毕业设计（论文）-MAN和SB对芍药“大富贵”花期花瓣中SOD活力、O2-产生速率、MAD含量和相对电导率的影响.doc

学号： 0404174024 MAN 和和 SB 对对芍芍药药“ “大富大富贵贵” ”花期花瓣中花期花瓣中 SOD 活力、活力、 O2-产产生速率、生速率、MAD 含量和相含量和相对电导对电导率率的影的影响响 学院名称： 新联学院 专业名称： 生物技术 年级班别： 2004 级 姓 名： 刘莹 指导教师： 刘萍教授 2008 年 05 月 河南师范大学新联 学院本科毕业论文 本科毕业论文 河南师范大学新联学院本科毕业论文 2 MAN 和 SB 对芍药“大富贵”花期花瓣中 SOD 活力、O2- 产生速率、MAD 含量和相对电导率的影响 摘 要 以不同浓度甘露醇（MAN150 mgL-1）和苯甲酸钠（SB，100 mgL-1、300 mgL-1和 500 mgL-1）混合水溶液对绿蕾期的芍药“大富贵”进行全株进行喷雾处理， 以喷蒸馏水作为对照。于整个花期测定对照与处理花瓣中超氧化物歧化酶活力（SOD） 、 超氧阴离子产生速率（O2-） 、丙二醛含量（MDA）和相对电导率。结果表明：在整个花期 中，经 MAN+SB 处理后 O2-产生速率 、MDA 含量和相对电导率较对照均明显下降；而 SOD 活力则明显提高。说明，不同浓度的 MAN+SB 均可以延缓芍药“大富贵”的衰老，延长花 期，其中以 MAN150+SB300 效果最佳。 关键词 芍药；MAN；SB；SOD；O2-；MDA；相对电导率； Effects of SBN and MAN on SOD activity, O2.production, MDA Content and Relative Electrical Conductivity in Petals of Peony Abstract Treated the peony “dafugui” in green bud period with the liquor of mannitol (150 mgL-1) and four different concentrations (0,100,300 and 500mg/L) of SB together by spraying over the individual plant, sprayed distilled water as comparison. Measured the SOD activitythe, O2- production, the content of MDA and the relative electrical conductivity of the peony in petals. The results indicated that SB and MAN decreased obviously O2-, the content of MDA and the relative electrical conductivity in the whole florescence. SOD activity in all the Peony “dafugui” higher obviously than the comparisons. The result showed that mannitol and sodium benzoate (SB) in different concentrations all could left caducity of the peony “dafugui” and prolong the florescence. MAN150+SB300 is the best. Keywords. MAN;SB; SOD;O2-; MDA; Relative Electrical Conductivity;Peony 河南师范大学新联学院本科毕业论文 3 前 言 芍药（Pseonia lactiflora Pall.）属芍药科（paeoniaceae）芍药属(peonoia)，多年生草 本或亚灌木1。花大而美丽被誉为“花相” ，单生枝顶或有时成束，红，黄，白，紫各色； 萼片 5，宿存 ；花瓣 510；雄蕊多数，花粉 2 核，具 3 孔沟；心皮 25，离生。芍药根 入药，称赤药、白药1 。芍药花期为 4 月下旬，花期较短，一般只有 57d，而最佳的 观赏时间为 23d，这无疑对它们的观赏价值造成不利影响。如果能使其花期延迟并使其 盛花期延长，将会带来相当可观的经济效益，基于以上目的我们分析了与开花时间相关 的一些重要因素。所以延长它的花期，提高花期花朵的质量，正在逐步受到科研工作者 的重视。 甘露醇是一种多元醇，含有 3 个羟基，亲水性强，能有效维持细胞内活度，在逆境 胁迫下，可作为细胞内的渗透调节剂，维持细胞的正常膨压和细胞的正常代谢功能，参 与抗逆反应。此外，甘露醇还是已知的氢氧根离子清除剂，甘露醇还调节气孔的开放2， 我们期望通过外施甘露醇找到其与花期控制的关系。 苯甲酸钠(Sodium benzoate SB)分子式为 C7H5NaO2，大多为白色颗粒，无臭或微带安 息香气味，味微甜，有收敛性；易溶于水（常温）53.0g/100mL 左右，pH 在 8 左右；苯 甲酸钠也是酸性防腐剂，在碱性介质中无杀菌、抑菌作用；其防腐最佳 pH 是 2.54.0， 在 pH5.0 时 5%的溶液杀菌效果也不是很好。苯甲酸钠亲油性较大，易穿透细胞膜进入细 胞体内，干扰细胞膜的通透性，抑制细胞膜对氨基酸的吸收；进入细胞体内电离酸化细 胞内的碱储，并抑制细胞的呼吸酶系的活性，阻止乙酰辅酶 A 缩合反应，从而延迟花的 衰老延长花期 。 本研究通过用不同浓度甘露醇（MAN150 mgL-1）和苯甲酸钠（SB，100 mgL-1、300 mgL-1和 500 mgL-1）混合水溶液对芍药“大富贵”切花作处理，观察开花期间花瓣 SOD 活力，超氧阴离子产生 速率，丙二醛含量及相对电导率的变化，来探求其对芍药“大富贵”衰老的影响，为提高它们的观赏 价值提供理论依据及技术方法。 1 材料与方法 1.1 材料准备与处理 芍药“大富贵”品种，取自河南师范大学芍药地。 从 08 年 3 月 31 日开始，以 MAN150mg/L+SB100,300,500mg/L 混合溶液进行整株喷雾 处理，每天傍晚 17:30-18:00 进行，每隔 2d 处理 1 次，共处理 8 次。以喷蒸馏水作为对 照，喷洒的药量以植株完全湿润为度。每个处理组最终选择生长一致的 6 株作为试验材 河南师范大学新联学院本科毕业论文 4 料。 1.2 材料提取 于芍药开花之日起，每天在同一时间（上午 7：30）采取花开不同天数的（自外向内 第 2，3 层）花瓣，进行自然和化控后生理生化指标的测定，同一时期的材料尽可能一致。 每个样品重复 3 次，不同样品取自不同植株的不同花朵，生理生化指标的测定结果取平 均值。 1.3 实验方法 1.3.1SOD(超氧化物歧化酶)活性测定 氮蓝四唑法3 称取植物材料(去叶脉)0.2g，加 1mL 预冷的磷酸缓冲液(PH7.8)在冰浴上研磨成浆。 12000r/min 下离心 15min，上清液即为 SOD 粗提液。 取 5mL 的试管(要求透明度好)若干，有对照、处理。按下表加样： 试剂(酶)用量/mL终浓度/比色时 0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5 130mmol/LMet 溶液0.313mmol/L 750mol/LNBT 溶液0.375mol/L 100mol/L EDTA-Na2 液 0.310mol/L 20mol/L 核黄素0.32.0mol/L 酶液0.05对照液用缓冲液 蒸馏水0.25 总体积3.0 混合后将一支对照管置暗处，其他各管于 4000Lx 日光下反应 20min。 已知 SOD 活力单位以抑制氮蓝四唑光还原的 50%为一个酶活力单位表示，按下式计算 SOD 活性。 SOD 总活力总活力=(ACK-AE)V/(0.5ACKWVt) 公式中：SOD 总活力以鲜重酶单位每克表示；比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示； ACK为照光对照管的吸光值；AE为样品管的吸光度；V 为样品液总体积，mL；Vt为测定时 样品用量，mL；W 为样品鲜重，g；蛋白质含量单位为 mg/g。 .2 超氧阴离子产生速率测定超氧阴离子产生速率测定 羟氨氧化法4 称取 0.2g 花瓣，加入 1.0mL 磷酸缓冲液(pH7.8)于冰浴研磨，研磨物以 12000r/min 离心 15min，取上清液 0.5mL 加入 0.5mL 磷酸缓冲液和 1mL10mmol/L 盐酸羟胺，25静置 1h，加入 1mL 17mmoL/L 对氨基苯磺酸和 1mL 14mmoL/L 萘胺，25静置 20min,测其 河南师范大学新联学院本科毕业论文 5 530nm 处 OD 值。根据测得的 OD 值，查标准曲线将花瓣中氧自由基含量的 OD 值转换成 NO2-,依据羟胺与 O2-的反应式： NHOH+2O2-+H+NO2-+H2O2+H2O 从NO2-对O2-进行化学计算，将NO2-乘以 2 得到O2-。 1.3.3MDA1.3.3MDA 的含量的测定的含量的测定 硫代巴比妥酸(TBA)法 5 称取花瓣 0.2g 加 1mL 蒸馏水于研钵中，充分研磨后，转移离心管中，再用 4mL 蒸馏 水分 2 次冲洗研钵。向每个试管提取液中加 5mL0.5%硫代巴比妥酸，充分摇匀，置沸水浴 中煮沸 10min,取出放入冷水中冷却。然后 3000 转/分离心 15min，取上清夜用 722 或 752 型分光光度计测其 450，532，600nm 处吸光度（OD）值。 丙二醛（MDA）含量的计算公式： MDA(mmolg-1FW)=6.452(OD532nm-OD600nm)-0.599OD450nm Vt/(V1W) 注：Vt：提取液总体积（mL） V1：测定用提取液体积（mL） W：样品鲜重（g） .4 电导率的测定电导率的测定 用相对电导法测定电导率6。 精确称取花瓣 0.2g，用无离子水冲洗 3 遍，吸水纸吸干水分后，剪碎放入盛有 20mL 无离子水的大试管中，用真空泵抽气至不再冒气泡为止，30oC 静置 4h，用 DDS-IIA 型电 导率仪测电导率。再将样品沸水浴加热 15min，冷却后测总电导率，以样品溶液电导率占 总电导率的百分比表示相对电导率。每个样品试验重复 3 次，取平均值。 2 结果与分析 2.1MAN+SB 对芍药“大富贵”花期花瓣 SOD 活力的影响 河南师范大学新联学院本科毕业论文 6 图2.1MAN+SB对芍药“大富贵”花期花瓣中SOD活力的影响 40 60 80 100 120 140 123456 时间 time(d) SOD活力(UgFW-1) CK MAN150+SB100 MAN150+SB300 MAN150+SB500 从图 2.1 可以看出，花期花瓣中 SOD 的活力在整个花期中的变化趋势呈双峰曲线， 峰值分别出现在第 3d 何第 5d，且第 3d 达到最大值。经甘露醇（MAN）和苯甲酸钠（SB） 的混合水溶液处理过的芍药，较对照组而言，不仅 SOD 活力均显著提高，而且其活力能 始终保持较高水平。这说明用苯甲酸钠（SB）和甘露醇（MAN）的混合水溶液处理后，可 以延缓了芍药“大富贵”的衰老。其中以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 处理的 SOD 活力最高， 延缓效果最好。 2.2 MAN+SBMAN+SB 对芍药大富贵花期花瓣中 O2-产生速率速率的影响 图2.2 MAN+SB对芍药“大富贵”花期花瓣中超氧阴离子产生速率 的影响 3 4 5 6 7 8 9 10 123456 时间 time(d) 超氧阴离子产生速率 (nmol/ming) CK MAN100+SB100 MAN100+SB300 MAN100+SB500 如图 2.2 所示，总的来说，整体变化呈单峰曲线，在第 4d 达到峰值，对照组整体上 超氧阴离子产生速率均高于经 MAN+SBN 处理后的速率。这说明不同浓度的 MAN+SBN 使芍 药花期花瓣中的超氧阴离子的产生速率均可降低，以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 效果最好， 这样有利于延缓芍药花的衰老。 河南师范大学新联学院本科毕业论文 7 2.3 MAN+SBMAN+SB 对芍药大富贵花期花瓣中 MDA 含量的影响 图2.3 MAN+SB对芍药“大富贵”花期花瓣中MDA含量的影响 40 60 80 100 120 140 160 180 123456 时间 time(d) MDA含量(mmolgFW-1) CK MAN150+SB100 MAN150+SB300 MAN150+SB500 从图 2.3 可知，在芍药“大富贵”的整个花期中，花瓣中 MDA 含量整体上呈现上 升趋势，随着开花的天数而逐渐增加。用 MAN+SB 处理后发现, 经处理的芍药花瓣中的 MDA 含量均低于对照组,其中以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 的 MDA 含量在整个花期中最低。 说明 MAN150mg/L+SB300 mg/L 可以最有效的抑制膜质过氧化，延缓花瓣的衰老，延长花 期。 2.4 MAN+SBMAN+SB 对芍药“大富贵”花期花瓣中相对电导率的影响 图2.4 MAN+SB对芍药“大富贵”花期花瓣中相对电导率的影响 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 123456 时间 time(d) 相对电导率(%) CK MAN150+SB100 MAN150+SB300 MAN150+SB500 图 2.4 可以看出，芍药“大富贵”花瓣的相对电导率在整个花期整体上均呈现上升 趋势。经不同浓度 MAN+SB 处理的相对电导率均明显低于对照组，说明以不同浓度 MAN+SB 处理均可有效延缓花瓣的衰老。其中以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 处理组降得最低，这说 明以 MAN150mg/L+SB300mg/L 处理可以最有效的保持细胞膜的稳定性，延缓花瓣的衰老， 进而延长花期。 河南师范大学新联学院本科毕业论文 8 3 讨论 植物体衰老主要是因为细胞的衰老，衰老细胞的一个明显特征是膜结构发生变化。 细胞衰老过程中膜的破坏是由细胞中(特别是线粒体和叶绿体)产生的自由基(如 O2- 、OH、O2等)使膜脂中的不饱和脂肪酸发生过氧化作用而造成的。膜脂过氧化作用中产 生的自由基，它不仅能连续诱发膜脂过氧化作用，而且还可以使蛋白质脱 H+而产生蛋白 质自由基，使蛋白质分子发生链式聚合，从而使细胞膜变性，但在植物体内，还存在着 活跃的清除活性氧的防御机制，如 SOD、CAT、POD 等保护酶系统，正常情况下，活性氧 的产生与清除处于动态平衡状态，一旦该平衡被破坏，就造成活性氧的积累产生毒害， 导致植株衰老和死亡7。 生物膜的主要成分磷酸酯，细胞膜的降解，使磷酸酯含量减少，组分变化，使膜的 致密程度和流动性降低，部分地出现从流动相到凝胶相的转变，增加了膜的透性。同时， 在衰老过程中，植物体内自由基产生过多，使膜脂质过氧化加剧，造成膜的完整性丧失8。 膜的完整性丧失时，一些具有膜结构的细胞器如叶绿体、线粒体、核糖体、细胞核，在 衰老期间其膜的结构发生衰退、破裂甚至解体，从而丧失其有关的生理功能并释放各种 水解酶类及有机酸，使细胞发生所谓的自溶现象，更加速细胞的衰老降解9。 植物在整个生长发育的过程中受到各种不良影响，如大气污染物，金属，离子辐射 等都能使植物组织产生超氧阴离子自由基（O2-.） ，羟自由基（OH） ，单线态氧（1O2）10. . ，过氧化氢（H2O2） ，它们有很强的氧化能力，性质活泼，故称为活性氧11。活性氧对许 多生物功能分子有破坏作用，包括引起膜的过氧化作用。细胞内活性氧的产生和清除始 终处在一种动态平衡。当生物体内活性氧的产生大于活性氧的清除而打破这种平衡时， 细胞内的活性氧则急剧积累而使细胞受氧胁迫。超氧化物歧化酶（SOD） ，过氧化物酶 （POD）和过氧化氢酶（CAT）等是活性氧清除酶系统的主要保护酶，它们能有效地阻止 高浓度氧的积累，防止膜脂的过氧化作用，延缓植物的衰老，使植物维持正常的生长发 育。其中 SOD 第一个参与活性氧的清除反应，在抗氧化酶类中处于核心地位。SOD 是一种 含金属离子（Cu-Zn, Fe 或 Mn）的保护酶，高等植物中主要是 Cu-Zn.SOD，在绿色植物细 胞内超氧化物歧化酶主要存在于叶绿体中，细胞溶质和线粒体中也有分布。SOD 的主要功 能是催化超氧阴离子的自由基发生的歧化反应，生成 H2O2和 O2，从而消除 O2-对细胞的损 害12，在维持细胞活性氧代谢的平衡中起重要作用。 芍药等花卉的花期大体经过初花期、盛花期、衰败期等几个阶段。初花期时，呼吸 速率加快，细胞代谢活动旺盛，为花瓣张开提供能量，同时形成较多的水解物；花开后， 河南师范大学新联学院本科毕业论文 9 由于植物由营养生长转向生殖生长，大量的营养物质向生殖器官运输，花器官本身也要 合成能源物质。由于初花期中较高的呼吸速率，自由基的产生速率加快，同时SOD合成的 物资基础和能量都较充足，所以SOD合成快，有大量的SOD保持高的活力形式。盛花期时， SOD活力均保持高的动态平衡，期间有些轻微波动，可能是由天气变化，取材不准确，误 差等原因造成的。随着开花时间的增加，花瓣逐渐进入衰败期，花瓣的呼吸速率再次加 强，SOD活力也有部分升高。衰败期时，自由基累积严重损害细胞，作为对衰老的适应 SOD活力又迅速下降。 从图 2.1 可以看出，SOD 的活性在整个花期中的变化趋势呈双峰曲线，先升高后降低 再升高再降低，从花开的第 1d 一直持续到盛花期第 3d，在此期间花瓣内的代谢旺盛， SOD 大量合成，组织内的 SOD 活性较高，以保证植物体内各种代谢之间的平衡，特别是自 由基，活性氧的产生与清除处于平衡，但在衰老后期这种平衡被打破，结果自由基和活 性氧的浓度超过了伤害“阈值” ，导致膜脂的过氧化，膜的完整性受到破坏，SOD 活性下 降，花瓣进入衰老期13-14。经不同浓度的 MAN+SB 混合水溶液处理过的芍药，不仅 SOD 活 性均显著提高，而且其活力能始终保持较高水平。在 MAN+SB 混合水溶液的三种浓度相比， 以 MAN150mg/L+SB300mg/L 处理的芍药花瓣 SOD 活力最高。还有一种解释认为 SOD 的活力 在整个花期中先上升表明了植物自身对逆境和衰老的一种适应，通过调节基因表达，使 SOD 的活力维持在较高水平，能够有效清除自由基，而随着盛花期的到来，花瓣内的各种 有害物质大量积累，特别是超氧阴离子自由基的积累造成膜脂的过氧化，使细胞的膜系 统遭到破坏15，同时也使 SOD 的活性迅速下降，花瓣开始衰老。 超氧阴离子（O2-.）是重要的活性氧, 在有氧的条件下，O2-.被认为是导致细胞损伤 和细胞膜中不饱和脂肪酸氧化的关键因子。超氧阴离子自由基（O2-.）在花瓣中的主要产 生场所是线粒体。线粒体是植物进行呼吸作用、能量转换的细胞器，其内膜上存在有呼 吸电子传递链的各组分。在传递过程中，当部分电子发生途中泄露，就会使氧以单价还 原的形式生成 O2-.，这种现象称为“电子漏” 。线粒体呼吸链上的电子漏是植物体内 O2-. 的重要来源。O2-.形成后可启动自由基连锁反应，产生羟自由基、单线态氧和过氧化氢等 一系列自由基、活性氧16。如前所述，这些活性氧能够启动膜脂过氧化或膜脂脱酯作用， 从而破坏膜结构17，促使植物衰老。因此超氧阴离子自由基的产生速率可以被看成植物 衰老的一项重要生理指标。 分析图 2.2 可知，对照和经不同浓度的 MAN+SB 处理的玫瑰芍药“大富贵”花瓣中超 氧阴离子的产生速率总的来说，整体变化呈单峰曲线，在第 4d 达到峰值且为最大值。在 花开的第 4d 之后，超氧阴离子的产生速率明显有所下降。与对照组相比，经 MAN+SB 处 河南师范大学新联学院本科毕业论文 10 理的对芍药花期花瓣中的超氧阴离子的产生速率受到抑制，产生速率均低于对照组的速 率。因此，对于芍药“大富贵”来说，不同浓度的 MAN+SB 使芍药花期花瓣中的超氧阴离 子的产生速率均可降低，以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 效果最好，它能有效的抑制超氧阴 离子的产生，有利于延缓芍药花的衰老。 丙二醛（MDA）是膜脂过氧化的最终产物，是反映膜损伤程度的重要生化指标之一。 对细胞有毒性，能够引起细胞膜功能紊乱，且对许多功能分子有破坏作用18 ，其积累是 自由基毒害作用的表现,目前已成为判断膜脂过氧化作用的一个重要指标已被证明。MDA 的积累来自不饱和脂肪酸的降解19-20，它的生成是由体内自由基引发而产生的21。因此， MDA的积累在一定程度上反映了体内自由基活动的状态，MDA积累多，OH. .和O2-等自由基亦 可能是高水平的。MDA、OH. .和 O2-等都是对细胞生命活动极有害的基团。O2-是机体中活性 氧代谢时产生的第一个毒性氧自由基，SOD通过歧化反应降解O2-，从而阻断毒性更强的活 性氧自由基的产生，对机体起到防护作用22。MDA具强交联性质，能与氨基酸或有游离氨 基的蛋白质、磷脂酰乙醇胺及核酸结合，形成具有荧光的Schiff 碱，称作类脂褐色素 (LFP)，它是干扰细胞内正常生命活动代谢23 的不溶性化合物。因此，人们也常用LFP作 为脂质过氧化的指标。MDA能与蛋白质结合，引起蛋白质分子内和分子间的交联及生物膜 中结构蛋白和酶的聚合和交联，使它们的结构功能和催化功能发生变化受到破坏。 从图 2.3 可知，在芍药“大富贵”的整个花期中，花瓣中 MDA 含量整体上呈现上升 趋势，随着开花的天数而逐渐增加，在第 5d 达到最大值。用 MAN+SB 处理后发现, 经处 理的芍药花瓣中的 MDA 含量均低于对照组。说明用不同浓度的 MAN+SB 均可有效的延缓芍 药花瓣的衰老，有利于花瓣的寿命延长。原因 MAN+SB 可以清除氧自由基，从而减少丙二 醛的生成量，起到了延长花期的作用。其中以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 的 MDA 含量在整 个花期中最低。说明 MAN150mg/L+SB300 mg/L 可以最有效的阻止膜质过氧化，延缓花瓣 的衰老，延长花期。 相对电导率是标志膜受损伤即植物受胁迫伤害程度的指标24，正常情况下细胞膜对 物质具有选择透性能力。当植物受到逆境影响时，如高温或低温，干旱、盐浸、病原菌 侵染后，植物细胞浸提液的电导率就会增大。膜透性增大的程度与逆境胁迫强度有关， 也与植物抗逆性的强弱有关。这样，比较不同作物或同一作物不同品种在相同胁迫温度 下膜透性的增大程度，即可比较作物间或品种间的抗逆性强弱，随着膜的透性的增加， 向外渗出的液体中离子浓度升高，导致了相对电导率的升高27。 在本实验中，从图 2.4 可以看出，芍药“大富贵”花瓣的相对电导率在整个花期整 体上均呈现上升趋势。经不同浓度 MAN+SB 处理的相对电导率均明显低于对照组，说明 河南师范大学新联学院本科毕业论文 11 以不同浓度 MAN+SB 处理均可有效延缓花瓣的衰老，进而延长花期。原因是 MAN+SB 能够 清除花瓣在衰老过程中产生的自由基，使膜脂过氧化作用减弱，膜脂过氧化产物减少， 保持细胞膜完整性，使细胞中电解质排除量减少。其中以 MAN150mg/L+SB300 mg/L 处理 组的相对电导率最低。 综上所述，本实验研究对象经 MAN+SB 处理后，在一定程度上确实提高了 SOD 的活力， 降低了超氧阴离子自由基的产生速率和 MDA 的含量，同时也降低了芍药花瓣的相对电导 率，起到了延缓芍药衰老，延长花期的作用，除此之外，还受到其它多方面的影响，如 天气，植株差异等，在实验过程中，又受到系统误差的影响，因此，化学物质对自然状 态下芍药的影响还有待于进一步的研究与探索。 参考文献 1 吴国芳植物学（第二版）M下册高等教育出版社 1988，247 2 董莹蜂，王学臣，娄成后HgCI2和甘露醇对细胞骨架调控气孔开放的影响J中国农业大学学 报1997，2(1)：6，44 3 李合生植物生理生化实验原理和技术M北京：高等科学版)，2006，21(2)：108111教育 出版社2000261-263 4王爱国，罗广华植物的超氧物自由基与羟胺的反应J植物生理学通讯，1990，(6)：55-57 5 宋纯鹏，梅慧生，储种稀等Ca2+对叶绿体中超氧自由基产生以及由ACC 形成乙烯的影响J植 物生理学报，1992，18（1）：55 6 李合生植物生理生化实验原理和技术M北京：高等教育出版社2000261-263 7 Fridovich I. The biology in oxygen radical. Science, 1978,201:875-880。 8 杨世杰植物生理学M科学出版社，2000：242 9 李合生现代植物生理学M2003，279-280 10 Halliwell B. Chloroplast metabolis, the structure and function of Chloroplast in green leaf cells M. Oxford: Chlarendon Press. 1981:186 11 Elstner EF. Oxygen activation and oxygen toxicity J.Ann.Rev.Plant Physiol, 1982, 33:73-96. 12 童富淡，胡家恕，陈进红等不同育秧方式对早稻叶片SOD活性、电解质渗透率和发根力的影响 J浙江农业大学学报1997，23（1