细胞染色剂.docx

1、斐林试剂配制：1）甲液质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100ml2）乙液质量浓度为0.05g/ml，取5gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml临用时将甲、乙液等量混合作用：鉴定还原性糖：C6H12O6、果糖、麦芽糖、乳糖等。还原性糖与斐林试剂发生作用，生成砖红色沉淀。如用于鉴定组织液中有否还原性糖、糖尿病人尿成分分析、酶专一性探索等。2、班氏尿糖定性试剂配制：称取17.4克无水硫酸铜（CuSO4）溶解于100毫升热蒸馏水中，冷却后，稀释到150毫升。称取柠檬酸钠173克及无水碳酸钠（Na2CO3）100克，加蒸馏水600毫升，加热使之溶解，冷却后，稀释到850毫升。把硫酸铜溶液倾入柠檬酸钠及碳酸钠溶液中，搅匀后即为班氏尿糖定性试剂。用细口瓶贮存备用（为了防止氢氧化铜沉淀的生成，故加入柠檬酸钠。柠檬酸钠是一种亲水性掩蔽性络合物形成剂，它能与铜离子形成可溶性络盐）。使用方法同斐林试剂，所不同的是班氏试剂可长期使用。3、双缩脲试剂配制：A液：质量浓度为 0.1g/ml，取10gNaOH溶于蒸馏水，稀释至100mlB液：质量浓度为0.01g/ml，取1gCuSO4溶于蒸馏水，稀释至100ml使用时，先加A液，后加B液作用：鉴定蛋白质，蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可产生紫色反应。也可用于鉴定多肽。4、苏丹配制：取0.1g苏丹，溶解在20ml95%酒精中作用：鉴定脂肪，脂肪可以被苏丹染成橘黄色（或被苏丹染成红色）。5、质量分数为15%的盐酸和体积分数为95%的酒精溶液的混合液（1：1）。作用：用于洋葱根尖的解离，即使组织中的细胞相互分离开来。能杀死细胞固定。6、质量浓度为0.01g/mL的或0.02g/mL龙胆紫溶液（或醋酸洋红溶液）配制：是将龙胆紫溶解在质量分阶段数为2%的醋酸溶液中配制而成作用：使细胞核内的染色体着色，便于观察。7、质量浓度为0.3g/ml的蔗糖溶液作用：观察成熟植物细胞质分离时用。经此处理细胞仍具活性。8、质量浓度为0.1mg/ml的亚甲基蓝溶液配制：将亚甲基蓝溶于蒸馏水中配制而成作用：（1）用于观察根对矿质元素离子的交换吸附观察；（2）用于检测水中细菌情况，根据亚甲基蓝褪色情况，判断水质被细菌污染情况。是活体染色剂。9、丙酮是有机溶剂，在叶绿体中色素提取时，用于溶解叶绿体中的色素。可用酒精替代，不过提取色素时将绿叶放入酒精中隔水加热10、层析液配制：由20份石油醚（在60900C下分馏出来的）、2份丙酮和1份苯混合而成。是一种脂溶性很强的有机溶剂，叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散很快；溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。代用品：93号汽油、四氯化碳11、SiO2、CaCO3加入少许SiO2是为了研磨得充分；加入少许CaCO3是为了防止在研磨时叶绿体中的色素受到破坏。12、碘液配制：取2gKI ，溶解在5ml蒸馏水中，再加1gI，待溶解后用蒸馏水稀释至300ml。溶液在光亮处容易变成紫色，必须保存在暗色玻璃瓶里。作用：用来测定淀粉，淀粉遇碘后，形成紫色的复合物。13、二苯胺配制：称取1.5g二苯胺，溶于100mL冰醋酸中，再加1.5mL浓硫酸，用棕色瓶保存。临用前，在10mL的上述溶液中再加入0.1mL体积分数为0.2%的乙醛溶液。作用：DNA遇二苯胺（沸水浴）会染成蓝色。14、NaOH：用于吸收CO2（验证光合作用需要CO2）或改变溶液的pH,15、Ca(OH)2：鉴定CO2（验证呼吸作用产生CO2）。16、NaHCO3：提供CO2等。 我再补充一个：台盼蓝（Trypan Blue，也称Direct blue 14）：一种死细胞染色用色素化学名：3,3-3,3-Dimethyl(1,1-biphenyl)-4,4-diylbis(azo)bis(5-amino-4-hydroxy-2,7-naphthalenedisulfonic acid), tetrasodium salt3,3-3,3-二甲基-(1,1-二苯基)-4,4-二基双(偶氮)-双(5-氨基-4-羟基-2,7-萘二磺酸)，四钠盐分子式：C34H24N6Na4O14S4分子量：960.81CAS Number： 72-57-1外观：黑褐色结晶粉末摩尔吸光度：69,000(在606nm附近)染色原理：细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合，使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性， 通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。这被称为染料排除测试（dye exclusion），Erythrosin B(红色)、negrosine、eosin Y、AO和EB也用于此目的。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。溶于水，可以配制成10mg/ml的水溶液，水溶液呈深蓝色。台盼蓝主要用来鉴定原代培养细胞时,细胞分离后的存活情况，用0.4%台盼蓝直接染色5-10分钟，在显微镜下观察即可。应用于细胞凋亡：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。尽管在凋亡的早期到中期检测是很困难的，此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。储存条件：常温保存注意事项：1. 台盼蓝对人体有毒2. 台盼蓝染细胞时，时间不宜过长。否则，部分活细胞也会着色，会干扰计数。3. 台盼蓝染色