e d t h a tt h es w a r m i n gm i g r a t i o no ff i e l ds t r a i n sb e g a na f t e rb e i n gc u l t u r e d2 5h - 3 5h ，t h e s w a r m i n gm i g r a t i o nd i s t a n c em a i n l yi n c r e a s e e dw i t ht h ei n c u b a t i o nt i m e ，t h es w a r m i n g m i g r a t i o nv e l o c i t yi n c r e a s e db e t w e e n2 5ha n d4 5h ，w h e r e a sd e c r e a s e db e t w e e n5h a n d5 5h ；w i t ht h es a n l ei n c u b a t i o nt i m e ，t h es w a r m i n gm i g r a t i o nd i s t a n c ew a sf a r t h e s t o n0 5 l bm e d i u m ，b u tt h ed i s t a n c eg r a d u a l l ys h o r t e n e do n1 0 ，1 5 a n d2 0 l bm e d i u mr e s p e c t i v e l y , i n d i c a t i n gt h a ts w a r m i n gm i g r a t i o nd i s t a n c ew a sn e g a t i v e l y c o r r e l a t e dw i t ha g a rc o n c e n t r a t i o n ；t h ef i e l ds t r a i n ss h a r e ds i m i l a rb i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i s t i c sw i t hp m i r a b i l i sa n dh a ds t r o n gp a t h o g e n i c i t yt om i c e ，t h el d s 0i nm i c e w a sb e t w e e n2 5 0 0 0 x 1 0 7c f u m l l a n d4 4 4 5 3 x 1 0 7e f u m l l ；t h ef i e l ds t r a i n sw e r e s e n s i t i v et oa m i k a c i na n dc e f l a z i d i m e ，w h e r e a ss h o w e dn os e n s i t i v i t yt oc i p r o f l o x a c i n ， e n r o f l o x a c i n ，n o r f l o x a c i n ，k a n a m y c i n ，g e n t a m i c i na n df l o r f e n i c o l ；t h ef r a g m e n to f1 5 3 5b pi ns i z ew e r ea p p l i f i e d t h ed n as e q u e n c i n gs h o w e d9 9 5 - 9 9 8 s i m i l a r i t y w i t hp m i r a b i l i sf o r1 6 sr d n 八w h i c hi n d i c a t et h a tt h ef i e l ds t r a i n sa r cp m i r a b i l i s 3 c l o n i n ga n dp r e d i c t i o no fp r o t e i ns t r u c t u r eo fv i r u l e n c ef a c t o r sz a p ag e n eo f p m i r a b i l i sf r o mg o a t t oc l o n ez a p ag e n e ，w h i c hi sa ni m p o r t a n tv i r u l e n c ef a c t o ro fp m i r a b i l i s ，a n d p r e d i c ti t sd e d u c e dp r o t e i n i nt h i ss t u d y , z a p ag e n ew a ss u b j e c t e dt op c ra m p l i f i c a t i o n ， m o l e c u l a rc l o n i n ga n dd n as e q u e n c i n g ；t h e g e n e s e q u e n c ew a st h e na p p l i e d t o v i d e v e l o p m e n to fg e n e t i ce n g i n e e r i n gv a c c i n e 4 a n a l y s i so f p m i r a b i l i sb yp c r - r f l p t os t u d yt h ep o l y m o r p h i s mo fp m i r a b i l i s ，b o t h1 6 sr d n aa n dz a p ag e n ew e 陀 a n a l y z e dw i t hp c r - p f l pa f t e rd i g e s t i o nb ys p e c i f i cr e s t r i c t i o ne n z y m e s 1 6 sr d n aa n d z a p ag e n eo ft h ef i e l ds t r a i n sw e r ea m p l i f i e db yp e rr e s p e c t i v e l y , t h ep c rp r o d u c t s w e r ep u r i f i e dw i t hg e le x t r a c t i o nk i t 1 6 sr d n ag e n eo ft h es t r a i n sw e r ed i g e s t e dw i t h r e s t r i c t i o ne n z y m e se c o r ia n dh i n d i i l ，a n dz a p ag e n ew e r ed i g e s t e dw i t hr e s t r i c t i o n e n z y m e sb a l l ，d r a la n dv s p i ；r e s t r i c t i o nm a ps h o w e dt h a tt h e r ew e r e8 6 8b p ，6 6 7b p f r a g m e n t sw i t hr e s t r i c t i o ne n z y m ee c o r i ；14 6 2b p ，7 3b pf r a g m e n t sw i t hh i n d i i i ；6 3 3 b p ，4 7 4b p ，3 6 9b pf r a g m e n t sw i t hb a l i ；7 9 6b p ，6 2 7b p ，4 9b p ，4b pf r a g m e n t sw i t h d r a i , a n d8 6 4b p ，4 1 1b p ，1 1 5b n8 6b pf r a g m e n t sw i t hv s p i , w h i c hs h a r e dt h es a m e r e s t r i c t i o ne n z y m ef r a g m e n t sw i t hs t a n d a r ds t r a i n t h es e g m e n t sf r o mp c r - r f l p a n a l y s i sd i s p l a y e dn od i s p a r i t yw i t hr e f e r e n c es t r a i nb o t hi nn u m b e ra n ds i z e a l lt h e r e s u l t si n d i c a t et h a tt h ef i e l ds t r a i n sa r cm e m b e r so fp m i r a b i l i sw i t hn op o l y m o r p h i s m 5 i s o l a t i o n ，i d e n t i f i c a t i o n ，c l o n i n ga n ds e q u e n c i n go f e c o l if r o mg o a t t oi s o l a t ea n di d e n t i f yp a t h o g e n s ，w h i c hw e r ei s o l a t e df r o mt h ei n f e c t e dg o a t s u s i n go r d i n a r yc u l t u r em e d i u ma n d c u l t u r em e d i u mc o n t a i n i n gc o n yb l o o d b i o c h e m i c a l t e s t ，a n i m a lt e s ta n da n t i b i o t i cs u s c e p t i b i l i t yt e s tw e r ea l s oc a r r i e do u t 1 6 sr d n ag e n e s o ff i e l ds t r a i n sw e r ea m p l i f i e d b yp c r ，c l o n e d a n ds e q u e n c e d f i v es t r a i n so f p a t h o g e n s ，w h i c hh a ds i m i l a rb i o c h e m i c a lc h a r a c t e r i s t i c sw i t he c o f i ，w e 他i s o l a t e d ；a l l f i e l ds t r a i n sh a dp a t h o g e n i c i t yt om i c e ，t h el d s oi nm i c ew a sb e t w e e n4 8 3 9 5 1 0 7 c f u m u l a n d1 0 3 7 5 1 0 8c f u m u l ：mf i e l ds t r a i n sw e r es e n s i t i v et ot r o b i c i na n d f u r a z o l i d o n e ，w h e r e a sh a dn os e n s i t i v i t y t oc e f l f i a x o n e s o d i u m ，c e f o p e r a z o n e ， c e p h a z o l i n ，a m p i c i l l i n ，c a r b e n i c i l l i n ，d o x y c y c l i n ea n df l o r f e n i c o l ；n ed n as e q u e n c i n g v 西南大学硕十学位论文 s h o w e d9 9 5 一9 9 8 s i m i l a r i t yw i t he c o l if o r1 6 sr d n a , w h i c hi n d i c a t et h a tt h e f i e l ds t r a i n sa r ee c o l i k e y w o r d s ：c c p p ；p m i r a b i l i s ；c l o n i n ga n ds e q u e n c i n g ；p c r r f l p 第1 章文献综述 第1 章文献综述 1 1山羊传染性胸膜肺炎病原概述 山羊传染性胸膜肺炎( c o n t a g i o u sc a p r i n ep l e u r o p n c u m o n i a ，c c p p ) 是山羊特 有的急性或慢性高度接触性传染病，该疾病感染不同年龄阶段的山羊，常引起胸 腔的病变，其临床特征为高热、呼吸困难、咳嗽、纤维素性胸膜肺炎、肺肝变和 胸腔积液，具有很高的发病率和死亡率【1 1 。该病在山羊饲养总量超过5 0 亿只的亚 洲和非洲地区较为流行【2 1 ，给该地区相关的经济造成较大的损失，同时对不存在该 病的周边国家的山羊饲养业造成了潜在的威胁。 c c p p 的病原通常为山羊支原体山羊肺炎亚种( mc a p r i c o l u m s u b s p c a p r i p n e u m o n i a e ，m c c p ) 【3 】，属于丝状支原体簇。丝状支原体簇共有六个成员，除 m c c p 夕b ，还包括山羊支原体山羊亚种( m y c o p l a s m ac a p r i c o l u ms u b s p c a p r i c o l u m ， m c c ) 、丝状支原体山羊亚种( 脱m y c o i d e ss u b s p c a p r i ，m i n e ) 、丝状支原体丝状亚 种坝胍m y c o i d e s s u b s p m y c o i d e sl a r g ec o l o n yl c ，m m m t c ) 型、丝状支原体丝状 亚种s c ( m y c o p l a s m am y c o i d e ss u b s p m y c o i d e ss c , m m m s c ) 型、牛支原体第七群 ( m y c o p l a s m as u b s p b o v i n eg r o u p7 ，r t , 9 7 ) 其中m e e p 、m e e 、m i n e 、m m m l c 都 可以引起山羊的呼吸系统疾病，但是m e e p i j i 起的病理变化常常局限于胸腔，而 1 v i i n c 、m m m l c 、m e e ：j i 起的疾病通常伴有其他器官的损害或除胸腔外其他部位的 病变。m m c 可引起肺部病变、乳房炎、关节炎和败血病，m m m t c 弓l 起的症状与 m 嗽相似，包括肺炎、乳房炎、多发性关节炎、角膜结膜炎和败血病【4 1 。m m m s c 是牛传染性胸膜肺炎的病原体，m b 9 7 是牛呼吸系统疾病的病原体。 1 2 奇异变形杆菌概述 奇异变形杆菌是变形杆菌属的一种，变形杆菌属还包括：潘纳变形杆菌( 只 p e n n e r i ) 、普通变形杆菌( 只v u l g a r i s ) 、产黏液变形杆菌( 只m y x o f a c i e n s ) 和h a u s e r i 变形杆菌( 只h a u s e r i ) i s 。奇异变形杆菌系无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性杆菌，大 小o 4 - 0 跏m x1 0 3 咄m 。多形性，呈球状或长丝状。有周生鞭毛，运动活泼；有 菌毛，可粘附于植物和真菌细胞表面，但不吸附动物组织细胞和红细胞；能迅速 分解尿素，产生大量硫化氢，并使苯丙氨酸脱氨基。 兼性厌氧，在普通琼脂培养基上生长良好，肉汤培养物上呈均匀浑浊且有菌 膜，鲜血琼脂培养基上有溶血现象，肠道鉴别培养基上形成无色菌落。在湿润的 固体培养基表面可呈“游散生长一或“迁徙生长，即形成一片薄膜状扩散的，厚 薄交替呈层层波状的同心环样菌苔。在培养基中加适当化学药品，如0 1 石碳酸、 0 4 硼酸、0 0 1 叠氮钠或者0 2m m o l l 对硝基苯甘油，或者添加的琼脂含量达 两南大学硕十学位论文 6 ，均可抑制其游散生长i 6 。 奇异变形杆菌是人泌尿道感染最常见的病原之一，尤其是长期需要导尿术或 泌尿道结构和功能异常的病人，以菌血症、膀胱炎、肾脏和膀胱结石、导尿管堵 塞、急性肾盂肾炎和发热为临床特征【7 】。除了泌尿道感染，奇异变形杆菌还能引起 各种社区或医院的获得性感染，包括呼吸道、创伤、烧伤、菌血症、新生脑膜脑 炎、积脓症和骨髓炎【引。在欧洲临床微生物实验室，奇异变形杆菌是仅次于大肠杆 菌的易分离的肠杆菌科成员，而在美国，医院感染奇异变形杆菌的比例高达3 【9 1 。 糖尿病患者脚感染是最常见的细菌感染，一旦感染，就渐渐恶化，治疗越来越困 难。当治疗对感染不起作用时，可能需要截肢。感染通常是多种微生物的混合感 染，而奇异变形杆菌常是条件致病菌1 1 0 】。最近研究表明奇异变形杆菌也是风湿性 关节炎的病原，风湿性关节炎是一种慢性、炎症性、多发性关节疾病【1 1 】。 奇异变形杆菌在自然界中广泛分布，存在于污水、土壤及人、畜粪便中，是 一种腐生性的条件致病菌；奇异变形杆菌也存在于人和动物消化道内，当机体抵 抗力下降时，可引起食物中毒、脑膜炎、腹膜炎、败血症、尿路感染及呼吸道感 染等【1 2 1 。近年来，国内不断有各种动物感染奇异变形杆菌的报道，在人类易引起 食物中毒、腹泻，在禽类多引起眼炎、腹泻和呼吸道症状，在熊猫、麇鹿、狐狸、 水貂、大黄鱼、鼠等动物常引起消化道、呼吸道、泌尿生殖道及体表溃烂症等症 状【1 3 - 1 4 1 。 1 3 奇异变形杆菌致病机制 奇异变形杆菌致病机制包括毒力因子粘附到宿主粘膜表面，损伤和侵入宿主 组织，逃避宿主免疫系统及铁离子的获取【1 5 l 等。奇异变形杆菌作用于机体，首先 在防御功能减弱的粘膜表面或伤口等部位大量繁殖，分泌透明质酸酶、蛋白溶解 酶等破坏靶细胞膜表面的免疫球蛋白或其他保护性粘蛋白；奇异变形杆菌通过菌 毛粘附到靶细胞表面，在靶细胞上分化生长，大量表达鞭毛和多糖荚膜，然后侵 入细胞和细胞间质，释放大量尿素酶、溶血素、溶蛋白酶等毒力因子，作用于感 染细胞，导致相应的组织和器官功能异常，引发各种疾病。在泌尿道感染中，细 菌通过输尿管或留置导尿管进入泌尿道，运输、定植于膀胱，再沿着输尿管上升 到肾脏，最后定植于肾脏并继续维持感染。在一些病例中，细菌可能进入毛细血 管，引发菌血症。 1 4 奇异变形杆菌毒力因子 奇异变形杆菌潜在的主要毒力因子，包括介导粘附到尿道上皮的菌毛，介导 迁徙运动的鞭毛，尿素酶、溶血素、细胞侵袭力、外膜蛋白及铁获得物等【1 6 1 。 2 第1 章文献综述 1 4 1 菌毛 奇异变形杆菌到达膀胱就产生大量的菌毛( f i m b r i a e ) 和粘附素，这些菌毛和粘 附素与泌尿道粘膜表面如膀胱上皮细胞发生特异性结合。在不同条件下，奇异变 形杆菌能够表达编码耐甘露糖变形杆菌菌毛( m 聊) 、奇异变形杆菌菌毛( p m f ) 、 适温菌毛( a t f ) 、非凝集菌毛( n a f ) 和类奇异变形杆菌菌毛( p m p ) 1 1 7 - 1 9 1 。 在奇异变形杆菌产生的粘附结构中，由于m i 汗菌毛在甘露糖作用下能凝集未 处理的红细胞而命名【冽。研究表明m r p 菌毛与肾盂肾炎联系紧密。虽然大多数 奇异变形杆菌分离株表达m r 口红细胞凝集素和耐甘露糖克雷伯氏菌( m 尉l 【) 红 细胞凝集素，但从急性