（作物遗传育种专业论文）药用植物红芽大戟组织培养的研究.pdf

药用植物红芽大戟组第t 培养的研究 药用植物红芽大戟组织培养的研究 摘要 本研究通过对濒危药用植物红芽大戟进行系统的组织培养试验，建立 起良好的红芽大戟组织培养体系，并进行了人工栽培试验，探索出影响试 管苗移栽成活率的一些因素。为红芽大戟组织培养快速繁殖、种质资源保 存及人工栽培提供重要参考依据。试验结果表明： 1 、红芽大戟组织培养的基本培养基以m s 培养基效果最佳。 2 、不定芽直接分化途径可作为获取组织培养苗的主要途径。 3 、光培养较暗培养有利于愈伤组织的诱导和分化。 4 、红芽大戟顶芽是组织培养快繁的最佳外植体。 5 、6 - b a 对诱导愈伤组织和芽增殖均有促进作用。 6 、红芽大戟最佳继代周期为2 0 d - 匕。继代培养最佳糖分浓度为2 0 9 l - l 。 7 、在继代培养中，应同时添加6 - b a 、n a a 和m e t ，较好的浓度配比 为6 一b a 2 0 i 孵l - 1 小队l m g - l 1 + m e t o 掣嘈l 1 。芽增殖倍数最高可达4 2 0 倍。 8 、在继代培养中，单因子6 - b a 的增殖效果明显优于k t 。 9 、生根壮苗培养基以1 2 m s + 龇2 , 雌l - t + m e t t 4 喈l 1 效果最好，而n a a 不利于不定根的诱导。 1 0 、在a b t l 、a b t 5 、a b 、a b t 8 四种生根粉中，a b t 8 的生根效果 较好，a b t l 不适宜生根诱导。 1 1 、以泥炭+ 珍珠岩( 1 ：1 ) 作为移栽基质效果最好。在移栽后l o d ，加 强对移栽苗的管理，相对湿度不低于8 5 ，温度控制在1 5 3 0 。c 之间，成活 药用植物红芽丈戢姐织培养的研究 率可达8 5 以上。 1 2 、喷施0 0 7 的k h 2 p 0 4 溶液有利红芽大戟组培苗的移栽生长。 关键词：药用植物红芽大戟组织培养体系试管苗移栽 广西大掌习e 士掌位 e 吁药用植物舡芽大崩u 阻彰l 培养的研究 s t u d yo nt i s s u ec u l t u r e o fm e d i c i n a l p l a n tk n o x i av a l e r i a n o i d e st h o r e le tp i t a r d a b s t r a c t t h r o u g ht h es y s t e m i ce x p e r i m e n t so nt i s s u e c u l t u r eo far a r ea n d e n d a n g e r e dm e d i c i n a lp l a n t ，k n o x i av a l e r a n o i d e st h o r e le tp i t a r d , a ne f f i c i e n t i nv i t r op r o p a g a t i o ns y s t e mw a s d e v e l o p e di nt h i sr e s e a r c h a d d i t i o n a l l y , as e r i e s o fe x p e r i m e n t so nm a n u a lc u l t u r ew e r ec o n d u c t e da n ds o m ef a c t o r sa f f e e t t i n g t h et r a n s p l a n ts u r v i v er a t eo ft e s t - t u b ep l a n t l e t sw e r eo b t a i n e d i tc a np r o v i d e s o m ei m p o r t a n tr e f e r e n c e so nk n o x av a l e r a n o i d e st h o r e le tp i t a r dt i s s u e c u l t u r e ，r a p i dp r o p a g a t i o n ，g e r m p l a s mc o n s e r v a t i o na n dm a n u a lc u l t u r e 讹e m a i nr e s u l t so f t h i sr e s e a r c ha r ea sf o l l o w s ： 1 r e g a r dt ot h et i s s u ec u l t u r eo fk n o x i av a l e r a n o i d e st h o r e le t p i t a r d , t h e o p t i m u mb a s i cm e d i u m w a sm sm e d i u m 2 1 1 坞p a t h w a yo fa d v e n t i t i o u sb u dd i f f e r e n t i a t i o nm a yb e c o m et h em a i n p a t h w a yo n t i s s u ec u l t u r et oa t t a i nt h et u b ep l a n t l e t s 3 d u r i n gi n d u c t i o nc a l l u sa n da d v e n t i t i o u sb u dd i f f e r e m i a t i o n , t h ec u l t u r a l c o n d i t i o ni nl i g h ti sb e t t e rt h a ni nd a r k 4 1 1 l ea p i c a l - b u dw a st h eb e s te x p l a n tf o rt h et i s s u ec u l t u r eo fk n o x i a v a l e r i a n o i d e st h o r e le tp i t a r d 5 6 - b aw a sb e n e f i c i a l f o rt h ec a l l u si n d u c t i o na n dt h es u b c u l t r u eo f a d v e n t i t i o u sb u d s 6 2 0d a y s g e n e r a t i o nw a sf a v o r a b l ef o rt h em u l t i p l i c a t i o no fa d v e n t i t i o u s b u d sa n dp l a n t l e t s n eb e s tc o n c e n t r a t i o no f s u g a ro ns u b c u l t u r ew a s2 0 9 l 一 7 i nt h es u b c u l t r u e ，i ti sn e c e s s a r yt h a t6 - b a ，n a aa n d 肼s h o u l db e m - 西大学硕士学位论文药用植物红习：夫藏组鸟己| 奇养的习门薯 a d d e di np r o p a g a t i o nm e d i u ma tt h es a u l et i m e ，t h eo p t i m u mc o m b i n a t i o nw a s 6 一b a 2 田m g l 1 + n a a o t l l 强f 1 + t 谯s 嘴l 1 。t h eh i g h e s tb u d sm u l t i p l i c a t i o nt i m e s w a s4 2 0 8 i nt h es u b c u l t r u e t h ee 丘b c to f 6 b aw a sb e t t e rt h a nk t o b v i o u s l y 9 i nt h ec u l t u r eo fr o o ti n d u c t i o na n ds o u n ds e e d l i n g ，t h eo p t i m a lm e d i u m w a s1 2 m sm e d i u ms u p p l e m e n t e dw i t h0 2 m g - l 1i b aa n d1 4 m g l - 1m e t , w h i l en a ad o e s n tf i tf o rt h er o o ti n d u c t i o na n ds o u n ds e e d l i n g 1 0 i nt h ef o u rk i n d s a b t ( a b t t 、a b t s 、a b t e 、a b t 8 ) ，t h ee f f e c to f r o o t i n d u c t i o ni na b t 8w a sb e t t e rt h a nt h eo t h e r s ，t h ea b t ld o e s n tf i tf o rt h er o o t i n d u c t i o n 11 t h eb e s tt r a n s p l a n ts u b s t r a t ew a sp e a tc o m b i n e dw i t hp e a r lg r a v e l ( 1 ：1 ) d u r i n gt h e1 0d a y so f t r a n s p l a n t ，w es h o u l dt a k ec a r ef o rt h et u b ep l a n t l e t s ，t h e r e l a t i v e l yh u m i d i t yn o tb ea l l o w e db e l o w8 5 ，t h et e m p e r a t u r ew a sb e t w e e n 1 5 3 0 i tc a ne n s u r et h a tt h es u r v i v er a t ew a su pt o8 5 1 2 s u p p l y i n go 0 7 k h 2 p 0 4s o l u t i o nw a sb e n e f i c i a lf o rg r o w t ho ft h e t r a n s p l a n t si nt h es u b s t r a t e ， k e yw o r d s ：m e d i c i n a lp l a n t ；k n o x i av a l e r i a n o i d e st h o r e le te i t a r d ； t i s s u ec u l t u r es y s t e m ；t e s t - t u b ep l a n t l e t ；t r a n s p l a n t i v ，西大学写旺b 学位论文 窍用植物红芽大瑚l | 匮鸟u 壹彝的司f 究 英文缩写 a b b r e v i a “o n 6 b a k t 2 4 d i b a 1 a a n 从 m e t f r t d z m 晖 m m s l ，4 m s b h e m m m r a i n 符号说明 英文名称 e n i g l i s hm n m g 6 - b e n z y la m i n o p u r i n e k i n e t i n i n d o l e - 3 一b u t y r i ca c i d i n d o l e - 3 - a c e t i ca c i d n a p h t h y l a c e t i ca c i d m u l t i p l e - e f f e c tt r i a z o l e a b t ( i a a + n a a ) t i l i d i a z e r o n m u r a s h i g ea n ds k o o g ( 1 9 6 2 ) l 4 m u r a s h i g ea n ds k o 0 9 0 9 6 2 ) c a m b o r g ( 1 9 6 s ) l u x c e n t i m e t e r m i l l i m e = t e - r m i n u t e i x 中文名称 c h i n e s em 船n m g 岳卞氨基腺嘌呤 激动素 2 , 4 - 二氯苯氧乙酸 吲哚丁酸 吲哚乙酸 萘乙酸 多效唑 吲乙萘合剂 n 苯基- n 。- l 2 ，3 噻二唑5 脲 m s 基本培养基 i 2 m s 培养基 i 4 m s 培养基 b 5 基本培养基 勒克斯( 照明单位) 厘米 毫米 分钟 广蘑b 弋学甄士擘啦论文药用檀物红芽大戟组岛己i 寄养的研究 前言 一、植物组织培养技术的发展及应用 植物组织培养主要是应用分子生物学和细胞生物学的理论、方法和技术，有计划、 有目的地进行组织或细胞培养，从而改变细胞的遗传信息，以创造植物新物种或新品种。 具体地说，植物组织培养就是指在无菌条件下。将离体的植物器官( 根、茎、叶、花、 果实、种子等) 、组织( 如形成层、花药组织、胚乳、皮层等) 、细胞( 体细胞和生殖细胞) 以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植 株。由于培养的是脱离植物母体的培养物，所以也叫离体培养( c u l t u r ei nv i t r o ) 或试管培 养( c u l t u r e i n t e s t t u b e ) 。目前，该项研究工作不仅在基础理论研究方面取得了很大进展， 而且在应用方面也取得了良好效果。 1 ，植物组织培养的发展概况 植物组织培养的理论基础源于1 8 3 8 1 8 3 9 年德国的植物学家t s c h l e i d o n 和动物学家 t s c h w a n n 提出的细胞学说。该学说基本内容是：“一切生物都是由细胞构成的，细胞是 生物体的基本功能单位，细胞只能由细胞分裂而来” 德国著名植物生理学家哈伯兰特( g h a b e r l a n d t ) 将分离的野芝麻( l a m i u mb a r b a t u m ) 、 鸭跖草( c o m m e l i n a c o m m u n i s ) 、风眼兰( e i c h h o r n i a c r a s s i p e s ) 、虎眼万年青( o r n i t h o g a l u m s s p ) 等植物叶片的栅栏组织、表皮组织、表皮毛等加入k n o p 等培养液中，培养单个离 体细胞虽然在栅栏组织中他看到细胞生长、细胞加厚和淀粉形成等，但没有观察到细 胞分裂，主要是由于他的实验材料高度分化，培养基过于简单。1 9 0 2 年，他根据细胞学 说理论和其他实验结果提出：高等植物的器官和组织，可以不断分割，直至单个细胞， 这种单个细胞是具有潜在全能性的功能单位，即植物细胞具有全能性【i 】 植物离体组织在体外生长的最早研究结果是德国的k o t t e 和美国学者r o b b i n s 在 1 9 2 2 年报道的，他们发现了离体培养的组织只能进行有限的生长，但未发现培养细胞有 形态发生的能力。 植物离体组织培养的第一个成功例子是1 9 0 4 年e h a n m n g 报道的。他对萝 ( r a p h a n u s s a t i v i s ) 和辣根菜( c o c h l e a r i a o f f i c i n a l i s ) 的胚进行了培养。发现了离体胚可以 广西大掌司【士掌位论又药用植物缸习。大取组t 坪彝的研咒 充分发育成熟。并提早萌发形成小苗 2 、植物组织培养的奠基 2 0 世纪3 0 年代初到5 0 年代末，是植物组织培养的奠基时期。美国科学家j o a u t h e r e t 等人，第一次成功地用烟草的茎段形成层细胞和胡萝卜的小块组织，在人工一 培养的条件下，使细胞增殖和诱导出愈伤组织。但没诱导出器官。由w h i t 的基质移栽后3 0 天，开始分别喷施不同的水肥作对比试验。 广西大掣硕士掌位韶曙药用植物舡芽大棘组每l 培养的研究 第二章结果与分析 2 1 愈伤组织诱导分化试验结果 2 1 不同取材部位对愈伤组织诱导的影响 对红芽大戟的三个不同取材部位：叶片、顶芽、不带腋芽的茎进行灭菌处理后在诱 导培养基中进行培养，在一周后。三个不同部位的试验材料均发生膨大，形成了愈伤组 织芽整体膨大，茎段两头膨大呈哑铃状，叶片为由外侧环剪部位向中心膨大或在剪伤 处膨大，三种试验材料颜色均由原来的绿色趋向黄白色。所得结果如表2 - l 。 表2 1 不同取材部位对愈伤组织诱导的影响 t a b l e 2 - 1 t h e e f f e c t s o f d i f f e r e n t m a t e r i a l p o s i t i o n o b c a l l u s i n d u c t i o n 由表2 - l 可看出，红芽大戟不同部位在诱导培养基m s + b a 2 岍l 1 f n a a o 4m g , l 1 中形成愈伤组织的能力是不一样的。a 2 处理( 顶芽) 的愈伤组织出愈率、生长量和质量 最好，愈伤组织呈淡黄色透明状，疏松，且易长出颗粒状绿点，其中有n 个愈伤组织 长出了小芽丛。处理( 茎) 的次之，愈伤组织呈黄白色。疏松，但无颗粒状绿点。 a l 处理( 叶片) 的最差，其愈伤组织质量紧密、褐化率高，易枯死所以，我们认为当 选择红芽大戟的芽、茎、叶作为三种外植体进行诱导愈伤组织，芽的效果最好。这与陈 芳清嗍等的研究相似。 2 1 2 不同2 4 一o 浓度对诱导的影响 红芽大戟无菌苗的芽和茎在含不同浓度2 a - d 的培养基上进行诱导培养。愈伤组织 出现的时间有所差异。芽在接种5 天后即开始出现整体逐渐膨大现象，而茎在接种后第 7 天两端的伤口才逐渐膨大呈哑铃形。在1 5 天进行观察时发现，在a 4 ( 芽的c k ) 中 j 冒 月臼舱掌位论文茹用植辘幢【芽大朝l 黉巨弗u 奇彝的研究 3 2 个接种材料中长出了2 8 株小芽，如- a 9 只是诱导成了黄白色的愈伤组织，但均没长 出芽。a l o ( 茎的c k ) 没有长出小苗，并出现由两端向中间褐化的现象，茎的其他处理 ( a i l - a 1 5 ) ，虽然不同程度地在茎表面长出黄白色颗粒状的愈伤组织，但均无绿点产生 不同浓度2 , 4 - d 对红芽大戟芽和茎诱导分化的影响见表2 - 2 。 表2 - 2 不同2 , 4 - d 浓度对愈伤组织诱导的效果 t a b l e2 - 2t h ee f f e c 妇o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o no f 2 4 一do ne a l l u si n d u c t i o n 从表2 - 2 可看出，红芽大戟的芽和茎在含有不同浓度2 , 4 - d 培养基中诱导的出愈率 很高，均达到1 0 0 0 , 6 ，即全部长出愈伤组织，且无褐化，但愈伤组织质量随浓度的增大 呈先增加后降低的趋势，在浓度为1 5 - 2 0m g l 1 间达到最好，愈伤组织均呈透明淡黄 色，质地疏松将愈龄为1 5 天，浓度为1 5m g l - 和2 0m g - l 。的4 组愈伤组织，无论是 转移到m s 添加6 - b a 5 t o 。i 1 + n a a o 粥。i 1 还是6 - b a 0 5 。i 1 + l 汀1 o 唧l 1 + n a a o i 唧f 1 的分化培养基中均无法分化出绿点和小丛芽。结合陈芳清1 4 9 等人对红芽大戟愈伤组织分 化的研究，我们认为，利用2 , 4 - d 诱导的愈伤组织难以分化出芽，因此在诱导培养基中 添加2 4 d 是不理想的。 2 1 3 不同f r - b a 浓度对不同部位诱导分化的影响 红芽大戟无菌苗不同部位在含不同浓度6 - b a 的培养基上培养一定时间后，愈伤组 广西大掌硬士掌位论文霹r 用植物红导大翠l ，臣蟹培界的研咒 织的诱导分化有不同的影响。在1 5 天后观察时发现，除各组的c k 处理外( a 1 6 大部分 褐化后枯死；a 2 2 不膨大，a 2 s 不膨大同时也有少量褐化) ，含有6 - b a 的各处理均膨大 形成愈伤组织，大小和质量的优劣均为芽 茎 叶，但愈伤组织体积均相对较用2 , 4 - d 诱导的小。 不同部位的材料均以6 - b a 浓度为4 0m g l - l 的诱导质量效果最好，芽的各处理中 均不同程度地长出了小芽或丛芽。a 笛、a 撕处理的出芽率均达到1 0 0 ，在靠近长出芽 基部部份的愈伤组织，长出较多的带绿色颗粒；茎的愈伤组织质地均较疏松、里淡黄色 透明状；叶形成的愈伤组织体积较小且有部份褐化茎和叶的愈伤组织均没长出芽，不 同浓度6 - b a 对红芽大戟叶、芽和茎诱导分化的影响见表2 - 2 ( 统计时间为接种质2 0 天) 和图i - l 2 ，3 。 表2 - 3 不同6 - b a 浓度对愈伤组织诱导的效果 t a b l e 2 - 3t h ee f f e c t s o f d i f f e r e n t e o u e c u t c a t i o no f 6 - b a o uc a l l u s i n d u c t i o n n o t e ：c l r ：c a l l u si n d u c t i o nr a t e c g a ：c a l l u sg r o w t ha m o u n t f i l l ：f r e q u e n c yo f b u dc l u m p i n d u c t i o n ! 查竺竺竺苎! 竺苎箜苎竺丝兰兰查竺竺璺兰苎竺! 兰 结合表2 - 3 和观察中的各项指标，我们认为浓度为4 0r a g - l 1 的6 - b a 对红芽大戟的 芽进行诱导分化的效果最好，出愈率和丛芽分化率高并且芽长势较好，粗壮，叶色浓绿。 2 1 4 不同n 从浓度与不同浓度6 - b a 配组对不同部位诱导的影响 红芽大戟无菌苗的叶、芽、茎在n a a 和6 - b a 组成不同配组的诱导处理中，在同 一个处理中不同部位的诱导情况与上面的单因素诱导试验情况相似：均在7 天左右就开 始膨大逐渐长成愈伤组织，愈伤组织的质量优劣均为芽 茎 叶。在1 5 天进行统计时 得出如下表2 - 4 的结果。 表2 4 不同n a a 浓度和6 - b a 对愈伤组织诱导的效果 t a b l e 2 - 4t h ee f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o no f n a a c o m b i n e d w i t h 6 - b a o mc a l l u s i n d n c 6 0 b n o t e ：c l r ：c a h u si n d u c t i o nr a t ec i 九：c a l l u sg r o w t ha m o u n tc q ：c a l l u sq u a l i t y 从表2 - 4 中可看出，叶作为外植体时，随着n a a 的浓度的升高，出愈率相应地变 大，在n a a 的浓度为0 4m g l - 1 和0 6m g l - 1 时，叶的出愈率几乎接近1 0 0 ，同时褐 化率也随着n a a 浓度增大而降低。但叶的愈伤组织生长量都小于本处理中的茎和芽的 愈伤组织，这与前面所傲的单因子试验的结果相同在茎和芽的处理也中发现，愈伤组 织质量随着n a p , 的浓度的增加而增加，呈黄白色透明颗粒状，以n a a 浓度为0 4r a g l 1 ， 厂西大掌硕士掌t z 论式西用租物舡习大印u 缸野谱界的研咒 6 - b a 浓度为2 0m g l o 和4 0n a g l 1 时愈伤组织的质量较好。 在2 5 天时观察发现，三种外植体诱导出的须状气生根( 见图一2 ) 随着n a a 浓度增 加而增加，数量大小为叶 茎 芽；芽的大部分愈伤组织均长出了芽丛，以在低浓度的 n a a ( 即a 3 4 a 3 7 处理) 长出丛芽的数量较多，而在高浓度的n a a ( a 3 r 5 处理) 中 只是有几个愈伤组织长出很细弱的丛芽总的来说，以n a 4 m 酽l - l + 6 - b a 2 细g f 1 ( 或 40 r a g l - 1 ) 配组对愈伤组织的诱导效果较好。 2 1 5 不同h m 浓度与同一浓度6 卧配组对不同部位诱导分化的影响 试验中，将无菌苗的顶芽、茎、叶片作为外植体进行诱导分化时，当6 - b a 浓度为 2 0m g l i ，红芽大戟愈伤组织随n a a 浓度改变而出现不同的变化。结果如表2 - 5 所示 表2 - 5 不同浓度的n a a 和6 - b a 对愈伤组织诱导的效果 t a b l e 2 - 5t h e e f f e c t s o f d i f f e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f n a a c o m b i n e d w i t h 6 - b a o l 5 c e i l u s i n d u c t i o n 叶l l n i v c茎s t e m芽b u d 兰萎茎鐾篁薹茎篁篁薹茎壁篁 n o t e ：c l r ：c a l l u s l n d u e t i o nr a t ec g a ：c a l l u sg r o w t ha m o u n t c q c a l l u sq u a l i t y e r i ：f r e q u e n c yo fb u dc l u m pi n d u c t i o n 从表2 5 中可看出，三种外植体的出愈率均高达1 0 0 ，在同一处理( 相同的处理代 号) 中，三者间的愈伤组织质量也是以芽的为最佳，茎次之，叶的最差；生长量均随着 n a a 的浓度的增加而逐渐增大，以n a a 浓度为0 4r a g l 。1 时最好：叶和茎的愈伤组织 均没有分化出芽丛，只有芽的愈伤组织能分化出芽丛，出芽率随着n a a 的浓度的增加 而下降芽愈伤组织分化出的芽粗壮，叶片墨绿色。同时在观察中也发现，随着n a a 的浓度增加，叶、茎、芽的愈伤组织气生根的诱导率也随着增加，到n a a 0 6m g l - 1 时 为最高( 见图i i - 2 ) 综合以上各项指标，我们认为，芽作为外植体的效果最为理想， 石 d 捞 瓠 m 骆 好好大大大 o o o 好 好好大大大 0 o o 差 差差申中中 锄b h 广西大掣颂士掌位论，巴垂r 用植物红芽大和l 重巨岛己，奇莽的研究 并且以6 - b a 2 ，o 唧l 1 + n a 4 肾l i 这一处理的诱导效果较好。 2 2 继代增殖试验结果 2 2 f 不同部位对继代增殖的影响 不同部位对继代增殖的影响见表2 - 6 。 表2 - 6 不同部位对顶芽继代增殖的效果 t a b l e 2 - 6t h ee f f e r mo f d i f f e r c a tp o s i t i o no f fb u d sm u l t i p l i c a t i o n n o t e ：札b m ：m u l t i p l eo fb u d sm u l 卸l i c a t i o ub e ：b u dh e i g h tb g s ：b u dg r o w t hs t a t u s + ：g e n e r a l ； + + ：g o o d ；+ + + ：b e t t e r - ：n o n e 从表2 - 6 可看出，不同部位对继代增殖具有较大的影响茎在继代增殖培养中不能 进行增殖。顶芽的增殖倍数在两个统计时期均远大于腋芽的增殖倍数，并且在芽高，芽 长势，叶质量方面均优于腋芽顶芽在继代增殖中长出的芽粗壮，叶片宽大呈墨绿并完 全展开，而腋芽在继代增殖中长出的芽相对较细弱，叶片为绿色并且不完全展开。故我 们认为用项芽作为继代增殖的材料较佳 2 2 2 基本培养基对芽继代增殖的影响 在m s 、玛和m i l l e r 三种基本培养基中进行继代培养，经过一定天数进行观察统计， 结果如表2 - 7 。( 芽高用+ ，+ + 、卅分别表示高度约为4 , 0 c m 、6 0 c m 、8 0 c m ，下同) 表2 - 7m s 、b 5 和 _ i h e r 培养基对芽继代增殖的影响 t a b l e2 - 7t h ee f f e c t so f m s 、风a n dm i e rm e d i ao nb u 由m u l t i p l i c a t i o n n o t e ： m b m ：m u l t i p l eo f b u d sm u l t i p l i c a t i o n r ：a i rr o o tb h ：b u dh e i g h t b g s ：b u dg r o w t hs t a t u s 4 - ：g e n e r a l l + + ：g o o d ；卅：b e t t e r - ：n o n e 从表2 - 7 中可看出，在不添加任何激素的空白m s 、b 5 、m i l l e r 培养基中，红芽大 厂酉夫荨啊页士掣啦论文蠢佣植物舡耳大辅皿第己，哥荞的研究 戟顶芽的增殖倍数也不低在三种培养基中，芽增殖倍数随着继代天数的增加而增大。 但增大幅度变小，即随着天数的增加，芽的增殖速度变慢，且在3 0 d 统计时发现长出的 芽相对较细且弱；同时，在不同的培养基中，芽增殖倍数有着明显的差别，在实验的三 个统计时期中。均是m s 培养基的芽增殖倍数最高，分别为3 4 、4 0 、4 5 倍，芽的素质 最好；其次是b 5 培养基。芽增殖倍数分别为3 0 、3 3 、3 5 倍，芽的素质一般；最差的 为m i l l e r 培养基。芽增殖倍数最低，分别为2 6 、3 0 、3 1 倍，苗的素质最差，叶色里浅 黄色( 见图1 ，从左到右分别为：m i l l e r 、b 5 、m s ) 综合以上各项指标，我们认为 基本培养基m s 处理效果均比b 5 和m i l l e r 的好，即红芽大戟在高盐成分的培养基( m s 培养基) 进行继代培养较高硝酸盐培养基( b 5 培养基) 和中等盐浓度的培养基( m i l l e r 培养基) 好 2 2 38 8 、1 2 m s 和1 4 l i s 培养基对芽继代增殖的影响 m s 、l 忍m s 和l ，4 m s 培养基对芽继代增殖的影响见表2 - 8 ，图2 1 和图h 1 表2 - 8m s 、i 2 m s 和1 4 m s 培养基对芽继代增殖的影响 里些! 苎坠! ! 堕垒堕堕墨：丝堕! 鲤! 塑坚型垫! ! 塑邑! ! 坐坐! 堕些! ! 塑 芽增值倍数 处理代号 m b m 气生根数芽高芽素质 t r e a t m e n t s r ( 3 0 d )b h ( 3 0 d )r g s ( 3 0 d ) 1 5 d2 0 d3 0 d n o t e ：札b m ：m u l t i p l eo f b u d sm u l t i p l i c a t i o n a r ：a i rr o o t b ：b u dh e i g h t b g s ：b u dg r o w t hs t a t u s + - g e n e r l l ：+ + ：g o o d ；卅：i l e t k r 一：n o n e 1 5 d2 0 d3 0 d 田2 - 1m s 1 2 l d s 和1 4 l l s 培养基对顶芽增殖的效果 f i g 2 - 11 h ee f f e c t so f m s i 2 b 幅a n di 4 m sm e d i ao i ib u d sm u l t i p l i e a t i o n 从表2 - 8 和图2 1 可看出，在不同大量元素成分的m s 培养基对红芽大戟芽继代增 5 i 5 3 5 2 5 l 5 o l 3 2 l o 暑三苫-墨冒i量j= 广西大学颂士掌删髓文 药用植物红舅大卅u 赵鸟治养的习f 究 殖产生不同的影响。不定芽在m s 和1 d m s 中的增殖倍数随着天数的增加而增大，但增 大率变小，由1 5 d 到2 0 d 的芽增殖倍数差值0 6 和o 5 降低到2 0 d 到3 0 d 的芽增殖倍数 差值均为o 3 ，即随着天数的增加，芽的生长速度呈先快后变慢，长出的芽也相对较细 且弱但在1 1 4 m s 培养基中，芽增殖倍数随着培养天数增加而减小，由1 5 d 的o 8 倍降 到3 0 d 的0 4 倍，芽素质也是越来越差，到3 0 d 后已逐渐变黄枯死；同时，在相同的培 养天数，不同的培养基中，芽增殖倍数也有着明显的差别，在实验的三个统计段中，均 是m s 培养基的芽增殖倍数最高，分别为3 2 ，3 8 ，4 1 倍，叶片展开呈墨绿色，芽的素 质最好；其次是i 2 m s 培养基，芽增殖倍数分别为2 6 、3 1 、3 4 倍，叶片展开但呈黄 绿色，芽素质次之；最差的为i 4 m s 培养基，芽增殖倍数最低，分别为0 8 、o 5 、0 4 倍，叶色呈浅黄色，苗的素质最差。综合以上二个试验的各项指标，我们认为基本培 养基m s 用于继代增殖的效果均比b 5 和m i l l e r 、1 2 m s 和i 4 m s 的好，这表明红芽大 戟在组织培养中所需钾盐、铵盐、硝酸盐的量较多，如果此三种盐的成分不足，就会导 致其长势较差甚至无法正常生长。因此，在以下的芽继代增殖试验中，我们均采用m s 培养基作为基本的培养基。 2 2 4 不同蔗糖浓度对芽继代增殖的影响 不同的蔗糖浓度对顶芽增殖的影响见表2 - 9 和图2 - 2 。 从表2 - 9 和图2 - 2 中可看出，红芽大戟芽的增殖倍数随着蔗糖浓度的增大而先增大 后下降的趋势，在b 8 处理中( 蔗糖含量为2 0 9 l - 1 ) ，芽增殖倍数达到最高值。为4 2 0 倍，芽的素质最佳、叶片展开且呈墨绿色；之后随蔗糖浓度增大而降低，在3 0 9 、4 0 9 、 5 0 9 时的增殖倍数分别为2 9 6 、2 0 3 、1 7 5 倍，在5 0 9 时芽素质较差、叶片微向叶背外 卷，且呈浅黄色。苗较弱，这可能是随着蔗糖浓度的增加，培养基的渗透压增高，抑制 了苗的生长。综合以上各种指标，我们认为在红芽大戟的芽继代增殖培养最佳的蔗糖浓 度为2 0 9 l - 表2 - 9 不同蔗糖浓度对顶芽增殖的效果 t a b l e2 - 9t h ee f f e c t so f d i f f e r e n tc o u c e n t t a t i o uo f s u g a ro ub d sm u l t i p l i c a t i o n n o t e ：l v l b m ：m u l t i p l eo f b u d sm u l 6 p c a 咖n 目l ：b u dh e i g h t b g s ：b u dg r o w t hs t a t u s + ：g e n e r a l ：抖：g o o d ；+ + 十：b e t t e r 3 3 广西大掣h 甄士学位论文 茹用植物红芽大崩强岛u 毒彝的研究 盯髓船 t r e t t m e m t s 目2 - 2 不同蔗糖衷度蚌芽增殖倍数的影响 f i z 2 - 2t h ee f f e c l so f d i f f e r e n ts u g a rc o n c e n t r a t i o no nb u d sm u l t i p l i c a t i o n 2 2 5 不同继代周期对芽继代增殖的影响 表2 - 1 0 不同继代周期对芽继代增殖的影响 t a b l e 2 - 1 0t h ee f f e c t so f d i f f e r e n tc a l l u ss u b c u l t u r ep e r i o do nb u d sm u l t i p l i c a t i o n n o t e ：e ：s u b c u l t u r ep e r i o d ；d g ：d a y s g e n e r a t i o ni l h ：b u dh e i g h tb g s ：b u dg r o w t hs t a t u s 由表2 - 1 0 可看出，不同继代周期对红芽大戟芽的继代增殖有不同的影响，总的趋 势是先增大后下降。当在最短( 1 5 c i ) 的继代周期时，芽增殖倍数为2 2 0 倍；当继代周 期为2 0 d 时，芽增殖倍数达到最大值2 2 9 倍；之后随着继代周期的增大，芽增殖倍数 逐渐下降；到4 0 d 为继代周期时为最小值1 8 4 倍在观察中发现，继代周期为2 0 、2 5 d 的处理，苗的素质较好，芽、茎相对较粗壮，叶片宽大呈深绿色，同时在基部长出较 新鲜淡黄色的愈伤组织：而3 0 d 和4 0 d 的处理中，苗的素质较前三组明显差了许多， 芽、茎长势均稍弱，叶片也较前三组处理细小，颜色也较前三组处理的稍浅。里淡绿 色。故在综合各方面因素看，我们认为红芽大戟最佳的继代周期为2 0 d 如果周期太短 ( 如少于1 5 d ) 或周期太长( 如大于2 5 d ) ，对芽的增殖都是不利的，前者可能是因在 新的培养基中复壮时间不够，生长还不达到最高峰，而后者则可能是因生长的高峰期 5 4 3 2 l o ij0皇暑_毒-o暑筝#芝 广西大掣啁仕掌位强i 丈 药用植物由葶大戟组衄培养的研究 己过生长势较弱，而导致芽增殖倍数低、苗素质也较差 2 2 8 高低浓度的6 队交替变化对芽继代增殖的影响 6 - b a 浓度在不同继代次数中的变化对芽继代增殖的影响觅表2 1 l 。 表2 - l l 不同继代培养基和继代次数对芽继代增殖的影响 t a b l e 2 - 1 1t h ee f f e c t so f d i f f e r e n tm e d i aa n dj u b c u l t u r et i m e so nb n d 0m u l t i p l i c a t i o n s u 甏b c 举u l t u r e s 。鞯r d e r 鞭o f m 序e d h 篙辅b i l 默b g 势s ( 4 卜+ ( 1 ) 2 2 0 + + + ( 4 卜，c 2 )2 3 6 + + + 一 ( 4 ) - 3 ) 2 3 8抖抖 ( 4 卜- 蚋) 2 8 0 + + + ( 4 卜，( 1 卜吖1 ) 2 0 3 + + + ( 4 ) ( 2 ) 一( 2 ) 2 2 4+ 二 ( 4 卜，( 3 卜鄙) 2 5 0 + + ( 4 卜，( 4 卜+ ( 4 ) 3 1 2 + + + ( 4 卜+ ( 1 卜( i ) _ + ( 1 ) 1 9 6 + + ( 4 卜，( 1 ) _ + ( 1 卜+ ( 4 ) 3 6 1 + +卅 ( 4 卜+ ( 2 卜啦卜，( 4 ) 3 2 0 + +卅 三( 4 ( 3 _ 唯卜，4 ) 4 0 1 + + 卅 ( 4 ) _ 州卜( 4 卜( 1 ) 2 3 8 + +抖- ( 4 卜+ ( 4 卜+ ( 4 卜+ ( 4 ) 3 3 5+十h n o t e ：m b m ：m u l t i p l e o f b u d s m u l t i p f i e a t i o n b 珏：b u d h e i g h t b g s ：b u d g r o w t h s t a t u s 4 - ：g e n e r a l ；+ h ( g r o o d | + h b e t t e r 从表2 - 1 l 的数据可看出，6 - b a 浓度的变化对红芽大戟在不同的世代中培养有不同 的影响当6 - b a 的浓度变化为高一低一低一低，即培养基由( 4 ) 一( 1 ) 呵1 ) 吖1 ) 变化时， 红芽大戟的芽增殖倍数变化为：2 2 0 一2 0 3 一1 9 6 由此可见，红芽大戟从高浓度转入低 浓度中连续培养三代，虽然芽生长高度相差甚小，但芽增殖倍数和芽长势呈下降趋势， 芽逐渐变细且弱，说明在低浓度细胞分裂素的培养基中连续继代不利于芽继代增殖，且 会导致芽的素质下降。 当6 - b a 的浓度变化为高一低一低一高，即培养基( 4 一( 1 卜，( 1 卜+ ( 4 ) 变化时，红芽 大戟的芽增殖倍数变化为：2 2 0 2 0 3 3 6 1 。红芽大戟芽增殖倍数和芽素质表现为先上 升后下降再上升的一个波谷形趋势，这说