（生理学专业论文）辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究.pdf

j ：j ，i 工 目录 中文摘要1 英文摘要e e oo o o oo oo oo 0 00 o oo o o0 4 英文缩写o o o oo o oo o o0 00 o oo e oo o o oo o oo o g o0 0 00 o o 00 oo 8 研究论文辛伐他汀对大鼠。肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究 前言9刖舌- 9 材料与方法o d o0 oo oo oo oo o9 结果- o g g 0 00 0 00 0 0 000oo o o oo o oo oo 1 7 附图、附表o o o o 00 0 bodig o 00 0 0 00 00 00 0 00 0 oo o o oo o od 1 9 讨论o o oo o eo 3 0 参考文献0 0 00 00 00o o e oe oo ooo o 0 00 0 0 oo oo 3 4 综述辛伐他汀对肾保护作用的研究进展o 00010 0 0oo 3 8 致谢o oe o om o ooo - 4 8 个人简历b oio0 o ooo oo 4 9 1 l 中文摘要 辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究 摘要 肾缺血再灌注损伤( r e n a li s c h e m i a r e p e r f u s i o ni n j u r y ，r i r i ) 是临床 上常见病理生理现象，在缺血性急性肾损伤的病理过程中起重要作用，是 多因素参与的复杂的病理过程。其中主要的损伤因素有自由基损伤、白细 胞一内皮细胞相互作用、胞内钙超载、n o 等舒血管物质减少、内皮素等 缩血管物质产生过多等。 他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶a ( h m g c o a ) 还原酶抑制 剂，通过对该酶特异性抑制作用，使h m g c o a 不能转变为甲羟戊酸 ( m e v a l o n a t e ，m v a ) ，从而阻断胆固醇的合成，降低血胆固醇的水平，这 一作用已普遍用于临床治疗高脂血症。他汀类药物作用的多效性除降脂作 用外，近年研究还发现，其对肾脏也有一定的保护功能。辛伐他汀及洛伐他 汀可通过诱导培养人内皮细胞e n o s 基因的转录激活，促进一氧化氮 ( n o ) 合成，而n o 可扩张肾小球入球和出球动脉，降低。肾脏血管阻力，使 肾脏血浆流量和肾小球滤过率增加。此外也有报道，他汀类药物可减少烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸( n i c o t i n a m i d ea d e n i n ed i n u c l e o t i d ep h o s p h a t e ， n a d p h ) 氧化酶亚基表达，增加抗氧化酶活性，发挥其细胞内抗氧化作 用，从而减少氧自由基产生或直接清除机体产生的氧自由基，增强机体的 抗氧化能力。 但他汀化学等方法观察辛伐他汀对r i r i 的作用，并探讨其可能的 作用机制。类药物是否对缺血再灌注损伤肾脏有保护作用，目前少有报道。 因此探讨他汀类药物对缺血再灌注损伤大鼠肾脏的保护作用及其作用机 制，对删附的防治具有十分重要的意义。本实验旨在应用生理、生化、 分子生物学及免疫组织 目的：观察辛伐他汀对r i r i 的作用，并探讨其可能的作用机制。 方法：采用夹闭双侧肾动、静脉4 5 分钟后松夹再灌的方法制作r i r i 模型，观察辛伐他汀对大鼠r i r i 损伤的影响。成年健康雄性 s p r a g u e d a w l e y ( s d ) 大鼠6 0 只，体重1 5 0 , - - - , 1 8 0 9 ，在1 8 2 2 实验室安 静饲养两日后动物随机分为5 组，即： 中文摘要 ( 1 ) 假手术组( s h a m ) ( 2 ) 缺血再灌注组( i 瓜) ( 3 ) 缺血再灌注+ 辛伐他汀低剂量组5 m g k g d ( s i m - l ) ( 4 ) 缺血再灌注+ 辛伐他汀中剂量组2 0 m g k g d ( s i m m ) ( 5 ) 缺血再灌注+ 辛伐他汀高剂量组4 0 m g k g d ( s i m h ) 动物分组后，s i m l 组每日给予辛伐他汀5 m g k g 灌胃，s i m m 组每 日2 0 m g k g 灌胃，s i m h 组每日4 0m g k g 灌胃，持续2 周。 假手术组和缺血再灌组每日予等量生理盐水灌胃。 2 周后复制动物模型。 动物经1 戊巴比妥钠腹腔麻醉，开腹，暴露双侧肾动、静脉。除假 手术组只开腹不夹闭肾动、静脉外，其余各组均夹闭双侧肾动、静脉4 5 分钟，然后去夹再灌。再灌后逐层缝合腹膜，腹壁肌肉和皮肤。分别于再 灌后6 小时和2 4 小时分批取血及双侧肾脏测定血清肌酐( s c r ) 、尿素氮 ( b u n ) 、肾组织丙二醛( m d a ) 、一氧化氮俏o ) 、 诱生型一氧化氮合 酶( i n o s ) 的含量及超氧化物歧化酶( s o d ) 的活性。免疫组化法观察肾 组织内皮型一氧化氮合酶( e n o s ) 、p 4 7 p h o x 的表达。w e s t e r nb l o t 法检 测肾组织e n o s 和p 4 7 p h o x 蛋白表达水平。 结果： 1 大鼠肾脏缺血再灌注损伤后，光镜所见：s h a m 组肾组织无明显异 常；i r 组肾组织损伤随缺血再灌时间延长逐渐加重，表现为肾小管上皮 细胞混浊肿胀、坏死、管腔明显扩张，管内可见管型和脱落细胞、间质水 肿、核染色质边集以及明显的胞浆空泡样变性。s i m m 和s i m h 组各时 点肾组织损伤程度较i r 组明显减轻，s i m l 组各时点肾组织损伤程度与 i 瓜组相似。 2 大鼠肾脏缺血再灌注损伤后，i r 组肾功能明显下降，b u n 、s c r 均明显高于s h a m 组( p 0 0 1 ) ，且随缺血时间延长呈加重趋势；与i r 组相比，s i m l 、s i m m 和s i m h 组各时点b u n 、s c r 均显著降低( 尸 0 0 5 - - - 0 0 1 ) 。 3 大鼠肾脏缺血再灌注损伤后，i r 组各时点s o d 活力较s h a m 组显 著降低( 尸 o 0 1 ) ，m d a 含量显著升高( p 0 0 1 ) ；与i r 组相比，s i m m 组和s i m h 组各时点s o d 活力均明显增加( 尸 0 0 1 ) ，m d a 含量均显著 中文摘要 下降( 尸 o 0 1 ) ，s i m l 组的各项指标与i r 组相比没有明显的变化。 4 大鼠肾脏缺血再灌注损伤后，i r 组各时点n o 及i n o s 含量均明 显高于s h a m 组( 尸 o 0 1 ) ；与i r 组相比，s i m m 组和s i m h 组各时点 n o 含量显著增加( 尸 o 0 1 ) ，s i m m 组和s i m h 组i n o s 含量降低( 尸 o 0 1 ) ；s h a m 组肾皮质e n o s 无明显表达，i r 组肾皮质e n o s 表达均较 s h a m 组增加，与i r 组相比，s i m m 组和s i m h 组各时点e n o s 表达显 著增加；w e s t e r nb l o t 法检测肾组织e n o s 蛋白含量，i r 组肾皮质e n o s 蛋白含量较s h a m 组增加，与i r 组相比，s i m m 组和s i m h 组各时点e n o s 蛋白含量均明显增加，s i m l 组与i r 组相比没有明显的变化。 5 大鼠肾脏缺血再灌注损伤后，肾皮质p 4 7 p h o x 表达较s h a m 组明 显增加，w e s t e r nb l o t 法检测肾组织p 4 7 p h o x 蛋白含量，i r 组肾皮质 p 4 7 p h o x 蛋白含量较s h a m 组明显增加；与i r 组相比，s i m m 组和s i m h 组各时点p 4 7 p h o x 表达及蛋白含量均明显降低。s i m l 组与i r 组相比无 明显变化。 结论： 1 r i r i 后，肾功能明显受损。肾小管上皮细胞肿胀、坏死、间质水 肿。r i r i 大鼠b u n 、s c r 、m d a 和i n o s 含量均较s h a m 组明显增加， s o d 活力及e n o s 表达均较s h a m 组明显降低，肾皮质p 4 7 p h o x 免疫反 应阳性颗粒和蛋白表达均明显增加。表明p 4 7 p h o x 参与了肾缺血再灌注 损伤，并在其中发挥了重要作用。 2 辛伐他汀可显著降低r i r i 大鼠b u n 、s c r 和m d a 含量，提高 肾组织s o d 活力。降低肾组织中i n o s 含量，增加e n o s 免疫反应阳性 颗粒和蛋白的表达，增加n o 含量。表明辛伐他汀可减轻r i r i 大鼠肾组 织损伤，改善肾功能。 3 辛伐他汀能明显减少缺血再灌损伤大鼠肾皮质p 4 7 p h o x 免疫反应 阳性颗粒和蛋白的表达，减轻肾缺血再灌注损伤。表明辛伐他汀减轻r i r i 大鼠肾组织损伤的机制可能与其降低p 4 7 p h o x 的表达水平、干扰 n a d ( p ) h 氧化酶生成通路的某些环节、抗自由基损伤有关。 关键词：肾脏；缺血再灌注损伤；辛伐他汀；内皮型一氧化氮合酶； p 4 7 p h o x 英文摘要 r o l eo fs i m v a s t a t i ni nr e n a li s c h e m i a - r e p e r f u s i o ni n ju r ya n di t s u n d e r l y i n gm e c h a n i s m s i nr a t s a b s t r a c t r e n a l i s c h e m i a - r e p e r f u s i o ni n j u r y ( r i r i ) i sa c o m m o n p a t h o p h y s i o l o g i cp h e n o m e n o n ，a n di t i s ac o m p l e xa n di m p o r t a n tp a t h o - p r o c e s sw i t hm a n yf a c t o r si na c u t er e n a li s c h e m i ai n j u r y t h em a i nd a m a g e f a c t o r sa r ef r e er a d i c a l d a m a g e ，l e u k o c y t e - e n d o t h e l i a l c e l li n t e r a c t i o n ， i n t r a c e l l u l a rc a l c i u mo v e r l o a d ，n oa n do t h e rv a s o d i l a t o rs u b s t a n c e sd e c r e a s e ， e n d o t h e l i na n do t h e rv a s o c o n s t r i c t o rs u b s t a n c e si n c r e a s e s t a t i n s ，ag r o u po f3 - h y d r o x y 一3 一m e t h y l g l u t a r y lc o e n z y m ea ( h m g c o a ) r e d u c t a s ei n h i b i t o r s ，a r ew i d e l yu s e di nc l i n i c a lp r a c t i c ef o rt h e i re f f i c a c yi n p r o d u c i n gs i g n i f i c a n tr e d u c t i o n si np l a s m ac h o l e s t e r o la n dl d l c h o l e s t e r o l v i ai n h i b i t e dm e v a l o n i ca c i d ( m v a ) p a t h w a yo fc h o l e s t e r o ls y n t h e s i s a n u m b e ro fr e c e n tr e p o r t sh a v es h o w nt h a ts t a t i n sm a ya l s oh a v ei m p o r t a n t k i d n e yp r o t e c t i o ne f f e c t s ，i n a d d i t i o nt ot h e i rl i p i d l o w e r i n ge f f e c t so n p l a s m al i p i d s s i m v a s t a t i n a n dl o v a s t a t i nc o u l di n d u c ee n o sg e n e t r a n s c r i p t i o ni nt h ec u l t u r e dh u m a ne n d o t h e l i a lc e l l s ，p r o m o t en os y n t h e s i s n 0c a l ld i l a t ee f f e r e n ta n da f f e r e n tg l o m e r u l a ra r t e r i o l e s ，l o w e rr e n a lv a s c u l a r r e s i s t a n c ew h i l ei n c r e a s er e n a lp l a s m af l o wa n dg l o m e r u l a rf i l t r a t i o nr a t e t h e m o l e c u l a rb a s i so ft h eo b s e r v e de f f e c t so fs t a t i n sm a yr e l a t et ot h e l ra b i l i t y b l o c kt h ep r o d u c t i o na n d o ra c t i v i t yo fr o s t h ei n h i b i t i o no fr o sg e n e r a t i o n b ys t a t i n s ，t h r o u g hi n t e r f e r e n c ew i t hn a d ( p ) h o x i d a s ee x p r e s s i o na n da c t i v i t y , a n dt h ea c t i o n so fs t a t i n st h a ts e r v et ob l u n tt h ed a m a g i n ge f f e c t so ft h e s e r a d i c a l s ，i n c l u d i n ge f f e c t s o na n t i o x i d a n te n z y m e s ，l i p i dp e r o x i d a t i o na n d n i t r i co x i d es y n t h a s e t h e s ea n t i o x i d a n te f f e c t so fs t a t i n sl i k e l yc o n t r i b u t et o t h e i rc l i n i c a le f f i c a c yi nt r e a t i n gc a r d i o v a s c u l a rd i s e a s ea sw e l la so t h e r c h r o n i cc o n d i t i o n sa s s o c i a t e dw i t hi n c r e a s e do x i d a t i v es t r e s si nh u m a n s h o w e v e r , w h e t h e rs t a t i n s 。s c h e j , 1 ：f f u s i o niniury。stillsclaemia-reperrusionu r yi ss t i l l 1 n l h a sa p r o t e c t i v e e f f e c to nr e n a l u n k n o w n t h ep r e s e n ts t u d yo b s e r v e dt h e o b j e e t i v e ：t h i ss t u d ya i m e dt oi n v e s t i g a t et h er o l eo fs i m v a s t a t i no l l r i r ia n dt oe x p l o r ei t sp o s s i b l em e c h a n i s m m e t h o d ：t h em o d e lo fr i r 1w a si n d u c e d b yb i l a t e r a lc l a m p i n gt h er e n a l a r t e r ya n dv e i nf o r4 5m i n u t e sf o l l o w e db yr e p e r f u s i o na n do b s e r v i n gt h e e f f e c to fs i m v a s t a t i no nr i r ii nr a t s a f t e rt w od a y sb r e e d i n gi n18 2 2 c i r c u m s t a n c e ，s i x t ym a l es p r a g u e - d a w l e yr a t sw e i g h i n gb e t w e e n15 0 9t o 18 0 9w e r ed i v i d e di n t of i v e g r o u p sr a n d o m l y ( n - 1 2o ne a c hg r o u p ) ：( 1 ) s h a m 。o p e r a t i o ng r o u p ( s h a m ) ；( 2 ) i s c h e m i a - r e p e r f u s i o ng r o u p ( i r ) ；( 3 ) l o w d o s es i m v a s t a t i ng r o u p ( s i m l ，5 m g k g d ) ；( 4 ) m i d d l e d o s es i m v a s t a t i n ( s i m m ，2 0 m g k g d ) ；( 5 ) h i g h - d o s es i m v a s t a t i ng r o u p ( s i m h ，4 0 m g k g d ) s i m - l ，ma n dhg r o u pr a t sw e r es t a r t e do no r a ls i m v a s t a t i n5 0 ，2 0a n d 4 0m g k g dt r e a t m e n tr e s p e c t i v e l yf o r2w e e k s s h a ma n di rg r o u pr a t sw e r e g i v e nt h es a m ed o s e ss o l u t i o ni nt h es a m ew a y t h em o d e lo fr i r 1w a sm a d e a f t e rt w ow e e k sl a t e r t h ea n i m a l sw e r ea n e s t h e t i z e dw i t h 1 p e n t o b a r b i t a l s o d i u m ，t h e b i l a t e r a lr e n a la r t e r ya n dv e i nw e r ec l a m p e df o r4 5m i n u t e sf o l l o w e db y r e f l o wi ni r , s i m l ，ma n dh g r o u pr a t s a f t e rr e p e r f u s i o n ，e a c hl a y e r o p e n e dw a sc l o s e dw i t hs u t u r e ，i n c l u d i n gt h ep e r i t o n e u m ，a b d o m i n a lw a l l m u s c l ea n ds k i n t h er a t si nt h es h a m g r o u pw e r et r e a t e di d e n t i c a l l ye x c e p tf o r t h ec l a m p i n g a f t e r6a n d2 4h o u r so fr e p e r f u s i o n ，t h eb l o o ds a m p l e sw e r e t a k e nf o rd e t e c t i n gc o n t e n t so fs e r u mc r e a t i n i n e ( s c r ) ，s e r u mu r e an i t r o g e n ( s u n ) a f t e rb l o o dw a st a k e n ，b o t hs i d eo fk i d n e yw e r ee x c i s e df o ro b s e r v i n g r e n a lh i s t o l o g i c a le x a m i n a t i o n ，c o n t e n to fn i t r i co x i d e ( n o ) ，a c t i v i t yo f s u p e r o x i d ed i s m u t a s e ( s o d ) ，t h ec o n t e n t o fm a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) ， i n d u c i b l en i t r i co x i d es y n t h a s e ( i n o s ) ，t h ee x p r e s s i o no fe n d o t h e l i a ln i t r i c o x i d es y n t h a s e ( e n o s ) a n dp 4 7 p h o x r e s u l t s ： 1 a f t e rr i r ，t h er e n a lt u b u l ee p i t h e l i a lc e l l ss h o w e d s i g n so fd a m a g ei n 5 美- - 文摘- 要w ， 一一 i rg r o u pr a t s ，e s p e c i a l l yp r o x i m a lc o n v o l u t e dt u b u l ei ni r g r o u pr a t s i n w h i c ht h el u m e no ft u b u l ew a s e n l a r g e d ；a l s ot h e r ew e r es o m ec a s ti nm a l l vo f t h er e n a lt u b u l e s c h r o m a t i nw a sl o c a l i z e di nt h ec e l ln u c l e u sp e r i p h e r y t h e d e g r e eo fr e n a lt i s s u ei n j u r ys i g n i f i c a n t l ym i t i g a t ei ns i m ma n ds i m hg r o u p r a t s c o m p a r e dw i t hi rg r o u pr a t s a td i f f e r e n tt i m ep o i n t ，b u tn o a n y i m p r o v e m e n to fr e n a lt i s s u ei n j u r yi ns i m lg r o u pr a t sc o m p a r e dw i t hi r g r o u pr a t s 2 a f t e rr i r i ，t h ec o n t e n t so fs c ra n db u n w e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d i nu r g r o u pr a t st h a nt h a to fs h a mg r o u pr a t sa td i f f e r e n tt i m ep o i n t 俨 o o 1 ) ； c o m p a r e dw i t h 吐l e 胀g r o u pr a t s ，c o n t e n t so fs c ra n db u nw e r es i g n i f i c a n t l v l o w e ri ns i m - l ，s i m ma n ds i m hg r o u pr a t s a td i f f e r e n tt i m ep o i n t 俨 0 0 5 0 0 1 ) 3 a f t e rr i r i ，a c t i v i t i e so fs o dw e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ( 尸 0 0 1 ) a n dt h ec o n t e n t so fm d aw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ( 尸 0 0 1 ) i ni rg r o u p r a t sa td i f f e r e n tt i m ep o i n t ；c o m p a r e dw i t hi r g r o u pr a t s ，t h ea c t i v i t i e so f s o dw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e dp 0 0 1 ) a n dt h ec o n t e n t so fm d aw e r e s i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ( 尸 0 01 ) i ns i m 。la n ds i m hg r o u pr a t s b u tn o ti n s i m lg r o u pr a t s 4 a f t e rr i r i ，n oa n di n o sw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di ni rg r o u p r a t sa td i f f e r e n tt i m ep o i n t 俨 o 0 1 ) ；c o m p a r e dw i t ht h ef rg r o u pr a t s ，n o c o n t e n t sw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d 妒 i c i o 1 ) a n di n o sw e r ed e c r e a s e d ( p o o1 ) i ns i m ma n ds i m hg r o u pr a t s ；t h e r ew e r en os i g n i f i c a n te n o s e x p r e s s i o no fr e n a lc o r t e xi ns h a mg r o u pr a t s ，p o s i t i v ei m m u n o r e a c t i v e p a r t i c l e so fe n o si nr e n a lp r o x i m a lc o n v o l u t e dt u b u l a re p i t h e l i a lc e l l sw e r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di ni rg r o u pr a t s c o m p a r e dw i t hi rg r o u pr a t s ， s i r e ma n ds i m - - hg r o u pr a t sw e r es h o w e dm o r ep o s i t i v ei m m u n o r e a c t i v e p a r t i c l e se x p r e s s i o n ；e n o sp r o t e i ne x p r e s s i o nw e r eu p - r e g u l a t e di ni rg r o u p r a t st h a nt h a to fs h a mg r o u pr a t s ，c o m p a r e dw i t ht h ei r g r o u p ，e n o s p r o t e i ne x p r e s s i o nw e r es i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e di ns i m ma n ds i m hg r o u p r a t s ，b u tn o ti ns i m - lg r o u pr a t s 5 t h ee x p r e s s i o no fp o s i t i v ei m m u n o r e a c t i v ep a r t i c l e sa n dp r o t e i no f 英文摘要 p 4 7p h o xw e r ei n c r e a s e di ni rg r o u pr a t st h a nt h a to fi ns h a mg r o u pr a t s c o m p a r e dw i t hi rg r o u pr a t s ，b o t ho fp o s i t i v ei m m u n o r e a c t i v ep a r t i c l e sa n d p r o t e i ne x p r e s s i o no fp 4 7 p h o xw e r ed e c r e a s e di ns i m - ma n ds i m - hg r o u p r a t s ，b u tn o ti ns i m lg r o u pr a t s c o n c l u s i o n s ： 1 a f t e rr 【i u t h er e n a lf u n c t i o nw a sm a r k e d l yi m p a i r e da n dr e n a l t u b u l ee p i t h e l i a lc e l l ss h o w e ds i g n so fd a m a g e i tw a sf o u n dt h a ts c r ，n 叭 a n di n o sw e r ei n c r e a s e d ，t h ea c t i v i t yo fs o da n de x p r e s s i o no fe n o sw e r e d e c r e a s e di nr i r ir a t s t h ep o s i t i v ei m m u n o r e a c t i v ep a r t i c l e sa n dp r o t e i no f p 4 7 p h o xi nr e n a lp r o x i m a lc o n v o l u t e dt u b u l a re p i t h e l i a lc e l l sw e r em a r k e d l y i n c r e a s e di nr i r a t s t h e s er e s u l t si n d i c a t e dt h a tp 4 7 p h o xi si n v o l v e di nt h e p a t h o g e n e s i so f r i r ii nr a t s 2 s i m v a s t a t i nc o u l dd e c r e a s e dt h es c r , b u n ，m d aa n di n o s ，i n c r e a s e d t h ea c t i v i t yo fs o da n dc o n t e n to fn o ，u p r e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o no fe n o si n t h er e n a lt i s s u e i ti si n d i c a t e dt h a ts i m v a s t a t i nc o u l dr e d u c e dr e n a lt i s s u e i n j u r ya n di m p r o v e dr e n a lf u n c t i o ni nr i r ir a t s 3 s i m v a s t a t i nc o u l dd o w n r e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o no fp 4 7 p h o xo fr e n a l t i s s u ei nr i 甜r a t sa n dm i t i g a t e dr e n a li s c h e m i a - r e p u f u t i o ni n j u r y i ti s i n d i c a t e dt h a tt h ep r o t e c t i v ee f f e c t so fs i m v a s t a t i nt ot h er i r im a yb er e l a t e d t ob l o c kt h en a d ( p ) ho x i d a t ep a t h w a ya n da n t i f r e er a d i c a ld a m a g e k e yw o r d s ：r e n a l ；i s c h e m i c a l r e p e r f u s i o ni n j u r y ； s i m v a s t a t i n ； e n d o t h e l i a ln i t r i co x i d es y n t h a s e ；p 4 7 p h o x 7 英文缩写 研究论文 辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用及其机制研究 前言 他汀类药物是三羟基三甲基戊二酰辅酶a ( h m g c o a ) 还原酶抑制 剂。自1 9 7 6 年e n d o n l 等于桔霉素提取液中发现了美伐他汀，随后洛伐 他汀等他汀类药物相继问世。他汀类药物( s t a t i n s ) 作为h m g c o a 还原 酶抑制剂，通过对该酶特异性抑制作用，使h m g c o a 不能转变为甲羟 戊酸( m e v a l o n a t e ，m v a ) ，从而阻断胆固醇的合成，降低血胆固醇的水平， 目前他汀类药物已普遍用于临床治疗高脂血症。近年来的研究发现，他汀 类药物除其降血脂作用外，尚有抑制血小板凝聚、抗炎、抗增殖、抗肿瘤、 改善心肌缺血及保护肾功能等其他多种非降脂方面的作用。因此，研究他 汀类药物在疾病防治中呈现出的多效性已成为人们关注的热点课题。 r i r i 是损伤与抗损伤等多因素参与的复杂的病理过程，其中主要 的损伤因素有自由基损伤、白细胞内皮细胞相互作用、胞内钙超载、n o 等舒张血管物质减少、内皮素等缩血管物质产生过多等。有报道乜3 他汀类 药物可减少n a d p h 氧化酶亚基表达，从而增加抗氧化酶发挥其细胞内 抗氧化作用，从而减少氧自由基产生或直接清除机体产生的氧自由基，增 强机体的抗氧化能力。o c t a v i o 等发现阿托伐他汀和辛伐他汀可以抑制前 e t 1 m r n a 的表达和内皮素e t - 1 的合成，并且可以阻断o x - l d l 对 n o 合成酶( n o s ) m r n a 表达的下调作用，增加n o 产生1 ，而n o 可扩张肾小球入球动脉和出球动脉，降低肾脏血管阻力，使肾脏血浆流量 和肾小球滤过率增加。 尽管国内外诸多学者在r i r i 的发病机制及防治方面做了大量的研 究工作，但关于他汀类药物对r i p d 的作用却鲜有报道。因此本研究旨 在观察辛伐他汀对大鼠肾缺血再灌注损伤的作用并探讨其作用机制，为肾 缺血再灌注损伤的防治提供一定的理论基础。 1 材料 材料与方法 研究论文 1 1 药物和试剂 辛伐他汀 p 4 7 p h o x 兔i g g 抗体 辣根酶标记羊抗兔i g g 抗体 1 3 i a c t i n d a b 显色剂 酗港_ e r p i p a 裂解液 苯甲基磺酰氟 三羟甲基氨基甲烷 n ，n ，n ，n 四甲基乙二胺 甘氨酸 吐温( t w e e n2 0 ) 过硫酸胺( a p s ) 十二烷基硫酸钠( s d s ) t r i s 1 3 巯基乙醇 甘油 溴酚蓝 e d t a n a 2 无水乙醇 胰蛋白酶 二甲基亚枫 血清肌酐试剂盒 血清尿素氮试剂盒 考马斯亮兰试剂盒 一氧化氮试剂盒 超氧化物歧化酶试剂盒 丙二醛试剂盒 诱生型一氧化氮合酶 杭州上虞京新药业有限公司 s a n t ac r u zb i o t e c h n o l o g y s a n t ac r u zb i o t e c h n o l o g y s a n t ac r u zb i o t e c h n o l o g y 北京中杉金桥公司 北京天根生物技术有限公司 北京天根生物技术有限公司 美国s i g m a 公司 美国s i g m a 公司 美国s i g m a 公司 美国s i g m a 公司 广州天马精细化工厂 美国a m r e s c o 公司 北京华美生物工程公司 天津市光复精细化工研究所 中国医药集团上海化学试剂公司 北京华美生物工程公司 上海试剂三厂 天津化学试剂六厂三分厂 天津化学试剂三厂 美国a a l l r c s c o 公司 北京益利精细化学品有限公司 北京北化康泰临床试剂有公司 北京北化康泰临床试剂有公司 南京建成生物制品公司 南京建成生物制品公司 南京建成生物制品公司 南京建成生物制品公司 南京建成生物制品公司 il1llllllllillllllllllll 研究论文 内皮型一氧化氮合酶 1 2 仪器 h w l 电热恒温水温箱 l x i i i 离心机 g p r 低温低速离心机 e w - 3 0 0 0 a 电子天平 分析天平 7 2 1 分光光度计 s n 6 8 2 b 全自动丫记数仪 p m i o a 光学显微镜 e p i c s x li i 型流式细胞仪 实验室用超纯水仪 d y y i i i 型电泳仪 电子分析天平 电子制冰机 酶标分析仪 超低温冰箱