化学发光原理及检测项目PPT课件.ppt

化学发光的临床应用,1,2,3,由于化学反应（通常是氧化）产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象。,化学发光（Chemiluminescence）,生物发光和化学发光均属于冷光，即发光不是由于发光体温度升高所至，发射波长也与其温度无关,4,单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件,光电倍增管,高压,高速放大器,高速比较器,高速分频器,发光样品产生光子,激发光阴极产生光电子,在阳极上形成较强信号,脉冲信号,相对发光单位数字脉冲(RLU),在各打拿极之间得到能量和数目的倍增,5,单光子计数式发光检测仪,计算机,打印机,发光仪控制模块,发光仪执行模块,控制器,程控高压,计数/贮存器,单光子计数器,样品运动/定位装置,程控自动门锁及检测装置,原位注射泵,6,按化学反应类型,化学发光的分类,酶促化学发光：辣根过氧化物酶系统碱性磷酸酶系统黄嘌呤氧化酶系统非酶促化学发光：吖啶酯系统草酸酯系统三价铁-鲁米诺系统,闪光（Flash）:,按发光持续时间,发光时间在数十分钟以上，如：HRP-Luminol系统AP-AMPPD系统黄嘌呤氧化酶系统无须原位进样、以速率法测量。,发光时间在数秒内，如吖啶酯以原位进样(InSituInjector)和时间积分法测量,辉光（Glow）:,7,时间,发光信号,辉光坪区,速率法测量,原位进样,积分法测量,闪光尖峰,闪光与辉光及其测量方式的差别,8,光生物学检测技术的优越性,彻底消除了放射性危害无半衰期限制，试剂稳定性和有效期大大延长容易实现连续、动态、重复测定,适合于复合标记系统进行多指标并行测定操作简单，反应速度快，容易实现自动化灵敏度和线性范围超过以往技术,9,几种标记/检测技术灵敏度的比较,酶标,荧光,放免,发光,灵敏度(mol/L),10-1810-1510-1210-9,10,几种标记/检测技术线性范围的比较,酶标,荧光,放免,发光,线性范围,105104103102,11,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病贫血心脏疾病生长激素炎症因子,12,甲状腺疾病,甲状腺功能亢进甲状腺功能减退甲状腺炎自身免疫性甲状腺病甲状腺腺瘤甲状腺癌,TT3TT4FT3FT4TSHTgAbTPOAbTg,13,甲状腺疾病对于全身器官有广泛的影响,14,甲状腺功能诊断新战略(Caldwell1985),甲状腺功能检查,TSH,降低,升高,正常,降低,降低,正常,升高,正常,FT4,FT4,FT3,正常,升高,甲亢,亚临床甲亢,继发甲减,正常,亚临床甲减,原发甲减,15,抗甲状腺球蛋白抗体（ThyroglobulinautibodyTG-AG）,在致病因素作用下，TG从甲状腺滤泡中溢入血液，成为异位抗原，刺激机体发生自身免疫反应，产生TG-Ab，它是甲状腺疾病中首先被发现的自身抗体，属IgG。它可与TG形成免疫复合物，还可与巨噬细胞或K细胞结合，对甲状腺滤泡细胞起破坏作用。TGAb阳性，明确指示病员的甲状腺疾病有自身免疫反应的存在。临床检测发现：慢性淋巴细胞甲状腺炎（hashimoto,桥本）阳性率为80%；毒性弥漫性甲状腺肿(Giaves病)阳性率为50%；原发甲低、粘液性水肿阳性率为50%；40岁以上妇女，阳性率可达10%，（可能是自身免疫性甲状腺病的早期反映）。,16,甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）,甲状腺过氧化物酶（TPO）是甲状腺激素合成（碘化、偶联）的关键酶，是甲状腺微粒体中的主要成分。自身免疫性甲状腺病（AITD）时可产生抗甲状腺微粒体抗体（TMAb）其主要成分为TPOAb。TPOAb是IgG。AITD时，TPO-Ab明显升高，其中桥本氏甲状腺炎可高达80-90%，毒性弥漫性甲状腺肿（Graves,GD）为60%，而甲状腺结节，亚甲肿炎一般为阴性。,17,甲功指标的诊断有效性,1、甲亢（1）诊断的有效性：TSHFT3FT4TT3TT4（2）FT3（TT3）可由多种甲状腺疾病引起，应注意鉴别2、甲减诊断的有效性：TSHFT4TT4FT3TT3,18,3、甲亢治疗（1）激素变化顺序FT4（TT4）FT3（TT3）TSH（2）随访的有效性：FT4TSHTT4FT3TT3（3）TSH的改变滞后于FT4（特别病程长、药控差者）（4）治疗药物过量：a.临床：低代谢症候：畏寒、心缓、嗜睡、便干、浮肿、甲状腺肿大b.FT4/TSH,甲功指标的诊断有效性,19,甲功检测的干扰因素,新生儿：TSH（20mU/L）FT4;TT4避孕药：TT4肝炎：TT4肝硬化：TT4妊娠：TSH；TT4抗癫痫药（卡马西平，苯巴比妥，苯妥英）：TT4胺碘酮：TT4(严重者可致碘甲亢)重症患者：TT3,20,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病肿瘤标志物贫血心脏疾病生长激素炎症因子,21,性激素检测项目,雌二醇总睾酮孕酮泌乳素卵泡刺激素黄体生成素,性激素六项,人绒毛膜促性腺激素HCG,22,性激素六项的生理变化,LHFSHPRLE2PROGT,垂体激素,甾体激素,23,垂体泌乳素（PRL）,PRL（Prolactin）是由垂体前叶PRL细胞合成和分泌的，除妊娠和哺乳外，人PRL含量极少。由下丘脑分泌的PRL释放因子（PRF）、PRL释放抑制激素（PIH）调节。生理效应1、促进乳腺生长、发育和分泌乳液。2、高PRL血症可引起性腺机能低下（抑制垂体分泌FSH、LH，抑制性腺分泌雌激素），女性出现黄体期期缩短，随后出现不排卵，月经稀发和闭经，不育；男性会出现睾酮分泌减少及生精障碍，表现为性欲减退，阳痿及不育。,24,临床意义升高：1、下丘脑病变（颅咽管瘤、转移性肿瘤）使PIH产生减少，PRL升高。2、垂体泌乳素瘤：90%PRL升高。3、原发性甲减：由于甲状腺激素减少，反馈作用减弱，下丘脑促甲状腺激素释放激素（TRH）分增多，TRH兴奋TSH和PRL的分泌。,25,4、胸壁病变：乳癌、乳头刺激、胸壁创伤、带状疱疹等。5、肝、肾疾病：PRL的代谢清除减少。6、糖尿病：可能是高血糖抑制中枢多巴胺的释放，引起PRL增高。,26,减低：1、垂体前叶功能减退：席汉氏综合症等。2、药物：如左旋多巴能抑制PRL的释放。：PRL升高是月经紊乱、闭经、不孕不育最常见的原因之一。,27,注意事项1、PRL分泌呈脉冲式，有昼夜性变化，夜间高于白天。上午810时最低，为基础分泌状态。中午12点开始升高，下午4、8点均为分泌高峰。另外，紧张、受刺激等因素也可使其分泌增加，因此，测定PRL最好在静息状态下，上午810点采血。2、严重溶血标本不能检测，标本4不超过一周。,28,促性腺激素（GTH）,垂体分泌的促性腺激素（GTH）有黄体生成素（Luteinizinghormone,LH）和卵泡刺激素（Folliclestimulatinghormone,FSH），均为糖蛋白，含有和亚单位，独立的和亚单位无生物学活性，两者结合才有促性腺激素作用。,29,生理效应1、女性：FSH主要生理功能是刺激卵泡的生长和卵巢颗粒细胞的增生，在卵泡期LH和FSH共同促进卵泡的成熟，刺激卵巢分泌雌激素和孕酮，在月经中期LH急剧升高，排卵后持续的LH分泌刺激黄体生成孕酮。,30,2、男性：FSH刺激睾丸支持细胞的发育，促进生殖细胞的发育分化产生成熟的精子。LH的主要作用是促进睾丸间质细胞的增生，促进其合成分泌雄性激素睾酮。,31,临床意义LH、FSH检测是鉴别卵巢、垂体、下丘脑闭经的有效方法。升高：1、FSH、LH均升高提示卵巢功能衰竭；2、原发性性功能低下；LH、FSH显著增高，男性伴睾酮（T）低下，女性雌二醇30pg/ml，伴月经稀发或闭经。3、GTH细胞瘤；FSH或LH瘤患者LH、FSH、T都增高。,32,4、真性性早熟；青春期前儿童LH、FSH同时增高提示真性性早熟。5、更年期综合症；FSH、LH水平均升高，FSH高于LH，绝经期后两者均明显升高。6、多囊卵巢综合症；若LH/FSH2为其诊断参考。7、克氏综合症；,33,减低：（1）FSH、LH均为低值提示为垂体或下丘脑闭经。（2）继发性性功能低下（低促性腺激素型性功能低下）,34,雌激素（Estrogen,E）,成熟卵巢合成分泌许多激素，包括雌激素（E）、孕酮（P）等。部分E可来源于睾丸、胎盘、肾上腺等。其17位上的氢被羟基置换则为雌二醇（E2）、加上16位上被取代则为雌三醇（E3）、17位上的氢被酮基置换则为雌一醇。正常育龄妇女E2的活性最强，E2:E3:E1=100:30:20。绝经后E1/E2值显著增高，E1为绝经妇女体内主要的雌激素。E3为E1、E2的降解产物，活性最弱，但孕期是非孕期的几百倍乃至上千倍。故孕晚期测定E3对评价胎儿、胎盘功能具有重要价值。,35,1、雌二醇（E2）生理效应(1)促进女性有正常的成熟发育，刺激阴道、子宫、输卵管及第二性征的发育。刺激乳腺的发育。(2)促进子宫平滑肌的生长及子宫内膜的发育，维持正常的月经周期。(3)在排卵调控中起核心作用。(4)对蛋白质、糖、脂肪、水、电解质代谢有一定的影响。,36,临床意义E2增高1、多胎妊娠：胎盘合成雌激素增多。2、糖尿病孕妇：E2能刺激胰岛素的分泌，使血浆胰岛素水平增加。3、肝硬化：灭活减少。4、卵巢肿瘤5、性早熟（真性）,37,E2减低1、妊高症2、原发性卵巢疾病：性腺不发育、Turner氏综合症、卵巢功能早衰。3、垂体前叶疾病，如席汉氏综合症。4、葡萄胎5、继发性性功能低下：下丘脑或垂体疾患使促性腺激素分泌不足，导致E2下降。,38,孕酮（P）,孕酮是卵巢分泌的，妊娠期主要来源于胎盘。男性主要来自肾上腺。,39,生理效应1、对子宫的作用：维持妊娠。2、对乳腺的作用：使乳腺腺泡发育成熟。3、对垂体、下丘脑促激素的分泌有反馈作用。4、产热作用：兴奋下丘脑体温调节中枢，基础体温可升高0.51.0，临床上将这种基础体温的变化作为判断排卵期的一个标记。5、使血管和消化道平滑肌松弛。,40,临床意义1、增高：葡萄胎、轻度妊高症、多胎等。2、减低：黄体功能不全，胎儿发育迟缓，死胎，严重的妊高症。,：主要是判断是否有排卵，黄体功能是否健全，因此要求在月经前一周采血。,41,睾酮（T）,睾酮为循环中的主要雄激素。是睾丸间质细胞在LH的作用下，连续不断的生成和分泌睾酮。在女性主要由肾上腺产生。,42,生理效应1、刺激外生殖器生长与Wollfian管的分化。2、刺激第二性征的产生并维持它们的正常状态。3、促进蛋白质的合成并抑制其分解。4、与FSH协同作用维持正常的生精作用。5、对垂体LH分泌有反馈性抑制作用。,43,临床意义1、增高：（1）睾丸良性间质细胞瘤；（2）垂体功能亢进；（3）畸胎瘤；（4）女性多毛症。（5）卵巢肿瘤、多囊卵巢综合症。（6）真性性早熟,44,2、减低：（1）性功能减退；（2）无睾症；（3）垂体功能减退；（4）男性更年期。（5）男性Turner综合症：为常染色体显性遗传性疾病。,45,生殖激素测定中需注意的问题,1、年龄：患者的年龄是判断性激素、促性腺激素是否正常的重要依据。青春期前性激素、促性腺激素均处于低水平，女性更年期后性激素明显减低，而LH、FSH在50-65岁间持续高于40IU/L，而65岁以后随着垂体的衰老，LH、FSH逐渐下降，到80岁只有幼儿的水平。,46,2、周期：月经周期是判断女性性激素是否正常时需考虑的问题。如要考察是否排卵，应在月经中期测定LH峰值。观察黄体功能应在经前1周左右采血。女性生殖激素的申请单上必须注明末次月经时间，以便分析结果时参考。,47,3、综合判断结果：需几个激素同时测定，联合分析。如雌激素水平持续低于100pmol/L，究竟是卵巢本身功能问题还是垂体或下丘脑问题，只有与LH、FSH同时测定才能判断。如这时LH、FSH持续高于100IU/L，则表明卵巢本身出了问题，否则，是垂体以上部分功能问题，进一步诊断需作垂体兴奋试验。,48,4、结果判断时需考虑的其它因素：正在用激素药物或进食含激素药物将影响结果；高脂餐后采血，不仅激素在血清和脂质层中的分布不同，同时还干扰测定中的免疫反应，造成结果不可靠。,49,总的来说，性激素的分泌虽不似肾上腺皮质激素和生长激素的分泌那样存在明显的昼夜节律，但每日中仍有一定波动。通常清晨高于下午，青春期这种差异更大。为便于比较，一般均在晨8点取血。必须指出，上述时间取样测定的结果，虽能代表取样时的血清浓度，但是并不一定能真实地反映性腺的内分泌功能，特别是女性，更存在着月经周期中不同期的每一天的差异，有时这种天间差异可相当巨大，如排卵日与前后日间。,小结,50,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病肿瘤标志物贫血心脏疾病生长激素炎症因子,51,代谢类激素检测,胰岛素肽皮质醇促肾上腺皮质激素甲状旁腺激素降钙素,52,胰岛素与肽检测,糖尿病患者胰岛功能评估方法：0，30，60，120，180分钟血糖、血胰岛素、血C肽测定胰岛素抵抗评估（多囊卵巢综合征，单纯性肥胖等）方法：0、120分钟胰岛素和C肽测定低血糖原因待查方法：低血糖发作时，同时测定血糖和血胰岛素,53,皮质醇,肾上腺皮质束状带和网状带细胞分泌24小时昼夜节律，上午8时为峰浓度，午夜2时为谷浓度，通常取上午8时和下午16时为采血时间参考值：上午8时：4.322.4ug/dL下午16时：3.0916.66ug/Dl正常节律：上午:下午2:124小时尿皮质醇：无昼夜节律影响，无血浆结合蛋白的影响参考值：55.5286ug/24h,54,皮质醇检测的临床应用,库欣貌患者（结合ATCH促肾上腺皮质激素）肥胖患者（鉴别单纯性肥胖和病理性肥胖）多发痤疮、多毛、男性化表现等,55,皮质醇测定,地塞米松抑制试验,56,甲状旁腺激素（PTH）,PTH是由甲状旁腺主细胞分泌的肽类激素，体内可分解为N端，C端和一些小片断，但只有完整的PTH才具有生物活性。PTH可通过促进骨吸收，活化VitD3，升高血Ca，降低血磷酸盐。完整甲状旁腺激素（iPTH）参考值：1.487.63pmol/L,57,iPTH结果判读,58,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病肿瘤标志物贫血心脏疾病生长激素炎症因子,59,肿瘤全球关注的焦点之一,在中低收入国家，肿瘤的死亡率高达63,全球超过1千2百万的新发患者,Source:/ncicancerbulletin/100609/page4,预期到2030年，全球新发患者超过2千7百万，每年死亡患者将超过1千7百万,60,远处转移情况,原发灶的位置,数量、大小,受累的淋巴结情况（数量、位置）,细胞类型，肿瘤等级,决定肿瘤分期的要素,Source:/cancertopics/factsheet/Detection/staging,61,5年生存率:早期发现对生存率的影响,乳腺癌,前列腺癌,直肠结肠癌,卵巢癌,90%,92%,93%,65%,100%,73%,79%,40%,100%,56%,51%,20%,32%,8%,18%,100%,睾丸癌,95%,95%,70%,N/A,胰腺癌,40%,20%,8%,2%,Sources:/medlineplus/ency/article/000913.htm,/docroot/CRI/content/CRI_2_4_1X_What_are_the_key_statistics_for_prostate_cancer_36.asp/mediacentre/factsheets/fs297/en/,肿瘤,I期,II期,III期,IV期,62,免疫检测,生物物理学技术,诊断价值,潜伏期（数月至数年）,早期,发病期,晚期,63,易于检测、随访,由肿瘤细胞直接产生或由非肿瘤细胞经肿瘤细胞诱导而合成的物质,其浓度受肿瘤细胞的数量、性质、血供以及类型等多种因素的影响,可以对肿瘤的存在、发病过程和预后作出判断,少数具有肿瘤特异性和/或器官特异性,肿瘤标志物,肿瘤标志物,64,肿瘤细胞的代谢产物如：糖酵解产物，组织多肽抗原，核酸分解产物,分化紊乱的细胞基因产物如：甲胎蛋白，癌胚抗原，异位激素等,细胞坏死、崩解，释放如血循环物质如：甲状腺球蛋白，CYFRA21-1,肿瘤宿主细胞的细胞反应性产物如：特异性的免疫球蛋白,来源,肿瘤标志物的来源,65,灵敏度100%使肿瘤能早期发现，早期诊断特异性100%即肿瘤患者为阳性，而非恶性肿瘤患者为阴性，因此，能对良、恶性肿瘤进行鉴别；能对肿瘤进行定位，即具有器官特异性；与病情严重程度、肿瘤大小或分期有关，即肿瘤越大或越晚期，肿瘤标志物浓度越高；监测肿瘤治疗效果，即肿瘤标志物浓度增高或降低与治疗效果密切相关；监测肿瘤的复发，即肿瘤治疗后肿瘤标志物浓度降低，肿瘤复发时明显升高；预测肿瘤的预后，即肿瘤标志物浓度越高，预后越差，反之亦然。但至今还没有一种肿瘤标志物能完全满足上述要求。,理想的肿瘤标志物,66,肿瘤标志物的应用价值,普查定位分期疗效检测,67,1：普查：由于目前临床常用的肿瘤标志物在诊断恶性肿瘤时灵敏度和特异性不够高，故目前主要用于肿瘤的辅助诊断；不能作为肿瘤诊断的主要依据；也不提倡对无症状人群进行普查，个别指标（如甲胎蛋白和前列腺特异性抗原）可用于高危人群筛,所以肿瘤标志物的筛查对高危人群有很大应用价值。,68,TM应用于高危人群筛查的原则该肿瘤标志物对早期肿瘤的发现有较高的灵敏度测定方法的灵敏度、特异性高和重复性好。筛查费用经济、合理。筛查时肿瘤标志物异常升高，但无症状和体征者，必须复查和随访。,69,2：定位由于绝大多数肿瘤标志物的器官特异性不强，因此肿瘤标志物阳性不能对肿瘤进行绝对定位。但少数肿瘤标志物，如前列腺特异性抗原（PSA）、甲胎蛋白（AFP）和甲状腺球蛋白（TG）等对器官定位有一定价值。,70,3：确诊因目前TM无足够的灵敏度，不能排除假阴性的结果，所以不能用于肿瘤的确诊，应用原则：筛查出来的高危人群应作近一步的确诊检测影像学检测病理诊断等,71,4：TM在判断肿瘤的大小和临床分期的价值大多数情况下，肿瘤标志物浓度与肿瘤的大小和临床分期之间存在着一定的关联。但需注意各期肿瘤的肿瘤标志物浓度变化范围较宽，会有互相重叠,因此,不能根据肿瘤标志物浓度高低来判断肿瘤的大小和进行临床分期。,72,5：TM最重要的临床应用价值疗效检测和预后判断临床可通过对肿瘤标志物治疗前、后及随访中浓度变化的监测，来了解肿瘤治疗是否有效，判断其预后，为进一步治疗提供参考依据。为确定何种肿瘤标志物适用于对该患者的监测，在治疗前应做相关肿瘤标志物检测。目前尚无一种被普遍认可的用TM浓度来评价治疗有效的标准，Beastall提出的方案是可行的无效：TM浓度与治疗前相比下降50%有效：TM浓度与治疗前相比下降90%显效：TM浓度下降到非恶性肿瘤参考范围内,73,以CEA为例治疗中或治疗后TM浓度变化3种类型,A：提示肿瘤全部除去病情缓解,B：提示复发或转移,C：提示肿瘤残留或肿瘤转移,74,注：化疗放疗和手术后测定TM浓度可能有短暂的升高，由于肿瘤的坏死所致化疗放疗和手术后测定TM浓度重新恒定升高，表示治疗无效,75,肿瘤标志物测定的影响因素,体内因素：肝功能损伤肾功能损伤胆汁淤积自身免疫性疾病药物物理检查生理变化,体外因素：样本来源：血液？体液？样本保存和处理微生物感染,76,常见假阳性与假阴性原因,假阳性良性疾病，如炎症等肝肾功能障碍生理性升高，如妊娠强烈治疗过程中，一过性升高,假阴性细胞或细胞表面被封闭体内形成自身抗体，与肿瘤抗原形成免疫复合物肿瘤组织血循环差，肿瘤标志物无法释放入外周血标本采集、储存不当,77,AFP,78,AFP,甲胎蛋白是一种肝细胞和生殖细胞（非精原细胞）恶性肿瘤的标志物。AFP在胚胎发育期由卵黄囊和肝脏大量合成，是胎儿循环中的主要蛋白之一。婴儿出生后水平下降，至18月降至正常人水平。生物半衰期：28天正常成人：血清500g/L：多见于原发性肝癌，与肿瘤组织大小相关。,79,AFP与肝癌,AFP诊断肝细胞癌的标准：AFP500ng/ml持续4周AFP由低浓度逐渐升高，持续不降AFP在200500ng/ml持续8周排除妊娠和生殖胚胎肿瘤,80,AFP的临床应用,高危患者筛查判断预后调整治疗,临床应用,检测对象,疑诊肝细胞癌患者疑诊胚胎细胞肿瘤（睾丸、卵巢、外生殖器肿瘤）患者肝细胞癌和胚胎细胞肿瘤患者治疗中或治疗后的随访肝硬化和乙肝患者向原发性肝细胞发展的监测胚胎细胞肿瘤高危患者的监测，如胚胎细胞肿瘤患者的孪生兄弟和姐妹,81,CEA,82,CEA,CEA于1965年被发现，用人直肠癌组织抽提物免疫动物所获抗血清经正常人直肠组织抽提液吸收。此抗血清能与肿瘤组织反应而不与正常组织反应。由于这种抗原也能在胚胎组织中发现，故称“癌胚抗原”。CEA在正常情况下由胎儿胃肠道上皮、胰和肝细胞合成，经胃肠道代谢。肿瘤状态时CEA进入血和淋巴循环，使血清CEA上升。正常群体CEA值：5g/L；吸烟者10g/L，半衰期28天CEA在妊娠前6个月内含量升高，出生后血清中含量很低。在结肠癌、直肠癌、胃、肺癌等恶性肿瘤时，CEA常明显升高超过正常值510倍。癌肿浸润、转移时CEA明显升高，手术后6周CEA水平可恢复正常。持续升高：预后不良,83,CEA升高的常见原因,肝硬化45%肺气肿30%直肠腺癌5%良性乳房疾患15%溃疡性结肠炎15%,直肠癌70%胰腺癌55%胃肠癌50%肺癌45%膀胱癌40%乳腺癌40%卵巢癌25%,良性疾病中的阳性率,恶性疾病中的阳性率,84,CEA的临床应用,临床应用,不适于筛查随访其变化可以帮助判断预后，观察疗效乳腺癌患者中明显升高，提示肺、骨转移可能肺癌中CEA高，提示非小细胞肺癌可能大,检测对象,结肠直肠癌患者治疗前后的监测甲状腺髓样癌患者治疗前后的监测CEA阳性的胃癌、胰腺癌、乳腺癌、肝癌和肺癌患者治疗前后的监测结肠直肠癌危险患者筛查，如肠炎患者、家族性息肉腺瘤患者或有癌症家族史的个体,85,CA125,86,CA125,卵巢癌和子宫内膜癌的肿瘤标志物正常人血清中CA125的临界值为35U/ml半衰期5天，在血中很快代谢，所测结果能反映肿瘤近期的变化状态CA125在卵巢癌，尤其是上皮性卵巢癌、子宫内膜癌可出现升高，还可在肺癌、宫颈癌等肿瘤状态时升高。CA125在子宫内膜异位症、1%的健康妇女、3%的患良性卵巢疾病妇女及其他非肿瘤患者也可见到升高。,87,CA125在各种疾病中的敏感度,良性疾病,恶性疾病,88,CA125的临床应用,卵巢癌的辅助诊断卵巢癌患者治疗过程中的随访，疗效评估卵巢癌患者病程随访，跟踪复发胰腺癌患者中，CA199之后的次选指标,临床应用,检测对象,疑诊卵巢癌患者卵巢癌患者治疗监测胰腺癌患者,89,CA15-3,90,CA15-3,乳腺癌患者病程监测的重要指标,但灵敏度有限，因此不适合做诊断和筛查用。正常人群：35U/L半衰期：57天对于乳腺癌：欧洲肿瘤组织标志物（EGTM）建议同时使用CA15-3和CEA来提高临床检测的灵敏度。两者联合应用对肿瘤复发和转移检测的临床敏感度可从3050提高到80，临床特异度可达87。在卵巢癌中，也有3071的阳性率，治疗过程中，监测CA15-3可帮助判断治疗效果。,91,CA15-3的应用,乳腺癌患者的疗效评估乳腺癌患者病程监测，跟踪复发卵巢癌患者的疗效评估,临床应用及检测对象,92,CA19-9,93,CA19-9,CA19-9是广谱肿瘤标志物，主要用于消化系统恶性肿瘤，包括胰腺癌、胃癌和肠癌等。对胰腺癌的作用尤为明显，胰腺癌中灵敏度可达86。其他如胃癌、结直肠癌中也有很高的阳性率，可达5080。正常人群：37U/L，半衰期48天。肝胆系统疾病及慢性胰腺炎时也可见CA19-9升高,94,CA19-9应用,主要用于胰腺癌、胃癌、结直肠癌、肝胆系统癌辅助诊断疗效评估病程监测跟踪复发也可用于良恶性腹水的鉴别腹水中临界值为30U/ml，灵敏度50，特异度100,临床应用及检测对象,95,独有的肿瘤标志物,复合型前列腺特异性抗原cPSA,乳腺癌肿瘤标志物HER-2/neu,96,PSA具有高度组织特异性，但缺乏癌肿特异性,男性最常见的肿瘤，占所有肿瘤的15,每年新发病例700,000例,早期诊断则5年生存率可达100,PSA和cPSA是前列腺癌筛查、诊断、随访的重要指标,前列腺癌,97,怎样诊断前列腺癌,PSA/cPSA标志物检测直肠指检组织活检超声检测影像学检查,98,复合型前列腺特异性抗原cPSA,前列腺癌是男性第二大恶性肿瘤，仅次于肺癌。PSA是前列腺癌筛查、诊断、随访的重要指标。PSA是主要有前列腺上皮细胞产生的一种蛋白酶，具有很高的组织特异性，但缺乏癌肿特异性。无论是良恶性前列腺增生，均可检出PSA的增高。PSA在血液中有游离型fPSA和结合型cPSA两种形式。,99,独有的肿瘤检测项目：cPSA,cPSA主要是与-抗糜蛋白酶（ACT）结合而成。结合发生在PSA进入血液循环之前。ACT可在癌细胞中大量表达和分泌，因而导致cPSA在前列腺癌中异常增高。而在前列腺良性增生中，由于ACT的合成较少，PSA多以游离形式释放入血。fPSA在血液中的稳定性较差，而且受直肠指检和前列腺穿刺等检查的影响较大。,100,各种形式PSA的应用价值比较,Sn：敏感度Sp：特异性PV：阳性预测值PV：阴性预测值OA：总准确度,国外医学：临床生物化学与检验学分册；2002；23（1）：36潘静改善血清前列腺特异性抗原对前列腺癌诊断特异性的几种方法,101,早期发现则5年生存率可达90,女性最常见的肿瘤，占所有女性肿瘤的26,每年新发病例100,000例,肿瘤的性质将影响治疗方案的选择，进而影响预后,乳腺癌,HER-2/neu是判断肿瘤侵袭力及预后的重要指标,102,HER-2/neu与乳腺癌,乳腺癌是女性肿瘤中发病率最高的肿瘤。据美国2006年数据，约占所有肿瘤的31。肿瘤的性质、侵袭力、治疗方案的选择等都影响患者的预后。HER-2/neu是判断肿瘤侵袭力及预后的重要指标，也是选择化疗方案的重要依据。,103,HER-2/neu原癌基因,HumanEpidermalgrowthfactorReceptor2（人类表皮生长因子受体2)的缩写最初在脑肿瘤细胞中发现，也称为neu，并且由于与病毒癌基因（V-erbB）的同源性很高，故也称为erbB-2HER-2/neu在正常人体腔上皮、腺上皮和胚胎中均有表达，但无基因扩增其产物p185是某种未知生长因子的受体，对细胞生长及分化具有重要作用,104,HER-2/neu检测的临床意义,判断肿瘤性质，评估预后，监测治疗状况HER-2/neu过表达提示预后差，肿瘤易于转移。HER-2/neu上升超过15，提示肿瘤进展。指导选择合适的治疗方案HER-2/neu过表达提示对某些常规化疗方案耐药。可选择针对性的靶向治疗。,105,血清HER-2/neu临床应用,基础水平HER-2检测结合组织活检,新辅助治疗中检测血清HER-2/neu水平,结合血清HER-2/neu检测,影像学检查和靶向治疗,辅助治疗中血清HER-2水平检测,106,肿瘤标志物的合理应用,每一个单独的肿瘤标志物的敏感性和特异性都有一定的限度，而选择相关的肿瘤标志物进行联合检测，则可以大幅提高肿瘤的早期检出率和特异度,（一）联合应用,107,单一指标的判定对卵巢恶性肿瘤的诊断价值,肿瘤标志物的联合应用,108,联合检测对卵巢恶性肿瘤的诊断价值(%),肿瘤标志物的联合应用,109,肿瘤标志物的合理应用,肿瘤标志物的结果判读必须结合患者的临床信息如病史、体格检查结果、影像学检查结果等多种诊断手段进行综合分析、判断。单一的肿瘤标志物检测不可作为肿瘤疾病的诊断依据。,（二）综合分析,110,肿瘤标志物的合理应用,虽然每个肿瘤标志物都给出了一个相对确定的临床决定值，但对于每个患者而言，其自身的基线值会更具判断意义。尤其在病程分析、疗效判断等应用中更需要动态观察肿瘤标志物的水平变化以帮助临床作出正确的选择。检测频率：术前和化疗前应做第一次检测第6周做第一次复查每三个月检查一次第35年，每半年一次第57年，每年一次7年后可停止复查期间若有一次升高，需在一月内复查一次，两次均升高需考虑复发。,（三）动态观察,111,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病肿瘤标志物贫血心脏疾病生长激素炎症因子,112,贫血,维生素B12铁蛋白叶酸,113,贫血,红细胞通过血红蛋白在血液中运送氧气。当没有足够的血红蛋白或者红细胞数量过少时，引起贫血对于有效的红细胞和血红蛋白的产生来说，维生素B12和叶酸是必要的营养物质。低水平的维生素B12和叶酸是引起贫血的原因。,114,贫血,铁蛋白是一种大分子的储铁蛋白多数存在于肝、脾和骨髓以及血浆中铁蛋白的水平，通常能够反应体内大部分铁的水平红细胞和血红蛋白的产生都需要铁铁蛋白通常协助诊断铁缺乏性贫血,115,促红细胞生成素（EPO）检测,适应症：原因不明的正细胞性贫血疑为肾性贫血EPO治疗前的基准值EPO降低：慢性肾衰，真性红细胞增多症EPO增高：组织缺氧；非肾性贫血；继发性红细胞增多症；部分恶性肿瘤；妊娠；急性出血,116,化学发光的临床应用,甲状腺疾病生殖系统疾病代谢疾病肿瘤标志物贫血心脏疾病生长激素炎症因子,117,内容,心脏标志物组合Ultra-TroponinI超敏肌钙蛋白ICK-MB肌酸激酶同工酶Myoglobin肌红蛋白BNPB型利钠肽Homocysteine同型半胱氨酸,118,心脏标志物,肌钙蛋白I,肌红蛋白,肌酸激酶质量,B型利钠肽,同型半胱氨酸,心肌缺血损伤标志物特异性灵敏性最好,心肌缺血损伤标志物特异性不佳，但灵敏性最好,心肌缺血损伤标志物特异性、灵敏性较好,心脏功能，心室负荷的标志物,动脉粥样硬化、冠心病的标志物,119,心肌损伤标志物,MarkerKinetics,InitialrisePeakRenormalize,CK-MBmass3-8h12-24h48-72h肌酸激酶MB同工酶质量Myoglobin1-4h6-9h6-24h肌红蛋白TroponinI3-8h12-24h4-7days肌钙蛋白T3-8h12-96h10-14days,120,暂时性脑缺血(TIA)缺血性中风严重腿部缺血,不稳定心绞痛(UA),急性心肌梗死(AMI),斑块形成稳定性心绞痛间歇性跛行,Adaptedfrom:StaryH.C.Circulation.1995;92:1355-1374FusterV.VascMed.1998;3:231-239RossR.NEJM.1999;340:115-126,心力衰竭,心肌损伤,斑块,心血管疾病:一个连续渐进的过程,121,TimetoThrombolyticAgent(h),Benefit(%),TiefenbrunnandSobel.1992,GISSI-3StudyonPopulation（1993）n=74365patientsmean=5.43hmedian=2.27h(从病人症状发作到送到医院的时间),最大疗效,确定的疗效,无明显疗效,治疗AMI时间的重要性,122,最特异的心血管标志物肌钙蛋白,TroponinI在心肌外不存在100%器官特异性,Troponins是直接与肌纤维收缩相关的蛋白.,123,建议的草案,ESC/ACC推荐最新的心肌损伤的首选标志物是肌钙蛋白(I或T),它对心肌组织几乎有绝对的特异性,同时具有很高的灵敏度,可以反映显微级的坏死。cTn升高应被定义为超过参照控制组测定值的单侧第99百分位值可接受的不精密度(CV%)在每个测试的第99百分位值应为10%.如果cTn测试不能进行,最佳的替代是CK-MB(质量测定)不建议进行总CK测试因为其在多种组织中均有分布。AST,LDH,LD同工酶不应用来诊断心肌损伤。,124,更高灵敏度，更早诊断,EarlierdetectioninmyocardialinjuryinapreliminaryevaluationusinganewtroponinIassaywithimprovedsensitivity.StacyEFMelanson,etal.AmJClinPatho.2007;128(2):282-286,新的超敏肌钙蛋白I与前一代的肌钙蛋白I相比可以将诊断时间平均提前9小时,125,正常人群99th值在急诊的应用价值,UseofCentaurTnI-Ultraassayfordetectionofmyocardialinfarctionandadverseeventsinpatientspresentingwithsymptomssuggestiveofaccutecoronarysyndrome.FredSApple,etal.ClinicalChemistry,April2008.,以99th值作为参考值诊断急性心肌梗塞，其ROC曲线下面积最大。其灵敏度和特异性都得到了很大程度的优化。,126,结果2,127,正常人群99th值在风险分层中的应用,Long-TermHealthOutcomesAssociatedwithDetectableTroponinIConcentrationsPeterA.Kavsak,etc.DepartmentofPathologyandMolecularMedicine,McMasterUniversity,Hamilton,ON,CandaClinicalChemistry53:2220227(2007),任何可测得的肌钙蛋白都于不良预后相关。肌钙蛋白超过99th值，8年生存率下降超过50。,128,超敏肌钙蛋白I,性能：正常人群99百分位值：0.04ng/ml10%CV值：0.03ng/ml检测灵敏度：0.006ng/ml溯源性：NISTSRM2921,129,唯一的一个达标的肌钙蛋白,唯有Centaur上的超敏肌钙蛋白I能满足99th值的精密度要求,130,各厂家肌钙蛋白精度比较,CardiacTroponinAssays：AViewFromtheClinicalChemistryLaboratoryStacyE.F.Melanson,MD,PhD（HarvardMedicalSchool）Circulation,2007,10;116,131,血样本的采集续贯监测应考虑患者的就诊时间及胸痛发作时间若无明显ECG异常，建议标本采集时间为：标志物入院时24h69h1224h肌红蛋白（6h）,NACB:心脏标志物应用指南（2007）,132,多种标志物的联合应用,早期标志物特异标志物MYO+cTn(+CKMB)Myo是一个很好的早期标志物，具有最高灵敏度；cTn是确诊标志物，最具心肌特异性。心肌损伤标志物炎症标志物心功能标志物cTnhsCRPBNP提供更多风险分层信息,NACB:心脏标志物应用指南（2007）,133,肌钙蛋白升高的ACS和HF外的可能因素,主动脉夹层脑血管意外急性上消化道出血肺栓塞和急性呼吸窘迫综合征急性心脏炎症急性严重感染慢性肾功能不全高血压、糖尿病、甲减手术心脏介入心律失常，尤其是电复律之后化疗药物,134,肌