（外科学专业论文）survivin和nfκb、pcna在胶质瘤中的表达及相关性研究.pdf

iii 工互8 量 t p 目录 中文摘要1 英文摘要3 研究论文s u r v i v i n 和n f r b 、p c n a 在胶质瘤中的表达及相关性 研究 前言一一”o ooooo 一一”“一”6 刖吾”“”一”“” 一“一”“一”“一”“一”“一“”“” 材料与方法7 结果- 1 0 附图1 2 附表2 0 讨论- 2 3 结 仓2 6 参考文献2 8 综述n f k b 、s u r v i v i n 在胶质瘤细胞凋亡中的作用2 9 个人简历4 1 中文摘要 s u r v i v i n 、n f g b 和p c n a 在胶质瘤中的表达及相关性研究 摘要 目的：探讨s u r v i v i n 、n f r d 3 和p c n a 与胶质瘤临床病理类型的相关 性以及三者在胶质瘤中表达的相关性。进一步明确它们在胶质瘤发生、增 殖、恶变和复发中的作用。为胶质瘤寻找新的治疗途径。 胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一，肿瘤的发生被认为是受多 基因协调控制的细胞增殖和细胞凋亡过程失衡的结果。s u r v i v i n 基因是一 个凋亡蛋白抑制家族的新成员，通过抑制效应c a s p a s e 分子来抑制细胞凋 亡途径。并且抗s u r v i v i n 主动免疫反应可能发生的证据也逐渐增多。核转 录因子k b ( n u c l e a rf a c t o r - k a p p ab ，n f r b ) 是一类广泛存在于细胞中的 多显性核转录因子，属r e l 基因家族。在肿瘤细胞中其具有调控多种基因 转录表达的能力，与肿瘤细胞的生长、增殖和侵润、转移的关系密切，还 能调控肿瘤细胞的调亡和免疫活性，此外，高水平的n f r d 3 还可影响细 胞外基质的产生及其功能。p c n a ( 增殖细胞核抗原) 是肿瘤细胞增殖活 动可靠的标志物。本文通过检测s u r v i v i n 、n f r b 和p c n a 蛋白在胶质瘤 中表达情况，应用统计学分析，探讨三者与胶质瘤临床病理类型的相关性 以及三者在胶质瘤中表达的相关性，进一步明确它们在胶质发生、增殖、 恶变和复发中的作用，以试图为胶质瘤的诊断和治疗提供新的思路和依 据。 方法：选取河北大学附属医院神经外科2 0 0 6 年1 月至2 0 0 9 年5 月手 术切除的4 8 例胶质瘤标本及存档蜡块，其中男性3 l 例，女性1 7 例年龄 1 5 - - - 7 6 岁，平均5 0 7 士1 0 6 。病程1 2 3 个月。用免疫组化s p 法检测4 8 例不同级别脑星形细胞瘤中s u r v i v i n 、n f r d 3 和p c n a 的表达情况，另取 同期因急性颅脑损伤行内减压手术切除的正常脑组织5 例作为对照。所有 标本均经过1 0 甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋后存档备用。每例标本以 4 岬厚度连续切片，并作h e 染色确定病理组织类型。阳性病理组织切片 随机选择5 个高倍视野( 4 0 0 x ) ，每个视野计数2 0 0 个肿瘤细胞，计算1 0 0 0 个肿瘤细胞中s u r v i v i n 、n f r , b p 6 5 或p c n a 蛋白的阳性表达率。免疫反 中文摘要 应按照下述标准判定：阳性细胞数o 为阴性( ) ；阳性细胞数 3 0 为( + ) ； 阳性细胞数3 0 , - - ，5 0 为( + + ) ，阳性细胞数之5 0 为( 卅) 。选择肿瘤细 胞标记密集的区域评估p c n a l i ，p c n a l i 为阳性染色细胞数在1 0 0 0 个 肿瘤细胞中所占的比例( 每张切片选取1 0 个高倍视野，每个视野计数1 0 0 个肿瘤细胞) 。 结果：4 8 例人脑胶质瘤中s u r v i v i n 、n f r bp 6 5 和p c n a 的阳性表达 率分别为6 6 7 、5 8 3 3 、4 7 9 2 。在5 例正常对照组中未见s u r v i v i n 、 n f r bp 6 5 和p c n a 表达，s u r v i v i n 、n f r , bp 6 5 和p c n a 在不同级别脑 胶质瘤的阳性表达率之间有显著性差异。n f r , bp 6 5 在低级别组( i i i 级) 与高级别组( i i i 、i v 级) 之间的表达有显著性差异( x 2 = 1 0 4 2 8 ，p 0 0 5 ) ； p c n a 在低级别组( i i i 级) 与高级别组( i i i 、i v 级) 之间的表达有显 著性差异( x 2 = 1 3 5 8 3 ，p 0 0 5 ) ；s u r v i v i n 在低级别组( i i i 级) 与高级 别组( h i 、i v 级) 之间的表达有显著性差异( x 2 = l1 6 5 8 ，p 0 0 5 ) 。随着胶 质瘤病理分级的增加，s u r v i v i n 、n f r , bp 6 5 和p c n a 表达的阳性率及表 达强度渐增。n f k bp 6 5 和p c n a 的表达之间存在正相关关系；n f k bp 6 5 与s u r v i v i n 及p c n a 与s u r v i v i n 的表达间均存在正相关关系。 结论：o s u r v i v i n ，p c n a 和n f r , b 蛋白在胶质瘤中广泛表达并和胶 质瘤的组织级别密切相关。( 室) s u r v i v i n 、n f t c b 和p c n a 在胶质瘤中的表 达存在正相关性，影响和促进胶质瘤发生、增殖、恶变和复发。s u r v i v i n 、 n f 1 c b 过度表达是胶质瘤发生的早期或初始事件，可以作为判断胶质瘤发 生或复发的早期诊断指标。s u r v i v i n 、n f 1 c b 是胶质瘤免疫治疗理想的 靶基因，为胶质瘤( 包括术后残余和复发胶质瘤) 的治疗提供新的思路和 有效方法。 关键词：胶质瘤；凋亡；增殖；s u r v i v i n ；n f t c b ；p c n a ；免疫组化 英文摘要 s t u d yo ne x p r e s s i o na n dc o r r e l a t i o no fs u r v i v i n 、n f - k ba n d p c n ai ng l i o m a a b s t r a c t o b j e c t i v e ：t os t u d yt h ec o r r e l a t i o nb e t w e e ns u r v l v l n ，n f - r ba n dp c n a a n dd i f f e r e n th i s t o l o g i ct y p e so fg l i o m aa n dt h ec o r r e l a t i o na m o n gs u r v i v i n ， n f r , ba n dp c n a e x p r e s s i o nh a v eb e e ns t u d i e di no r d e r t of u r t h e re x p l o r et h e f u n c t i o no ft h e s eg e n e si nt h eo n c o g e n e s i s ，p r o l i f e r a t i o n ，m a l i g n a n c ya n d r e c u r r e n c eo fg l i o m a t oi n v e s t i g a t et h ev a l u eo fd e t e r m i n i n gs u r v i v i n ，n f - k b i nc l i n i c a lu s eo f g l i o m a g l i o m ai so n eo ft h em o s tc o m m o nt u m o r so fc e n t r a ln e r v o u ss y s t e m t u m o u r sa r et h o u g h tt oa r i s ef r o ma l li m b a l a n c eb e t w e e nc e l l u l a rp r o l i f e r a t i o n a n dc e l l u l a ra p o p t o s i sa n db o t hp r o c e s s e sa r ec o n t r o l l e db yt h ec o o r d i n a t e r e g u l a t i o no fan u m b e ro fg e n e s s u r v i v i ng e n ei s an e wm e m b e ro ft h e i n h i b i t o ro fa p o p t o s i sp r o t e i n sg e n ef a m i l yt h a tb l o c k sa p o p t o s i sp a t h w a y sb y i n h i b i t i n ge f f e c t o rc a s p a s em o l e c u l e s a n dt h e r e a r ea l s oc u m u l a t i v ee v i d e n c e s t h a t s p o n t a n e o u s i m m u n e r e s p o n s ea g a i n s t s u r v i v i n m a y o c c u r p c n a ( p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n ) i sam a r k e rw h i c hc a nr e f l e c tt h e p r o l i f e r a t i v ea c t i v i t y o ft h et u m o u rc e l l s u s i n gs t a t i s t i c a l a n a l y s i s ，t h e c o r r e l a t i o nb e t w e e ns u r v i v i n ，n f r ba n dp c n aa n dd i f f e r e n th i s t o l o g i ct y p e s o fg l i o m aa n dt h ec o r r e l a t i o na m o n gs u r v i v i n ，n f 一1 c ba n dp c n a e x p r e s s i o n h a v eb e e ns t u d i e di no r d e rt of u r t h e r e x p l o r et h ef u n c t i o no ft h e s eg e n e si nt h e o n c o g e n e s i s ，p r o l i f e r a t i o n ，m a l i g n a n c ya n dr e c u r r e n c eo fg l i o m a ，t ot r yf o r g l i o m ad i a g n o s i sa n dt r e a t m e n to f t h ep r o v i s i o no fn e wi d e a sa n dt h eb a s i s m e t h o d s ：4 8s p e c i m e n sa n da r c h i v e dp a r a f f i n b l o c k so fg l i o m a sw e r e c o l l e c t e df r o mp a t i e n t sw h ou n d e r w e n ts u r g e r ya tt h ea f f i l i a t e dh o s p i t a l ，o f h e b e iu n i v e r s i t yf r o mj a n u a r y2 0 0 6t om a y2 0 0 9 t h e r ew e r e31m a l e sa n d 17f e m a l e sw i t ham e a na g eo f5 0 7 + 10 9y e a r s ( r a n g e ：15t o7 6y e a r s ) t h e e x p r e s s i o n so fs u r v i v i n ，n f k ba n dp c n ap r o t e i nw e r ee x a m i n e db ys - p i m m u n o h i s t o c h e m i c a ls t a i n i n gi n4 8h u m a na s t r o c y t o m aa n da n o t h e rc h e c k 3 英文摘要 t h es a m ep e r i o dd u et oa c u t eb r a i ni n j u r yd e c o m p r e s s i o ns u r g i c a lr e s e c t i o n l i n eo ft e nc a s e so fn o r m a lb r a i nt i s s u ea sc o n t r o l s a l lt i s s u e sw e r er o u t i n e l y f i x e di n 10 f o r m a l i n ，d e h y d r a t e d c o n v e n t i o n a l l y , e m b e d d e d i n p a r a f f m w a x ，a n dt h e na r c h i v e dt op r e p a r ef o ru s i n g s e r i a ls e c t i o n so f4 1 x mw e r ec u t f r o mt h eb l o c k s t h e nr e p r e s e n t a t i v es e c t i o n sw e r es t a i n e dw i t hh e m a t o x y l i n a n d e o s i n ( h & e ) i n o r d e rt oc o n f i r mt h e h i s t o p a t h o l o g i c a lt y p e a s p ( s t r e p t a v i d i n b i o t i np e r o x i d a s e ) i m m u n o h i s t o c h e m i c a lm e t h o dh a sb e e n t ；f f c 。n fr bn dp a l o n a la n t i b o d i e st otheused t op e r l b r ms u r v l v l nn l - r d 5a n d i n am o n o c l o n ma n t l d o o l e st om e ， l s e l e c t e ds e c t i o n so ft l l e4 8g l i o m a s a n dt h e5n o r m a lb r a i n m e n i n g e s i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yh a sb e e ns t r i c t l yp e r f o r m e da c c o r d i n g t o r e a g e n t b o xd i r e c t i o n s t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nf r e q u e n c i e so fs u r v i v i n ， n f r b p 6 5a n dp c n a w e r ec a l c u l a t e da sap e r c e n to ft h e i rp o s i t i v ec e l l st ot h e t o t a ln u m b e ro f10 0 0t u m o rc e l l si nf i v er a n d o m l ys e l e c t e dh p f s ( h i g h p o w e r m i c r o s c o p i cf i e l d ，x 4 0 0 ) o f t h ep o s i t i v e p a t h o l o g i c a ls e c t i o n t h e y w e r e e x p r e s s e da sf o l l o w i n g ：一w a sa s s i g n e dt os p e c i m e n sw i t h0s t a i n i n gp o s i t i v e c e l l s ；+ ，a p p r o x i m a t e l y l e s st h a n3 0 p o s i t i v e ；抖，a p p r o x i m a t e l y31 - 5 0 p o s i t i v e ；十卜十，m o r et h a n5 0 p o s i t i v e f o re v a l u a t i o no fp c n al i ，t u m o ra r e a s w i t hah i g hd e n s i t yo fl a b e l i n gw e r ec h o s e n p c n al 1w a sc a l c u l a t e d 弱p c n a p o s i t i v es t a i n i n gc e l l st ot h e t o t a ln u m b e ro f10 0 0t u m o rc e l l si nt e nh p f s ( 10 0 t u m o rc e l l sc a l c u l a t e di ne a c hf i e l d ) r e s u l t s ：i n4 8c a s e so fh u m a nb r a i ng l i o m a t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o nr a t e o fs u r v i v i n n f 1 c bp 6 5a n dp c n aw e r e6 6 7 ，5 8 3 3 ，4 7 9 2 i nt h ef i v e c a s e so fn o r m a lc o n t r o lg r o u p ，n os u r v i v i n ，n f - l 出p 6 5a n dp c n ae x p r e s s i o n ， s i g n i f i c a n td i f f e r e n c eo fp o s i t i v ee x p r e s s i o nb e t w e e n t h es u r v i v i n ，n f - 徊p 6 5 a n dp c n aa td i f f e r e n tl e v e l sr a t eo fg l i o m a t h e r eh a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c e b e t w e e nl o w 1 e v e lg r o u p ( i i ig r a d e ) a n dh i g h l e v e lg r o u p ( i i i ，i vg r a d e ) t h a tt h ee x p r e s s i o no fn f 1 c bp 6 5 ( x 2 = 1 0 4 2 8 ，p o 0 5 ) ；t h e r eh a s s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c eb e t w e e n l o w - l e v e l g r o u p ( i i ig r a d e ) a n d h i g h 1 e v e lg r o u p ( i i i ，i vg r a d e ) t h a te x p r e s s i o no ft h ep c n a ( x 2 = 1 3 5 8 3 ，p o 0 5 ) ：t h e r eh a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e n l o w - l e v e lg r o u p ( i i i g r a d e ) a n dh i g h l e v e lg r o u p ( i l l ，i vg r a d e ) t h a te x p r e s s i o no ft h es u r v i v i n 4 英文摘要 ( x 2 = 11 6 5 8 ，p o 0 5 ) 晰mt h ei n c r e a s eg r a d eo f g l i o m a , s u r v i v i n ，n f 一1 c bp 6 5 a n dp c n a e x p r e s s i o ni n c r e a s e t h ep o s i t i v ec o r r e l a t i o nw a sf o u n db e t w e e nt h e e x p r e s s i o no fn f k bp 6 5a n dp c n a 、n f 一1 出p 6 5a n ds u r v i v i n 、p c n aa n d s u r v i v i n c o n c l u s i o n ：o s u r v i v i n ，n f - 1 c ba n dp c n ap r o t e i n sw e r e w i d e l y e x p r e s s e di ng l i o m a sa n dw e r ec l o s e l yc o r r e l a t i v ew i t ht h eh i s t o l o g i c a lg r a d e o fg l i o m a s t h ep o s i t i v ec o r r e l a t i o nc a nb ef o u n da m o n gs u r v i v i n ，n f 诏 a n dp c n ae x p r e s s i o ni n g l i o m a s ，w h i c h i n f l u e n c e sa n d p r o m o t e st h e o n c o g e n e s i s ，p r o l i f e r a t i o n ，m a l i g n a n c ya n dr e c u r r e n c eo fg l i o m a s s u r v i v i n a n dn f - 1 ( bo v e r - e x p r e s s i o nr e p r e s e n t sa 1 1 e a r l yo re v e ni n i t i a t i n ge v e n ti n g l i o m ag e n e s i sa n dm a yf u n c t i o na sa ne a r l yd i a g n o s t i ci n d e xt oj u d g e o c c u r r e n c ea n dr e c u r r e n c eo fg l i o m a s s u r v i v i na n dn f l 出m a ys e r v ea sa n i d e a li m m u n o t h e r a p e u t i c a l t a r g e tg e n ea n dp r o v i d ean e wi d e aa n da ne f f e c t i v e a p p r o a c hf o rg l i o m a s ( i n c l u d i n gr e s i d u a lo rr e c u r r e n tg l i o m a sa f t e ro p e r a t i o n ) k e yw o r d s ：g l i o m a ；a p o p t o s i s ；p r o l i f e r a t i o n ；s u r v i v i n ；n f r b ；p c n a ； i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 5 研究论文 s u r v i v i n 、n f k b 和p c n a 在胶质瘤中的表达及相关性研究 - 上_ - 鱼 莉声 胶质瘤是中枢神经系统最常见的肿瘤之一，肿瘤的发生被认为是因为 细胞增殖和细胞凋亡失衡结果，而这两个过程受到多种基因相互协调控 制。细胞凋亡受到凋亡促进基因( 如b a x ) 和凋亡抑制基因( 如b c l 2 ) 作 用的控制。s u r v i v i n 基因是凋亡蛋白抑制l a p ( i n h i b i t o ro fa p o t o s i s p r o t e i n ，l a p ) 家族新成员，它通过抑制效应c a s p a s e 3 和c a s p a s e 7 分子来 抑制细胞凋亡途径，是至今发现作用最强的特异性凋亡抑制基因。s u r v i v i n 蛋白在人体多种恶性肿瘤组织如淋巴细胞瘤、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、胃 癌、结肠癌、前列腺癌等中表达异常升高，与肿瘤的发生、发展密切相关。 而且s u r v i v i n 作为靶基因应用于部分恶性肿瘤免疫治疗已经开始研究并 得到部分结论。 核转录因子r , b ( n u c l e a rf a c t o r - k a p p ab ，n f r b ) 是一类广泛存在于细 胞中的多显性核转录因子，属r e l 基因家族。在肿瘤细胞中其具有调控多 种基因转录表达的能力，与肿瘤细胞的生长、增殖和侵润、转移的关系密 切，还能调控肿瘤细胞的调亡和免疫活性，此外，高水平的n f 心还可 影响细胞外基质的产生及其功能。 增殖细胞核抗原( p r o l i f e r a t i n gc e l ln u c l e a ra n t i g e n ，p c n a ) 是细胞增 殖d n a 复制所必需的调节蛋白，是反映细胞增殖的主要生物学指标之一， 其合成与表达与细胞增殖状态密切相关。胶质瘤是中枢神经系统中最常见 的肿瘤之一，s u r v i v i n 、n f r d 3 和p c n a 在胶质瘤形成和发展过程中表达 的相关性、s u r v i v i n 及n f - r b 能否作为胶质瘤免疫治疗理想的靶基因尚未 见文献报道。本文采用免疫组织化学s p 方法，通过检测4 8 例术后胶质 瘤组织标本和5 例对照正常脑组织中s u r v i v i n 、n f r d 3 和p c n a 蛋白的表 达情况，应用统计学进行分析，就其与胶质瘤临床病理特征相关性及其在 胶质瘤中表达的相互关系进行了探讨。进一步明确三者在胶质瘤发生、增 殖、恶化和复发过程中所起的作用，以试图为胶质细胞瘤的诊断和治疗方 案的设计提供新的思路和依据。 研究论文 材料与方法 1 材料 1 1 实验对象 选取河北大学附属医院神经外科2 0 0 6 年1 月至2 0 0 9 年5 月手术切除 的4 8 例胶质瘤标本及存档蜡块。其中男性2 7 例，女性2 1 例；年龄1 5 - 7 6 岁，平均5 0 7 士1 0 6 。病程1 - - 2 3 个月。标本用1 0 甲醛溶液固定，常 规脱水，石蜡包埋后存档备用。每例标本以4 9 m 厚度连续切片，并作h e 染色确定病理组织类型。根据w h o 分级标准，胶质瘤i 级6 例，i i 级 1 2 例，i i i 级1 7 例，级1 3 例，经病理学检查确诊。全部患者术前未进 行放疗和化疗，均是第一次开颅手术切除肿瘤后采集标本。另取同期行脑 外伤内减压的正常脑组织5 例作为对照。其中男5 例，女4 例，年龄2 1 6 7 岁，平均年龄4 8 8 岁。 1 2 主要仪器及试剂： 试剂： s u r v i v i n 兔抗人单克隆抗体( f l 1 4 2 ，l o t a 1 2 0 6 ) ，即用型产品，北京中 山金桥生物技术公司 n f r b p 6 5 兔抗人多克隆抗体( 工作浓度均为l ：1 0 0 ) 北京中山金桥生物技 术公司 鼠抗人p c n a 单体( 浓缩型；产品编号：z m 0 2 1 3 ；克隆号p c i 0 ) 北京中山金桥生物技术公司 s p 免疫组化染色试剂盒北京中山生物技术有限公司 d a b 显色试剂盒武汉博士德生物工程公司 0 0 1 mp b s 缓冲液北京中山生物技术有限公司 0 0 1 m 枸橼酸盐缓冲液北京中山生物技术有限公司 a p e s ( 粘片剂)北京中杉金桥生物有限公司 主要仪器： l e i c ar m 2 1 2 5 转轮石蜡切片机上海莱卡仪器有限公司 w g 2 0 0 3 台式干燥箱重庆四达仪器有限公司 可调微量移液器( 1 1 0 9 1 )德国e p p e n d o r f 公司 可调微量移液器( 2 0 2 0 0 9 1 )德国e p p e n d o r f 公司 研究论文 d f l6 0 a 电子分析天平 o n m p u s 显微镜 2 方法： 常熟市衡器厂 日本o n ：，m p u s 公司 s u r v i v i n ，n f k b 和p c n a 蛋白在脑膜瘤中的表达均采用免疫组织化学链 霉菌抗生物素一过氧化酶连接( s p ) 方法进行检测。 免疫组化s p 染色的主要过程如下： 1 ) 石蜡切片脱蜡和水化后，用p b s ( 磷酸盐缓冲液，p h 7 4 ，0 0 1 m ) 冲 洗三次，每次3 分钟( 3 x 3 ) 。 2 ) 根据每一种抗体的要求，用柠檬酸缓冲液微波抗原修复法对组织抗原 进行相应的修复( 参照石蜡组织切片柠檬酸缓冲液微波抗原修复法操作步 骤进行) 。 3 ) 每张切片加l 滴( 5 0 1 d ) 过氧化物酶阻断溶液( 试剂a ) ，以阻断内源 性过氧化物酶的活性，室温下孵育1 0 分钟。 4 ) p b s 冲洗( 3 x 3 ) 。 5 ) 甩去p b s 液，每张切片加l 滴( 5 0 p 1 ) 的非免疫性动物血清( 试剂b ) ， 室温下孵育1 0 分钟。 6 ) 甩去血清，每张切片加1 滴( 5 0 1 t 1 ) 的第一抗体( n f r b p 6 5 兔抗人多 克隆抗体，p c n a 鼠抗人单克隆抗体，s u r v i v i n 兔抗人单克隆抗体) ，室 温下孵育6 0 分钟或4 c 过夜( 参阅每种抗体的使用说明书) 。 7 ) p b s 冲洗( 3 x 5 ) o， 8 ) 甩去p b s 液，每张切片加l 滴( 5 0 1 t 1 ) 生物素标记的第二抗体( 试剂 c ) ，室温下孵育1 0 分钟。 9 ) p b s 冲洗( 3 x 3 ) 。 1 0 ) 甩去p b s 液，每张切片加1 滴( 5 0 i _ d ) 链霉素抗生物素一过氧化物酶 溶液( 试剂d ) ，室温下孵育l o 分钟。 1 1 ) p b s 冲洗( 3 x 3 ) 。 1 2 ) 甩去p b s 液，每张切片加2 滴( 1 0 0 i d ) 新鲜配制的d a b ( d i a m o i n o b e n z i d i n e ，3 ，3 二氨基联苯胺) 溶液，显微镜下观察3 1 0 分 钟，阳性染色为棕色。 1 3 ) 自来水冲洗，苏木素复染，0 1 h c l 分化，o 1 氨水或p b s 冲洗返 蓝。 研究论文 1 4 ) 用d a b 显色，切片经过梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶 封闭。 1 5 ) 显微光镜观察，扫描图像并记录结果。 3 结果观察和判断标准 s u r v i v i n 蛋白在胶质瘤中表达的阳性染色部位主要在肿瘤细胞的胞浆 中，n f k b p 6 5 以细胞浆和( 或) 细胞核染色棕黄或棕褐色，以阳性细胞 数占全部肿瘤细胞数的百分率5 为“+ ”， 5 为“一”。p c n a 蛋白为细 胞核抗原，阳性表达部位主要在肿瘤细胞的胞核中。所有阳性表达呈现为 粗细不一的淡黄色或棕黄色颗粒。如切片背景亦呈淡黄色，阳性细胞必须： 细胞结构清晰；阳性颗粒位于细胞核内或细胞浆，定位较好，着色明 显高于背景。阳性对照片为北京中山金桥生物技术公司提供，p b s 作阴性 对照。 为确保研究结果的精确性，每张组织切片随机选择5 个高倍视野 ( 4 0 0 x ) ，每个视野计数2 0 0 个肿瘤细胞，计算1 0 0 0 个肿瘤细胞中s u r v i v i n 、 n f r , b p 6 5 或p c n a 蛋白阳性染色的表达百分率。阳性细胞百分率= 阳性 细胞数1 0 0 0 x 1 0 0 。判定标准以着色强度和阳性细胞数综合判定：以整 个切片无着色或未见阳性细胞为阴性( 一) ；阳性细胞数 3 0 为弱阳性 ( + ) ；阳性细胞数3 0 - - 一5 0 中度阳性( + + ) ，阳性细胞数5 0 强阳性( + + + ) 。 胶质瘤增殖活性用p c n a 标记指数( p c n a l i ) 代表。选择标记密度高 的肿瘤区域评估p c n al i ，每张切片选取l o 个高倍视野，每个视野计数 1 0 0 个肿瘤细胞中的阳性细胞数并取其平均值，计算阳性染色细胞例数所 占百分比为p c n a 标记指数( p c n a l i ) 。 4 统计方法 、 本文所有数据均采用s p s s l 6 0f o rw i n d o w s 软件包进行统计学处理。 s u r v i v i n 、n f k b 和p c n a 蛋白在正常脑组织和胶质瘤组织中表达的阳性率 采用) c 2 检验；不同组别间的差异采用非参数秩和检验( m a n n w h i t n e yu 法) ；不同组别间p c n al i 差异采用方差分析q 检验；s u r v i v i n 、n f 1 和 p c n a 蛋白在胶质瘤中表达两变量间的相关性采用s p e a r m a n 等级相关分 析；所有检验结果p o 0 5 认为有统计学意义。 研究论文 结果 1 胶质瘤中的染色结果：正常脑组织中未检测到s u r v i v i n ；n f r , bp 6 5 ；p c n a 的表达，肿瘤组织中可见s u r v i v i n ；n f k bp 6 5 ；p c n a 阳性染色。s u r v i v i n ；在 肿瘤细胞浆染色( f i 9 2 5 ) ，n f r , bp 6 5 在肿瘤胞质及部分胞核呈棕染( 见 f i 9 7 1 0 ) ，p c n a 在肿瘤胞核棕染( 见f i g l 2 15 ) 。 2 免疫组化染色结果( 表1 ) ：本组s u r v i v i n 的总阳性表达率为6 6 7 。 贮= 1 1 6 5 8 ，各组间差异有显著性p 0 0 5 ；各组间两两比较，胶质瘤各组 与正常脑组织间差异均有显著性( p o 0 5 ) 。s u r v i v i n 蛋白的表达水平与胶 质瘤病理级别具有相关性。随着胶质瘤级别的升高，s u r v i v i n 蛋白表达明 显增高( 见f i 9 2 5 ) 。 3 免疫组化染色结果( 表2 ) ：本组n f 1 出p 6 5 的总阳性表达率为5 8 3 。 贮= 1 0 4 2 8 ，各组间差异有显著性p 0 0 5 ；各组间两两比较，胶质瘤各组 与正常脑组织间差异均有显著性( p o 0 5 ) 。n f k ：bp 6 5 蛋白的表达水平与 胶质瘤病理级别具有相关性。随着胶质瘤级别的升高，n f k bp 6 5 蛋白表 达明显增高( 见f i 9 7 1 0 ) 。 4 免疫组化染色结果( 表3 ) ：本组p c n a 的总阳性表达率为4 7 9 。 x 2 = 1 3 5 8 3 ，各组间差异有显著性p 0 0 5 ；各组间两两比较，胶质瘤各组 与正常脑组织间差异均有显著性( p o 0 5 ) 。p c n a 蛋白的表达水平与胶质 瘤病理级别具有相关性。随着胶质瘤级别的升高，p c n a 蛋白表达明显增 高( 见f i g l 2 1 5 ) 。 5 s u r v i v i n 染色阳性3 2 例( 6 6 7 ) ，n f r d 3p 6 5 染色阳性2 8 例( 5 8 3 ) 。 其中s u r v i v i n 染色阳性组中n f r , bp 6 5 染色阳性2 6 例，s u r v i v i n 染色阴性 组中n f k bp 6 5 染色阴性1 4 例( 表4 ) ，线性趋势贮检验：s u r v i v i n 和n f r d 3 p 6 5 的表达间存在正相关关系( x 2 = 1 0 2 8 5 ，p 0 0 5 ) 。s u r v i v i n 的表达与 n f r d 3p 6 5 的表达具有正相关性，随着s u r v i v i n 的表达升高，n f k bp 6 5 的表达也明显升高。 6 s u r v i v i n 染色阳性3 2 例( 6 6 7 ) ，p c n a 染色阳性2 3 例( 4 7 9 ) 。其中 s u r v i v i n 染色阳性组中p c n a 染色阳性2 2 例，s u r v i v i n 染色阴性组中p c n a 染色阴性l5 例( 表5 ) ，线性趋势贮检验：s u r v i v i n 和p c n a 的表达间存 在正相关关系( x 2 = l o 7 2 6 ，p 0 0 5 ) 。s u r v i v i n 的表达与p c n a 的表达具有 研究论文 正相关性，随着s u r v i v i n 的表达升高，p c n a 的表达也明显增高。 7 n f r , bp 6 5 染色阳性2 8 例( 5 8 3 ) ，p c n a 染色阳性2 3 例( 4 7 9 ) 。其 中n f r , bp 6 5 染色阳性组中p c n a 染色阳性1 7 例，n f r bp 6 5 染色阴性 组中p c n a 染色阴性1 4 例( 表6 ) ，线性趋势贮检验：n f r , bp 6 5 和p c n a 的表达间存在正相关关系( 贮= 1 1 5 7 0 ，p 0 0 5 ) 。n f r , bp 6 5 的表达与p c n a 的表达具有正相关性，随着n f r d 3p 6 5 的表达升高，p c n a 的表达也明显 增高。 卫生笙l 附图 f i g 1e x p r e s s i o no fs u r v i v i ni nn o r m a lb r a i nt i s s u e f i g 2e x p r e s s i o no fs u r v i v i ni ng r a d ei g l i o m a 研究论文 f i g 3e x p r e s s i o no fs u r v