无菌实验室的管理要求.doc

无菌实验室的管理要求食品微生物实验室的无菌间应制定质量管理标准，并设专人负责无菌间的定期环境监测工作。对无菌室的管理可遵循以下的原则：1. 无菌室应设有无菌操作间和缓冲间，无菌操作间洁净度应达到10000级，室内温度保持在20-24，湿度保持在45-60%。超净台洁净度应达到100级。2. 工作人员进入无菌室前，必须用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在缓冲间更换专用工作服，鞋，帽子，口罩和手套(或用70%的乙醇再次擦拭双手)，方可进入无菌室进行操作。3. 无菌室使用前必须打开无菌室的紫外灯辐照灭菌30分钟以上，并且同时打开超净台进行吹风。操作人员进入无菌室应关掉紫外灯；4. 人员进入无菌室要穿无菌衣、帽、口罩和专用鞋，非工作人员不得随意进入；5. 无菌室应备有工作浓度的消毒液，如5的甲酚溶液，70的酒精，0.1的新洁尔灭溶液等。6. 无菌室内配备紫外灯进行空气消毒，应定期用适宜的消毒液（70%酒精或0.2%新洁尔灭）灭菌清洁，以保证无菌室的洁净度符合要求。7. 无菌室应保持清洁，严禁堆放杂物，以防污染。每日进行湿式小扫除，每周进行大扫除，每月进行空气和实验台表面的细菌学检测，各项指标控制在最低标准，符合无菌室的技术要求。8. 严防一切灭菌器材和培养基污染，已污染者应停止使用。9. 需要带入无菌室使用的仪器、器械、平皿等一切物品，均应包扎严密，并应用适宜的方法灭菌。10. 供试品在检查前，应保持外包装完整，不得开启，以防污染。检查前，用70的酒精棉消毒外表面。11. 无菌间内应保持清洁。操作完毕，应及时清理无菌室，用2%-3%煤酚皂溶液消毒，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。再用紫外灯辐照灭菌。需30W紫外灯，距离在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。12. 处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。13. 无菌室应每月检查菌落数。在超净工作台开启的状态下，取内径90mm的无菌培养皿若干，无菌操作分别注入融化并冷却至约45的营养琼脂培养基约15ml，放至凝固后，倒置于3036培养箱培养48小时，证明无菌后，取平板35个，分别放置工作位置的左中右等处，开盖暴露30分钟后，倒置于3036培养箱培养48小时，取出检查。100级洁净区平板杂菌数平均不得超过1个菌落，10000级洁净室平均不得超过3个菌落。如超过限度，应对无菌室进行彻底消毒，直至重复检查合乎要求为止。无菌操作基本技术及要求1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminarflow)以紫外灯照射30-60分钟灭菌，以70%的酒精擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10分钟后，才开始实验操作。2. 每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70%的酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。3. .无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70%的酒精擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘的非无菌区域操作。4. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。5. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少ClassII)。操作过程中，应避免引起气溶胶类物质的产生，小心毒性药品，例如DMSO及TPA等，并避免尖锐针头之伤害等。6. 使用无菌瓶内的溶液时，不可将无菌敷料堵塞瓶口倾倒无菌溶液，或直接伸入溶液瓶内蘸取，以免污染剩余的溶液。7. 无菌包内物品不慎污染或无菌包浸湿，外界微生物可渗入包内，造成污染，需重新消毒。8. 戴手套时应注意未戴手套的手不可触及手套外面，而戴手套的手则不可触及未戴手套的手或另一手套的里面。戴手套后如发现破裂，应立即更换。脱手套时，须将手套口翻转胶下，不可用力强拉手套边缘或手指部分，以免损坏。9. 每次操作过程中，均应做阴性对照，以检查无菌操作的可靠性。10. 吸取菌液时，必须用吸耳球吸取，切勿直接用口接触吸管。11. 接种针每次使用前后，必须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后，方可接种培养物。 12. 带有菌液的吸管，试管，培养皿等器皿应浸泡在盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒，24小时后取出冲洗。13. 如有菌液洒在桌上或