（光学专业论文）低强度激光与丹参注射液有效成分对中性粒细胞呼吸爆发影响的初步研究.pdf

摘要 本论文主要研究了低强度h on e 激光与丹参注射液及其主要有效成分丹参素、丹参酮单 独应用及联合作用对中性粒细胞的呼吸壤发的影响。 本文介绍了低强度激光对疾病治疗的临床及机理研究的简史概述了低强度h e - n e 激 光、丹参注射液的临床应用和作用机理的研究现状，简要论述了中性粒细胞的呼吸爆发，井 综述了胞外p h 变化对中性粒细胞呼吸爆发的影响。 本文利用高灵敏度单光子计数型超弱发光测量仪，应用化学发光法对低强度f i c , - n e 激 光、丹参注射液、丹参素、丹参酮分别单独作用、低强度h e - n e 激光与丹参注射液联台作用、 作用对中性粒细胞 2 本文所研究的几个低强度h e - n e 激光剂量对中性粒细胞呼吸爆发的影响满足光生 物调节作用的生物信息模型 3 本文发现，同一剂量、不同强度的低强度激光对中性粒细胞呼吸爆发所产生的效应 是不同的初步发现，剂量的因素当中强度的变化较时间的变化所产生的影响更为 重要改变激光功率比改变照射时间对中性粒细胞的呼吸爆发产生的影响要大。 4 本文发现，丹参注射液、丹参素、丹参酮单独应用对中性粒细胞的呼吸謦发有抑翻 效应，并且呈剂量- 效应关系 5 本文发现，低强度h e - n e 激光与丹参注射液联合作用、低强度h e - n e 激光与丹参 素联合作用、低强度i - i e - n e 激光与丹参酮联合作用对中性粒细胞的呼吸爆发均有抑 制效应，并且有协同作用广v 关健词：低强度激光，丹参注射液，丹参素。丹参_ ，中性粒细施，备嗳量发， 化学发光 t h et h e s i sm a i n l yi n c l u d e st h es t u d yo ft h ee 塌鼯t so fl o wi n t e n s i t yl a s e ri r r a d i a t i o n , s a l v i a m i l t i o n h i z am j e c f i o n ( s m ) ，d a m h e n s u ，t a n s h i n o n co i lt h er c s p i m t o r yb u r s to fn e u t r o p h i l s , a n dt h e s t u d yo ft h e e f f e c t so ft h ec o m b i n a t i o no fl o wi n t c n s i t yh e - n el a s e rh t a 捌咖a n ds m d a n s h e n s u , o rt a n s h i n o n eo n t h er e s p i r a t o r yb u r s to f n c u t r o p h i l s i nt h i sp a p t h eh i s t o r yo f c l i n i ca n d 娥r e s e a r c ho 吐l o wi n 钯n s i t yl a s e rt h e r a p ya n ds a l v i a m i l t i o n - h i z am j e c t i o n , r c s p o c t i v e l y , h a sb e e no u t l i n e d , a n dt h er e s p i r a t o r yb u r s to fn a | 舡q ，h n s e s p e c i a l l y t h ec 商- f c to ft h ee x c e l l u l a rp ho nt h er e s p i r a t o r yb u r s to fa c u t r o p h i l s , h a sb e e n d i s c u 刚 i nt h i sp 驴盯，t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ew 璐u s e dt oo b s e r v et h ee f f e c t so fl o wi n t e n s i t yh c - n e l a s e r i r m d i a t i o n , s m , d f l i s h c n s b ，t a m h i n o n ca n d t h ec o m b i n a t i o n o f t h e m o d t h er c s p i m o r y b u r s t o f n c u t r o p h i l sr t 雄x ：c f i v e l yb ys i n g j cp h o t o no o u n t o gd o r i c c t h em a i no o n c l u s i o n s 黜l i s t e da 8 f o l l o w i n g ： l _ l o w i n t e n s i t y h e i n e l a s e r i r r a d i a t i o n c 姐i n h i b i t t h er e s p i r a t o r y b u r s t o f n “a r o p h i l s 2 d 珀融i r r a d i a t i o nd o s eo fl o wi n g n s i t yh e - n el a s e ri r r a d i a t i o nc a ns t i m u l a t eo r i n h i b i tt h er e s p i r a t o r yb u r s to f e u t r o p h i l s ，s ot h a tt h eb i o l o g i c a li n f o r m a t i o ar a ( x k lo f p h o t o b i o m o d u l a t i o np u tf o r w a r db y l i ut c ye ts lh o l d s 3 t h em t e m i t y p l a y sa 如化油p o r u m t r o t ei nt h ef a c t o r so f t h ed o s et h a nt h ei r r a d i a t i o n t i m ed o e sf o r p h o t o b i o m o d b t i o n 0 1 1n e u m ) p h i l s 4 s m d a n s h c a l ! m , o rt a n s h i n o n ec a l li n h i b i tt h er 睁p i r a t o r yb u r s to f n c u l a x ) p h i l s 5 t h ee 丘b c to f t h ec o m b i n a t i o no f l a s e ri r r a d i a t i o nm a ds m , d a n s h e a l s t ho rt a m h i n o i s 瑚s i g n i f i c a n t t h a n t i t a t o f o n l y t a s c r l r r a d i a t i o d o f m e d i c i n e k e y w o r d s ：l o wi n t e m i t yl a s e r ，s a l v i am i l t i o r r m z al u | e c t i o n , d a n s h e m u ， t a n s h l n o n e n e u t r e p h l l s ，t h er e m l r j t o r y b u r s t ，c h e m i l u m i n e s c e n c e h 引言 自1 9 6 0 年m a i m a n 制造了第一台激光器以来，激光在生物学和医学中获得了广泛的应 用。人们在应用中发现了激光的一种特殊作用，激光作用于生物体但不产生不可逆损伤， 其生物效应直接产生于辐射而不是热效应( b a s f o r d1 9 ) 如病灶直接照射和穴位照射， 能产生消炎，镇痛，血管扩张，促进创伤愈合、毛发、神经及骨再生等作用：照射小鼠胸腺区 和脾区可增强免疫细胞活性及促进免疫分子产生( 陶艳梅等1 9 9 7 ) 。人们将激光的这种特 殊作用称为激光生物刺擞作用( b a s f o r d1 9 8 9 k a r u1 9 9 8 ) ，井将相应的疗法称为低强度 激光疗法( b a s f o r d1 9 8 9 ，k a r u1 9 9 8 ，t u n 6 re ta l1 9 9 9 阎孝诚等1 9 9 9 ) 。今年，美国 激光医学会年会将生物刺激作用惨改为光生物调节作用( p h o t o b i o m o d u l a t i o n ) 。 自从六十年代末诞生低强度激光疗法以来，人们对光生物调节作用开展了大量的实验 研究提出了大量的模型( b a s f o r d1 9 8 9 1 9 9 5 k a r u1 9 9 8 - i l d e ne ta l1 9 9 8 ，t u n e r e ta l1 9 9 9 ) 。倒如生物电场共振吸收、调整生物等离子体假说，光色素系统吸收、调节生 命过程假说，细胞膜受体吸收、活化细胞机能假说，类脂极化分子受偏振光调节、改变细胞 膜类脂双分子层构象假说等( 李忠明l 蝴) ；“换艟学说”( 低强度激光生物刺激作用的本 质是将光能转变为生物内能，并通过代谢及调节过程作用于机体) ( 董为人等1 9 9 5 ) 。目前 逐渐得到公认的是k a r u 的线粒体学说( k a n | 1 9 9 8 ) 和刘承宜等人提出的生物信息模塑( l i u t c y1 9 9 9 - 2 0 0 3 刘承宜等1 9 9 7 ，1 9 9 9 t 2 0 0 0 ) ，它们将在本文第一章中予以详细介绍。 现在，许多临床与基础研究表明低强度激光照射生物机体及细胞可以产生多种生物效 应( b a s f o r d1 9 8 9 ，k a r u l 9 9 8 t u n 6 re ta l1 9 9 9 l i ut c ye ta l1 9 9 9 ，s h c h e p e t k i ne t a l1 9 9 3 ，k a r ue ta l 1 9 8 9 a ，j o y c ee ta l1 9 9 9 ) ，如机体免疫活性的改变、机体新繇干 谢的变化、血液流变学性质的改变、蛋白结构的变异、酶活性的激活或抑制等。低强度激 光可以调节细胞增殖、胞内c a 肝水平、胶原蛋白的合成、b f g f 的分泌和吞噬细胞的呼吸 爆发等细胞的根多功能( k a r u1 9 9 8 ) 。实验中发现( k a r ul 驰8 ) ，当细胞的一种功能受到 低强度激光的调节时，其它功能保持不变。这说明，低强度激光具有根强的信息功能信 息和信息交换是生龠现象存在的基本要素之一。生物系统生存环境的一切外界条件的变化， 如温度、光线、水分、声音、气味、营养物质以及盐分和浓度等，都可作为信号被生物系 统所接收这些都属于信息生物学的研究范围化学信号比如药物分子的信息生物学是当 前信息生物学量流行的研究领域相比之下，象声、光和磁等物理信号的信息生物学却是 一个薄弱环节我们的研究就是基于对低强度激光在细胞水平的实验研究低强度激光在 细胞承平的生物效应，并将之与化学信号的信息生物学研究相结合，探讨了光信号和化学 信号联合作用在细胞水平所产生的生物效应，以及其在临床上的应用和展望。 第一章低强度h e - n e 激光的临床应用及光生物调节 作用的机理研究 第一节低强度h e - n e 激光的临床应用及基础研究概况 1 1 低强度h e - n e 激光的临床应用研究 在低强度激光疗法当中低强度h e - n e 激光在临床上应用最为广泛，它在心、脑血管、 神经系统、泌尿系统、肿瘤、糖尿病等多种疾病的临床治疗中都取得了显著疗效。临床应 用低强度h e - n e 激光治疗疾病时大多采用血管内照射的方法( 阎孝诚等1 9 9 9 ) 。前苏联科 学院肿瘤研究中心受紫外线照射自血回输疗法( u l t r a v i o l e tb l o o di r r a d i a t i o n a n d o x y s e n a t i o n , u b i o ) 的启发，进行了低能量h e - n e 激光照射对离体人淋巴细胞的作用研究， 发现低能量h e - n e 激光对人外周血免疫学、生物化学和形态学指标均有明显的作用，可作 为肿瘤患者术后增强机体免疫力、延缓肿瘤转移和复发的免疫治疗新方法f 杨在富等 2 0 0 1 ) 鉴于激光对离件血液照射比紫外线照射复杂而且困难，人们把体外血液照射改为静 脉血管内照射治疗，即低强度激光血管内照射疗法( i n t r a 础l a s e r i r r a d i a t i o oo f b l o o d , i l i b ) 。白此，蛐广泛在国内外临床上应用，并取得了良好疗效( 阎孝诚等1 9 9 9 ) 。 在急慢性化脓性感染、急慢性肺脓疡、肺炎、腹膜炎、胰腺炎、肝胆外科疾病、毒血 症等的综合治疗表明，i l i b 在癌染性疾病的治疗上具有明显疗效。 i l i b 在临床上最令人振奋的是对缺血、缺氧性病症的治疗，比如缺血性心脏病( 冠心 病、心绞痛、心肌梗塞) 、心率失常、急性脑血管疾病( 脑血栓形成、脑栓塞) 、脑动脉硬 化、脑供血不足、血栓性闭塞性脉管炎等伟自在富等2 0 0 1 ，高平青等1 9 9 6 ，d o n sw r e ta l 1 9 9 7 ，陈英华等2 0 0 1 ) 。 i l i b 应用于慢性非特异性肺部疾病、慢性阻塞性肺部疾病、支气管哮嗤等可镇痛，使 咳嗽、阻塞症状减轻，呼吸功能改善中性粒细胞散、唾液酸下降，血沉减小，炎症很快 消失( 杨在富等2 0 0 1 ) 。几m 治疗胃及十二指肠溃疡可使免疫指标明显改善，组织自体致敏 作用下降i l i b 治疗慢性肾炎可获得明显的利屎效果，同时伴有血压下降，2 4 小时屎蛋 白成倍减少水肿减退，血浆总蛋白量增加吨和t 球蛋白、胆固醇和纤维蛋白原减少， 肌酸廓清宰好转( 王原平等1 9 9 8 ) i l i b 治疗风湿性关节炎、变形性关节炎、糖尿病和慢 性肾小球肾炎及肾功能不全也获得良好疗效( 扬在富等2 0 0 1 ) 1 2 低强度h e - n e 激光疗法的机理研究 由于i l i b 在临床上取得了显著疗效人们对i l i b 的作用机理进行了大量的研究，并 提出了许多模型假说去解释它。 1 2 1 对免疫系统的调节作用 i l i b 对淋巴细胞有明显的免疫调节作用。i l i b 可使淋巴细胞亚群发生变化，淋巴细 2 胞转化率升高。m 免疫调节刺激作用有两个特点：一是累加效应，小剂量照射只有达到 一定次数才开始出现疗效；二是激光刺激作用有抛豹线特性。 我们知道，红细胞具有重要的免疫功能是因为红细胞膜表面具有c 3 b 受体，借助c 3 b 受体粘附实现清除c i c ，阻止因c i c 沉积所引起的组织损伤i l i b 可使红细胞c ，b 受体花 环率升高，而红细胞免疫复合物花环率下降( 郑红等1 9 9 1 ) 。 1 2 2 改变血液流变学性质，纠正欺循环障碍 i l i b 可降低红细胞、血小扳聚集性。导致纤维蛋白溶解系统澈活，纤维蛋白原下降 血液脂质光谱活跃静脉回流增加脑动脉血液加速组织氧台作用增强，改善急性脑循 环障碍( 刘承宜等1 9 9 9 b ) 。i l i b 使血红蛋白的氧解离曲线向右偏移氧对血红蛋白的亲 和力下降，而弥散功能增强，血浆氧含量增高，脑损伤灶缩小( 刘枢晓等1 9 9 9 ) 。i l i b 还 可减少血液中具有血管痉挛和前聚集作用的物质( 如加压素、血管紧张素、血管紧张原肽 和前列腺素f 雄) 浓度。 1 2 3 清除中分子物质的解毒作用 中分子物质是血液中分子量为4 9 9 8 7 4 9 9 8 6 7 的物质，中分子肽是其主要成分。中分 子物质是尿毒症、急性烧伤毒血症、心肌梗塞、免疫抑制、肿瘤性中毒等毒性效应的主要 原因之一。其毒性效应主要表现为对免疫系统、神经系统、酶活性和生物膜功能的抑制。 应用i l i b 治疗急慢性肺脓疡可使中分子肽浓度明显减少t 淋巴细胞和b 淋巴细胞及免 疫球蛋白增加，中性粒细胞活性增强( 刘承宜等1 9 9 9 b ) 激肽释放酶激驮系统是维持机体内环境稳定的体渡调节成分之一，其激肽生成的减 弱和中断是出血性胰腺炎和溃疡的主要病因之一i l i b 能使患者激肚释放酶激肚系统活 性趋于正常( 杨在富等2 0 0 1 & 2 0 0 2 ) 。 1 2 5 其它 过氧化氢酶、血浆铜蓝蛋白、过氯化物歧化酶等受体能被l i b 激活从而吸收激光辐 射的能量产生光照活化效应。r i b 对蛋白质、脂质、酶等具有非特异性作用可使它们 的形态结构和机能状态发生变化此外，i l i b 还具有抗脂质过氧化作用、及增加红细胞中 a t p 含量的作用。 尽管低强度激光在临床治疗上取得显著疗效，对其作用机理也进行了大量研究，但尚 未形成一个完善的理论体系其机理的完全阐明还有特科研工作者们进一步的大量研究。 第二节光生物调节作用的机理 1 3k a r u 的线粒体模型 近年来光生物调节作用的实验研究尤其是在细胞功能的研究方面取得了较大进展。在 现有的假说和模型当中最著名的是k a r u 的线粒体模型( k a r u1 9 9 8 ) 。根据k a n t 的线粒 体模型，线粒体中的细胞色素吸收激光后不但促进a t p 的合成，而且通过电子传递链产 生的氧化还原反应调节细胞的功能然而，已经发现， 1 ) 低强度激光对没有线粒体的红细胞也有生物刺激作用( y o v a e ta l1 9 9 4 许贞峰等 1 9 9 9 ) ： 2 ) k a r u 理论用光动力损伤来解释抑制效应( k a r u1 9 9 8 ) ，然而，光生物调节作用的 剂量似乎远低于光动力疗法( p d t ) 中使用的激光剂量典型的p d t 激光剂量为2 5 x l 旷 j “乙3 x 1 0 6 j i m 2 ( f i s h e r e t a l1 9 9 5 ) 。由于细胞内的自然光敏剂浓度远小于p d t 中的光敏剂 浓度，要产生光动力损伤所需要的激光剂量应比p d t 中的激光剂量高得多； 3 ) k a r u 理论目前还不能解释的“各种各样的低强度激光效应”( k a t e1 9 9 8 ) 。 正如k a n t 本人所指出的( k a r u1 9 9 8 ) ，由于k a r u 的线粒体模型不能完全解释低强度 激光的信息功能必定存在一种尚未认识的机制介导低强度激光的信息功能。 1 4 光生物调节作用的生物信息模r e ( r o m p ) 1 9 9 1 年在美国佛罗里达召开了低功率草案和美国食品与药品管理局会议。正如 g o l d m a n 所总结的那样( g o l d m a n1 9 9 1 ) 会议代表在总结大量实验数据的基础上关于光 子对细胞非损伤作用的原初过程达成了麸识，即细胞有两类光子受体，一类是细簏色素， 一类是古有生色团的分子。低强度激光不只作用于细胞色素，它还作用于细胞的含有生色 团的分子刘承宜等( l i ut c y e ta l1 9 9 9 - 2 0 0 3 ，刘承宜等1 9 9 7 ，1 9 9 9 & 2 0 0 0 ) 认为，光生物 调节作用可以分为两类：1 ) 提供生物能量：由低强度激光与细胞线粒体的细胞色素作用 所介导；2 ) 提供生物信息：由低强度激光与细胞生色团的作用所介导。低强度激光的生 物能量作用已经被低强度激光与细胞线粒体的直接作用实验所证实( y u e ta l1 9 9 6 ) ，并得 到公认( b a s f o r d1 9 8 9 & 1 9 9 5 , k a r u1 9 9 8 ) 。 刘承宜等认为( l i ut c y e td1 9 9 9 2 0 0 3 ，刘承宜等1 9 9 7 ，1 9 9 9 & 2 0 0 0 ) ，细胞膜受体可 以介导低强度激光对细胞的信息调节作用。介导细胞对低蟊度激光响应的初级过程是激光 与细胞分子的非共振作用1 。根据低强度激光的信息功能我们认为这个细胞分子为激素、 药物、细臆因子或其它化学因子的细胞膜受体作为蛋白质细胞膜受体不能对可见光产 生共振吸收因此，受体与可见光的作用是非共振的。单个受体与细胞的作用可以忽略不 计。然而，细胞膜上有大量的独立的同类受体，在病理条件下可以形成超辐射态，从而将 单个受体的非共振作用非线性放大受激光作用的受体通过信号转导介导低强度激光的信 息功能显然，这种光信号转导不同于常规的光信号转导，我们称为集合光信号转导( l i u 1 关于找振作用和非麸振作用用光的吸收强度散纵坐标，光的波长为横坐标，所得到的图称为光谱曲线 光谱曲线峰值对应的光吸收称为兆振嗳收其它部分的光吸收为非共振吸收- 4 t c y e t a l2 0 0 0 - 2 0 0 3 ) 。介导集合光信号转导的化学因子受体称为集合受体。 关于激光的生物信息作用，刘承宜等在总结激光对细胞生物刺激作用的基础上，提出 细胞光生物调节作用的生物信息模型( b i m p ) ( l i u t c y e t a l1 9 9 9 2 0 0 3 。刘承宜等1 9 9 7 1 9 9 9 & 2 0 0 0 ) 根据b i m p 低强度激光作用于病理条件下的细胞膜表面受体，受激发的受 体通过与g 蛋白或受体关联酶发生作用引起细胞内第二信使浓度的改变： 暖色( 虹色、橙色、黄色、虹外光) 兴奋g | 蛋白介导的信号通路：c m 叶 冷色( 孽色、苴色、紫色、长波紫井u 、强) 兴奋c 蛋白，g i 蛋白戚受体关联1 1 4 p 导的信 号通麝i “m 咿山 为了讨论的方便，将上述模型称为b i m p i 。表1 1 给出了满足b i m p l 的例子( l i ut c y e ta l1 9 9 9 ) b i m p i 已经利用了两类信号通道之间的拮抗关系( 刘景生1 9 9 8 ) ，例如在 中性粒细胞的呼吸爆发过程中，c a m p ( 环磷酸腺苷) 系统和c 一系统是互相拮抗的一对 信号控制系统( j o y c e e ta l1 9 7 8 ) 根据已有实验事实和细胞内部的平衡机制b i m p 提出了低强度激光的生物信息转换 模型( b r i m p ) 根据b 舢， 在不引趋摄伤的前提下当t 光的搁量翘过一定壤健，其产生的生物效应使假使孵漱 髓过定的壤位这个时接生物系统内部的平奢机翻舍使t 光所启动的雌薰境转长成 与现有熏缝帽描抗的信使秉统 构成g 蛋白的所亚基对g 蛋白和受体关联蛋白酶启动的信号转导都具有调节作用( 刘 景生1 9 9 8 ) 是b i t m p 的分子基础。 关于剂量效应，药物学将刺激与抑制交替的规律称为a r n d t - s c h u l z 定律( k a r u1 9 9 8 ) 例如活化的巨啦细胞在受到脂多繁的持续过度刺激时，可转化为抑制状态的巨噬细胞( 王 重庆1 9 9 7 ) 这个定律也适用于低强度激光对细胞的生物调节作用( k a r u1 9 9 8 ) 。b r r m p 实际上是将低强度激光的a m d t - s c h u l z 定律用信号转导的语言表达出来。b i t m p 的f 剐壹证 据来自明暗视觉系统：明视觉刺激视杆细胞g t 蛋白使c g m p ( 环磷酸鸟苷) 分解，关闭 由c g m p 激活的阳离子通道，阻止n a + 和c 一的内流胞内o p 浓度的进一步降低则又引 起胞内鸟苷酸环化酶活化，重新合成c g m p ，而恢复暗视觉。 根据b i t m p 可知，b i m p i 的成立有一定的和量范围。当激光的剂量超过b i m p i 成立 的闷值时，撮据b i m p 和b m p 可以得到b i m i 吃： 冷色兴奋g i 蛋白介导的生理过程：c p t 曩色兴奋g q 或g i 蛋白戚受体关联介导的生理过程：e a m n , 表1 1 1 、i 2 和1 3 给出了满足b i m p 2 的捌子( l i u t c y c ta l1 9 9 9 ) 。显然，这个剂量范围是 研究得最多的 当激光的剂量进一步增加时根据b i m p 和b i t m p 可以给出一个一般的模型当激 光的和量超过b i m p ( 2 n - 1 ) 成立的阈值时。根据b i t m p 可以得到b i m p 2 n m b i m p 2 ：当激 光的剂量超过b i m p 2 n 成立的阙值时，根据b 1 t m p 可以得到b i m e ( 2 n + t ) - 咖l 表 1 3 列出了蒲足b i m p n 的例子( l i u i c y e ta l1 9 9 9 ) 。从表1 1 1 3 可以看出，每种细胞都 有各自特殊的剂量关系。在实际应用中，表1 1 - 1 3 的卉蛩量范围仅供参考。 值得指出的是低强度激光的剂量关系与一般药物的剂量关系有很大的区别。一般将 刺激与抑制的交替看成倒钟形曲线。药物只有一段倒钟形曲线而激光有多段倒钟形曲线 3 窿- i 能要归因于激光与集合受体的作用的非共振性质我们认为，随着低强度激光剂量的 增加。低强度激光的集合受体将发生改变；每个集台受体将各有一段倒钟形曲线。 在生物刺激作用方面，激光与普通单色光没有本质区别( k a r u1 9 9 8 ) 。因此上述模型 也适用于普通单色光的生物刺激作用。 表1 1不同可见光对哺乳动物细胞溶液的影响( b i m p i & 2 ) 波长 细胞功能 刺激抑制 ( 姗) 剂量j m 2 参考文献 b i m p l c o l dc o l o rh 吐丑p r o l i f e r a t i o n1 0 f i g s 1 1 2 & 3 1 6 3 2 。8肌9c e l l sp r o l i f e r a t i o n 1 1 0 p 2 0 5 6 3 3h e t ac a m p t1 0 f i g 7 1 0 h m n o n d i p l o i ds k i nc o l l a g e nt y p ei 6 3 2 8q p 2 0 6 f i b t o b l a s t s p r o d u c t i o n b n 缸，2 c o l dc o l o rh e t a p r o l i f e r a t i o nl o f i g s 1 1 2 & 3 1 h u m a n 6 3 2 8p r o l i f e r a t i o n5 6t a b s 5 2 s 3 b 如p b 口q 附p h a h o tc o i c 口h e l ap r o l i f e r a t i o n1 0 2 f i g s 1 1 2 & 3 1 m u r i n ef l b r o b l a s t s ， c a m e y e t i l1 9 6 7 6 9 4 3m e l a n o m ac e l l sa n dp r o l i f e r a t i o n 1 0 f i g 4 5 a 6 3 2 8h u m a n p i l l pf i b r o b l a s t s p r o l i f e r a t i o n1 x 1 0 3n a r ae ta l1 9 9 2 c e l lg r a n u l et r e l l e s da l 6 3 2 8m o u s em a s tc e l l s 2 , 4 1 0 4 r e l e a s e1 9 8 8 佑7 9 2 7 1 6 0 6 3 2 8小鼠巨噬细胞c a 2 +胡庆沈等1 9 9 8 2 0 3 7 ) 1 0 3 1 0 p r i m a r yf i i n o b l e s t s 6 3 3 ：r i cc r l l 4 7p r o l i f e r a t i o n2 x l 旷 r i g a u e t 丑l o c d 1 孵k 1 9 9 1 6 6 03 1 3f i b r o b l a s t sp r o l i f e r a t i o n 2 1 6 x 1 0 4毗丑l l 蚺1 4 m e l a n o m a c e l l s ，m m i n e j a m i c s o no ta l 6 9 4 3d i v i s i o n ( 4 - 4 0 ) x 1 0 f i b r o b l a s t s1 9 6 9 e 吣叫铅0h e l ad n a s y n t h e s i s 3 0 h l 矿t 曲4 1 h u m a nm o n o n u c l e m s h i e l d s e t 丑l 6 6 0p r o l i f e r a t i o n1 0 4 l e u c o c y t e s 1 9 9 2 c d 4t - c e l l sm c g o w a ne i 矗l 6 6 0i l 2r e l e a s e1 0 4 + p h l 鲫_ 6 h y p e m o p h i c w 曲b da l 6 6 0 p r o l i f e r a t i o n2 4 4 x l 扩 s c a r - d c r i v e df i b r o b l a m 1 9 9 8 2 4 ， 6 6 0h u m a n n e u t r o p h i l s b a 曲c r i a k i l l i n g y ue ta 11 9 9 7 4 8 x 1 0 4 b o n en 嵋岫wc e l if r o m m i c r o s c o p i c6 x l 睁1 5 2 v a c ke t m 6 3 2 8 c 5 7 8 1 1 0n d c e s p l e e nc o l o n i e s x l 旷1 9 8 2 a l m e i d ac t 正 6 7 0 o i n g i v a lf i b r o b l a s t sp r o l i f e r a t i o n 2 x 1 0 4 2 0 0 l a l m e i d a 吐i d 6 9 2 g i 删f l b r o b l a s t sp r o l i f e r a t i o n 2 x 1 0 2 0 0 l i n d i a nm u n t j a c a d o r e1 1 ，j o y c e e t 丑l 6 6 0 f i b r o b l a s t s r e s p o n s e 2 3 0 x 1 0 4 1 9 9 9 除非特别列出参考文献，所有的圈或表或页码皆来自k i n u 1 9 9 8 7 表1 3不同可见光对哺乳动物细胞溶液的影响( b i m p 3 & 4 ) 波长 细胞功能 刺激f 抑制 参考文献 ( 咖)剂量j m 2 b d 正p 3 c o l l a g e n 5 5 1 0 2 6 3 2 8h u m a ns k i nf i b r o b l a s t sl a v a 眦a l1 9 8 6 s y n t h e s i s 1 6 x l o 1 1 9 ，3 5 r a tk i d n e y e p i t h e l i a l 6 ， g r o c t i l l 6 3 2 8g r o w t h c e l l7 1 1 1 4 1 9 9 0 2 2 x 1 0 5 人脐带血造血细胞+ 集 5 1 0 6p r o t i f e r a f i o n5 x 1 0 4汪涟明等1 9 9 8 落刺激因子 h u - 2 7 4 4 0 0p r o l i f e r a t i o n1 0 1 0 k 1 0 6t 曲7 1 w i 3 8 b d 小 h u m a n l y m p h o b l a s t o i d 4 0 5p r o l i f e r a t i o n1 0 51 h b 7 1 c e l l s 6 3 2 8小鼠腹腔巨噬细胞c a m p 山1 0 6郑红等1 9 9 1 m u r i n es k e l e t a l f i b r o b l 8 s t s ，n o n u a l u r o t h e l i a lc e l l sh c v 2 9 , h u m a n 8 q u a l l l o $ s r o k a le t a l 6 3 5m i t o t i ci n d e x2 x l o s c a r c i n o m ac e ul i n e1 9 9 7 瑚【a n du r o t h e l i a l c a r c i n o m a c d l sh c v 2 9 h u n m am e l a n o m a ( 2 年2 8 ) 6 9 4 3p r o l i f v r a t i o n卫| b 7 1 c u l t u r ex 1 0 6 h 由e t u l 6 9 4 3m o u s ef i b r o b l a s t sl 9 2 9p r o l i f e r a t i o n1 0 5 1 9 6 7 除非特别列出参考文献，所有的图或表或页码皆来自k a r u l 9 9 8 8 第二章丹参注射液一般药效药理及其 对中性粒细胞的作用 丹参注射液是由中药丹参经提取制成的灭菌水溶液组成。有活血化瘀、通脉养心之功 效。丹参注射液能降低血压、增加冠脉流量、减慢心率、缩短实验性心肌缺血持续时间， 具有抑钼血小扳聚集及抗凝作用，可减轻急性心肌梗死所引起的病变防治过敏性紫癜 对皮肤真菌有抑制作用。近年来的实践证明丹参注射液还有下列临床用途( 刘振国等 2 0 0 2 王凯等2 0 0 2 ) ： 治疗脑血管意外丹参注射液可增加脑血流量，改善脑循环，故对脑血栓、脑出血、 蛛网膜下腔出血等属于中医“中风”范畴的疾病有治疗作用还可防治脑组织因缺血所出 现的缺氧性脑损害和脑水肿。 治疗病毒性心肌炎与能量合剂、维生素c 台用治疗小儿急性病毒性心肌炎，可明显 提高疗效 治疗冠0 病、心绞痛应用大剂量丹参注射液不仅可改善患者的症状、体征，还可使 心电图s t 段、t 波明显恢复无过敏及不良反应。用丹参注射液后血流速度明显增加， 从而改善心肌组织供血、供氧、缓解心绞痛症状。 治疗慢性肺原性心脏病在西医常规治疗下另以丹参注射液静脉点漓在控制病情、 提高血氧分压、降低血粘度等方面均优于单纯西医治疗。且能增加右心每搏输出量，增强 右室心肌收缩力，降低右心负荷，且血液流变学均有改善 治疗慢性肝病在制定中药处方基础上加丹参3 0 6 0 克，疗效大大高于对照组，且 疗效随疗程延长而提高。用丹参注射液静漕具有良好的降低转氨酶、胆红素及迅速促进肝 细胞再生、炎症消退、坏死组织吸收等作用。 治疗慢性肾功能衰竭丹参注射液静滴治疗慢性肾功能衰竭，患者出现症状改善、食 欲和体力增加，恶心呕吐消失尿量增多，尿素氨等生化指标均改善。 用于传染病治疗丹参注射液能调节免疫，预防和治疗弥漫性血管内凝血，因而能辅 助治疗流行性出血热、伤寒等传染病临床实践表明，静滴应用丹参注射液可使大多数患 者顺利度过休克期和少尿期极少并发症，患者死亡率大大降低。 辅治恶性肿癯国外学者采用丹参c o p 方案治疗恶性淋巴癯。患者血浆纤维蛋白原 治疗后较治疗前明显下降，揭示丹参的促纤溶作用是其抗肿瘤作用的重要机制之一。对食 管、贲门癌患者根治术后并用丹参注射液有改善肿瘤术后徽锫环和阻止术后血粘度上升 的作用 此外，对糖尿病神经病变、血栓闭塞性脉管炎、支气管哮喘、硬皮病、痤疮、慢性附 件炎、盆腔炎、子宫内膜异位等，丹参注射液也有着广泛的治疗用途。 丹参素和丹参酮是丹参注射液的主要有效成分之一临床上丹参注射液、丹参素和丹 参酮治疗缺血、缺氧性病症和炎症损伤疗效良好，但其作用机制尚未完全阐明近年来丹 参注射液、丹参素和丹参酮抗缺血、缺氧性病症损伤和炎症损伤的研究备受关注。 有报道表明丹参注射液对中性粒细胞化学发光有抑制作用( 朱雄翔等1 9 9 9 ) ，丹参注 射液能对t m n 再灌注损伤有保护作用( z h a ob lhb l1 9 9 6 ) ，丹参注射液对i t 2 0 2 - f 一体系 产生的羟自由基有清除作用，对黄嘌岭，黄嘌呤氧化酶系统引发的超氧阴离子自由基有清除 作用( 杨卫东等1 9 9 0 ) 。丹参注射液对大鼠脑组织缺血再灌注损伤有保护作用，能够提高 9 c a t 活性、s o d 活性，增加a t p 含量降低m d a 含量( 莫志贤等1 9 9 8 ) 。丹参注射液使 视网膜静脉阻塞( r v o ) 患者血浆脂质过氧化物( l p o ) 含量下降及红细胞超氧化物歧化 酶( s o d ) 活性上升( 粱庆丰等1 9 9 9 ) 。丹参注射液能抑制梗阻性黄疸肾损害大鼠氧自由 基所引发的脂质过氧化作用( 张金池等2 0 0 2 ) 。丹参注射液抗感染性休克的机理可能是减 少内毒素清除氧自由基( 沈文律等2 0 0 2 ) 。但也有丹参注射液e 增加中性粒细胞氧自由 基产生的报道( 王潮临1 9 9 7 ) 。 丹参素可以清除黄嘌岭黄嘌呤氧化酶系统引发的超氧阴离子自由基。丹参酮在治疗心 肌梗死时能抑制中性粒细胞过激( 李晓辉等1 9 9 1 ) ，丹参酮可抑制中性粒细胞产生氧自由 基( 徐罗玲等1 9 9 4 ) ，丹参酮能够清除心肌线粒体膜脂质过氧化作用产生的脂质自由基 ( z h a ob lda l1 9 9 6 ) 丹参酮对猪心肌肌质网脂质过氧化过程中脂类自由基有清除作用 ( 江文等1 9 9 4 ) ，丹参酮能通过抑制钙超载从而对大鼠神经细胞缺氧缺血性损伤有保护作 用( 何丽娜等2 0 0 1 ) 。 科研工作者对丹参注射液、丹参素和丹参酮抗缺血、缺氧性病症损伤和炎症损伤作了 大量研究，但到目前为止丹参注射液、丹参素和丹参酮抗缺血、缺氧性病症损伤和炎症损 伤在细胞水平的作用机制尚未完全阐明。 1 0 第三章中性粒细胞 白细胞分为三大类：粒细胞、单核细胞和淋巴细胞。粒细胞占白细胞总数的6 0 左右， 而其中绝大多数是中性粒细胞。中性粒细胞( p o l y m o r p h o n u c l e a rn e u t r o p m l ，p m n ) 在 宿主抵抗各种细菌、病原体等侵入时起着关键作用是最重要的吞噬细胞，其组成机体和 组织抵抗病菌入侵的第一道防线。中性粒细胞的主要功能是吞噬和杀菌，其中包括一系列 相互连贯的复杂的代谢过程，并具有精巧完善的调节和控制系统。中性粒细胞的防御功能 主要包括趋化运动、吞噬作用和杀菌作用三方面，整个进程由趋化物质与p m n 细胞膜表 面受体结合开始，包括变形、移动、粘附性增加、肌动蛋白装配、氰化物不敏感性、氧消 耗增加、0 2 生成及有中间代谢改变等系列有序性功能。本章简单论述中性粒细胞的基本 生理学特性，并从化学刺激的角度分析其信号转导过程及产生刺激和抑制的表现，并着重 论述了胞外p h 变化对p m n 呼吸爆发的影响和低强度激光对p m n 研究的现状。 3 1 中性粒细胞的生理学特性 3 1 1 中性粒细胞的发生和分化 中性粒细胞又称多形核白细胞，是机体防御系统中非常重要的免疫活性细胞。骨髓是 原始粒细胞、早幼粒细胞和晚幼粒细胞及杆状核中性粒细胞成熟的良好环境，后二种组群 代表了骨髓库中主要的前期中性粒细胞，每公斤体重约有2 - - 8 1 0 9 细胞。中性粒细胞在 骨髓中从增殖到成熟约需6 一1 0 天。骨髓每天可提供1 5 1 0 9 细，眇公斤体重。血液中的 p m n 包括循环中的p m n 循环池( 0 3 - 0 4 l 矿细，哪公斤体重) 和边绿池( m a r g i n a t i n gp 0 0 1 ) ( o 4 1 0 细胞，公斤体重) ，循环中的p m n 生命期较短，其半寿期约6 小时( 陈文杰1 9 9 3 ) 。 中性粒细胞祖细胞是多能干细胞在集落刺激因子( c s f ) 包括粒单集落刺激因子 ( g m - c s f ) 、粒系集落刺激因子( g c s f ) 和白细胞介素3 ( ，3 ) 作用下产生的。这些 促生长和分化的因子绝大部分是从骨髓基质细胞中衍生的。在骨髓中，经过髓母细胞、前 髓细胞、髓细胞、后髓细胞经约1 4 天发育为成熟的中性粒细胞( 圈3 1 ) ( 尤复翰1 9 8 2 ) 。 p m n 祖细胞分化为成熟的p m n 部分原因可能是由于在分化、发育的各个阶段细胞上 有特异性因子的受体。肾上腺素、皮脂类固醇、补体片断和感染能加快成熟的p m n 进入 循环血。多种细胞因子和糖蛋白能调节p m n 的功能。 干细瞻一蜢母细胞一一前髓捆臆一蠢细瞻一一一后髓蛔胞成熟中牲柱细胞 卜一肯熊分墩a ，5 天卜卜一终止针袋后( 6 s 鞭卜_ + 、， 厂 骨髓血液 图3 1 中性粒细胞的发育过程( 尤复翰1 9