（预防兽医学专业论文）秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究.pdf

1。1。1。1。_ 一位一创性利撇权h 烨 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集 体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文 收录到中国学位论文全文数据库，并向社会公众提供信息服务。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：4 日 导师签名： 英文缩写英文全称 b p c e l e g a n s e c o l i d n a e r i c d n t p e b c f u p c r g f p 印m 肛l l p g g m o l l u s h d f l f a d f i a d g ￥| g b a s ep a i r s 符号说明 c a e n o r h a b d i t i se l e g a n s e s c h e r i c h i ac o l i d e o x y r i b o n u c l e i ca c i d e n t e r o b a c t e r i a lr e p e t i t i v e i n t e r g e n i cc o n s e n s u s d e o x y r i b o n u c l e o s i d et r i p h o s p h a t e e t h i d i u mb r o m i d e c o l o n y f o r m i n gu n i t s p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n g r e e nf l u o r e s c e n c ep r o t e i n r o t a t i o np e rm i n u t e m i c r o l i t e r l i t e r m i c r o g r a m g r a m m o l ep e rl i t e r u n i t s e c o n d h o u r d a y f e r m e n t e dl i q u i df e e d a v e r a g ef e e di n t a k e a v e r a g ed a i l yg a i n f e e d g a i n 中文名称 碱基对 秀丽隐杆线虫 大肠埃希氏杆菌 脱氧核糖核酸 肠杆菌间基因间共有 重复序列 脱氧核糖核苷三磷酸 溴化乙锭 菌落形成单位 聚合酶链氏反应 绿色荧光蛋白 每分钟转数 微升 升 微克 克 摩尔升 单位 秒 小时 天 发酵液体饲料 平均日采食量 平均日增重 料肉比 山东农业大学博士学位论文 目录 摘要i 文献综述8 1 秀丽隐杆线虫的生物学特性8 1 1 解剖学特性8 1 2 线虫的生命周期1 0 1 3 生理和免疫调控系统1 1 2 秀丽隐杆线虫作为实验动物模型的研究进展1 4 2 1 已建立和应用的秀丽隐杆线虫模型1 5 2 2 秀丽隐杆线虫动物模型在病原菌研究中的应用1 6 2 3 秀丽隐杆线虫作为实验动物模型的优势1 8 3 乳酸菌作用机制的研究进展1 9 3 1 消化道正常微生物区系的调节2 0 3 2 产生多种活性物质2 5 3 3 乳酸菌的免疫功能2 7 3 4 其他机理2 9 3 5 益生菌研究中存在的问题3 0 4 本研究的目的和意义3 1 试验部分3 3 试验一秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立3 3 1 材料3 4 1 1 虫株3 4 1 2 菌种3 4 1 3 培养基及主要试剂3 4 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究 1 4 主要仪器及耗材3 4 1 5 线虫用培养基、缓冲液及主要溶液配制3 5 2 方法：3 6 2 1 细菌标准曲线的绘制3 6 2 2 线虫动物模型的建立3 7 3 结果与分析3 9 3 1 细菌标准曲线3 9 3 2 秀丽隐杆线虫动物模型的建立4 0 4 讨论4 4 4 1 秀丽隐杆线虫的培养及动物模型条件的统一4 4 4 2 沙门氏菌对线虫的致病性4 6 4 3 线虫动物模型在乳酸菌研究中的优点4 7 试验二利用线虫动物模型对乳酸菌的筛选研究4 9 1 材料5 0 1 1 虫株5 0 1 - 2 菌种5 0 1 3 培养基及主要试剂5 0 1 4 酶、试剂盒及相应试剂5 0 1 5 培养基、缓冲液及常用试剂的配制5 0 1 6 常用仪器及耗材5 1 2 方法5 2 2 1 细菌的培养5 2 2 2 乳酸菌的鉴定5 2 2 3 乳酸菌体外抑制试验5 4 2 4 线虫模型对乳酸菌的筛选实验5 4 3 结果与分析5 5 3 1 乳酸菌的鉴定5 5 3 2 乳酸菌体外抑菌实验结果5 8 3 3 线虫模型对乳酸菌的筛选实验5 9 i i 山东农业大学博士学位论文 4 讨论6 1 4 1 乳酸菌体外抑菌作用及机理6 1 4 2 秀丽隐杆线虫模型用于乳酸菌效果评价体系的优势和有待解决的问题6 2 试验三线虫益生菌动物模型的应用研究前选乳酸菌s 6 4 株和c l i i 株作用效果比较研究 6 4 1 材料6 5 1 1 虫株6 5 1 2 菌种6 5 1 3 培养基及主要试剂6 5 1 4 线虫用培养基、缓冲液及试剂的配制6 5 1 5 主要的仪器设备6 5 2 方法6 6 2 1 乳酸菌活菌、高温灭活菌及培养上清的制备6 6 2 2 乳酸菌保护实验6 7 2 3 线虫肠道细菌数量的检测6 7 3 结果与分析6 8 3 1 乳酸菌保护实验6 8 3 2 线虫肠道细菌数测定结果7 0 4 讨论7 3 4 1 线虫动物模型筛选菌对线虫作用原理的分析7 3 4 2 线虫肠道计数方法7 5 试验四线虫益生菌动物模型的应用研究筛选乳酸菌对畜禽作用效果的研究 7 6 1 材料7 7 1 1 菌种7 7 1 2 培养基及主要试剂7 7 1 3 培养基、主要缓冲液及试剂的配制7 7 1 4 主要的仪器设备7 9 1 5 饲粮组成7 9 i l l 。_ _ 。1 。1 。 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究 2 方法8 0 2 1 乳酸菌对断奶仔猪作用效果的研究8 0 2 2 乳酸菌对雏鸡作用效果的研究8 2 3 结果与分析8 5 3 1 乳酸菌对断奶仔猪作用效果的研究8 5 3 2 乳酸菌对雏鸡作用效果的研究8 8 4 讨论9 2 4 1 乳酸菌株在发酵饲料上的应用9 2 4 2 乳酸菌制剂对鸡免疫的作用9 3 4 3e r i c - p c r 的技术及应用9 3 4 4 线虫动物模型在益生菌研究中的应用前景9 4 结论9 6 创新点9 7 参考文献_ 9 8 博士在读期间发表学术论文1 1 4 致谢1 1 5 i v 山东农业大学博士学位论文 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究 摘要 由于畜禽肠道菌群复杂、无菌动物的费用昂贵和高技术要求，堡垒9i 塾堕直笠益生 菌佳耳效果圾期璃咩飙盔：致使乳酸菌等益生菌制剂( 微生态制剂) 的质量难以控制、 合理的开发应用受到了很大的影响。因此，本研究选用肠道结构简单、细胞内部基因调 控研究比较深入、奄壅星堕邀适翅童l 互毯型盔挞嗨翌墼型鎏鱼羞复左面弛盟盟型燃尊穆移 壹塞塑型丝堕重亘堕狂线虫( c a p 甩。，h 口b d i t i sp l e g a n s ) 作为实验动物，以沙门氏菌作为佬胎 病原指示菌，哒垩l 酸菌为研究益生菌，建立了线虫益生菌实验动物模型，并应用于乳酸 菌的研究。 、q 幺毡钟幽加害考；? 本研究首先采用改良线虫液体培养法，成功孵化了秀丽隐杆线虫塞变娃s s l 0 4 ；在 确定了沙门氏菌的最适攻毒量及乳酸菌的最佳保护剂量基础上，建立了秀丽隐杆线虫益 生菌动物模型；以线虫的存活率为判定标准，丛! z 挞乳酸苴虫篮选_ 出j 斗畦静兜暴瓣 塑篁! ! 堡塑堑羞筮上l l l 洙菌芳通过对线虫存活率及肠道菌数量检测分析，比较了两 株的活菌、死菌和培养上清液作用效果的差异；探讨了线虫动物模型筛选的乳酸菌对断 奶仔猪和雏鸡生产性能、腹泻率、免疫性能及肠道菌群的影响，从而验证线虫动物模型 筛选的乳酸菌对线虫的作用效果与对畜禽作用效果的相似性。 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的成功建立为乳酸菌等益生菌的筛选、作用效果及机 理研究提供了技术支撑，为微生态制剂的质量控制、开发利用提供了保障。本研究内容 共分四部分。 试验一秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立 应用改良线虫液体培养法，将同期化的秀丽隐杆线虫( s s l 0 4 ) l 4 期幼虫孵化、分 装于2 4 孔培养板，、再4 稚4 孔随机分为不同处理组，每组4 孔，每孔1 5 2 0 条线虫；然 后吠蛭蕊：记迦 j 医菌l 旦! ! ! 垒作为线虫的致病菌、以乳酸菌( s 6 4 株) 作为线虫的有 益保护菌，探索建立线虫动物模型的条件及效果。结果显示，改良线虫液体培养法操作 简单、条件易控制；沙门氏菌浓度在1 0 7 c f u m l 、1 0 8 c f u m l 和1 0 9 c f u m l 均能致死线虫，碘7 以1 0 9 c f u m l 时致死速度快、致死率最高，于第6 d ，所有线虫全部死亡( 致死率1 0 0 ) ： 第l o d 时，浓度为1 0 8 c f u m l 乳酸菌对线虫存活率达到8 7 9 ，较对照组提高5 1 ，而 i 浓度为1 0 9 c f u m l 的乳酸菌对线虫的存活率仅为6 3 2 ，较对照组下降1 9 2 ；保护实验 镍厶酬! 删：，) 蛹多太姒衍，l 习讹7 觚荀鲫乞品级、? 勾他稻伙研一 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究，易广 第9 d ，攻毒前加入乳酸菌和攻毒后加入乳酸菌对线虫的保护率分别为4 4 9 $ 1 15 8 1 ； 说明乳酸菌能够有效保护线虫免受g f p 标记沙门氏菌的感染。结果表明，本研究成功。 建立了秀丽隐杆线虫益生菌动物模型。 试验二利用线虫动物模型对乳酸菌的筛选研究 凇妇 苏奋艰? 首先应用1 6 sr r n a 序列分析法对1 7 株乳酸缈了鉴定 在此基础上，丛丝甩 ，、氏菌d t l 0 4 为病原指示菌，连堡i 塾堕重链处塑鱼塑线直签凼塑堕塞坠。结果显示，1 7 _， - o - _ _ o 一一。、_ _ 一 胪埯张i 株孚黼株对沙门氏菌的抑菌圈直径在1 9 m m 一2 5 m m 之间，培差液上渣也均能直熬抑鼢 制沙门氏菌的生长( o d 6 0 0 值在0 0 5 8 0 0 7 4 之间) ；1 7 株乳酸菌对线虫的保护率为 物旧 2 6 5 6 不等，其中c l 9 、l 3 、l b l 、l b 4 、$ 6 4 株的保护率分别为5 9 、5 3 2 ，5 1 1 、 5 8 7 并1 35 5 7 ( p 0 0 5 ) ，而c l l 0 、c l l1 、c l l 2 、l b 2 四株菌株保护率仅为3 2 、 - 6 2 ，2 2 7 l ：1 32 9 ( p 0 0 1 ) 。堡里窒笙墨耋塑：重亟盟血型刈蝠越趔塾塾塑堕竺 筛选效果优于体外抑菌实验堕选鎏。沙俑鹕柳 ，_ 一 一一，。， ”。o 4 试验三线虫益生菌动物模型的应用研究 筛选乳酸菌s 6 4 株和c l l l 株作用效果比较研究 r ，毒；式痧7通过对线虫存活率和肠道菌数的检测，对线虫动物模型筛选的有效乳酸菌株$ 6 4 和 备竹垤冀无效菌株c l l l 的作用效果进行了比较试验，结果显示：( 1 ) $ 6 4 乳酸菌株组和c l l1 株组线虫存活率分别为7 2 2 和2 5 7 ，对线虫的保护率分别为5 1 7 和2 2 ，差异 显著( p 0 0 5 ) ；灭活$ 6 4 乳酸菌株组和c l l1 株组线虫存活率分别为5 7 4 和2 5 8 ， 对线虫的保护率分别为3 3 9 和2 3 ，差异显著( p o 0 5 ) 。( 2 ) $ 6 4 株活茵组线虫肠道内乳酸菌数高于活菌c l l l 株组，线虫肠道内沙门氏菌数低于活菌c l l l 株组和对照组，差异显著( p 0 0 5 ) ；灭 活菌$ 6 4 株组线虫肠道内沙门氏菌数低于灭活菌c l ll 株组和对照组，差异显著( p o 0 5 ) ；虫体荧光结果显示，$ 6 4 株乳酸菌活菌和灭活菌均可有效抑制沙门氏菌在线 虫肠道内的生长。 2 山东农业大学博士学位论文 试验四线虫益生菌动物模型的应用研究 筛选乳酸菌对畜禽作用效果的研究 为探讨线虫动物模型筛选的乳酸菌对畜禽作用的有效性，本研究以断奶仔猪和雏鸡 作为实验动物进行了饲喂实验。 ( 1 ) 选用大三元断奶仔猪9 6 头，随机分为8 组，分别饲喂乳酸菌$ 6 4 、l b l 、l b 2 、 a l b 2 、l 3 矛i ：i c l ll 株发酵液体饲料，对照l 组饲喂基础颗粒料，对照2 组饲喂湿拌料，实 验至2 1 d 经检测料肉比、腹泻率和肠道菌数，结果显示，乳酸菌a l b 2 、$ 6 4 、l b l 矛i l 3 株发酵饲料组料肉比较对照2 组分别下降了4 9 、4 7 、3 6 和2 4 ( p o 0 5 ) ，腹泻 指数较对照2 组分别下降了5 0 8 9 、6 4 2 9 、9 3 5 1 和3 2 5 ( p 0 0 5 ) ，腹泻率较对 照2 组分别下降了5 0 0 1 、8 1 8 2 、6 3 6 5 和2 3 7 2 ；c l l1 和l b 2 株组料肉比分别提高 了4 矛e 1 1 2 ( p o 0 5 ) ，腹泻指数分别提高了1 5 和2 7 2 7 ( p 0 0 5 ) ，腹泻率分别 提高了2 1 7 8 $ 1 1 2 9 9 5 ( p 0 0 5 ) ；l b l 株发酵组较对照组和l b 2 发酵组肠道 塾堕堕塑量显耋监业三q ：q 驰：题扛鲎塑哇凿萏勤盘堂u 尘亚q ) 。有彀乖 ( 2 ) 选用2 0 0 羽1 日龄海兰褐蛋公鸡，随机分成4 组，第l 、2 、3 组分别为乳酸 菌$ 6 4 、l 3 和c l l1 株饮水组，第4 组为空白对照组，对各组鸡抗体效价、免疫器官指 数和肠道菌群数进行测定，结果显示，3 5 日龄时，第1 、2 组血凝抑制效价显著高于对 照组和第3 组( p 0 0 5 ) ；第1 、2 组鸡肠 道乳酸菌数量较第3 组和对照组增加显著( p o 0 5 ) ，肠杆菌数量显著减少( p o 0 5 ) ； 第1 组胸腺、法氏囊和脾脏指数均显著高于对照组( p o 0 5 ) 。e r i c - p e r 结果显示，$ 6 4 株组肠道菌群指纹条带较l 3 株和c l l l 株组明显增多，表明$ 6 4 株更能有效调整鸡肠道菌群平衡。 本试验结果显示，线虫动物模型筛选的有效乳酸菌( $ 6 4 和l b l 株) 能够明显提高 断奶仔猪的生产性能和雏鸡的免疫等功能，表明线虫动物模型筛选的乳酸菌对线虫的作 用效果与对畜禽作用效果是相似的。 - _ _ _ 一 关键词：秀丽隐杆线虫；动物模型； 芝有b 铂 乳酸菌筛选；g f p 标记沙门氏菌；效果相似性 3 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究 e s t a b l i s h m e n ta n da p p l i c a t i o nr e s e a r c ho fal a b o r a t o r ya n i m a l m o d e lu s i n gc a e n o r h a b d i t i se l e g a n sf o rs t u d yp r o b i o t i c s a b s t r a e t t h es t u d yc o n c e r n i n ge f f e c t i o na n dm e c h a n i s mo fl a c t o b a c i l l u sh a sb e e nr e s t r i c t e db y c o m p l i c a t e di n t e s t i n a lm i c r o f l o r ao fm a m m a la n i m a l sa n de x p e n s i v ec o s to ng e r m f r e e a n i m a l s c a e n o r h a b c 矗t & e l e g a n sh a sb e e nu s e da sal a b o r a t o r ya n i m a lm o d e lf o rt h ef a c tt h a t t h e r ei sab r o a do v e r l a pb e t w e e nm a m m a l sa n dc e l e g a n sa b o u ti n f e c t i o nm e c h a n i s m ， i m m u n er e a c t i o na n ds oo n i nt h i ss t u d y ，s a l m o n e l l au s e df o rp a t h o g e na n dl a c t o b a c i l l u s u s e df o rp r o b i o t i c c a e n o r h a b d i t i se l e g a n sh a sb e e nu s e df o re s t a b i l i s h e dal a b o r a t o r y a n i m a lm o d e lf o rc o n d u c tr e s e a r c ho np r o b i o t i c t h ec e l e g a n ss t r a i ns s10 4h a sb e e nh a t c h e df i r s t l yb yf l u i l di n c u b a t i o nm e t h o d ，a n d p r o p e rd o s eo fs 1 y p h i m u r i u ma n dl l a c t o b a c i l l u sh a sb e e nc o n f i r m e d w eh a v ee v a l u a t e d17 l a c t o b a c i l l u si s o l a t e sf r o mc h i c k e na n dp i gi n t e s t i n ef o rt h e i ra b i l i t yt op r o t e c tt h ew o r m s f r o ms a l m o n e l l a - i n d u c e dd e a t hi nv i t r o ；w h e nt e s t e do nc e l e g a n si n f e c t e dw i t hs t y p h i m u r i u md t 10 4 ，t h ei s o l a t e sw e r e ，h o w e v e r ，d i f f e r e n t i a t e di nt h e i ra b i l i t yt op r o t e c tt h e n e m a t o d ef r o ms a l m o n e l l a i n d u c e dd e a t h t w ol a c t o b a c i l l u si s o l a t e s $ 6 4a n dc l11 ( $ 6 4 w i t hf u l l ，b u tc l11w i t hn op r o t e c t i o n ) w e r ef u r t h e rs t u d i e d t h es t u d yo nd i f f e r e n c ec u l t u r e f r a c t i o n s ( t h ee x t r a c e l l u l a rc u l t u r ef l u i d ，l i v ea n dh e a t k i l l e dc e l l s ) o fi s o l a t e sc l 11a n d $ 6 4 h a sb e e nd e s i g n e d ；w eo b s e r v e dt h ee f f e c t so fl a c t o b a c i l l u si s o l a t e so np e r f o r m a n c e ， d i a r r h e ai n c i d e n c e ，i m m u n ea c t i v i t i e sa n di n t e s t i n a lm i c r o f l o r ao fw e a np i g l e t sa n dl a y e r c h i c k e ni no r d e rt oe v a l u a t es i m i l a r i t yb e t w e e nl i v e s t o c ka n dc e l e g a n s t h es t u d yc o n s i s t so ff o u rp a r t s ： 1e s t a b l i s h m e n to ft h ea s s a yw i t hc e l e g a n su s e da sa na n i m a lm o d e rf o r s t u d yp r o b i o t i e s s y n c h r o n i z a t e dl 4l a r v a eh a sb e e nh a t c h e d ，r e s u s p e n s i o ni n2 4 - w e l lt i t r ep l a t e sw i t h e a c hw e l lc o n t a i n i n g2m lo fsm e d i u ma n d10 15w o r m s ，a n di n c u b a t e da t2 5o cd u r i n gt h e a s s a y e a c ht r e a t m e n th a df o u rw e l l s t oe x p l o r et h ee x p e r i m e n t a lc o n d i t i o no fc e l e g a n s u s e da sa n i m a lm o d e lf o re v a l u a t et h ee f f e c to fal a c t o b a c i l l u si s o l a t eo np r o t e c t i n gt h e n e m a t o d ef r o ms a m o n e l l a i n d u c e dd e a t h t h er e s u l ts h o w e d ：t h ef l u i di n c u b a t i o nm e t h o do f 4 山东农业大学博士学位论文 _ 一 c e l e g a n sw a sm o r ee a s yt oo p e r a t e ；c e l e g a n sw a si n f e c t e da n dd i e dw i t hs t y p h i m u r i u m a t 10 7 c 纠m l 、l0 8 c 6 j m la i l d10 9 c f u m l ，h o w e v e r ，a l lt h ew o r m sd i e di n6 。“d a y sa t10 c f u m l ；t h e s u r v i v a lr a t e ( 8 7 9 ) o fl a c t o b a c i l l u s t r e a t e dw o r m sa t10 8 c f u m lw a sh i g h e rt h a nt h a to fc p l e g a 以sf e de c o l io p 5 0 ( 8 2 8 ) o n l yo n10 md a y ，b u ts u r v i v a lr a t eo fc e l e g a n sw a s 6 3 2 a t10 9 c f u m l ；t h ep r o t e c t i v er a t eo fl a c t o b a c i l l u sf o rc e l e g a n sw a s5 0 3 m e a n w h i l e ，t h e g r e e nf l u o r e s c e n c ew a se m i t t e db yt h eg f p s a l m o n e l l ao fl a c t o b a c i l l u s - t r e a t e dw o r m sw a s m o r ed i m i n i s ht h a np o s i t i v ec o n t r o li nt h ed i g e s t i v et r a c to f t h ew o r m s 2p r e s r e e n i n go fl a c t o b a c i l l u si s o l a t e su s i n gal a b o r a t o r ya n i m a lm o d e lo f c a e n o r h a b d i t i se l e g a n s 17l a c t o b a c i l l u si s o l a t e sh a sb e e nc o n f i r m e db y 16 sr r n aa n a l y s i sm e t h o d t h e s d o t - o n - t h e 1 a w na s s a yd e m o n s t r a t e dt h a ta l l17t e s t e dl a c t o b a c i l l u si s o l a t e sw e r ei n h i b i t i v e t os t y p h i m u r i u m t h es i z eo fg r o w t hi n h i b i t i o nh a l o e sr a n g e df r o m19t o2 5m l r li nd i a m e t e r a n dt h ee x t r a c e l l u l a rc u l t u r ef l u i d ( e c f ) r e c o v e r e df r o mt e s t e dl a c t o b a c i l l u sc u l t u r e sa l lh a da s i m i l a rd e g r e eo fi n h i b i t i o nt o w a r d ss t y p h i m u r i u m ；w h e nt e s t e do nc e l e g a n si n f e c t e dw i t h s t y p h i m u r i u m t h ei s o l a t e sw e r e ，h o w e v e r ，d i f f e r e n t i a t e d i nt h e i ra b i l i t yt op r o t e c tt h e n e m a t o d e 行o ms a l m o n e l l a i n d u c e dd e a t h o nt h el a s td a y ( 9 m ) o ft h ea s s a y s ，t h ep r o t e c t i v e r a t eo fl a c t o b a c i l l u sr a n g e df r o m - 2 6 t o - 5 6 a m o n gt h e m ，f i v ei s o l a t e s ( c l 9 ，l 3 ，l b1 ， l b 4 ，a n ds 6 4 ) p r o v i d e dm a x i m u mp r o t e c t i o n ( 5 9 、5 3 2 ，5 1 1 、5 8 7 a n d 5 5 7 r e s p e c t i v e l y ) ( p 0 0 5 ) t ot h ei n f e c t e dw o r m st h a t h a das i m i l a rl e v e lo fl o n g e v i t y c o m p a r e dt ot h en e g a t i v ec o n t r 0 1 t h ep r o t e c t i v er a t e o ft w oi s o l a t e sc l10a n dc l11w a s 3 2 a n d 6 2 ( p 0 01 ) a n dd e m o n s t r a t e dn e g a t i v ee f f e c t i v eo nc e l e g a n s o u r o b s e r v a t i o n ss u g g e s tt h a tc e l e g a n sc a nb eu s e da sa na n i m a lm o d e lf o rp r e 。s c r e e n i n g p r o b i o t i c s 3a p p l i c a t i o nr e s e a r c ho nc a e n o r h a b d i t i se l e g a n sa sa na n i m a lm o d e lf o r s t u d yp r o b a o t i c s e f f e c t i o no fl a c t o b a c i l l u si s o l a t e ss 6 4a n dc l lls c r e e n e db yc e l e g a n s t oe x p l o r ep o s s i b l em e c h a n i s m su n d e r l y i n gt h ep r o t e c t i o no f f e r e db yl a c t o b a c i l l u s d i f f e r e n tc u l t u r ef r a c t i o n s ，i n c l u d i n gt h ee c f ，l i v ea n dh e a t k i l l e dc e l l s ，o fl a c t o b a c i l l u s i s o l a t e ( $ 6 4a n dc l l1 ) w e r ei n v e s t i g a t e df o rt h e i re f f e c to nt h e s u r v i v a lr a t ec e l e g a n s i n f e c t e dw i t hs a l m o n e l l aa n dt h ec o l o n i z a t i o no ft h ep a t h o g e ni nt h ed i g e s t i v et r a c to ft h e n e m a t o d e t h er e s u i td e m o n s t r a t e d ：( 1 ) o nt h e9 md a yi nt h ea s s a y ，t h es u r v i v a lr a t eo f 5 秀丽隐杆线虫益生菌动物模型的建立及应用研究 c e l e g a n st r e a t e dw i t hl a c t o b a c i l l u si s o l a t e $ 6 4a n dc l l1l i v ec e l l sw a s7 2 2 a n d2 5 7 ( p 0 0 5 ) ，t h ep r o t e t i v er a t ew a s51 7 a n d2 2 r e s p e c t i v e l y ；t h es u r v i v a lr a t eo fc e l e g a n s t r e a t e dw i t hl a c t o b a c i l l u si s o l a t e $ 6 4a n dc l l1h e a t k i l i e dc e l l sw a s5 7 4 a n d2 5 8 ( p o 0 5 ) ，t h ep r o t e t i v er a t ew a s 13 2 a n d12 3 r e s p e c t i v e l y ( 2 ) o nt h e8 md a yi nt h ea s s a y ，t h ea m o u n to fl a c t o b a c i l l u si n t h ed i g e s t i v et r a c tt r e a t e dw i t hl i v el a c t o b a c i l l u si s o l a t e $ 6 4w a si n c r e a s ed i s t i n c t l yc o m p a r e t ot h a to ft r e a t e d 晰t 1 1l i v ei s o l a t ec l l1 ( p o 0 5 ) ；t h ea m o u n to fs a l m o n e l l at r e a t e dw i t h l i v ea n dh e a t - k i l l e di s o l a t e $ 6 4w a ss i g n i f i c a n t l yr e d u c e dt h a nt h a to ft r e a t e dw i t hi s o l a t e c l l1a n dp o s i t i v ec o n t r o l ( p 0 0 5 ) ；m e a n w h i l e ，t h eg r e e nf l u o r e s c e n c ew a s e m i t t e db yt h eg f p s a l m o n e l l ao fl i v ei s o l a t e $ 6 4 一t r e a t e dw o r m sw a s s i g n i f i c a n t l y d i m i n i s h e dt h a np o s i t i v ec o n t r o la n di s o l a t ec l11 - t r e a t e dw o r m s 4a p p l i c a t i o nr e s e a r c ho nc a e n o r h a b d i t i se l e g a n sa sa na n i m a lm o d e lf o r s t u d yp r o b a o t i c s 。一e f f e c t i o no fl a c t o b a c i l l u si s o l a t e ss c r e e n e db yc e l e g a n so nl i v e s t o c k t o e x p l o r et h ee f f c t i o no f e f f e c t i o no fl a c t o b a c i l l u si s o l a t e ss c r e e n e db yc e l e g a n so n l i v e s t o c k ，t h ef e e d i n gt r i a lh a d b e e d nd e s i g n e du s i n gw e a np i g l e ta n dc h i c k e na sa n i m a l m o d l e ( 1 ) 9 6w e a n e dp i g l e t sw e r ed i v i d e di n t o8g r o u p sr a n d o m l ya n df e dt h e mw i t h f e r m e n tl i q u i df e e d ( f l f ) w h i c hf e r m e n t e db yl a c t o b a c