（化学工程专业论文）鼻咽清胶囊的制备与质量标准研究.pdf

华中科技大学硕士学位论文 摘要 鼻咽清胶囊是由辛夷、黄芩等四昧中药组方制备而成，临床用于鼻窦炎、鼻炎 具有明显疗效。本课题以传统中医药理论为指导，依照新药审批办法中有关中 药6 类新药的规定，运用现代制药技术，对该制剂的制备工艺、质量标准进行了系 统的实验研究。 一、制备工艺研究 根据处方药物的性质，剂型确定为胶囊剂。以黄芩苷含量为评价指标，采用正 交试验优选水提、酸沉工艺。结果黄芩的提取工艺为：黄芩切片，加水煎煮三次， 第一次2 小时，第二次和第三次各l 小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度 为1 0 5 1 1 0 ( 8 0 测) ，8 0 时加盐酸( 2 m o l l ) 调p h 至1 0 2 0 ，保温1 小时， 静置2 4 小时，滤过，沉淀物依次用水洗、7 0 乙醇洗，低温干燥，备用。 采用c o ：超临界萃取法提取辛夷中的挥发油；黄芪、辛夷、防风的水溶性成分也 是有效成分，以正丁醇提取物为评价指标，采用正交试验优选水提、醇沉工艺条件。 结果水提、醇沉最佳工艺条件为：水提取3 次，每次1 5 小时，再用6 0 e 醇沉淀。 减压干燥。 以吸湿率和休止角为指标，研究了成型工艺，确定辅料为淀粉，用8 0 乙醇制粒， 干燥，整粒，喷入辛夷挥发油，装入胶囊的成型工艺。 二、质量标准研究 采用薄层色谱法对制剂中黄芩、黄芪进行了鉴别，采用高效液相色谱法对黄芩苷 进行了含量测定，并进行了方法学考察，平均回收率为9 6 8 ，r s d = i 4 5 ，此法准 确、可靠，可用于制剂中的含量测定。 关键词：鼻咽清胶囊黄芩辛夷制备工艺质量标准正交试验 华中科技大学硕士学位论文 a b s t r a c t b i y a n q i n gc a p s u l e s ，w h i c hi sm a d ef r o mf l o sm a g u o l i a e 、r a d i xs c u t e l l a r i a ea n do t h e r t w ok i n d so fc h i n e s ed r u g s ，i sa ne f f e c t i v ep r e s c r i p t i o ni nn a s o s i n u s i t i sa n dr h i n i t i s w i t h t h eg u i d a n c eo ft h et h e o r i e so ft r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ea n dp h a r m a c y ( t c m p ) ， a c c o r d i n gt o t h es t a n d a r dr e l a t e dt ot h es i x t hc a t e g o r yo fn e wc h i n e s ed r u gi nt h e “e x a m i n i n ga n da p p r o v i n gm e t h o do fn e wm e d i c i n e ”，b i y a n q i n gc a p s u l eh a sb e e n s t u d i e do ni t sp r e p a r a t i o na n dq u a l i t ys t a n d a r db ya d o p t i n gt h em o d e mp h a r m a c e u t i c a l t e c h n i q u e s 1 s t u d yo nt h ep r e p a r a t i o n i na c c o r d a n c ew i t hp r o p e r t i e so fm e d i c i n a lm a t e r i a l sa n ds p e c i f i c i t yo fi n d i c a t i o no f t h ep r e s c r i p t i o n ，t h ec a p s u l e sw a ss e l e c t e da st h ed o s a g ef o r mo ft h ed r u g u s i n gt h e b a i c a l i nc o n t e n to ft h ed r u ga sa na s s e s s i n gi n d e x ，t h eo p t i m u me x t r a c t i n gc o n d i t i o n s w h i c ha r ea b o u te x t r a c t i n gw i t hw a t e ra n dd e p o s i t i n gw i t ha c i dw e r es e l e c t e db y o r t h o g o n a ld e s i g n m e a n w h i l et h ev o l a t i l eo i l sh a v eb e e nm a d ef r o mf l o sm a g n o l i a eb y a d o p t i n gt h es c f e c 0 2 ( s u p e r c f i t i c a lf l u i de x t r a c t i o r nm e t h o d c o m p o n e n t sw h i c hw e r e e x t r a c t e dw i t hw a t e ro fr o sm a g u o l i a ea n dr a d i xs c u t e l l a r i a ea r ee f f i c a c i o u sa s w e l l u s i n gt h es u b s t a n c ew h i c hh a sb e e ne x t r a c t e df r o mt h eo t h e rh e r b sw i t ht h en b u t a n d ， t h eo t h e ro p t i m u me x t r a c t i n gc o n d i t i o n sw h i c ha r ea b o u te x t r a c t i n gw i t hw a t e ra n d d e p o s i t i n gw i t ha l l o h e lw e r es e l e c t e d u s i n gd i l u t i o nr a t ea sa na s s e s s i n gi n d e xw es t u d i e dt h ef o r m a t i o nt e c h n i q u ew h i c h f o l l o w sa st h i s ：a d da m y l u mm a t e r i a l ，m a k eg r a n u l eu s i n g8 0 a l c o h o l ，m a k et ob ed r i e d ， s p r a yi n t ov o l a t i l eo i la n dp u t i ti n t oc a p s u l e s 2 s t u d y o nq u a l i t ys t a n d a r d r a d i xs e u t e l l a r i a ea n dr a d i xa s t r a g a l iw e r ei d e n t i f i e db yt l c ，a n dt h eb a i c a l i n c o n t e n to ft h ed r u gw a sm e a s u r e db yh p l c a v e r a g er e c o v e r yr a t ew a s9 6 8 w h i l er s d w a s1 4 5 a s s a ym e t h o dw a sv a l i d a t e di nt h er e s e a r c ho fc o n t e n t o nt h eb a s i so ft h e a b o v e m e n t i o n e dq u a n t i t a t i v ea n a l y s i sm e t h o df o rb a i c a l i n ，q u a l i t ys t a n d a r do fb i y a n q i n g c a p s u l ew a sd r a f t e d k e yw o r d s ：b i y a n q i n gc a p s u l e h o sm a g n o l i a er a d i xs c u t e l l a r i a e p r e p a r a t i o n p r o c e s sq u a l i t ys t a n d a r d t h eo r t h o g o n a ld e s i g n 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他 个人或集体己经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：碧可翻幻 日期：俨，月2 - 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和 借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据 库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口， 在 本论文属于 ”一 不保密口。 ( 请在以上方框内打“”) 学位论文作者签名 年解密后适用本授权书。 指导教师签名： 刍埘 日期：弘。，年岁月j 弓日 日期：，哆，年、r 月f 弓日 华中科技大学硕士学位论文 1 1 引言 1 综述 急、慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎为临床常见病多发病，近年来发病率有逐年增加 的趋势，中医药治疗上述疾病有一定的优势和特色，中药汤剂治疗急、慢性鼻窦炎， 过敏性鼻炎有定的疗效，且毒副作用小。但汤剂存在服用不便的缺点，且在煎煮 过程中会使一些有效成分丢失，为此将遴选出的四味药制成胶囊，按照新药( 中药) 药学的指导原则的要求，进行了鼻咽清胶囊的制备工艺和质量标准研究，为进一步 开发治疗急、慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎的新药打下良好的基础。 急性羿窦炎是指鼻窦粘膜的急性炎症，多继发于外感之后，亦可见于变态反应性 鼻炎、气压性损伤、鼻腔异物、腺体样肥大、鼻腔肿瘤之后继发感染。属祖国医学 鼻渊、头痛范畴。本草纲目有“鼻渊流浊涕，是脑受风热”记载。可见其病因病 机为感受风热之邪，或寒邪入里化热，热毒痰浊聚于鼻窍而成：或由于脾肺虚弱，肺 气不足，卫表不固，不能抗御外邪，脾虚运化失健，痰浊停聚，滞留鼻窍，腐蚀鼻窦肌 膜，而成鼻渊。 祖国医学称慢性鼻窦炎为“鼻渊”。由肺气郁结，壅塞鼻窍，同久不散致气血淤 滞、浑浊、凝结而成，认为胆移热于脑，则称鼻渊，鼻渊者浊涕下不止也，符合现代慢 性鼻窦炎的临床特征。对慢性鼻窦炎的治疗应首先选择药物治疗“、”，只在规范的 药物治疗无效或发生并发症的情况下才考虑手术治疗”“。药物治疗的目标是控制 感染、改善通气和恢复鼻一鼻窦生理功能。其主要包含抗炎、抗过敏、促进黏膜纤 毛传输以及改善机体免疫缺陷等方面。 过敏性鼻炎即变态反应性鼻炎，属于中医学鼻鼽范畴，其发病率较高。本病是以 突然和反复发作鼻痒、喷嚏、流清涕为主要症状的一种疾病。西医多从避免接触致 敏原、对症治疗和降低机体敏感性等方面治疗，但远期疗效尚不理想，中医治疗方法 颇多，效果较为满意。现将近年有关中医药治疗过敏性鼻炎的情况综述如下。 “正气存内，邪不可干”，“邪之所凑，其气必虚”。中医认为过敏性异炎内因由 肺脾肾三脏虚损，外因由风、寒等六淫之邪侵袭为患。肺气虚，卫表不固，腠理疏松， 华中科技大学硕士学位论文 风寒乘虚而入，犯及鼻窍，邪正相搏，肺气不得通调，滓液停聚，而致喷嚏流清涕，即 “清涕者，脑冷肺寒所致”。肺气的充实，有赖于脾气的输布，脾气虚则肺气虚，而气 之根在肾，肾虚则摄纳无权，气不归元，阳气易于耗散，风邪得以内侵而致病。办即 “五气所病肾为欠、为嚏”。中医治疗本病，在辨证的基础上，三因治宜，灵活地 以内治法治其本，恢复脏腑功能，以外治法调理气血或直达病所。因此，治疗本病宜 从整体出发，内外兼治。中医治疗本病有着独特的优势，值得进一步探索研究。 鼻明清胶囊系纯中药制剂，本方紧扣肺气郁结，壅塞鼻窍，f 1 久不散致气血淤 滞、浑浊、凝结及肺脾肾三脏虚损，外因由风、寒等六淫之邪侵袭的痫机，具有辛 散驱风，清热通窍的功效，用于急、慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎。疗效显著。 1 2 处方来源、组成及分析 1 2 l 处方来源 该方是在数十个传统汤剂处方的基础上对各种中药进行比较、分析、研究后， 遴选出了四味中药而组成，这些药物用于临床多年，疗效确切，对两干多例确诊为 急、慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎患者的临床治疗观察，证明疗效确切，有很好的研究 价值和推广前景。 1 2 2 处方组成 辛夷黄芩黄芪防风 1 2 3 功能主治 祛风通窍，清热解毒。用于急慢鼻渊( 急、慢性鼻窦炎，过敏性彝炎) 。 1 2 4 方解 本方所治病症乃因风火上扰于脑，清阳不能上升，浊阴反而逆上所至鼻渊。治 宜祛风通窍，清热解毒。方中辛夷能入肺经，具祛风通窍之力，本草纲目避载： “辛夷走气而入肺，能助胃中清阳上行，治头面目鼻之病。”本草新篇记载：“辛 夷，通窍而上走于脑舍，治鼻塞鼻渊之症。”其善通鼻窍，并能升胃中清阳，上达 于脑：黄芩清热解毒，泻肺降火。李果曾这样描述：“黄芩，味苦而薄，敞能清肺火 而解肌热。”其善清肺火，与辛夷相伍，治鼻渊流涕，有清热散j x l 之效，m - 药同为 2 华中科技大学硕士学位论文 方中之君药。黄芪入肺、脾二经，医学启源记载黄芪的功效：“补肺气，实皮毛， 泻肺中火”。防j x l 治风通用之药，主治诸风引起的周身不遂，治咳嗽鼻塞。防风可 引黄芪达表而御邪，黄芪得防风而无留邪之弊，防风得黄芪不必发散太过，补中寓 散，补散兼治，二药为方中之臣使也。诸药合用，祛风通窍，清热解毒，具有标本 兼治，使鼻鼽、鼻渊之症可解。 1 2 5 处方中药物的现代研究情况 ( 1 ) 辛夷：辛夷含挥发油l 5 ，油中，大多含有桉油精、丁香酚、胡椒酚甲 醚等以及木兰脂素等木质素类成分。有收敛募黏膜血管与抗组胺样作用“，并能增 加血流速度、改善微循坏及良好的抗过敏和平喘”“4 作用。 ( 2 ) 黄芩：含多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷( b a i c a l i n ) 【1 3 叫5 1 ，黄芩素 ( b a i c a e n ) 、汉黄芩苷( w o g o n o s i d e ) 1 1 5 】，汉黄芩素( w o g o n i n ) i s l 、黄芩新素 ( s k u l l c a p f l a v i n e ) i 和i i 【1 6 1 刀等，具有抗菌、抗病毒【1 8 19 1 ，抗变态反应 2 0 25 1 ，抗炎 2 6 1 ，增强机体免疫功能，镇静与降压，利胆与解痉，抗氧化2 8 、2 9 1 等药理作用。 ( 3 ) 黄芪：含多糖类 3 0 l ，主要有黄芪多糖i 、黄芪多糖i i 、黄芪多糖i i i ：皂苷类， 主要有黄芪皂苷( a s t r a g a l o s i d e ) i v i i i 3 0 吲l ，大豆皂苷( s o y a s a p o n i n ) 【3 2 1 ，其中 黄芪甲苷为黄芪的主要成分。还含有天冬酰胺( a s p a r a m i d e ) 、脯胺酸( p r o l i n ) 等2 1 种氨基酸 3 3 1 ，具有提高和促进免疫功能【3 4 - 3 8 1 ，保肾利尿，抗菌与抗病毒，提高机 体应激能力，抗炎等作用。 ( 4 ) 防风：含挥发油及升麻素( c i m i f u g i n ) 、升麻苷( p r i m 一0 g l u c o s y l c i m i f u g i n ) 、 5 氧甲基维斯阿米醇及其苷( 4 o b d g l u c o s y l 5 0 m e t h y l v i s a m m i n 0 1 ) 3 9 - - 4 0 1 等色 原酮成分，补骨脂素( p o s r a l c n ) 等香豆素成分，人参醇( f a l c a r i n 0 1 ) ，胡萝h 苷等 成分。具有镇静、镇痛【4 卜4 2 1 、抗过敏“、免疫增强、抗炎、解热等药理作用。用于 风寒感冒头痛，类风湿性关节炎，偏头痛，皮肤瘙痒，破伤风等。 1 3 本课题研究内容 异冈清胶囊是由辛夷、黄芩等四味中药组方制备而成，传统汤剂处方中这几味 药在临床用于鼻窦炎、鼻炎具有明显疗效。但汤剂存在服用不便的缺点，且在煎煮 华中科技大学硕士学位论文 过程中某些有效成分丢失，为此将其制成胶囊。按照新药( 中药) 药学的指导原则 的要求，本课题以传统中医药理论为指导，依照新药审批办法中有关中药6 类 新药的规定，运用现代制药技术，对该制剂的制备工艺、质量标准进行了系统的实 验研究。为进一步开发治疗急、慢性鼻窦炎，过敏性鼻炎的新药打下良好的基础。 4 华中科技大学硕士学位论文 2 制备工艺研究 2 1剂型选择 本处方是在数十个传统汤剂处方的基础上对各种中药进行比较、分析、研究后， 遴选出了四味中药而组成，这些药物以汤剂的形式用于临床疗效确切，但汤剂需临 用新配，口服剂量太，服用携带不便，不适应于现代生活节奏，且在煎煮过程中某 些有效成分丢失，故考虑改革剂型。根据本方的功能主治，为便于服用和携带，首 先考虑制成固体制剂，鉴于本方日服用量为2 1 3 9 ，服用量较小，考虑做成胶囊剂 或片剂。而胶囊剂制备时不需加黏合剂和压力，在胃肠道吸收快川，同时，本品中 有些成分易受空气中光、湿、热的影响，从而造成含量降低，最终影响疗效，若制 成胶囊剂，可保护药物尽量不受这些因素的影响，从而提高稳定性，保证疗效。故 最终选择制成胶囊剂。 2 2 工艺路线的初步确定 2 2 1 剂型 本品拟制成胶囊剂 2 2 2 工艺路线的选择 本品基本工艺路线为“： 药材j 堕暨提取液坌堕尘塑骂浓缩液坌童墅蔓骂浸膏粉 塑塑型塑婪立翌型堕辈兰堡些颗粒垡壁巡成品 鼻咽清胶囊的制备工艺是根据处方中药物性质，并结合大生产可行性及生产 设备等诸多因索，经过反复试验而来。 2 3 提取工艺的研究 舜炎清胶囊出辛夷、黄芩、黄芪、防风四昧药组成，功能“祛风通窍，解毒利 5 华中科技大学硕士学位论文 咽”，主治急慢性鼻窦炎、过敏性鼻炎，辛夷主含挥发油，木兰脂素等木质素类成 分；黄芩含黄芩苷，黄芩素、汉黄芩苷，汉黄芩素等有效成分；黄芪含黄芪多糖、 黄芪甲苷等皂苷类成分：防风含升麻素、升麻素昔、刻芳酚苷、5 一氯甲基维斯阿 米醇营等色原酮成分。根据各味药活性成分的理化性质并参考有关文献，确立了制 各工艺路线。 黄芩的主要成分是黄芩苷，黄芩苷在植物体内以镁盐形式存在，所以用水作提 取溶剂。黄芩苷分子结构中c ：上羧基易成盐形式存在，加酸后黄芩苷分子就被还原 出来。利用黄芩苷在酸性溶液中易析出的性质，进行提取和纯化。黄芪、辛夷、防 风水煎液偏酸性。如果将四味药混合提取，必将使黄芩苷随杂质滤除。所以黄芩不 能与黄芪、辛夷、防风混合提取，胶囊制剂工艺中黄芩采用单独提取的工艺。辛夷 提取挥发油，药渣与黄芪、防风进行水提醇沉的工艺处理，使主要有效成分得以提 出并去除部分鞣质，树脂，蛋白质等杂质，可减少服药量。 2 4 黄芩单提工艺研究 2 4 1 实验仪器及材料 ( 1 ) 实验仪器：紫外分光光度计u v - 2 6 5 ( 日本岛津、) ；l c 2 0 1 0 a 液相色谱仪 ( 闩本岛津) ，c r 3 a 。记录仪，s p d i o a v 检测器，s i l 1 0 a 自动进样器。甲醇为 色谱纯： ( 2 ) 实验材料：黄芩苷( 中国药品生物制品鉴定所) ：黄芩：购自南阳市药材公 司，为唇形科植物黄芩s c u t e l l a r i a b a i c a l e n s i sg e o g i 的干燥根。 2 4 2 实验方法 黄芩的主要成分是黄芩菅，黄芩苷在植物体内以镁盐形式存在，所以用水作 提取溶剂。黄芩苷分子结构中c ：上羧基易成盐形式存在，加酸后黄芩苷分子就被还 原出来。利用黄芩苷在酸性溶液中易析出的性质。本试验采用水提取、酸沉淀再用 水洗、醇洗的方法进行提取和纯化。 2 4 3 结果与分析 为了便于研究，将黄芩单提工艺分为：水提取工艺的研究；酸沉工艺的研 究：水洗，醇沈工艺的研究三部分，分别进行考察。 ( 1 ) 黄芩水提取工艺的研究 6 华中科技大学硕士学位论文 利用厄交设计，以黄芩苷含量为标准，选择药材粒度，提取次数，第一次煎煮 时间，第二、三次煎煮时间，加水倍数丘个因素，每个因素各选二个水平，采用l h ( 2 7 ) 诈交表进行设计试验。 表l黄岑水提取f 艺冈素水平 称取黄芩饮片2 0 0 9 ，平均分成4 份，每份5 0 9 。称取黄芩粗粉2 0 0 9 ，平均分成 4 份，每份5 0 9 。分别按表l 黄芩水提取工艺因素水平和表2 黄芩水提取工艺e 交 试验设计进行实验，每份实验提取液用蒸馏水定容至1 0 0 0 m l 容量瓶中，待测含量。 准确量取每份实验之提取液2 m l ，置烧杯中，加稀盐酸调p h 至l 2 ，移入l o m l 离心管中每次用水5 滴洗涤容器，沈液并入离心管中，至沉淀全部移入为止。离 心，弃去上清液，每次用丙酮0 5 m l 沈涤沉淀，离心，弃去丙酮，至丙酮沈液近无 色为止。用9 5 乙醇将沉淀移至 o o m l 量瓶中，加热使溶解，放冷至室温，加乙醇 稀释至刻度，摇匀。然后，精密吸取5 m l ，置5 0 m l 量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇 匀。照分光光度法，在2 7 9 n m 的波长处测定吸收度，按c ：，h ，。o 。的吸收系数( 旷。) 为6 7 3 计算黄芩苷的含量。结果见表2 。 表2 黄岑水提取止交试验结果 列号 l2 3 4 67 黄苓茴 表头殴计 abc 。 de 含域( g ) 8 i i i i ， 一 i i r l 1 5 7 8 5 1 5 9 8 0 3 9 4 6 3 9 9 5 0 0 4 9 l 2 l 1 3 7 7 5 1 8 0 1 0 3 4 3 9 4 5 2 3 l0 8 4 1 5 7 7 5 1 5 9 9 0 3 9 4 4 ： 9 9 8 0 0 5 4 l 2 1 2 1 2 l 2 t 4 6 0 5 1 7 1 6 0 3 6 5 1 4 2 9 0 0 6 3 9 l 2 l l 1 5 5 4 5 1 6 2 2 0 3 8 8 6 4 0 5 5 0 ，1 6 9 l 1 2 1 5 6 4 5 1 6 1 2 3 9 1 1 4 0 3 0 0 1 1 9 i l 54 5 5 1 6 3 l o 3 8 6 4 4 ( ) 7 8 0 2 1 4 2 8 2 5 3 9 6 5 4 2 6 0 4 7 3 5 3 2 9 5 3 6 7 0 4 2 2 5 4 7 9 f ) 华中科技大学硕士学位论文 用正交试验的直观分析法进行分析，从r 的大小可知：因素的主次顺序为 b ) c ) e d a 。优组合为：a ! b ：c ! d 正二即辟i 祖粉煎煮三次，每次煎煮2 h ，每次加t 2 倍水。 对上述资料进行方差分析见表：j 。 袭： 方差分析 从方差分析知：b 、c 达到了极显著水平，虽然e 没有达到显著水平，但其f 值 也较大，应控制在最优水平，而d 和a 因素可以在任意水平，为了节约工寸，同时 考虑到实际生产中颗粒粉易焦化、粘结，过滤难的特点。a 应取a - ，d 应墩d i 。l 捌 i i ： i ：，i i i 。，i i ， i ? 。所以，b 取眺，c 取c ! ，e 取& 。最佳提取工艺是a 乳c ：d ， e 。即用黄芩饮片，煎煮3 次，第一次2 小时，第二、三次各l 小时，每次加l2 倍 量水。 ( 2 ) 黄芩酸沉工艺的研究 用正交试验，以黄芩总苷( 即沉淀量) 为指标，选择浓缩液相对密度，加艘后的 p h 值，保温温度，保温时忙j ，静置时问5 个因素，每个因素各选2 个水卜，采f j b ( 幻f 交表进行设计试验。 称取黄芩饮片8 0 0 9 ，第一次煎煮2 小时，第二、三次各煎煮l 小寸，饵次朋 i 2 倍量水，合并煎液，滤过，将滤液、平均分成8 份，按表4 酸沉工艺因袭水f 和灰 5 酸沉工艺正交试验设计及黄芩总苷含量进行试验，以黄芩总苷( 即沉淀忆力指杯， _ r 华中科技大学硕士学位论文 表4酸沉工艺闻索水平 | 灭l 素相对密度p h 值保温温度保温时间静置时间 水平a ( g m l ) bc ( ) d ( 小时) e ( 小时) 表5 酸沉j 二艺上e 交试验设计及黄芩总酋含麓 列号1 2 3 4 ， 67 黄岑茁 表头设计a b cd e 含量( g ) 用正交试验的直观分析法进行分析，从r 的大小可知：因素的主次顺序为a b d c e 。最优组合为a ，b 。c ，d e 。对上述资料进行方差分析见表6 。 表6 方差分析 方著来源d fs s，f 。 。 al1 7 0 8 4 7l _ 7 0 8 4 7 1 0 6 7 8 1 0 1 33 4 1 2 b c d e 1 误差e 误差e 、 1 l 0 4 0 1 8 5 6 0 ，0 2 6 3 3 5 0 0 8 4 6 6 6 7 8 1 0 一 4 0 2 1 0 “ 4 8 1 0 、 0 4 0 1 8 5 6 0 0 2 6 3 3 5 0 0 8 4 6 6 6 7 8 x 1 0 1 2 0 1 x 1 0 3 1 6 x 10 _ 2 5 1 1 6 率幸 1 6 4 6 * 5 2 9 2 枷k b d c ，最优组合为a 。b ，c ，d 。条件，即萃取罐的温度为4 5 * 0 、萃取压力为i o o m p a 、 c 0 2 流量为2 0 k g h 、萃取时问为2 0 h 为最佳提取条件。经方差分析见表1 0 。 表l o 方差分析 方差来源d ，5 s，f 。 。 a22 3 3 9 61 l t9 8 1 5 7 1 6 6 4 2 68 0 2 b22 9 0 3 1 4 5 1 58 6 8 料 c20 7 60 3 82 2 7 d21 1 6 30 5 8 1 53 4 8 e91 5 0 50 1 6 7 2 总变异1 73 0 1 4 5 a 、b 达极显著在最优水平即a b ，c 、d 可在任意水平，即最佳条件为a ：b 。c d ， 所以萃取时间可定为l h ，以缩短生产时程。 在上述最佳萃取条件下，测得辛夷中的挥发油的平均含量( 4 4 o 5 ) ( n = 3 ) 。 互显生缝垒一 1 2 华中科技大学硕士学位论文 超临界c o ：萃取较传统水蒸汽的区别点是提取时间短，总收得率及有效组分含 量均高，同时低温萃墩有利于有效成份的保存。该方法在辛夷的提取及质量研究方 面有其独特的优点。 2 6 煎煮条件的选择 2 6 1 实验仪器及材料。 ( 1 ) 实验仪器c s 一9 3 0 双波长薄层扫描仪( 日本岛津) ， ( 2 ) 实验材料 辛夷为木兰科植物望春花m a g n o l i ab i o n d i ip a m p 、玉兰m d e n u d a t ad e s r 的干 燥花蕾。符合中国药典2 0 0 0 年版一部1 4 3 页规定。 黄芪 为豆科植物蒙古黄芪a s t r a g a l u sm e m b r a n a e e u s ( f i s c h 、b g e v a r m o n g h o l i c u s ( b g e ) h s i a o 的干燥根。符合中国药典2 0 0 0 年版一部2 4 9 页规定。 防风为伞形科植物防风l e d e b o u r i e l l ad i v a r i c a t a ( t u r c z ) h i r o e 的干燥根。符合中国药典2 0 0 0 年版一部1 1 7 页规定。 辛夷、黄芪、肪风药材均购自南阳市药材公司。 2 6 ，2 实验方法 辛夷、黄芪、防风药材均含有水溶性成分，所以，采用水煎煮提取的方法进行 提取，然后用乙醇沉淀除去部分杂质的方法。 2 6 3 结果与分析 ( 1 ) 水煮条件的选择，根据中药提取常用方法，选择了煎煮时间、煎煮次数、醇 沉浓度，煎煮时的加水量四个因素，每个因素又各选三个水平进行正交试验，其试 验设计和结果见表1 l 。 表l i 煎煮工艺因素水平 1 2 1 5 2 o i 2 5 0 6 0 华中科技大学硕士学位论文 因方中黄芪、防风、辛夷等均含有极性较大的有效成分，故以水饱和丁f 丁醇 提取物为指标，来综合考察各味药有效成分的煎出效果。 分别取黄芪8 9 、防风7 5 9 、辛夷l o g 加水2 0 0 m l ，采用l 。( 3 1 ) 正交表安 排试验，药液浓缩，醇沉2 4 小时后，滤过，滤液水浴挥去醇昧。定量转移至6 0 m 1 分液漏斗中，加水饱和正丁醇萃取4 次，每次2 0 m l ，合并萃取液，置t 0 5 “c 烘至恒 重的蒸发皿中，水浴挥去溶剂后，于1 0 5 0 c 烘至恒重，求得正丁醇萃取物的量。结 果见表1 2 。 表1 2i 交设计方案及结果 实验方案实验结果 冈素 实验毒 abcd 水饱和正j 醇提取物( g ) ll1ll1 3 0 1 41 3 8 2 52 6 8 3 9 2l2221 7 3 l i 1 6 4 4 83 3 7 5 9 3l333 1 8 4 1 51 7 2 5 83 5 4 0 3 42123l - 1 1 3 61 6 4 0 2 2 7 5 3 8 522321 6 9 3 l1 3 0 0 929 9 4 623l1 1 8 3 2 1 1 6 3 4 7 2 8 2 9 7 731321 4 3 5 41 3 9 4 33 4 6 6 8 832131 6 1 2 41 6 2 4 632 3 7 9332l 1 8 7 2 5 1 9 7 6 4 3 8 4 8 9 k i 9 6 0 0 l8 2 6 7 49 3 8 7 7 9 9 9 9 6 心 9 2 1 4 6 9 6 0 6 99 9 7 8 69 1 9 9 6 9 9 1 5 61 0 5 8 69 3 6 49 5 3 l l k 3 2 02 7 5 5 83 1 2 93 3 3 3 2 琏 3 0 7 23 2 0 2 33 3 2 6 23 0 6 7 墨 3 3 0 5 3 6 1 93 1 2 13 1 7 7 亓0 2 3 3 0 8 6 30 2 0 5 20 2 6 6 2 从直观结果看，四个因素对试验结果影响的大小依次为b a c d 。d 因素从直观 分析表可知，第1 水平( 加6 倍量水) 提取率最高，生产中考虑既能充分浸没药材， 又不致药液体积过大，结合直观分析结果，故选择加水量为生药量的6 倍。最优组 合为a 。b ：c ：d 。对资料进行方差分析见表1 3 。 1 4 华中科技大学硕士学位论文 表1 3 方差分析 方著来源d f s sf焉*r m 总变异 0 0 2 0 7 1 4 2 6 8 0 2 o 2 7 9 4 9 9 8 女 00 2 0 3 l o 0 2 7 9 8 5 。 7 、线性范围考察 精密称取在6 0 * ( 2 减压干燥4 小时的黄芩苷对照品1 0 5 0 m g ，置1 0 0 m l 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 0 m l ，置2 5 m l 量瓶中，加甲醇稀释至 刻度，摇匀，制成每i m l 含0 0 4 2 m g 的溶液。 分别精密吸取5 、l o 、1 5 、2 0 、2 5u1 的对照品溶液，注入液相色谱器仪中， 测定色谱峰面积，测定结果见表2 2 。 表2 2 黄岑苷不同进样量的峰面积 以进样量为横座标，色谱峰面积为纵座标，绘制标准曲线，经线性回归，回归 方程为： y = 6 7 7 2 9 0 x + 5 2 4 3，= 0 9 9 9 8 由测定结果提示，黄芩苷对照品进样量在0 2 1 1 0 6 p - g 范围内线性关系良好。 3 0 华中科技大学硕士学位论文 8 、供试品溶液制备方法考察 鉴于本制剂中黄芩系提取后加入，故本试验拟以超声处理法制备供试液。试验 中对提取溶剂、超声处理条件进行了定量考察，考察结果如下。 ( 1 ) 提取溶剂选择 根据黄芩萤的化学性质，本试验拟以5 0 甲醇与甲醇为溶媒，以黄芩苷提取量 为指标加以考察，考察结果见表2 3 。 表2 3 提取溶剂考察结果 溶刺黄岑营含鼍( m g g ) 5 0 甲醇 甲醇 4 8 8 4 3 6 结果表明，用5 0 甲醇提取效率较高，故选用5 0 甲醇为提取溶剂。 ( 2 ) 超声处理条件考察 本试验选用超声处理法制备供试液对不同超声处理条件进行了考察，考察结果 见表2 4 。 表2 4 超卢处理时间考察结果 提取时间( 分)黄芩营含耸( m g g ) 1 0 2 0 3 0 4 2 1 4 8 9 4 8 8 测定结果提示，超声提取2 0 分钟，样品中黄芩苷己基本提取完全，为节约提 取时间，故确立超声处理时间为2 0 分钟。 9 、稳定性试验考察 取样品内容物l0 粒，倾出内容物。研细，取粉末1 0 9 ，精密称定，按正文 含 量测定 项下制备供试液，精密取同一供试液( 批号2 0 0 3 1 0 0 5 ) ，按0 、2 、4 、6 、8 小时时n i n 隔，分别进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表2 5 。 表2 5 稳定性试验考察结果 3 i 华中科技大学硕士学位论文 试验结果提示：供试液制备后8 小时内测定，色谱峰面积无明显变化，在此时 间内，待测组分化学性质稳定。 1 0 、精密度试验考察 取本品1 0 粒( 批号2 0 0 1 0 1 0 5 ) ，倾出内容物，研细，取粉术l g ，精密称定， 按正文 岔量测定 项下方法制备供试液。分别精密吸取5 ul ，连续进样5 次，按前 述色谱条件进样分析，测定色谱峰面积，测定结果见表2 6 。 表2 6 精密度试验测定结果 测定结果表明，本试验精密度试验符合有关规定。 1 l 、重复性试验考察 取同一批号的样品( 批号2 0 0 3 1 0 0 5 ) 1 0 粒，5 份，分别倾出内容物，研细，取 l g 精密称定，分别按样品 含量测定 项下方法操作，测定，测定结果见表2 7 。 表2 7 重复性试验测定结果 1 2 、回收率试验考察 取同一批号( 2 0 0 3 1 0 0 5 ) 样品，内容物5 份，研细，取粉末0 5 9 ，精密称定，精 密加入黄芩苷对照品溶液( 0 0 4 2 m g m 1 ) 5 0 m l ，按样品含量测定项下方法操作，测定， 测定结果见表2 8 。 表2 8 回收率试验测定结栗 华中科技大学硕士学位论文 测定结果提示：本方法回收率在9 6 4 1 0 0 4 之间，r s d 为1 5 4 ，符合有关 规定。 1 3 、样品含量测定数据 经采用正文 含量测定 项下方法，测定三批样品中黄芩苷含量，测定结果见表 2 9 。 表2 9 二批样品含堵测定结果 根据上述测定结果，暂定本品每粒含黄芩以黄芩苷计算，不得少于2 0m g 。 3 4 本章小结 为了控制制剂的质量，必须制定出合理的质量标准及可行的检测手段，本章对 鼻明清胶囊的质量标准进行了拟定，并对各项目的检测进行了研究，并选出较好的 方法。在鉴别方面，因黄芩与黄芪为处方中最为主要的两昧药，故采用药典规定的 鉴别方法以鉴定制剂中的黄芩和黄芪。这里主要研究了供试品溶液的处理及薄层板 的选择。对黄芩，采用甲醇超声提取2 0 分钟，滤过，滤液水浴蒸干，残渣加水使 溶解，置6 0 m 1 分液漏斗中，加醋酸乙酯萃取3 次：加水饱和正丁醇萃取3 次， 合并萃取液，加水洗涤一次，弃去水层，萃取液水浴蒸干，残渣加甲醇2 m l 使溶解 以制成供试品溶液，薄板采用硅胶( ；薄板；对黄芪，采用取本品内容物，研细，称 取细粉约2 0g ，加甲醇2 0 m l ，超声处理2 0 分钟，滤过，滤液加于已处理好的中 性氧化铝柱( 1 0 0 i 2 0 目，5 9 ，内径l o 1 5 m m ) 上，用5 0 甲醇l o o m l 洗脱，收集 沈脱液，蒸干，残渣加水3 0 m l 使溶解，用饱和的f 丁醇提取2 次，每次2 0 m l ，合 并正丁醇液；用水洗涤2 次，每次2 0 m l ，弃去水液，萨丁醇液蒸于，贱渣加甲醇 0 5 r n l 使溶解以制成供试品溶液，i m 尊板采用硅胶g 薄板。在含量测定方面，通过 3 3 华中科技大学硕士学位论文 对色谱条件的考察，柱用s h i m _ p a d k ，c l co d s ( 6 0i n l i l * 1 5 0 m m ) 在此条件下，供试 液被测成分与其它组分分离度良好。经参考有关文献，并经绘制紫外图谱，确定测 定波长为2 7 7 n m 。紫外图谱测定条件为：溶剂为甲醇。扫描纸数为4 0 n m c m ，扫描 区间4 0 0 - - 2 0 0 n m 。 华中科技大学硕士学位论文 4 全文总结 急、慢性异窦炎，过敏性鼻炎为临床常见病多发病，近年来发病率有逐年增加 的趋势，中医药治疗上述疾病有一定的优势和特色，传统汤剂处方中这几味药在临 床用于鼻窦炎、鼻炎具有明显疗效。但汤剂存在服用不便的缺点，且在煎煮过程中 某些有效成分丢失，本课题就是在传统汤剂处方的基础上，经过对比、分析、研究， 遴选出四昧中药并将其制成胶囊，按照新药( 中药) 药学的指导原则的要求，进行 了舞咽清胶囊的制备工艺和质量标准研究，并从中获得了一些具一定价值的信息， 为进一步开发治疗急、慢性异窦炎，过敏性鼻炎的新药打下良好的基础。 异咽清胶囊系纯中药制剂，本方紧扣肺气郁结，壅塞鼻窍，同久不散致气血淤 滞、浑浊、凝结及肺脾肾三脏虚损，外因由风、寒等六淫之邪侵袭的病机，具有辛 散驱风，清热通窍的功效，用于急、慢性鼻寞炎，过敏性鼻炎有很好的疗效。 l 、通过相关文献资料分析，结合临床给药要求及处方中药物性质确定了剂型： 根据处方功能主治和药物成分的理化性质，确定了工艺路线和工艺条件。 黄芩的单提是该课题的创新点之一，因为在传统处方中一起煎煮会使黄芩苷大 量丢失。黄芩单提研究为：采用正交试验考察了水提取、酸沉淀、水洗、醇洗工艺 并进行了方差分析，确定了黄芩单提工艺的最佳工艺参数，黄芩的最佳提取工艺的 条件为：水提取：用黄芩饮片，煎煮3 次，第一次2 小时，第二、三次各l 小时， 每次加12 倍量水；酸沉：浓缩至相对密度1 0 5 1 1 0 ( 8 0 测) ，加盐酸调1 2 ， 8 0 保温i 小时，静置2 4 小时；水洗、醇洗：酸沉后的沉淀物用水洗至p h 5 0 ， 水沈的目的是洗出酸处理讨程中产生的无机盐及一些水溶性杂质，继用7 0 乙醇沈 至p h 7 0 ，其目的是去除一些醇溶性杂质。试验证明，提取工艺合理，黄芩苷收率 高，质量易于控制，避免了方中其他的相互干扰，能够较好的控制成品质量。 将辛夷的挥发油提取后加入煎煮提取物中是浚课题的又- - b , 新点。采用f 交试 验考察了用c o 。提取辛夷挥发油工艺，确定了辛夷的工艺参数为：萃取罐的温度为 4 5 、萃取压力为1 0 0 m p a 、c o ：流量为2 0 k g h 、萃取时f b j 为l0 h 为最佳提取条件。 对辛夷中其它成分及黄芪、防风成分的提取，采用正交试验以f 丁醇为指标考 华中科技大学硕士学位论文 察了水提醇沉的工艺参数，结果表明：煎煮3 次( 每次i 5 h ) ，醇浓度为6 0 加水 量为6 倍为最佳提取方案。对成型品工艺的研究，以吸湿率和休止角为指标考察成 型工艺，确立了成型工艺参数，结果表明，添加玉米淀粉为辅料最为理想，但不管 添加何种辅料，休止角都大于4 0 度，流动性不符合要求。研究表明：制成颗粒后 吸湿率及休止角都改所改善并符合要求，所以应制成颗粒为宜。 2 、成品质量标准的研究，通过l o 批中试样品的观察，拟订了成品性状：采用 t l c 法鉴别黄芩和黄芪，该法专属性强。对成品进行了砷盐检查、重会属检查、微 生物限度检查、水分、装量差异、崩解时限检查以及胶囊剂项下的检查项内容；采 用h p l c 法测定了黄芩苷的含量，研究结果表明：该法精密度高，方法准确，回收 率在9 6 4 i 0 0 4 之间； 结论：通过对鼻咽清胶囊的制备工艺和质量标准的系统研究，本品制备工艺合 理可行，质量基本稳定，质量标准可控