结核分枝杆菌课件PPT课件.ppt

1,一、生物学性状,形态与染色结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，大小14X0.4m。牛分枝杆菌则比较粗短。分枝杆菌属的细菌细胞壁脂质含量较高，约占干重的60%，特别是有大量分枝菌酸包围在肽聚糖层的外面，可影响染料的穿入。,2,分群（Mitchson假说）,A菌群：快速繁殖，巨噬细胞外和肺空洞干酪液化部分；B菌群：半静止状态，巨噬细胞内和空洞璧坏死组织中；C菌群：半静止状态，可突然间歇生长。D菌群：休眠状态，不繁殖，数量很少。,3,染色,分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl-Neelsen)抗酸染色法，以5%石炭酸复红加温染色后可以染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他细菌和背景中的物质为蓝色。,4,培养特性,专性需氧。最适温度为37，低于30不生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。在一般培养基中每分裂1代需时1824h，营养丰富时只需5h。,5,常用的有罗氏（Lowenstein-Jensen）固体培养基，内含蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿等。孔雀绿可抑制杂菌生长，便于分离和长期培养。蛋黄含脂质生长因子，能刺激生长。根据接种菌多少，一般24周可见菌落生长。菌落呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色，不透明。,6,抵抗力,结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感，在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘埃上保持传染性810d，在干燥痰内可存活68个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热626315min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死，可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。,7,耐药性,在固体培养基中对常用的含异烟肼1mg、链霉素10mg、利福平50mg能生长的结核分枝杆菌为耐药菌。耐药菌株毒力有所减弱。异烟肼可影响细胞壁中分枝菌酸的合成，诱导结核分枝杆菌成为L型,此可能是耐异烟肼的一种原因。药物敏感试验表明对异烟肼耐药，而对利福平和链霉素大多仍敏感。,8,二、致病性,结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖引起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤有关。致病物质与荚膜、脂质和蛋白质有关。,9,荚膜,荚膜的主要成分为多糖，部分脂质和蛋白质。其对结核分枝杆菌的作用有：荚膜能与吞噬细胞表面的补体受体3结合，有助于结核分枝杆菌在宿主细胞上的粘附与入侵；荚膜中有多种酶可降解宿主组织中的大分子物质，供入侵的结核分枝杆菌繁殖所需的营养；荚膜能防止宿主的有害物质进入结核分枝杆菌，甚至如小分子NaOH也不易进入。,10,故结核标本用4%NaOH消化时，一般细菌很快杀死，但结核分枝杆菌可耐受数十分钟。结核分枝杆菌入侵后荚膜还可抑制吞噬体与溶酶体的融合。,11,脂质,据实验研究细菌毒力可能与其所含复杂的脂质成分有关，特别是糖脂更为重要。索状因子：是分枝菌酸和海藻糖结合的一种糖脂。能使细菌在液体培养基中呈蜿蜒索状排列。此因子与结核分枝杆菌毒力密切相关。它能破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。若将其从细菌中提出，则细菌丧失毒力。磷脂：能促使单核细胞增生，并使炎症灶中的巨噬细胞转变为类上皮细胞，从而形成结核结节。,12,硫酸脑苷脂：可抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合，使结核分枝杆菌能在吞噬细胞中长期存活。蜡质D:是一种肽糖脂和分枝菌酸的复合物，可从有毒株或卡介苗中用甲醇提出，具有佐剂作用，可激发机体产生迟发型超敏反应。,13,蛋白质,有抗原性，和蜡质D结合后能使机体发生超敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状，并在形成结核结节中发挥一定作用。,14,免疫性,免疫机制结核分枝杆菌是胞内感染菌，其免疫主要是以T细胞为主的细胞免疫。T细胞不能直接和胞内菌作用，必须先与感染细胞反应，导致细胞崩溃，释放出结核分枝杆菌。机体对结核分枝杆菌虽能产生抗体，但抗体只能与释出的细菌接触起辅助作用。,15,结核分枝杆菌侵入呼吸道后，由于肺泡中80%90%是巨噬细胞，10%是淋巴细胞（T细胞占多数）；原肺泡中未活化的巨噬细胞抗菌活性弱，不能防止所吞噬的结核分枝杆菌生长，反可将结核分枝杆菌带到他处。但可递呈抗原，使周围T淋巴细胞致敏。,16,致敏淋巴细胞可产生多种淋巴因子，如IL-2、IL-6、INF-，他们与TNF-的共同作用可杀死病灶中的结核分枝杆菌。淋巴因子中INF-是主要的，有多种细胞能产生INF-，浸润的先后为NK、Ts/Th和CD4+、CD8+/T细胞。上述细胞有的可直接杀伤靶细胞，有的产生淋巴因子激活巨噬细胞，使吞噬作用加强引起呼吸暴发，导致活性氧中介物和活性氮中介物的产生而将病菌杀死。,17,结核的免疫属于感染免疫(infectionimmunity)，又称有菌免疫，即只有当结核分枝杆菌或其组分存在体内时才有免疫力。一旦体内的结核分枝杆菌或其组分全部消失，免疫也随之不存在。随着机体对结核分枝杆菌产生保护作用的同时，也可以看到有迟发型超敏反应的产生，二者均为T细胞介导。,18,近来研究表明结核分枝杆菌诱导机体产生免疫和超敏反应的物质不同。超敏反应主要由结核菌素蛋白和蜡质共同引起，而免疫则由结核分枝杆菌核糖体RNA引起。二种不同抗原成分激活不同的T细胞亚群释放出不同的淋巴因子所致。,19,结核菌素试验,结核菌素试验是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核分枝杆菌是否能引起超敏反应的一种试验。1.结核菌素试剂：旧结核菌素：系将结核分枝杆菌接种于甘油肉汤培养基，培养48周后加热浓缩过滤制成。稀释2000倍，每0.1ml含5u。目前都用纯蛋白衍化物，PPD有二种：人结核分枝杆菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCG-PPD。每0.1ml含5u。,20,2.试验方法与意义：常规试验分别取2种PPD5个单位注射两前臂皮内，4872h后:硬结4mm者为阴性；5-9mm为弱阳性；10-19mm为阳性；20mm或虽20mm，但局部出现水泡和淋巴管炎，为强阳性。若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之，BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种所致。,21,阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌，但应考虑以下情况：感染初期，因结核分枝杆菌感染后需4周以上才能出现超敏反应老年人严重结核患者或患有其他传染病，如麻疹，水痘导致的细胞免疫低下获得性细胞免疫低下，如艾滋病或肿瘤等用过免疫抑制剂者。,22,涂片法,抗酸杆菌（）：连续观察300视野未发现；抗酸杆菌（）：连续观察300视野发现1-3条;抗酸杆菌（1）：1-9条/100视野抗酸杆菌（2）：1-9条/10视野抗酸杆菌（3）：1-9条/1视野抗酸杆菌（4）：10条/1视野,23,浓缩集菌,先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4%NaOH（痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本先加5%鞣酸、5%乙酸各0.5ml于锥形量筒内静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。,24,培养,罗氏培养基，一般需2-6周，阳性结果随时报告，8周无菌生长，报为阴性结果，阳性结果按生长菌落占斜面1/4,1/2,3/4和全部划分1+到4+,25,快速诊断,一般涂片检查菌数需5x1034/ml,培养需1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性，且1-2d得出结果。操作中需注意实验器材的污染问题，以免出现假阳性。细菌L型由于缺壁并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假阴性。用组织磨碎器