（外科学专业论文）twist基因联合ecadherin、arf检测在大肠癌组织中的意义.pdf

、：ii ，- 目录 中文摘要l 英文摘要3 研究论文t w i s t 基因联合e c a d h c r i n 、a r f 检测在大肠癌组织 中的意义 莆f 言 6 0 o o o o ooooo o 日i j 矗 材料与方法7 结果lo 刚i 羁1 4 附表l q j 论2 s 结论3 2 参考文献一3 4 综述1 w i s t 基嗣联合e c a d h e r i n 、a r f 检测在大肠癌组织中 的意义一3 s 致谢4 8 个人尚历。4 9 中文摘要 t w i s t 基因联合e c a d h e r i n 、a r f 检测在 大肠癌组织中的意义 摘要 目的：大肠癌( c o l o r e c t a lc a n c e r , c r c ) 包括结肠癌和直肠癌，是常见的 消化道恶性肿瘤之一。近年来随着经济发展和人民生活水平提高，生活方 式和生活环境变化，我国结直肠癌的发病率和死亡率均呈上升趋势。本研 究旨在检测人肠癌忠者的痛组织和正常大肠粘膜组织中t w i s t 蛋白表达水 平同开j 联合除测a r f 、e c a d h e r i n 蛋白：探讨t w i s t 、a r f 和e c a d h e r i n 蛋白表达与临床病理参数的关系：并进步阐述t w i s t 与a r f 、e c a d h e r i n 蛋白表达的相关性z 乏其在人肠痛诊断和预后； ，的作用及作用机理。 方法：选取河北医科火学笫l ! g 医院外二科2 0 0 9 年6 月- - 2 0 0 9 年1 2 月期问予术切除的6 0 例结戌肠痛患者的癞身i 织和正常结j 畅粘9 葵6 0 倒， 标本离体后黄予1 0 0 , 。r i ，性福尔马t 1 、r 。- i 固定后进行石蜡包j 晕4 u m 连续切 片备用。对所有标本采用免疫组织化! 娑两步方法分剔进行t w i s t 、a r f 、 e c a d h e r i n 蛋白检测，并对实验结裂应用s p s s l 5 0 统计软件包进行数据 分析处弹。 结果： 1t w i s t 的表达结果 6 0 例结直肠癌组织和正常结直肠粘膜中t w i s t 的表达f ； j 性率分别为 7 6 7 ( 4 6 6 0 ) 和3 0 o ( 1 8 6 0 ) ，t w i s t 在癌组织中的表达明显高于1 f 常 群i 腴( p 0 0 5 ) 与肿瘤的病理学分级、肠壁浸润深度、有无淋巴结转移、t n m 分期相关 ( p 0 0 5 ) 。 2a r f 的表达结果 6 0 例结直肠癌绁织和正常结直肠粘膜中a r f 的表达阳性率分别为 3 0 o ( 2 4 6 0 ) 和7 3 3 ( - i - 4 6 0 ) ，a r f 在癌组中的表达明显低于正常粘 腆( p o 0 5 ) ， 与呻癌的：亩理学分级、肠壁浸润深度、有无淋巴结转移、t n m 分期、有 无远处转移相关( p o 0 5 ) 。 中文摘要 3e c a d h e r i n 的表达结果 6 0 例结直肠癌组织和正常结直肠粘膜中e c a d h e r i n 的表达阳性率分 别为1 3 4 ( 8 6 0 ) 和6 0 o ( 3 6 6 0 ) ，e c a d h e r i n 在癌组织中的表达明显 低于正常粘膜( p 0 0 5 ) ，与肿瘤的病理学分级、肠壁浸润深度、有无淋巴结转 移、t n m 分期相关( p 0 0 5 ) 。 4t w i s t 、a r f 和e c a d h e r i n 之间的关系 6 0 例结直肠癌组织中，t w i s t 与a r f 共同阳性者1 0 例，共同阴性者 8 例，两者呈显著性相关关系( 产o 8 0 6 ，p 0 0 5 ) 。t w i s t 与e c a d h e r i n ：i 同阳性者3 例，共同阴性者7 例，两者呈显著性相关关系( f 0 7 5 4 ，p 0 0 5 ) 。 结论：t w i s t 可能成为结直肠癌诊断的分子生物学指标和分析结随肠 癌患者病程以及判断疾病预后的特异性指标之一。a r f 、e c a d h e r i n 蛋白 在大肠癌生长、侵袭转移过程中具有霞要作j = l ，t w i s t 可能通过铡 i a r f m d m 2 p 5 3 途径抑制细胞凋亡促进肿瘤细胞形成，同时影响 e c a d h e r i n 的袭达而促进上皮间质转化现象，参与大肠癌的发生和转移。， 关键词：大肠癌；t w i s t ；a r f ；e c a d h e r i n ；免疫组织化学 英文摘要 t h es i g n i f i c a n c et od e t e c tt w i s t 、e c a d h e r i n 、a r f g e n ei nc o l o r e c t a lc a r c i n o m a a b s t r a c t o b j e c t i v e ：c o l o r e c t a lc a n c e ri n c l u d i n gt h ec o l o nc a n c e ra n dr e c t a lc a n c e r i so n eo ft h em o s tc o m m o nm a l i g n a n tt u m o r so fd i g e s t i v et r a c t i nr e c e n ty e a r s w i t ht h ed e v e l o p m e n to fe c o n o m i c ，t h ei m p r o v e m e n to fp e o p l e sl i v i n g s t a n d a r d sa n dt h ec h a n g eo fl i f e s t y l e sa n dl i v i n gc o n d i t i o n s ，t h ei n c i d e n c ea n d m o r t a l i t yr a t e so fc o l o r e c t a lc a n c e ra r ei n c r e a s i n g t h ep u r p o s eo ft h i ss t u d y w a st od e t e c tt h ee x p r e s s i o nl e v e lo ft w i s ti nc o l o r e c t a lc a n c e ra n dn o r m a l t i s s u e a tt h es a m e ，a r ee c a d h e f i na r ed e t e c t e dt o g e t h e r , f u r t h e rt oe x p l o r e t h er e l a t i o n s h i po ft w i s ta n da r ee - c a d h e r i np r o t e i nw i t hc l i n i c - p a t h o l o g i c a l i n d i c a t o r s a n di t sf u n c t i o na n dm e c h a n i s ma tt h ed i a g n o s i sa n dp r o g n o s i so f m a l i g n a n tt u m o r s m e t h o d s ：6 0c a s e so fc o l o r e c t a lc a r c i n o m aa n d6 0c a s e so fn o r m a l c o l o r e c t a lt is s u e sw e r ec o l l e c t e di nt h ef o u r t hh o s p i t a lo fh e b e im e d i c a l u a i v e r s i t yf r o mj u n e2 0 0 9t od e c e m b e r2 0 0 9w h ot o o ko p e r a t i o n st h e r e c o l o r e c t a ic a l q c e 7a n dn o r m a ic o l o r e c t a lt i s s u e sw e r ec o f l e c t e di ne a c ho t p a t i e n t s p e c i m e n sw e r ep l a c e di n 10 n e o t r a lf o r m a l i nf i x e da n db u r i e di n p a r a f f i n ，4 u m s e r i a ls e c t i o n s t a n d b y a l ls p e c i m e n s w e r ee x a m i n e d r e s p e c t i v e l yt w i s t ，a r fe - c a d h e r i np r o t e i nb yi m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o d a n dt h ee x p e r i m e n tr e s u l tw e r ed e a l e db ys p s s15 0s t a t i s t i c a ld a t aa n a l y s i s p a c k a g e r e s ut t s ： 1 i h ee x p r e s s i o nc o n s e q u e n c eo ft w i s t e x p r e s s i o no ft w i s t i n6 0c a r c i n o m aa n dn o r m a lc o l o r e c t a lt i s s u e sw e r e d e t e c t e d b yi h c ，t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o n r a t e sw e r e7 6 7 ( 4 6 6 0 ) ，3 0 o ( 18 6 0 ) r e s p e c t i v e l y t h ee x p r e s s i o no ft w i s ti nc a r c i n o m ag r o u pw a sh i g h e r t h a nn o m a lg r o u p ( p o 0 5 ) ，b u tc o r r e l a t e dw i t hp a t h o l o g i c a lg r a d e ，t h ed e p t h 3 英文摘要 o ft h et u m o ri n v a d e dt h eb o w e lw a l l ，c o n d i t i o no ft h el y m p hn o d em e t a s t a s e s a n dd u k e ss t a g e ( p 0 0 5 ) 2t h e e x p r e s s i o nc o n s e q u e n c eo f a r f e x p r e s s i o no fa i 强i n6 0c a r c i n o m aa n dn o r m a lc o l o r e c t a lt i s s u e sw e r e d e t e c t e db yi h c ，t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t e sw e r e3 0 0 ( 2 4 6 0 ) ，7 3 3 ( 4 4 6 0 ) r e s p e c t i v e l y t h ee x p r e s s i o no fa r f i nc a r c i n o m ag r o u pw p sl o w e r t h a nn o m a lg r o u p 【p 0 0 5 ) ，b u tc o r r e l a t e dw i t hp a t h o l o g i c a lg r a d e ，t h ed e p t h o ft h et u m o ri n v a d e dt h eb o w e lw a l l ，c o n d i t i o no ft h el y m p hn o d em e t a s t a s e s ， d u k e s s t a g ea n dd i s t a n tp l a c em e t a s t a s i s ( p 0 0 5 ) 3t h e e x p r e s s i o nc o n s e q u e n c eo f e c a d h e r i n e x p r e s s i o no fe c a d h e r i ni n6 0c a r c i n o m aa n dn o r m a lc o l o r e c t a lt i s s u e s w e r ed e t e c t e db yi h c t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t e sw e r e13 4 ( 8 7 6 0 ) 6 0 0 ( 3 6 6 0 ) r e s p e c t i v e l y t h ee x p r e s s i o no fe c a d h e f i ni nc a r c i n o m ag r o u pw a g l o w e rt h a nn o m a lg r o u p ( p o 0 5 ) ，b u tc o r r e l a t e dw i t hp a t h o l o g i c a lg r a d e ， t h ed e p t ho ft h et u m o ri n v a d e dt h eb o w e lw a l l c o n d i t i o no ft h el y m p hn o d e m e t a s t a s e sa n dd u k e ss t a g ef p 0 0 5 ) 4t h e r e l a t i o n s h i po f7 t w i s t ，a r fa n d e c a d h e r i n 1h e r ew e r e10c a s e si nt h ec o l o r e c t a lc a r c i n o m ag r o u pw h e r et h e e x p r e s s i o no ft w i s ta n da r fw a sp o s i t i v es i m u l t a n e o u s l y , t h es i m u l t a n e o u s ly n e g a t i v e w e r e8c a s e s s p e a r m a nc o r r e l m i o ns h o w e dt h a tt w i s th a da r e m a r k a b l y c o r e l a t i o nw i t ha r fi nc o l o r e c t a lc a r c i n o m a ( f o 8 0 6 ，p o 0 5 ) t h e r ew e r e3c a s e s i nt h ec o l o r e c t a lc a r c i n o m ag r o u pw h e r et h ee x p r e s s i o no f q ? w i s ta n de c a d h e d nw a sp o s i t i v e s i m u l t a n e o u s l y , t h es i m u l t a n e o u s l y n e g m i v ew e r e7c a s e s s p e a r m a nc o r r e l a t i o ns h o w e dt h a t t w i s th a da r e m a r k a b l y c o r r e l m i o nw i t he c a d h e r i ni nc o l o r e c t a lc a r c i n o m a ( r - - 0 7 5 4 ， p 0 0 5 ) c o n c l u s i o n ：t w i s tm a yb et h e b i o l o g i c a lp a r a m e t e r o fc o l o r e c t a l c a r c i n o m a ，a sw e l ia sd e t e r m i n et h ec o u p eo fd i s e a s ei np a t i e n t sw i t h c o l o r e c t a l d i s e a s e s p e c i f i c i n d i c a t o ro f p r o g n o s i s p 5 3p r o t e i n ， e 一 4 英文摘要 c a d h e r i np l a y sa l li m p o r t a n tr o l ei nt h ep r o e e s so fc o l o r e c t a lc a n c e rg r o w t h 、 i n v a s i o na n dm e t a s t a s i s ，t w i s tp r o b a b l yi n h i b i t sa p o p t o s i sa n dp r o m o t e st u m o r c e l lf o r m a t i o nb yr e g u l a t i n gp a t h w a yo fa r f m d m 2 p 5 3 ，m e a n w h i l e i m p a c t se x p r e s s i o n o fe - e a d h e r i nt op r o m o t es i t u a t i o no fe m t ，a n d p a r t i c i p a t e si nt h eo e c u r r e n c ea n dm e t a s t a s i so fc o l o r e c t a lc a n c e r k e yw o r d s ：c o l o r e c t a lc a n c e r ；t w i s t ；a r f ；e c a d h e r i n ；i m m u n o h i s t o - c h e m i s t r y 5 研究论文 t w i s t 基因联合e c a d h e r i n 、a r f 检测在 大肠癌组织中的意义 ! 釜 刖置 大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤之一，在美国和多数发达国家，大肠 癌的病死率居癌症病死率的第2 位，在全世界范围居第4 位【i 】。在我国， 大肠癌的发病率位于全部恶性肿瘤的第4 6 位，居消化道恶性肿瘤的第2 3 位，虽然我国大肠癌的发病率低于西方发达国家，但是随着我国现代化程 度的提高国民的饮食结构发牛了很大的变化，精细食物和高蛋白、高脂 肪食物的摄入不断增多，致使大肠癌的发病率在最近2 0 年里以平均每年 4 2 0 的速度增加r 2 】。大肠癌的发生、发展是一个多步骤、多阶段及多基 因参与的一个渐进过程大肠癌患者的生存期与疾病进展阶段密切相关， 如果早期发现，经私 极治疗，预后较好；若已发生转移则预后差，死亡牢 极高。文献报道，d u k e s a 期患者根治性切除术后的5 年生存率可达9 0 以上，而d u k e s d 期的患者转移灶即使能够完整切除或得到根治性治净7 ， 5 年生存率也只有2 0 3 0 ；远处转移灶如果未能得到根治性治疗，仅 仅采用辅助性放化疗，则5 年生存率不到5 。如何早期诊断、早期治疗 是提高火肠癌疗效的关键。 t w i s t 是一种痛基【大l 货白，能够影响肿瘤细胞的凋亡。它是碱性的螺旋 环螺旋蛋白家族( b a s i c h e l i x l o o p h e l i x ，b h l l l ) r f 高度保守的转录因子。 它介导着多种信号传导通路。t w i s t 的表达能够被( s o n i ch e d g e h o g ) s h h ， 成纤维细胞生长因子( f i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r ，f g f ) ，骨形成蛋白( b o n e m o r p h o g e n e t i cp r o t e i n ，b m p ) 信号调控，而且在s h h 和f g f 信号中发挥 正反谈作用。t w i s t 是s h h ，f g f ，b m p 信号通路的整合器( i n t e g r a t o r ) ， 因此f g f 受体、s h h 信号转导分子、b m p 7 的突变都会导致相似的表型 改变【3 】o 在n 甫乳动物，t w i s t 与r e l a ( 背侧相关蛋白) 相互调节，t w i s t 蛋白 被r e l a 细胞因子信号通路激活，t w i s t 蛋白通过与r c l a ( 属于n f kb 家 族) 形成负反馈环路，抑制炎症凶子的产生，因而r w i s t 蛋白通过负反馈环 路调控依赖n f kb 的炎症因子产生l 斗j 。t w i s t 是e m t 过程中的重要的调 控因子。肝细胞生长因子( h g f ) 、纤维母细胞生长因子( f g f ) 、表皮生长 6 研究论文 因子( e g f ) 通过作用于r a s m a p k 或者磷酰酞肌醇3 激酶( p 1 3 k ) 通路诱 导某些上皮细胞发生e m t 。t g f1 3 s m a d 通路能够协同r a s 诱导e m t 以及鼠的转移模型。以上这些通路均能激活t w i s t 的表达【5 】，同时t w i s t 蛋白在细胞凋亡中起着重要作用，它能编码凋亡抑制蛋白，通过抑制分化， 阻断p 5 3 通路，阻碍n m y c 的促凋亡作用等多种途径抗细胞凋亡从而引 起肿瘤的发生i 6 ，7 1 。 恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移是多阶段的级联过程，其主要步骤 包括：正常细胞的癌变一原发癌的生长一肿瘤细胞脱落并侵入基质一进入 脉管系统一癌栓形成一转移癌的生长一转移癌继续扩散。t w i s t 似乎可参 与肿瘤发生发展的整个过程。研究其在肿瘤发生和远处转移中的作用机 制，可为临床肿瘤的诊断、判断治疗效果和预后提供新的思路和实验室依 据，并且t w i s t 在大肠癌巾的相关研究很少有文献报道。本课题以临床火 肠癌患者作：为研究对象，采用免疫组织化学两步染色方法，检测t w i s t 在 大肠癌和正常大肠组织中表达水平及其与临床病理指标的火系，时联合 检测a r f 、e c a d h e r i n 蛋白的表达水平，以进一步探讨t w i s t 在大肠癌l f - 1 的作用及作刚机理。 材料与方法 1 实验材料 1 1 标本 随机选取河北医科大学第四医院c b - 科2 0 0 9 年6 月 2 0 0 9 年1 2 月 期间手术切除的结直肠癌组织标本6 0 例，所有标本均经病理学诊断证实， 其中男3 2 例，女2 8 例，年龄4 0 8 l 岁，平均6 1 5 岁。每例病例均附有详 细的临床病理资料。病人手术前均未进行化疗、放疗、中医中药及生物等 其他治疗，采集标本包括大肠癌组织和距离癌组织边缘8 1 0 厘米之间的 正常大肠粘膜。标本离体后置于1 0 中性福尔马林中固定后进行石蜡包 埋，4 u m 连续切片备用 1 2 主要仪器 病理组织切片机德国l e i c a 公司 b mi i 型瘸理组织包埋机安徽电子科学研究所 7 研究论文 切片漂烘温控仪安徽电子科学研究所 电热恒温箱重庆实验设备厂 z d i i i b 型医用微波炉上海中达医学应用研究所 l e i c ad ml s 2 双头显微镜德国l e i c a 公司 电子天平上海精科天平厂 1 3 主要试剂 多聚赖氨酸( z l i 9 0 0 5 ，北京中杉公司) p b s 缓冲液：o 0 1 m ，p h 7 4 枸橼酸盐抗原修复液：o o l m 兔抗人t w i s t 多克隆抗体( a b e a m 美国1 兔抗入a r f 多克隆抗体( 武汉博! j ：德) 兔抗人e c a d h e r i n 单克隆抗体( 武汉博：0 德) 生物素标记山羊抗兔l g g ( 晶美公司) 正常兔咖清工作液( 武汉博一l - 德) s a b c 免疫组化试剂盒( 武汉博士德) 浓缩型d a b 试剂盒( z l i 9 0 3 2 ，北京中杉公司1 中性树胶( 上海标本模型厂) 2 方法 2 1 免疫组织化学两步法染色步骤： 参照免疫组织化学两步法检测试剂盒说明j 雩进行染色，高压加热法抗 原修复，3 7 。c 温箱孵育，用磷酸盐缓冲液( p b s ) 0 0 1 m o i lp h 值为7 4 的p b s 代替一抗做阴性对照，在相同条件下进行染色。具体步骤如下： ( 1 ) 组织切片常规脱蜡至水。 ( 2 ) 清水冲沈，入蒸馏水3 分钟。 ( 3 ) 滴加0 0 1 m 枸橼酸盐抗原修复液，置高压炉( 快速生物医学实验仪) 中进行热抗原修复，以充分暴露抗原决定簇，室温冷却2 0 3 0 分 钟，p b s 冲洗3 次，每次5 分钟。 ( 4 ) 3 h 2 0 2 ( 甲醇9 7 m l ，3 0 过氧化氢3 m 1 ) 室温孵育1 0 分钟，以消 除内源性过氧化物酶的活性，p b s 冲洗3 次，每次5 分钟。 ( 5 ) 1 0 正常山羊血清封闭，室温孵育l o 分钟，倾去血清，不洗，以 防止抗原与非特异性抗体结合。 研究论文 ( 6 ) 滴加适当稀释的一抗工作液，室温2 3 小时。 ( 7 ) 甩去多余液体，p b s 冲洗3 次，每次5 分钟。 ( 8 ) 滴加辣根过氧化物酶标记的二抗( 链酶卵白素) ，室温孵育3 0 分 钟。 ( 9 ) 甩去多余液体，p b s 冲洗3 次，每次5 分钟。 ( 1 0 ) 每张切片滴加1 0 0 h 1 左右新鲜配置的d a b 溶液显色，显微镜下 观察显色情况，显色满意后自来水冲洗，终止染色。 q d 复染( 苏木素淡染细胞核3 分钟) ，梯度酒精脱水、二甲苯透明、 中性树胶封片。 3 免疫组织化学染色结果判定 3 1t w i s t 、a r f 和e c a d h e r i n 表达判断 免疫组化染色分析以已知阳性标本为阳性对照，以p b s 替代抗为 阴性对照，阅片人员均为有一定工作经验的病理科医师，不同次阅片至少 两次以上符合者。 t w i s t 蛋白免疫纽化染色结果判趔3 1 ：t w i s t 蛋白主要表达于细胞质，一f j 少数细胞膜中也有表达，以细胞呈清晰的棕色或棕褐色为| 5 【 性，以细胞无棕 褐色或与背景一致的极淡的棕色为l 纠性。在高倍视野下随村1 选墩1 0 个视 野1 5 f 1 性细胞数 7 5 ，染色强度与阳性细胞百分比的乘积 2 分为免疫反应阳性( + ) 。( f i g 4 7 ) e 钙粘蛋白免疫组化染色结果判定【5 1 ：免疫组织化学染色阳性信号为 细胞出现棕黄色细小颗粒。每张切片观察1 0 个高倍视野约5 0 0 个细胞， 以出现清晰的颗粒状棕黄或棕褐着色为阳性。确定肿瘤组织和正常组织中 着色定位并以附陛细胞百分比进行分级。没有阳性细胞或阳性细胞数少于 1 0 的定为( 一) ，阳性细胞数占1 0 - - 2 5 定为( + ) ，阳性细胞数占 9 研究论文 2 6 - - - 5 0 定为( + + ) ，阳性细胞数 5 0 定为( + + + ) 。f i g ( 8 - 1 0 ) 4 统计学方法 本实验采用s p s s1 5 0 统计软件包进行数据分析处理，根据不同的数 据类型分别采用独立样本贮检验和分类变量的关联性分析。以a = 0 0 5 为 检验水准，当p 0 0 5 时差异有统计学意义。 复士里 皇日禾 1 临床病理资料 1 1 临床资料 本实验随机选取河北医科大学第四医院外二科2 0 0 9 年6 月至2 0 0 9 年l2 月期间的大肠癌手术切除标本共6 0 例。患者年龄范嗣4 0 8l 岁，j f 均年龄6 1 5 岁，具体临床资料见表( t a b l e1 1 ) 。 1 2 病理资料 大肠癌原发肿- i 茚f f i 侵润深度：根据美国癌症联合委员会( a j c c ) 标准分 组。( t a b l e1 2 ) ( 2 ) 大肠癌淋巴结转移情况分组：根据有无淋巴结转移将伞部病例分为 两组。( t a b l e1 3 ) ( 3 ) 火肠癌远处转移情况分组：根据有无远处转移将全部病例分为两 组。( t l b l el - 4 ) ( 4 ) 大肠癌标本的t n m 分期：根据国际抗癌联盟( u i c c ) 1 9 9 7 年公布的 t n m 分期标准，分期如下。( t a b l e1 5 ) 2 t w i s t 蛋白表达及其与临床病理参数之间的关系 2 1 大肠癌组织和正常大肠组织t w i s t 蛋白表达情况 大肠癌组织中t w i s t 蛋白表达水平显著高于正常大肠组织 ( 7 6 7 3 0 o ) ，p = o 0 0 0 0 0 5 ，差异有统计学意义，( t a b l e2 1 ) 。( f i g 1 3 ) 2 2t w i s t 表达水平与临床病理参数的关系 ( 1 ) t w i s t 表达水平与性别、年龄、肿瘤位置的关系：经统计学分析显示， 大肠癌组织中t w i s t 表达在不同性别、年龄、肿瘤位置间无明显差异。 ( t a b l e2 2 ) ( 2 ) 不同浸润深度的大肠癌组织t w i s t 表达水平的差异性比较：经统计 1 0 研究论文 学分析显示t w i s t 表达水平在不同浸润深度的大肠癌组织中具有显著差 异，t 3 + t 4 组表达水平明显高于t l + 1 2 组( 8 2 6 4 2 9 ) p = o 0 0 3 0 0 5 差 异有统计学意义。( t a b l e2 3 ) ( 3 ) 大肠癌组织中t w i s t 表达与淋巴结转移的关系：经统计学分析显示 淋巴结转移阳性组大肠癌组织t w i s t 表达水平显著高于淋巴结转移阴性组 ( 8 6 9 4 2 9 ) ，p = o 0 0 1 0 0 5 无统计学意义。( t a b l e2 3 ) ( 5 ) 不同t n m 分期的大肠癌组织中t w i s t 表达水平的差异性比较：经统 计学分析幔示t w i s t 表达水平在不同t n m 分期的火肠癌组织中具何显著 差异，i l l + i v 组表达水平高于i + i 【组( 9 0 0 5 0 o ) ，p = 0 0 0 1 0 0 5 差异 有统计学意义。( t a b l e2 3 ) “ 3a r f 蛋白表达硬+ j 乓与临床病理参数之间的关系 3 1 大肠癌组织和谁常大肠组织a l 讧蛋白表达情况 大肠癌组织中a r f 蛋白表达水平显著低于正常大肠组织， p = 0 0 0 0 0 0 5 ( 4 0 0 7 3 3 ) ，差异有统计学意义。( t a b l e3 1 ) ( f i g 钆7 1 3 2a r f 莨达水平与：隘床病理参数的关系 ( 1 ) a r f 衷达水平与性别、年龄、肿瘤位置的关系：经统计学分析娩示， 大肠癌组织中a r f 表达在不同性别、年龄、肿瘤位茕无明湿惹异。( t a b l e 3 2 ) ( 2 ) 不同浸润深度的大肠癌组织a r f 表达水平的差异性比较：经统计 学分析显示a r f 表达水平在不同浸润深度的大肠癌组织中具有显著差 异，t 3 + t 4 组表达水平显著低于t i + t 2 组( 8 7 5 7 1 ) ，p = 0 0 0 3 0 0 5 差 异有统计学意义。( t a b l e3 3 ) ( 3 ) 大肠癌组织中a r f 表达与淋巴结转移的关系：经统计学分析显示 淋巴结转移阳性组大肠癌组织a r f 表达水平显著低于阴性组 ( 8 7 吲5 7 2 ) ，p = 0 0 0 4 0 0 5 差异有统计学意义。( t a b l e3 - 3 ) ( 4 ) 不同m 分期的大肠癌组织中a r f 表达水平的差异性比较：经统计 学分析显示在伴有远处转移的癌组织的a r f 表达水平显著低于无远处转 移组( o 0 6 3 0 ) ，p - - 0 0 0 3 0 0 5 差异有统计学意义( t a b l e3 - 3 ) 研究论文 ( 5 不同t n m 分期的大肠癌组织中a r f 表达水平的差异性比较：经统 计学分析显示a r f 表达水平在不同t n m 分期的大肠癌组织中具有显著 差异，i l l + i v 组表达水平显著低于i + 1l 组( 15 0 w 5 0 o ) ，p = 0 0 0 4 0 0 5 差异有统计学意义。( t a b l e3 3 ) 4e 钙粘蛋白表达及其与临床病理参数之间的关系 4 1 大肠癌组织和正常大肠组织e 钙粘蛋白表达情况 大肠癌组织中e 钙粘蛋白表达水平显著低于正常大肠组织 ( 1 3 3 唰6 0 o ) ，p = 0 0 0 0 l i n 浸润深度的大肠癌组织e 。钙粘蛋白表达水、l 的差异性比较：经 统计学分析浸永e 钙粘蛋白表达水甲在刁、= 同浸润深度的歹：肠璃纡l 织巾j t - 有显著差异，t 3 + t 4 组表达水平姓著低于t i + t 2 身【( 8 7 膳2 9 ) ， p = 0 0 0 3 0 0 5 差异有统计学意义。( t a b l e4 3 ) ( 3 ) 大肠癌组织中e 钙粘蛋白表达与淋巴结转移的关系：经统计学分析 丝豕淋巴结转移刚，陆组e 钙粘蛋臼表达水j f 疆著低，| 刿性组， ( 4 3 4 2 9 ) ，p = 0 0 0 0 0 0 0 5 差异无 统计学意义。 ( t a b l e4 3 ) ( 5 ) 不同t n m 分期的大肠癌组织中e 钙粘蛋白表达水j 的差异性比 较：经统计学分析显示e 钙粘蛋白表达水平在不同t n m 分期的大肠癌组 织中具有显著差异，i i i + i v 组表达水平显著低于i + 1l 组( 5 0 0 o 4 0 o ) ， p = 0 0 0 1 0 0 5 差异有统计学意义。( t a b l e4 3 ) 5 t w i s t 蛋白表达与a r f 、e 钙粘蛋白之间的相关性分析 5 1t w i s t 蛋白表达与a r f 蛋白之间的相关性分析 大肠癌组织t w i s t 蛋白表达与a r f 蛋白之间的相关性分析：经统计学 分析显示大肠癌组织t w i s t 蛋白表达与a r f 蛋白之间显著相关。( t a b l e 1 2 研究论文 5 1 ) 5 2t w i s t 蛋白表达与e 钙粘蛋白之间的相关性分析 大肠癌组织t w i s t 蛋白表达与e 钙粘蛋白之间的相关性分析：经统计学分 析显示大肠癌组织t w i s t 蛋白表达与e 钙粘蛋白之间显著相关。( t a b l e 5 2 ) 附图 ) 研究论文 f i g 3t w i s tn e g a t i v ee x p r e s s i o ni nn o r m a le o l o r e e t a lt i s s u e s ( i h c4 0 0 x ) f i g 4a r fn e g a t i v ee x p r e s s i o ni n c o l o r e c t a lc a r c i n o m a ( i h c2 0 x ) 1 5 研究论文 f i g 5a r fn e g a t i v ee x p r e s s i o ni nc o l o r e c t a lc a r c i n o m a i h c4 0 x ) f i g 6a r fp o s i t i v ee x p r e s s i o ni nn o r m a l c o l o r e c t a lt i s s u e s ( i h c2 0 x ) 1 6 研究论文 f i g 7a r fp o s i t i v ee x p r e s s i o ni nn o r m a le o l o r e c t a it i s s u e s ( i h c4 0 x ) ：。0 _ ? 。_ ，；_ 咿 1 x ! ，：1 j 多od ，一9 ；：“：，”t ， 。v ? 乏“ 一戈“夕 0 亨 ” ， 。， ，i 。”，? 霉 j ，一： f i g 8e c a d h e r i ne x p r e s s i o ni nc o l o r e c t a lc a r c i n o m a ( i h c2 0 ) 1 7 。 孵h 哆j ，弘。 ， 。 0 ，r ， -、，。一， t ，p ，： o：柑， o，芝 斗 h x 弘 “黪澎蛰净恕警0 臻 翟，?n每 圹。 鬈一0一j选 p 。谚o r m蠢。p。，0 黔磐 f 嘻9e c a d h e r i ne x p r e s s i o ni nc o i o r e c t a ic a r c i n o m a41h c4 0 x ) f i g 10e c a d h e r i ne x p r e s s i o nj nn o r m a lc o l o r e c t a lt i s s u e s ( i h c2 0 x ) 研究论文 附表 t a b l e1 - 1t h ec l i n i c a id a t eo fc o i o r e c t a lc a n c e r g r o u p n r a t i o ( ) g e n d e r m a l e f e m a l e a g e ( y e a r ) 6 0 6 0 t u m o rl o c a t i o n r e c t u m c o l o n 3 2 2 8 3 6 2 4 4 0 2 0 5 3 3 3 4 6 6 7 6 0 o o 4 0 o o 6 6 6 7 3 3 3 3 t a b l e1 - 2c o l o r e e t a lp r i m a r yt u m o rd e p t ho fi n v a s i o n g r o u p t h ed e p t ho fp r i m a r yt u m o ri n v a s i o n n r a t i