（环境科学专业论文）流动注射化学发光在环境监测和药物分析中的应用研究.pdf

本文研究了h 嘲i n 0 1 f e ( c n ) 6 - n i 2 + 流动注射化学发光新体系，实验发现在鲁米诺零l 铁 氰他镡的发光爱应焉，加入心+ 产生二次发光现象。据此建立7 一种测定水孛n i 2 + 戆方法， n i 2 + 在8 。o l o 一6 。o l o - 6m o l r 1 浓度范围内，与其发光强度成较好的线性关系，该方法 的检出限为l 。7 1 0 _ 9m o l 1 ，应用于水样中n i 2 + 的分析，得到令人满意的结果。 第四章：铈( ) 罗丹甥体系测定赆魏酸 在酸性会震中硫酸铈与隧魏酸作用，有微弱憋发光现象，基予罗丹明6 g 对该发光反应 有明显的增敏效果，建立了一种测定阿魏酸的简便快捷灵敏的方法。该方法的检出限为8 。7 1 0 9m 0 1 l 1 ，线性范嗣是8 o l 矿一1 o 1 0 q i n o l l - 1 。对1 。o 1 0 5m o l l 1 的阿魏酸进行 1 1 次连续平行测定，相对标准偏差为2 4 。对太太口服液中阿魏酸的测定，回收率为9 2 o 一1 0 4 o ，其结果令人满意。 第五章：鲁米诺高镟酸钾体系测定多巴胺 在碱性介质中，多巴胺对l m n 0 1 1 c m n 0 4 化学发光体系的发光强度有明显的增强作用， 据此结合流动注射技术，建立了快速测定多巴胺的流动注射化学发光分析法。该法线性范围 为2 o l o _ 6 2 o l m o l l _ 1 ，检出限为2 5 l 旷1 。m o l l - 1 ，对1 o l o m o l r 1 多巴胺 1 1 次平行测定，其相对标准偏差为2 。s 。对盐酸多巴胺注射齐| l 中多巴胺静分析，缩果令人 满意。 关键词：化学发光流动注射环境监测药物分析 珏 a b s n a c t a n a l y t i c a la p p l i c a t i o n so f f l o w i n je c t i o n c h e m i l u m i n e s c e n c ei ne n v i r o n m e n t a l a n d p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s m a s t e ro fe n v i r o n m e n t a ls c i e n c e ：j u p e n gw a n g s u p e r v i s o r ： p r o f e s s o rh o n g q u nl u o a b s t r a c t c h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l ) a i l a l y s i sh 嬲b e e n 、) l r i d e l ya p p l i e di ne n v j r 0 姗e n t a ls c i e n c ea i l dl i f e s c i e n c e ，、：h i c hh a sb e c o m eo n eo fm em o s tp o w e r f u l 协c l l i l i q u e si i la n a l y t i c a lc h e m i s n ym o s tc l r e a c t i o n sc a nf i n i s hi ns e v e r a ls e c o n d sa l l da r ep r o n et 0t h ee n v i r o m n e n t a le f r e c t ；t l l u s ，m eu s eo f c la s s a yi nq u 肌t i t a t i v e 锄a l y s i si sl i i i l i t e d w h e nc li sc o m b i n e dw i mn o w 叫e c t i o na n a l y s i s ( f i a ) ，f i a c la n a l y s i sc a j lp r o v i d eh i 曲e m c i e n c y 锄da c c u r a c y 锄db e c o m e sm o r ca l l dm o r e i m p o n a n ti nm a n y n e l d s t h i sp a p e rr 印o r t sm er e s e a r c h e so ff 队c lm e t l l o di l le n v i r o n m e n t a la 1 1 dp h 锄m c e u t i c a l a n a l y s i s c h a p t e rl ：s u 舢m r i z a t i o n t h em e c h a n i s ma n dp r i n c i p l e so fc la i l a l y s i s 鹪w e n 嬲t h eh i s t o 叫o fc la n a l y s i s 鲫d s e v e r a lc o m m o nc la n a l y s i sa r em e n t i o n e d s o m eo m e rt e c l l i l i q u e s 岫ta r ec o m b i n e dw i t hc l a n a l y s i sh a v eb e e i ls u 删m r i d t h er c s e a r c h e s 龃da p p l i c a t i o l l so fc la 1 1 a l y s i si ne n v i r o n m e n t a l a n dp h a n 瑚r c e u t i c a la i l a l y s i si i lr e c e n ty e a r sh a v eb e e n 砷m d u c e d c h a p t e r2 ：d e t e 眦i n a t i o no fc 抽a r y lb 舔e d0 n 吐l ec e ( ) 一砒1 b c a r b a 巧lf 队一c la m l y s i ss y s t c m as i m p l e ，s e n s i t i v ea n dr 印i df 队c la m l y s i sl 娜b e e nd e v e l o p e df o r 坞d e t e 肌i n a t i o no f c a r b a 叫lb a s e do nt h ec h e r n i l u m i i l e s c e n c er e a c t i o no fc a r b a r y lw i t hc e r i cs u l f a t ei ns u l p h u r i ca c i d m e d i u mw h i c hc 锄b ea u g m e n t e db yr h o 枷n eb s 仃o n gc h e r n j l u m i n e s c e n c es i 印a lw 舔o b s e r v e d i i i m a s t e rt h e s i so fs o u t 董1 w e s tu n i v e r s i t v w h e nc 抽a 巧1w a si 坞e c t e di | l 幻凌ea e i 击cc 暖es u l 蠡t es o l u 磊。芏l 撼鑫蠢o w e l l 。弧ep f e s e n t 撼。凌o d a l l o 戳d 妇d e 差e 黝i 羹o no f e 蕊删主至| 妞e 锄e 鞠妇i 艟麟g eo f 2 。o l 扩6 幻1 oxl e 一4 脚l 一 蚴dl l 把如t e c t i o nl i 商tf o rc a r b a 猡1w 豁5 。6 l 9m o lr 1 。n l er e l 撕v es t a l l d a r dd e v i a t i o nw a sl 。8 f o rn 姊l i c a t e d 肌a i y s e so fl 。o l o - 5m o ll _ 1c a r b 哪1 m p r o p o s e dm e t l l o dw 勰a p p l i e d t ot h e d e t e m ：l i n a t i o no fc a r b a r y “nw a t c rs 渊 】p l e 、衍ms a “s f 犯t o r yr e s u l 协 c h a p t e r3 ：d e t e r n l i n a t i o no fl l i c k e l ( i i ) b yl u 删n o l k 3 f e ( c n ) 6 州i ( i i ) f 队- c la n a l y s i s an e wl u n 娃n 0 1 k 3 f e ( a q 6 - n i 2 + s e c o n df 从c l a n a l y s i s 蠡) rt h ed e 懈m i n a t i o no fn i c k e l ( i i ) b a s e do ni t sc a t a l y s i st om ec ls y s t e mo f1 u m m o l - k 3 f e ( c n ) 6h 勰b e c nd e v e l o p e d 。t h ed e t e c t i o n l i 删to f n i ( i i ) i s1 7 l 旷m o ll 1 a n dt 1 1 en i c k e l ( i i ) c o n c e n 臼僦o n g eo fl i n e a rr e s p o n s ei s 舶m8 o i 旷t o6 o l o - 6m o ll _ t 1 1 ep r o p o s e dp r o c e d u 心h a sb e c n s a t i s f a c t o 矗l ya p 出d t ot h e d e t 以城n a t i o no f n i ( 1 1 ) 遗w a l e r s a 致l p l e s c h a p t e r4 ：d e t e 蝴i n 撕o no ff e m l i c 粒i db yc e ( ) 一r h 6 g 一南n l l i ca c i df 弧一c la n a l y s i s b a s e do nt h ec h e m i i u r n i n e s c e n c er e a c t i o no ff e m l i ca c i dw i t l lr h od ；酣i l i n e6 ga r l dc e r i cs u l f a t e i ns u l p h u r 主ca c i dm e d i u m ，s 叙的n gc h e 蕊l u l i l i n e s c e n c es i g n a lw a s0 _ b s e f v e dw h e nf e f u l i ca e i dw a s 蠲e e t e di 藏耄。凌e a c i d 主ce e 纛c 辩l f a 耄es o l 娃矗。珏遮鑫懿o w e 珏鸭ep f e s e n 耋攥。像。莲鑫l l o w e 莲氇e d e 溆溉n 8 爨强嚣f e 斑l 主ca c 撼遮_ l 量措c o 曩c 锹燃i 躐粼l g eo f 8 。o l o 硝论l 。o l 脚lr 1 然d 瞧e d e t e c t i 锄l 姒t 衙受r u l i ca c i dw 豁8 。7xl o - 9m o lr 1 t h ep f o p o s e d 戏如dw 躺嘲l i e d 乏ot h e d e t e 疵n a t i o no ff e m l i ca c i di n1 a i t ab e a u 桫e s s e n c es a n l p l e sm n ls a t i s f a c t o 秽r e s u l t s c h a p t e r5 ：d e t e 觚n a t i o no f 卸a 觚n eb yl u m i l l o l 一圣0 蛆n 0 4 一d 印a 碰n ef 队c la n a l y s i s 廷w a sf o 珏魏dt h a l kc ls 筘捃擞叠d 擞垃接r e a c 蠢鳃o fk m 魏( bw i 也l 落遗n o l 嫩鑫l k a l i 矬es o l 挂t i o n c o u l d b es 加n g l ye l l l l a n c e d b yd o p a l n i n e 。b 躺e d 触“sp h e l l o 黼n o l i ，a wf 丛c l a n a l y s i sf o rt h e d e t e m l i i l 撕o no fd o p 触w 豁p r o p o s e d n ed e t e c t i o nl i i i l i tf o rd o p 触w a s2 5 1 旷om o ll - 1 a i l dm ed e t e n t l i n a t i o no fd o p a r r l i i l ei i l 吐l ec o n c e n t r a 晡o nm g eo f2 o l 旷6t o2 o l o 一5m o ll - 1 1 1 em e m o dw a ss u c c e s s f h l l ya p p i i e dt ot h ed e t e r 戚n a t i o no fd o p 锄i n ei ni n j e c t i o ns a r l l p l e s k e y w o r d s ： c h e m i i u m i n e s c e n c e ， n o w - i n j e c t i o n ， e n v i r o n m e n t a l a n a i y s i s ， p h a r m a e e u t i c a la n a l y s i s | v 独创性声明 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已加 了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同 仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者： 易本昀 l 签字日期：刀参年多月莎日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院可以将学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 口保密期限至年月止) 学位论文作者签名：五备昀 签字日期：剀够年f 月多日 1 1 化学发光的基本原理 1 1 1 化学发光分析法 第一章综述 物质分子在吸收能量被激发到较高的电子能态之后，在返回基态的过程中， 必须将这部分能量释放出来，如以发射辐射的方式释放能量这就是发光现象。基 态分子激发到激发态所需要的能量可以有多种来源，如光能、化学能、电能、热 能等。在化学反应过程中，分子吸收反应释放出来的化学能而产生激发态物质， 当回到基态的时发出的光辐射称为化学发光 1 ，2 。 化学发光反应发出的光强度取决于化学发光反应的速率，而反应速率又与反 应分子的浓度成正比。因此，通过检测发光强度可以直接测定反应物的浓度。但 是大多数化学发光都非常微弱，并且稍纵即逝，由于检测器的限制，使得化学发 光反应到了本世纪六十年代才被用于分析化学，建立了化学发光分析法【3 。 不同的化学发光反应可以产生不同波长的光辐射，化学发光分析法的定量测 定基础就是化学发光的强度决定于化学发光反应的反应速率，因而一切影响反应 速率的因素都可以作为建立测定方法的依据，通常反应速率决定于反应分子的浓 度，这样通过测定化学发光的强度，就可以间接求出待测物的浓度。 1 1 2 化学发光的原理及特点 化学发光是指在没有任何光、电、热的作用下，只是由于反应体系中某种物 质( 反应物、产物、中间体或荧光物质) 的分子吸收了反应所释放的能量而由基 态跃迁至激发态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形式释放出 来，产生化学发光的现象 4 】。 化学发光反应有直接发光和间接发光两大类： 第一种类型，反应物a 和b 反应生成激发态的c ，激发态的c 回到基态时产 生光辐射； a + b c 木+ d c 宰一c + h 丫 匹直盔堂亟堂垡迨塞 第二种类型，反应物a 和b 反应生成激发态的c ，激发态的c 把能量转移给 荧光物质f ，激发态的f 回到基态产生光辐射。 a + b c 木+ d c 母+ f c + f 木 f 奉一f + h y 可见任何一种化学发光反应都包括两个关键步骤：激发和发射。因此能产生 化学发光的反应必须满足以下几个条件： 第一是反应必须能够提供足够的激发能。通常只有那些反应速度相当快的放 能反应，其焓变介于1 7 0 3 0 0 k j m o l 之间，才能在可见光范围内观察到化学发光 现象。通常具有这种能量的反应是氧化反应，这些能量的释放必须来自键断裂时 电子的转移。所以化学发光分析也是氧化还原反应过程的能量转移的测定，这是 化学发光反应分析区分于其它光学分析法的重要特征。 第二是化学反应的能量至少能被一种物质所接受并产生激发态。 第三是处于激发态的分子或原子能够释放出光子或者将其能量转移给另一个 分子，使此分子激发，然后以辐射光子的形式回至基态。 因此，化学发光分析测定的物质可以分为三类： 第一类物质是化学发光反应中的反应物； 第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或者抑制剂； 第三类物质是偶合反应中的反应物、催化剂、增敏剂或者抑制剂。 而化学发光反应按反应体系的状态不同，可以分为两大类 5 】： 第一种类型，气相化学发光反应 例如： ( 1 ) 臭氧与乙烯的化学发光反应 c h 2 = c h 2 + 0 3 ，h c o o h + c h 2 0 c h 2 0 木一c h 2 0 + l r y ( 2 ) s 0 2 、n o 、c o 等与o 的化学发光反应 o + o + s 0 2 ，s 0 2 木+ 0 2 s 0 2 幸一s 0 2 + h 丫 第二种类型，液相化学发光反应 2 ( 1 ) 生成过氧化物中间体的化学发光反应，此中间体的- 葛 星 t i 勰( s ) 硫酸铈，o 1 0m o l l - 1 ：硫酸，0 5 0m o 卜l - 1 ：罗丹明6 g ，1 o 1 0 4m o l l 1 ； 混合管长，3 oc m ；流速，7 8m l m i i i ；负高压，8 0 0 v 图4 6 响应信号图 f i g 4 6r e s p o n d i n gs i 印a lf o ras e r i e so ff e m l i ca c i d 4 3 4 共存物质的影响 根据本实验方法试验了样品中可能有的共存物对阿魏酸测定的影响，以干扰 水平5 计算，结果表明对于1 0 1 0 一5m o l l - 1 阿魏酸，l o o o 倍b a 2 + ：5 0 0 倍n a + 、 k + 、n h 4 + ；2 0 0 倍c u ”、m 矿+ ；1 0 0 倍c a 2 + 、z n 2 + 、l 氨基乙酸：5 0 倍咖啡酸；2 0 倍l 赖氨酸、葡萄糖、果糖均无干扰。 4 4 分析应用 取太太口服液( 深圳太太制药有限公司) 1 支( 1 0 m l 支) 于l o o m l 容量瓶中， 蒸馏水定容。取上述溶液1 0 m l 用蒸馏水稀释到1 0 0 m l 容量瓶中，相当于将该注 射液稀释了1 0 0 倍，按图4 1 所示流路进行测定。然后进行标准加入回收实验，回 收率为9 2 o 一1 0 4 o ，五次测定的相对标准偏差都在5 以下，( 表4 1 ) 结果 令人满意。 表4 1 阿魏酸的测定结果 t a b l e4 1r e s u l t sf o r 1 ed e t e 册i n a t i o no ff e m l i ca c i d 注：测定五次的平均结果 4 5 机理探讨 为了更好地说明该发光体系的反应机理，分别进行了静态注射化学发光实验、 发光光谱实验、紫外可见吸收实验，并且分别绘制了动力学曲线( 图4 7 ) 、发光 光谱图( 图4 8 ) 、紫外可见吸收光谱图( 图4 9 ) 。 窘 昌 3 富 一 u t i m e ( s ) 硫酸铈，o 0 5m o l l - 1 ：硫酸，o 6 0m o l l - 1 ； 罗丹明6 g ，5 o l o _ 5m o l l _ 1 ；阿魏酸，5 o 1 0 - 5m o 卜l _ 1 图4 7 动力学曲线 置 易 口 3 盘 一 u f i g 4 7 k i i l e t i cc u n ，e0 fc h e i l l i l u m m e s c e n c e w a v e l e n g t h ( n m ) 硫酸铈，o 1 0 m 0 1 l _ 1 ；硫酸，o 5 0 m o 卜l 1 ； 罗丹明6 g ，1 o 1 0 - 4l n o l l 1 ；阿魏酸，1 0 1 0 一5m 0 1 l - 1 图4 8 发光光谱图 f i g 4 - 8 c h e m i l u m i l l e s c e n c es p e c 臼m m 3 7 w a v e l e n g t h ( n m ) ( a ) 1 0 1 0 一m o l1 1 f e r u l i ca c i d ； ( b ) 1 0 1 0 3m o ll - 1c e ( s 0 4 ) 2 ； ( c ) 1 o 1 0 5m o l l 一1f e m l i ca c i d + 1 0 1 0 一3r n o l l 一1c e ( s 0 4 ) 2 ； ( d ) 1 0 1 0 一5m o ll 一1f e m l i ca c i d + 1 0 1 0 - 3m o ll 一1c e ( s 0 4 ) 2 + 1 0 1 0 一5m o ll 一1 r h 6 g 图4 9 紫外可见吸收光谱图 f i g 4 - 9 u v 二v i sa b s o r p t i o ns p e c 缸1 m 1 图4 7 表明该发光体系反应速率非常快，并且产生很强的发光强度；图4 8 表 明，c e ( ) i 地6 g f a 化学发光体系的发光光谱最大发射波长约为5 6 0 n m ，与r h 6 g 的 发光光谱相近；图4 8 表明，f a 在2 0 0 啪和3 2 0n m 附近有两个吸收峰，当f a 被 c e ( ) 氧化时两个吸收峰出现在2 4 0n m 和3 2 0 砌；当加入r h 6 g 时吸收峰的位置 不变，但是峰高变大。基于阿魏酸具有共轭苯环，可以看成苯酚的衍生物。其不 饱和侧键包括c = c 和羟基，很容易被氧化成酮和羧酸。结合以上三个实验， c e ( ) r h 6 g - f a 化学发光体系的能量接受体应为r h 6 g 。当加入r h 6 g 后，该体系反 应产生的能量转移至r h 6 g ，而跃迁至激发态形成r h 6 g 奎，当其回到基态时，导致 化学发光的产生。可能的反应机理如下图所示。 h 三d 夕一h 一一 c “i i i ) +rh6g+ 第五章鲁米诺一高锰酸钾化学发光体系测定多巴胺 5 1 引言 多巴胺( d o p 锄i n e ) 是一种儿茶酚类神经传递物质，是由赖氨酸衍生而来的， 具有重要的生理作用及临床应用价值。临床上主要应用于治疗支气管哮喘、高血 压、心脏病以及治疗各种休克，如感染性中毒休克、心源性休克及出血性休克等等 1 7 5 】。多巴胺是去甲肾上腺素生物合成的前体，药用的是人工合成品。自2 0 世纪7 0 年代初发现神经递质的电化学性质以来，一直是生命科学研究的热点。脑内多巴 胺神经功能失调是精神分裂症和帕金森式症的重要原因 1 7 6 ；此外多巴胺为拟肾 上腺素药，具有兴奋心脏，增加肾血流量的功能 1 7 7 。因此，对其测定方法的研 究无论是在生理功能研究还是在临床应用方面都有重要意义。 测定多巴胺的分析方法文献报道较多，主要有分光光度法 1 7 8 、毛细管电泳 法 1 7 9 ，1 8 0 】、离子色谱法 1 8 1 、电化学分析法 1 8 2 1 8 6 】、双安培法【1 8 7 以及高效 液相色谱法 1 8 8 。这些测定方法存在检出限高、线性范围窄等缺点，而用化学发 光法测定多巴胺的文献少有报道。本文发现在碱性介质中，多巴胺对鲁米诺高锰 酸钾化学发光反应有很强的增敏作用，并详细研究了对该体系有影响的多种因素， 发现此体系十分稳定，灵敏度高，选择性好。结合流动注射技术，建立了一种简 单、灵敏、快速测定多巴胺的化学发光分析法并应用于注射液中盐酸多巴胺的测 定。 5 2 实验部分 5 2 1 仪器和试剂 i f f m e 型流动注射化学发光分析仪( 西安瑞迈分析仪器有限公司) ；聚四氟 乙烯管( 内径o 8m m ) ；u v - v i s8 5 0 0 型紫外分光光度计( 上海天美有限公司) ； f 4 5 0 0 型荧光仪( 日本日立公司) 。多巴胺储备液( 1 o 1 0 。m o l l 。1 ) ；鲁米诺 ( s i g m a ) 储备液( 1 o l o 。2m o l l - 1 ) 用浓度为2 o 1 0 也m o l l 。1 的氢氧化钠溶 液配制；高锰酸钾( 上海s c r c 国药集团化学试剂有限公司) 储备液( 1 o 1 0 七m o l l - 1 ) 。所有试剂均为分析纯，水均为二次蒸馏水。 3 9 5 2 2 实验方法 根据反应体系中药品的化学反应以及发光特性，设计了发光反应流路( 图 5 1 ) 。基于鲁米诺和多巴胺混合没有发光现象，而鲁米诺和高锰酸钾有很强的发光 反应。为了便于控制，在体系反应前使鲁米诺和多巴胺先混合，然后再与高锰酸 钾反应( a 管进分析物，b 管进鲁米诺溶液，c 管为水载液，d 管进高锰酸钾溶液) 。 用水作空白得到相对发光强度i ( 样品测定时的发光强度减去空白发光强度) 。 这样就绘制出标准曲线，然后通过同样的测定方法再结合标准曲线就能测出注射 液中盐酸多巴胺的浓度。 矗 b c d p l ( a ) 分析物；( b ) 鲁米诺；( c ) 水载体；( d ) 高锰酸钾； ( p 1 ) 主蠕动泵；( p 2 ) 副蠕动泵；( v ) 进样阀；( c e ) 发光反应池；( w ) 废液； ( h v ) 负高压源；( p m t ) 光电倍增管；( 朋帅) 放大器；( r ) 信号接受器( 计算机) 图5 1 流动注射化学发光反应流程示意图 f i g 5 - 1s c h e m a t i cd i a g r 锄o ft h ef i a c lm a n i f o l du s e df o rt h ed e t e n n i n a t i o no fd o p a m i n e 5 3 结果与讨论 5 3 1 体系优化 5 3 1 1 反应介质的选择及浓度影响 研究了鲁米诺在几种碱性介质中的发光强度，结果表明用氢氧化钠溶液作介 质效果最好。在1 o 1 0 5m 0 1 l - 1 鲁米诺溶液，2 o l o - 5m o l l - 1 高锰酸钾溶液， 1 o 1 0 - 5m 0 1 l - 1 多巴胺溶液的条件下，考察了1 0 1 0 - 2 9 o 1 0 一2m 0 1 l - 1 浓度 范围内氢氧化钠对发光体系的影响。在1 0 1 0 - 2 5 0 1 0 - 2m o l l _ 1 浓度范围内 4 0 第五章鲁米诺一高锰酸钾化学发光体系测定多巴胺 发光强度随氢氧化钠的浓度增大而增强；在5 o l o - 2 9 o 1 0 2m o l l _ 1 浓度范 围内发光强度随氢氧化钠的浓度增大而减弱。( 图5 2 ) 结果显示氢氧化钠的最佳 浓度为5 o 1 0 2m o l l _ 1 。 n a o hc o n c e n t r a t i o n ( m o ll 1 ) 1 o l o 一5i n o l l - 1 鲁米诺，2 0 1 0 - 5m o l l - 1 高锰酸钾，1 o 1 0 5m o l l - 1 多巴胺 图5 2 氢氧化钠浓度的影响 f i g 5 - 2 e 岱o c to f m en a o hc o n c e n 跏i o no n 廿舱r e l a t i v ec li i l t e n s i t y 5 3 1 2 鲁米诺浓度的影响 研究了在5 o l o 一2m 0 1 l _ 1 氢氧化钠溶液，2 o 1 0 5m o l l 1 高锰酸钾溶液， 1 0 1 0 5m o l l _ 1 多巴胺溶液的条件下鲁米诺对发光体系的影响。( 图5 3 ) 显示在 2 0 1 0 一1 o 1 0 _ 4m 0 1 l - 1 范围内发光强度随鲁米诺的浓度增大而明显增强， 在1 0 1 0 - 4 1 6 1 0 - 4i n o l l _ 1 范围内随鲁米诺的浓度增大发光强度增大幅度 很小。考虑到实际操作以及节约试剂，所以选择1 0 1 0 - 4m o l l _ 1 作为鲁米诺的 最佳浓度。 4 1 参ls皇o_宙一厂iu oai_量0_ l u m i n o lc o n c e n t r a t i o n ( m o ll - 1 ) 5 o 1 0 一2m o 卜l - 1 氢氧化钠，2 0 1 0 5m 0 1 l _ 1 高锰酸钾，1 o 1 0 5m o l l 一1 多巴胺 图5 3 鲁米诺浓度的影响 f i g 5 3 e 丘e c to fm el 眦i n o lc o n c e n 仃a t i o no nt l l er e l a t i v ec li n t e n s i t y 5 3 1 3 高锰酸钾浓度的影响 在5 o 1 0 一2m 0 1 l - 1 氢氧化钠溶液，1 o 1 俨m 0 1 l - 1 鲁米诺溶液，1 0 1 0 一5 m 0 1 l _ 1 多巴胺溶液的条件下，考察了在1 o 1 0 - 5 9 o l o - 5m 0 1 l - 1 浓度范围内 高锰酸钾对发光体系的影响。图5 4 显示在1 0 1 0 - 5 6 0 1 0 一5m o l l - 1 范围内 发光强度随着高锰酸钾的浓度增大而明显增强，在6 0 1 0 一9 o 1 0 - 5m 0 1 l _ 1 范围内随高锰酸钾的浓度增大发光强度增大幅度很小。考虑到对试剂的节约，以 及高锰酸钾溶液浓度过大会产生自吸对测定结果的影响，所以选择6 0 l o - 5m o l l _ 1 作为高锰酸钾的最佳浓度。 4 2 _皇的蜀o_uiu qai苌石笛 k m n 0 4 c o n c e n t r a t i o n ( m o ll - 1 ) 5 o 1 0 2m o l l _ 1 氢氧化钠，1 0 l 俨i n o l l - 1 鲁米诺，1 0 1 0 5l n o l l - 1 多巴胺 图5 4 高锰酸钾浓度的影响 f i g 5 _ 4 e f r e c to ft 1 1 ek m n 0 4c o n c e r l 仃a t i o no nt 1 1 e 咒l a t i v ec li n t e n s i 哆 5 3 2 参数优化 为了使该体系的发光现象更加明显易测，对系统各参数条件进行优化。在信 噪比较好的前提下把负高压设定为6 0 0v ；流速设定为9 6m l m i n - 1 ，混合管长 ( 不包括检测器部分) 设定为3 0c m 发光现象好，信号稳定。 5 3 3 特性分析 在5 o 1 0 2m 0 1 l - 1 氢氧化钠溶液，1 0 l 俨m o l l _ 1 鲁米诺溶液，6 o 1 旷5 m 0 1 l _ 1 高锰酸钾溶液，以及3 0c m 的( 外) 混合管长，9 6m l - m i n 。1 的流速，6 0 0 v 的负高压等条件下对一系列浓度的多巴胺进行测定，并绘制了标准曲线( 图5 5 ) 。 在2 o 1 0 - 6 2 o l o - 5m o l l - 1 浓度范围内有较好的线性。线性方程：i = 3 3 7 1 0 8c 一4 6 6 7 ( c 为多巴胺浓度m 0 1 l - 1 ，r = 0 9 9 8 8 ) ，对1 o 1 0 _ 5m o l l _ 1 多 4 3 茸一叻皇_暑一u q墨肖一。名 酉直丕堂巫堂焦迨塞 一 巴胺溶液进行了1 1 次平行测定，其相对标准偏差为r s d = 2 8 ，该方法的检出 限为2 5 1 0 1 0m 0 1 l 。 套 皇 o _ 皇 一 u t i m e ( s ) 5 0 1 0 - 2m o l l - 1 氢氧化钠，1 o l 矿m d l - 1 鲁米诺，6 0 1 0 一5m 0 1 l - 1 高锰酸钾 混合管长，3 0c m ；流速，9 6i i l l m i i l 一；负高压，6 0 0 v 图5 5 响应曲线 f i g 5 5r c s p o n d i n gs i 印a lf o ras 矾e so fd o p 锄妣 5 3 4 共存物质的影响 根据本实验方法试验了样品中可能有的共存物对多巴胺测定的影响，对一些 常见离子和一些有机物的干扰情况进行了考察，以干扰水平5 计算，结果表明 对于1 0 1 0 5m 0 1 l - 1 多巴胺溶液，1 0 0 0 倍n a + 、k _ 、n 0 3 、p 0 4 3 、s 0 3 厶；5 0 0 倍c a 2 + 、m 矿+ 、n h 4 + 、c 1 。、s 0 4 2 ；1 0 0 倍淀粉、葡萄糖；1 0 倍z n 2 + 、b a 2 + 、维 生素c 均无干扰。 5 4 分析应用 取盐酸多巴胺注射液( 上海禾丰制药有限公司，标示量：2 0 m g 2 m l ) 1 支于 5 0 0 m l 容量瓶中，蒸馏水定容。取上述溶液2 5 m l 用蒸馏水稀释到1 0 0 m l 容量瓶 中，相当于将该注射液稀释了l o o o o 倍，按图5 1 所示流路进行测定。然后进行标 准加入回收实验，回收率为9 4 o 一1 0 9 o ，五次测定的相对标准偏差都在5 以下，( 表5 1 ) 结果令人满意。 表5 1 注射针剂中多巴胺的测定结果 t h b l e5 - lr e s u l t sf o rt 1 1 e ( 1 e t e 册i m l t i o no fd o p a m i n ei ni n j e c t i o n s 注：测定五次的平均结果 4 5 参考文献 【1 】林金明化学发光基础理论与应用【m 】北京：化学工业出版社，2 0 0 4 ，3 - 6 【2 】严凤霞，王筱敏现代光学仪器分析选论 m 】上海：华东师范大学出版社，1 9 9 2 ，5 - 1 2 【3 】陆明刚，吕小虎，杨森利用化学发光反应动力学曲线进行定量分析的理论研究【j 光谱 学与光谱学分析1 9 9 5 ，1 5 ( 5 ) ：9 9 一1 0 2 【4 】方禹之分析科学与分析技术【m 】上海：华东师范大学出版社，2 0 0 2 ，1 3 6 【5 】何治柯，罗庆尧，曾云鹗化学发光分析进展 j 】分析测试学报，1 9 9 7 ，1 6 ( 1 ) ：7 2 - 8 4 【6 】k e v i nr ，p a u 】jw a 1 1 a l y t i c a la p p l i c a i o 璐o fl i q u i d p h a s e c h e 砌u i l l i n e s c e n c e j 】a n a lc h i n a c t a 1 9 9 2 2 6 6 ：1 4 7 1 7 3 ( 7 】章竹君，吕九如发光分析【j 】分析实验室，1 9 9 1 ，l o ( 4 ) ：1 0 2 - 1 0 4 8 】周宜开，李红发光分析在药物分析中的应用研究 j 药物分析杂志，1 9 8 9 ，9 ( 6 ) ：3 7 2 - 3 7 4 【9 】y a l i l a g i l c l l im ，y o s h i d ah ，n o h t ah i 舢口i n o l t ) ，p ec h e r i l i l u 栅n e s c e n c ed e r i v a t i z a t i o nr e a g e n t s f o rl i q u i dc h r o m a t o 蓼a p h ya l l dc a p i l l a r ye l e c 打o p h o r e s i s j 】j o 啪a lo fc h r 0 】m 【a t o g r a p h ya ，2 0 0 2 ，9 5 0 ( 1 ) ：l 1 9 1 0 】a n d e r s o ndj ，g u ob ，x uy ，e ta 1 c l i i l i c a lc h e i i l i s 仃y 【j 】- a n a l ”i c a lc h e i l l i s 略1 9 9 7 ，6 9 ： 1 6 5 1 7 0 【1 1 】r - o b 矾skw b r s f 0 1 dp a m l 徊c a la p p l i c a t i o i l so fl i q u i d _ p h 舔ec h e r n j l u r i l i n e s c e n c e j 】 a n a l y t i c ac h i i i l i c aa c t a ，1 9 9 2 ，2 6 6 ( 2 ) ：1 4 7 - 1 7 3 【1 2 】k w a l 【r n 孤pjm ，b 血锄uatp e r o x y o x a l a t ec h e i l l i l u i i l i n e s c e n c ed e t e c t i o ni nl i q u i d c h r o m a t o g r a p h y 【j 】a n a l y t i c ac k m i c aa c t a ，1 9 9 2 ，2 6 6 ( 2 ) ：1 7 5 1 9 2 【13 】 s c h r o e d e rhry e a g e rfm i 咖蚰o a s s a y 矗” s 咖m 廿l y r o x j n e m o n j t o r e d b y c h e m i l u m i n e s c e n c e 【j 】j o 啪a lo fi m m l m o l o 百c a lm e m o d s ，1 9 7 9 ，2 5 ( 3 ) ：2 7 5 - 2 8 2 【1 4 】b a 玎l e t tnw h i i l d s o nbj ，k w i sswe ta 1 d e t e r m m a t i o no fr a i l i t i d 妇a n ds a l b u t a m o lb y f l o wi n j e c t i o na n a l y s i sw i t hc h e i i l i l u n l 硫s c 饥c ed e t e c t i o n 【j 】a n a l 如c ac h i r i l i c aa c t a ，1 9 9 9 ，3 8 4 ( 2 ) ：1 5 1 1 5 8 【15 】m e s 仃eyf z a m o r al ，c a l a t a ”djm ，e ta 1 d n c tn o w 埘e c t i o nc h e i i l i l u i l l i n e s c e n c e d e t e 肌i n a t i o no f s a l i c y l a m i d e 【j 】a m l y t i c ac t l i i l l i c a a c t a ，1 9 9 9 ，3 9 4 ( 2 - 3 ) ：1 5 9 - 1 6 3 16 】山斌o lkj a c e kml c h e i i l i l 啪i n e s c c ed e t e m l i i l a t