（水生生物学专业论文）壬基酚对雌激素受体表达和雌二醇水平的作用.pdf

_ _ _ _ - - _ 一 一 归，吮疑疆 ：矽羁苹现￥歌觋嘉 ( 。 ，衅掣群阜丁相翠毁) 。口鼯龃坐士冒 ￥歌再杂章。辞砰砰章目耍到嚣影专了犁周鼯势￥歌可杂章 。窜群即牟聚到昂蟛晕￥歌朝鼯龃3 ￥歌可 杂嘴 ；毗猪士睥虿舅辨e 丰孽出黪、d j 缮目够相且拳舛助梁封群鞣* 单y 骺嚣掣朝￥歌科丢章赫杂￥平掣丁砰砰y 章。刨料咄圜覃礁￥ 歌觑肜硎士砷咄勒由琴朝￥歌革蘩酵衅草 - 。l 她* 单掣箕器蛰辫毒掣 剧￥群朝￥诳现杀日辫、孱蛰* 单丢￥i 平絮丁影弓晋y 章 的草砰弭目觋茸砚弭嘉 功万晦目 。 迭呼 夥羁茅勘￥歌再秦 胀害擎箕的强睁的勒串￥翠目解勘考咄y 专朝详兽益垂吊谢髫 抱朝￥歌章仁。酱帮霉抱驷衷盆薄孽擎芬荡目彩毒草y 妙聃并号母坐 ￥诳章将君掣朝目l 盒肋裂荡目串￥剖。酱翠朝勘蛆勘工肇抱缈幂 车穰i 台群朝蛳台孕y 章著￥歌现杂朝覃群鲻：断草事嘶- y - 章 醣革羽f l 寻戳茸观 朗卑砰狲目珊疆骺卓羽，f i 号戳茸磁珂杀 壬基酚对雌鲫雌激素受体表达和雌二醇水平的作用 摘要 环境激素，又称为内分泌扰乱化学物( e n d o c r i n ed i s r u p t i n g c h e m i c a l s ) ，是指由于人类活动而释放到水域、空气等生态环境中 具有类雌激素作用的有害化学物质总称，它可影响和干扰人和动物内 分泌系统，使雄性动物雌性化、精子数量减少、生殖器官异常，并使 生殖能力下降，后代的健康与成活率下降等。近年来研究发现，壬基 酚( 4 - n o n y l p h e n o l ，n p 或p - n p ) 是一种环境激素，具对动物( 鼠、 鱼等) 有雌激素样效应。目前，对于n p 的内分泌扰乱研究，在陆生 动物方面主要集中在n p 对雄性或雌性动物生殖功能的影响、n p 对癌 症细胞的增殖效应等方面；在水生动物研究方面，卵黄蛋白原 ( v i t e l l o g e n i n ，v t g ) 成为研究n p 的指标性物质，发现一定浓度的 n p 对鱼类卵黄蛋白原具有诱导作用，另外还发现n p 对鱼类有一定的 免疫毒性等。 关于壬基酚对淡水鱼类作用的研究尚处于起步阶段，关于其作用 机制还没有统一、明确的认识。为了了解壬基酚在淡水鱼体内的作用 途径，为生态保护研究提供相关依据，本论文利用免疫组织化学、 r t p c r 以及荧光免疫分析手段，以壬基酚对雌激素受体( e s t r o g e n r e c e p t o r ，e r ) 作用为研究切入点，对壬基酚在雌鲫体内的作用机制 进行研究。 1 壬基酚对e rq 、e rb 以及c y p i am r n a 表达的影响 对雌鲫腹腔注射i m g k g 、5 0 m g k g 、l o o m g k g 的n p 或i m g k g 的 e 。，分别在2 4 h 和4 8 h 提取肝脏r n a 用r t p c r 查看q 型雌激素受体 ( e rq ) 、b 型雌激素受体( e rd ) 和细胞色素p 4 5 0 ( c y p l a ) m r n a 表达情况。结果得到：i m g k ge ：处理组在2 4 h 和4 8 he rqm r n a 的 表达极显著性增加( 尺0 0 1 ) ，c y p l am r n a 表达有显著性增加 ( p i m g k g n p ，lo o m g k g 的n p 对e r qm r n a 表达的上调效果接近于l m g k g e 。的效果。n p 对c y p l am r n a 表达有上调作用，并且表达随注射浓度 上升而增强( 具剂量一依赖效应) 。以上结果表明n p 具有弱雌激素效 应，能使e r qm r n a 表达上调。由于c y p l a 对e ：具有代谢作用，因此 推测n p 诱导c y p i am r n a 表达从而导致血清中e 。水平的下降。在2 天内l m g k ge 。和5 0 m g k gn p 对e r m r n a 表达影响不明显，但l m g k g n p 和1 0 0 m g k gn p 在4 8 h 对e r bm r n a 表达有显著诱导。通过以上结 果，得到4 8 h 内n p 通过上调肝脏e rq 表达实现雌激素效应，在此期 间内肝脏e rb 不起主要作用。 2 壬基酚对雌鲫血清中雌二醇水平的影响 对雌鲫腹腔注射l m g k g 、5 0 m g k g 、1 0 0 m g k g 的n p 或l m g k g 的 e 。，在2 4 h 和4 8 h 提取血清用荧光免疫法测定e ：浓度。结果得到注射 n p 后，血清中e ：浓度有显著下降。l m g k gn p 处理组的e 。浓度在2 4 h 与对照组比较有显著性下降( p ( 0 0 5 ) ，但在4 8 h 后有所回升。5 0 m g k g n p 处理组的e 。浓度在2 4 h 和4 8 h 与对照组比较有极显著性下降 ( p ( o 0 1 ) 。1 0 0 m g k gn p 处理组的e ：浓度在2 4 h 与对照组比较有显 著性下降( 尺o 0 5 ) ，在4 8 h 有极显著性下降( 尺0 0 1 ) 。随着n p 注 射量的增加，e ：浓度逐渐减少( 具剂量一依赖效应) 。e ：下降效应： 1 0 0 m g k gn p 5 0 m g k gn p l m g k gn p 。 结合2 、3 的结果，n p 能促进肝脏e r 的表达同时能抑制血清中 e ：的水平，并具剂量一依赖效应，显示n p 能通过肝脏e rq 途径实现其 雌激素效应。同时，我们的研究发现，n p 对鲫鱼的c y p l a 基因的表 达具有上调作用。由于c y p l a 对e 。具有代谢作用，能造成e 。水平的 下降，因此n p 通过促进c y p l a 表达实现对e 。水平的抑制。 3 改变温度后n p 对血清e 。水平以及对肝脏e rqm r n a 表达的影响 有壬基酚对鱼类内分泌扰乱研究的文献中所涉及的实验温度并 不一致，而温度是影响鱼类体内激素水平变化的重要因素。为了研究 n p 对鲫鱼雌激素效应以及温度的变化可能对实验结果带来的影响， 本章节研究了雌鲫在两种温度下( 6 和1 7 ) 放养一周后，n p 在 4 8 h 内对鲫鱼肝脏e rq 表达的影响以及对血清e ：水平的影响。 每种温度下分对照组和n p 处理组，n p 注射量为l o o m g k g 。在 2 4 h 和4 8 h 提取血清用荧光免疫法测定e ：浓度和提取肝脏r n a 用 r t - p c r 查看e rq 的表达情况。结果显示在，n p 均能使e ：水平下降。 l o o m g k gn p 在6 。c 和1 7 。c 条件下均能有效降低血清e ：水平，为n p 对雌鲫内分泌扰乱效应的研究提供实验支持。在6 。c 条件下，n p 处 理组e 。浓度在2 4 h 与对照组比较有显著性下降( p o 0 5 ) ，在4 8 h 有 极显著性下降( 尺0 0 1 ) 。在1 7 条件下，对照组e 。浓度与6 条件 下对照组相比有极显著增加，n p 处理组e ：浓度和对照组比较，在2 4 h 和4 8 h 有极显著性下降( p o 0 1 ) 。在17 下，对照组e rq 表达比 n p 处理组高，这与6 条件下的情况不一致。由于n p 具有弱雌激素 效应，温度提高后，对照组e ：水平有显著提高，在这种情况下，e ： 对e rq 表达的影响要远远大于n p 对e rq 表达的影响。因此，研究 n p 的雌激素效应时，要适当考虑温度对实验结果造成的影响。 4 e rq 在雌鲫组织内的免疫组织化学定位 应用免疫组织化学的方法，q 型雌激素受体( e r - q ) 在成熟雌 鲫的肝脏进行定位研究，为e rq 在肝脏组织中的存在提供证据。提 取肝脏组织，制作石蜡切片，之后使用兔抗e r ( r a b b i t sa n ti - e r ) 和a b c 试剂盒进行免疫组织化学反应。结果得到，e rq 存在与肝脏细 胞核中。 关键词：环境激素，内分泌扰乱，壬基酚，雌鲫，雌激素受体 e f f e c t so f4 - n o n y l p h e n o lo ne x p r e s s i o no fe s t r o g e nr e c e p t o ra n d l e v e lo f1 7 pe s t r a d i o l nv i v oo ff e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u s a b s t r a ct e n v i r o n m e n t a lh o r m o n e s ，o re n d o c r i n e d i s r u p t i n gc h e m i c a l s ，i n c l u d e m a n m a d et o x i cc h e m i c a l sw h i c hw e r ed i s c h a r g e di n t ow a t e r , a i ra n d a n o t h e re n v i r o n m e n ta n dh a v ee s t r o g e n 1 i k ee f f e c t s ，w h i c hc a nr e s u l ti n e n d o c r i n ed i s r u p t i o ne f f e c t s ，s u c ha sf e m i n i z a t i o no fm a l e ，d e c r e a s ei n s p e r mc o u n t ，a b n o r m i t yo fg o n a d ，a b o r t i o no fp r o c r e a t i o n ，d e c r e a s ei n s u r v i v a lr a t eo fo f f s p r i n ga n ds oo n 4 - n o n y l p h e n o l ( n p ) i sak i n do f e n v i r o n m e n th o r m o n e s ，w h i c hc a nr e s u l ti ne n d o c r i n ed i s r u p t i o ne f f e c t s t h ec u r r e n tr e s e a r c h e so fn p se n d o c r i n ed i s r u p t i o ni nt e r r i c o l o u sa n i m a l s f o c u so ne f f e c t so fn po np r o c r e a t i o no fm a l eo rf e m a l ea n i m a l s p r o l i f e r a t i o ni nc a n c e rl i n e ，a n ds oo n i na q u a t i ca n i m a l s ，v i t e l l o g e n i n ( v t g ) b e c o m e sab i o m a r k e ri nr e s e a r c ho fn p , w h i c hh a si n d u c i b l e e f f e c t so nv t ga n di na n o t h e rr e s e a r c hi tw a sf o u n dt h a tn ph a s i m m u n o t o x i ce f f e c t so nf i s h t h er e s e a r c ho fn pi so np r i m a r ys t e p ，a n di t sm e c h a n i s mi nv i v oo f t e l e o s ti su n c l e a r i no r d e rt ou n d e r s t a n di t sm e c h a n i s mi nt e l e o s ta n d p r o v i d ea c a d e m i cs u p p o r t sf o re c o l o g i c a lc o n s e r v a t i o n ，t h em e c h a n i s mo f 卜沪i nv i v oo ff e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u si s i n v e s t i g a t e di nt h i sp a p e rb y i m m u n o h i s t o c h e m i c a ll o c a t i o no fe s t r o g e n r e c e p t o r ( e r ) ，i 冰p c rt o c h e c ke f f e c t so fn po ne r a n df l u o r e s c e n ti m m u n o a s s a yt o a s s e s s 171 3 一e s t r a d i o l ( e 2 ) 1 e v e l i ns e r u m 1 e f f e c t so fn po ne x p r e s s i o no fe r a ，e r p ，a n dc y p l am r n ai n l i v e r w et o o ki n t r a p e r i t o n e a li n je c t i o ni nf e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u sw i t h t h ed o s e o f l m g k g ，50 m g k g ，10 0 m g k go fn po r lm g k go f 17 1 3 一e s t r a d i o l ( e 2 ) r e s p e c t i v e l y t h ee x p r e s s i o no f e r a ，e r l 3a n dc y p 1a m r n ai nl i v e rw e r ee v a l u a t e db y t h er e s u l t ss h o w e dt h a te a n d r t - p c ri n2 4 ha n d4 8 ho fi n j e c t i o n c y p1am r n aw e r eu p r e g u l a t e db y n po re 2 ( d o s e d e p e n d e n t ) i nlm g k ge 2t r e a t m e n tg r o u p ，t h e r ew a s s i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no fe r am r n a 俾 o 01 、) a n dc y p1a m r n ap 0 0 5 ) i n4 8 h i nl m g k gn pt r e a t m e n tg r o u p ，t h e r ew a s s i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no fe r ar n r n ai n2 4 h ( p o o1 ) a n d 4 8 ( p 0 0 5 ) ，a n dt h e r ew a ss i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no fc y p1a m r n ai n2 4 h ( p 0 0 5 ) a n d4 8 h ( p 0 o 1 ) i n50m g k gn pt r e a t m e n tg r o u p ， t h e r ew a ss i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no fe r am r n a i n2 4 h ( p 0 01 ) a n d4 8 ( p o 0 5 ) ，a n da n dt h e r ew a ss i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no f c y p1 am r n ai n 2 4 h ( p 0 0 5 ) a n d4 8 h ( p 50 m g k gn p lm g k gn p t h e e f f e c to flo o m g k go fn po ne r 0 【m r n a se x p r e s s i o ni sc l o s et ot h a to f lm g k go fe 2 i nc o n t r a s t ，l m g k ge 2a n d50 m g k gn ph a v en oe f f e c t so n e x p r e s s i o no fe r pm r n a ，e x c e p ts i g n i f i c a n ti n c r e a s ei ne x p r e s s i o no f e r l 3m r n au n d e rlm g k gn pa n d10 0 m g k gn pa t4 8 h t h e s ei n d i c a t e t h a tn ph a sw e a ke s t r o g e n l i k ee f f e c t s ，w h i c hh a v es o m e t h i n gt od ow i t h e r a a n dt h e r ei sac o n c l u s i o nt h a ti n d u c t i v e e x p r e s s i o no fc y p 1a m r n a b yn pf a c i l i t a t e dt h em e t a b o l i s mo fe 2i ns e r u m i n4 8 h ，t h el i v e r e r 6m i g h tp l a yl e s si m p o r t a n tr o l ei nn p se s t r o g e n 1 i k ee f f e c t s 2 e f f e c t so fn po i le 2l e v e li ns e r u m w et o o ki n t r a p e r i t o n e a li n je c t i o ni nf e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u sw i t h t h ed o s eo fl m g k g ，5 0 m g k g ，10 0 m g k g o fn po rlm g k go fe 2 r e s p e c t i v e l y t h ec o n c e n t r a t i o no fe 2i ns e r u mw a sa s s e s s e d b y f l u o r e s c e n ti m m u n o a s s a yi n2 4 ha n d4 8 ho fi n je c t i o n t h er e s u l ts h o w e d t h a tt h el e v e r so fe 2w e r ed e c r e a s e db yn p ( d o s e d e p e n d e n t ) i nlm g k g n pt r e a t m e n tg r o u p ，t h e r ew a ss i g n i f i c a n td e c r e a s ei ne 2l e v e l i n2 4 h p o 0 5 ) b u tt h e r ew a sab i ti n c r e a s ea t4 8 h i n5 0 m g k gn pt r e a t m e n t g r o u p ，t h e r ew a ss i g n i f i c a n td e c r e a s ei ne 2l e v e li nb o t h2 4 ha n d4 8 h ( 尸 o 01 ) i n 10 0 m g k gn pt r e a t m e n tg r o u p ，t h e r ew a ss i g n i f i c a n t d e c r e a s ei ne 2l e v e l i n2 4 h ( p l m g k gn p b a s e do nt h er e s u l to f2a n d3 ，i n c r e a s ei ne r a se x p r e s s i o na n d d e c r e a s ei ne 2i nn pt r e a t m e n tg r o u pi n d i c a t en p se n d o c r i n ed i s r u p t i o n v i ae r ap a t h w a y si nv i v oo fc a r a s s i u sa u r a t u s a n dt h e r ei sac o n c l u s i o n t h a ti n d u c t i v ee x p r e s s i o no fc y p 1a b yn pf a c i l i t a t e dt h em e t a b o l i s mo f e ，i ns e r u m 3 t h ee f f e c t so fn po nl e v e lo fs e r u me 2a n de x p r e s s i o no fl i v e r e r a o ff e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u sa t6 a n d1 7 t h ee x p e r i m e n tt e m p e r a t u r e so fd i f f e m tr e f e r e n c e sr e f e r e dn p s e n d o c r i n ed i s r u p t i o na r ed i f f e r e n t b a s e do nt h ei m p o r t a n ti n f l u e n c eo f s i g n i f i c a n to ns t e r o i dl e v e li nv i v oo f t e l e o s t ，w ed e s i g n e dt h i se x p e r i m e n t t oi n v e s t i g a t et h ep o t e n t i a li n f l u e n c eo ft e m p e r a t u r e sc h a n g eo nn p e n d o c r i n ed i s r u p t i o n a f t e rm a i n t e n a n c e7 d a y sa t6 c ( r o o mt e m p e r a t u r e ) o r17 。c ( h e a t ) ，f e m a l ec a r a s s i u sa u r a t u sw e r et a k e ni n t r a p e r i t o n e a l i n je c t i o nw i t ht h ed o s eo f10 0 m g k go fn p t h ec o n c e n t r a t i o no fe 2i n s e r u mw a sm e a s u r e db yf l u o r e s c e n ti m m u n o a s s a ya n dt h ee x p r e s s i o no f e r 0 【i nl i v e rw a se v a l u a t e db vi m p c r i n2 4 ha n d 4 8 ho fi n je c t i o n t h e r e s u l ts h o w e dt h a te 2l e v e l sw e r ed e c r e a s e di nb o t h6 a n d17 ( p 草鱼，肝脏 肌肉；n p 处理组的雌鱼的性腺重量有明显的提高， 说明了n p 的雌激素活性。另外还发现n p 对鱼类有一定的免疫毒性， 如鲫鱼暴露于n p 后，壬基酚对鲫鱼巨噬细胞增殖在低浓度表现为诱 导作用，高浓度表现为抑制作用，表明壬基酚对鲫鱼具有潜在的免疫 毒性汹1 。 3 本论文研究的意义 水域环境是环境激素最后的归宿点，鱼类和其它水生动物受到环 境激素已受到环境激素的损伤是不争的事实。由于鱼类的敏感性，因 此是一个理想的研究对象。但对环境激素在水生动物体内的作用生理 过程远未认识清楚，使我们开展环境生态评价，提出保护措施都都缺 乏科学依据。 由于壬基酚具有雌激素效应，因此我们以肝脏q 型雌激素受体( e r q ) 、b 型雌激素受体( e rp ) 为研究对象，探讨壬基酚对雌激素受 体的表达有何种作用。另外，目前的研究少有关于环境激素与体内雌 激素水平关系的研究，因此本研究中探讨了n p 与鲫鱼体内雌激素( e 2 ) 水平之间的关系，查看n p 是否能影响对e 。水平。由于鱼类的细胞色 素p 4 5 0 ( c y p i a ) 对体内e ：的代谢有作用哺9 1 ，因此，我们也探讨了n p 对c y p i a 表达的作用。最后通过免疫组织化学的方法，查看雌激素受 体是否存在于肝脏组织中。本论文利用r t - p c r 技术、荧光免疫技术 和免疫组织化学方法，对壬基酚为代表的环境内分泌干扰物对鲫鱼雌 激素效应进行了系统研究，研究结果将有助了解环境激素是如何影响 鱼类的生殖生理过程，它的作用机制是什么，研究结果对保护我们的 环境有重要启示作用，并为生态保护研究提供相关理论依据，也为环 境内分泌干扰研究提供新的启示和新的思路。另外，我们的研究也有 助于更好地了解环境激素对人类的作用机制，因为鱼类和人类的生殖 机理有许多相似之处。 引言参考文献： 1 】杜克久，徐晓白环境激素研究进展科学通报，2 0 0 0 ，4 5 ( 2 1 ) ：2 2 4 1 - 2 2 5 1 2 徐楠，环境激素与人类疾病国外医学临床生物化学与检验学分册，2 0 0 2 ，2 3 ( 2 ) ：9 7 9 9 3 邓南圣，吴峰环境中的内分泌干扰物北京：化学工业出版社，2 0 0 4 4 西奥科尔伯恩，黛安娜杜迈洛斯基，约翰彼得森迈尔斯我们被偷走的未 来o u rs t o l e nf u t u r e 唐艳鸿译，湖南科学技术出版社，2 0 0 1 年第一版 5 p e t r o v i cm ，e l j a r r a te ，l o p e zd ea l d amj ，b a r c e l od e n d o c r i n ed i s r u p t i n g c o m p o u n d sa n do t h e re m e r g i n gc o n t a m i n a n t si nt h ee n v i r o n m e n t ：as u r v e yo nn e w m o n i t o r i n gs t r a t e g i e sa n do c c u r r e n c ed a t a a n a lb i o a n a lc h e m 2 0 0 4 ，37 8 ：5 4 9 5 6 2 【6 b j d a n z o ，t h ee f f e c to fe n v i r o n m e n t a lh o r m o n e so nr e p r o d u c t i o n c e l l u l a ra n d m o l e c u l a rl i f es c i e n c e ，1 9 9 8 ，5 4 ：1 2 4 9 1 2 6 4 7 】e n m i nz o u 环境污染对几类水生无脊椎动物内分泌功能扰乱的研究现状动物学报， 2 0 0 3 ，4 9 ：5 5 1 5 6 5 【8 环境激素，曾北危，姜平北京：化学工业出版社，2 0 0 5 【9 环境激素与人类未来，孙胜龙北京：化学工业出版社，2 0 0 5 1 0 w a i n w r i g h te s ，m o r am a ，s e r i c a n oj l ，e ta 1 c h l o r i n a t e dh y d r o c a r b o n s a n d b i o m a r k e r so fe x p o s u r ei nw a d i n gb i r d sa n df i s ho ft h el o w e rr i og r a n d ev a l l e y t e x a s a r c he n v i r o nc o n t a m t o x i c o l ，2 0 0 1 ，4 0 ：1 0 1 - 11 1 11 b e r g e r o nj m ，c r e w sd ，m c l a c h l a nj a p c b sa se n v i r o n m e n t a le s t r o g e n s ：t u r t l e s e xd e t e r m i n a t i o na sab i o m a r k e ro fe n v i r o n m e n t a lc o n t a m i n a t i o n e n v i r o n m e n t a l h e a l t hp e r s p e c t i v e s ，19 9 410 2 ：7 8 0 - 7 81 1 2 张浩，曾样贵，程薇波，等壬基酚对成年雄性s d 大鼠生殖功能的影响四 川大学学报( 医学版) ，2 0 0 3 ，3 4 ( 2 ) ：2 9 5 2 9 7 13 g a u g e rk j ，k a t oyh a r a g u c h ik p o l y c h l o r i n a t e db i p h e n y l s ( p c b s ) e x e r t t h y r o i dh o r m o n e - l i k ee f f e c t si nt h ef e t a lr a tb r a i nb u td on o tb i n dt ot h y r o i dh o r m o n e r e c e p t o r s e n v i r o n m e n t a lh e a l t hp e r s p e c t i v e s ，2 0 0 4 ，11 2 ( 5 ) ：516 5 2 3 14 】z o e l l e rr t ，c r o f l o nk m t h y r o i dh o r m o n ea c t i o ni nf e t a lb r a i nd e v e l o p m e n ta n d p o t e n t i a lf o rd i s r u p t i o nb ye n v i r o n m e n t a lc h e m i c a l s n e u r o t o x i c o l o g y , 2 0 0 0 ，2l ( 6 ) ： 9 3 5 4 5 1 5 s c h a n t zs l ，w i d h o l mj j c o g n i t i v ee f f e c t so fe n d o c r i n e d i s r u p t i n gc h e m i c a l si n a n i m a l s e n v i r o n m e n t a lh e a l t hp e r s p e c t i v e s ，2 0 0 1 ，1 0 9 ( 1 2 ) ：11 9 7 1 2 0 6 16 c h u n gy wc l e m e n sl g e f f e c t so fp e r i n a t a le x p o s u r et op o l y c h l o r i n a t e d b i p h e n y l so nd e v e l o p m e n to f f e m a l es e x u a lb e h a v i or e n v i r o n c o n t a m t o x i c o l ，19 9 9 ， 6 2 ：6 6 4 6 7 0 1 7 h e l e nt r y p h o n a s i m m u n o t o x i c i r yo fp c b s ( a r o c l o r s ) i nr e l a t i o nt og r e a tl a k e s e n v i r o n m e n t a lh e a l t hp e r s p e c t i v e s ，19 9 5 ，10 3 ( s u p p l e m e n t9 ) ：3 5 4 6 【1 8 林浩然鱼类生理学广东：广东教育出版社，1 9 9 9 ：1 4 6 2 0 2 19 a r n a u dm e n u e t a ，i s a b e l l ea n g l a d e a ，g i l l e sf l o u r i o t a ，e ta 1 t i s s u e s p e c i f i c e x p r e s s i o no ft w os t r u c t u r a l l yd i f f e r e n te s t r o g e nr e c e p t o ra l p h ai s o f o r m sa l o n gt h e f e m a l er e p r o d u c t i v ea x i so fa no v i p a r o u ss p e c i e s ，t h er a i n b o wt r o u t b i o l o g yo f r e p r o d u c t i o n ，2 0 0 16 5 ，1 5 4 8 1 5 5 7 2 0 e n m a r ke ，j ag u s t a f s s o n e s t r o g e nr e c e p t o r 肛_ an o v e lr e c e p t o ro p e n su pn e w p o s s i b i l i t i e sf o rc a n c e rd i a g n o s i sa n dt r e a t m e n t e n d o c r i n e r e l a t e dc a n c e r ，19 9 8 ，5 ： 2 1 3 2 2 2 【2 1 g r e e ns ，w a i t e rp ，k u m a rv ，e ta 1 h u m a no e s t r o g e nr e c e p t o rc d n a ：s e q u e n c e ， e x p r e s s i o na n dh o m o l o g yt ov e r b a n a t u r e ，1 9 8 6 ，3 2 0 ：1 3 4 1 3 9 【2 2 k u i p e rg g j m ，e n m a r ke ，p e l t o h u i k k om ，e ta 1 c l o n i n go fan o v e le s t r o g e n r e c e p t o re x p r e s s e di nt h er a tp r o s t a t ea n do v a r y p r o cn a t la c a ds c iu s a ，19 9 6 ，9 3 ： 5 9 2 5 5 9 3 0 2 3 t o m a sb a r k h e m ，b oc a r l s s o n ，y v o n n en i l s s o n d i f f e r e n t i a lr e s p o n s eo fe s t r o g e n r e c e p t o ra n de s 仃o g e nr e c e p t o rt op a r t i a le s t r o g e na g o n i s t s a n t a g o n i s t s m o l e c u l a r p h a r m a c o l o g y1 9 9 8 ，5 4 ：1 0 5 1 1 2 2 4 】a nj ，r i b e i r or c ，w e b bp ，e ta 1 e s t r a d i o lr e p r e s s i o no ft u m o rn e c r o s i sf a c t o r a l p h at r a n s c r i p t i o nr e q u i r e se s t r o g e nr e c e p t o ra c t i v a t i o nf u n c t i o n 2a n di se n h a n c e db y c o a c t i v a t i o r s p r o cn a t la c a ds c iu s a ，1 9 9 9 ，9 6 ：1 5 1 6 1 1 5 1 6 6 2 5 h a w k i n sm b ，t h o r n t o nj w ，c r e w sd ，e ta 1 i d e n t i f i c a t i o no fat h i r dd i s t i n c t e s t r o g e nr e c e p t o ra n dr e c l a s s i f i c a t i o no fe s t r o g e nr e c e p t o r si nt e l e o s t s p r o cn a t la c a d s c iu s a ，2 0 0 0 ，9 7 ( 2 0 ) ：10 7 51 10 7 5 6 2 6 】h a l ms ，m a r t n e z r o d r i g u e zgr o d r i g u e zl c l o n i n g ，c h a r a c t e r i s a t i o n ，a n d e x p r e s s i o no ft h r e eo e s t r o g e nr e c e p t o r s ( e r a ，e r l 31a n de r 3 2 ) i nt h ee u r o p e a ns e a b a s s ，d i c e n t r a r c h u sl a b r a x m o l e c u l a ra n dc e l l u l a re n d o c r i n o l o g y ，2 0 0 4 ，2 2 3 ：6 3 7 5 1 2 2 7 h a w k i n sm b ，g o d w i nj ，c r e w sd t h ed i s t r i b u t i o n so ft h ed u p l i c a t eo e s t r o g e n r e c e p t o r s e r b e t aa n de r b e t ai nt h ef o r e b r a i no ft h ea t l a n t i cc r o a k e r ( m i c r o p o g o n i