常用试剂配制.docx

常用试剂书山有路 2008-08-25 19:40:18 阅读35 评论0 字号：大中小订阅 氨苄青霉素组分浓度 50mg/ml 氨苄青霉素配制量 10ml配制方法 1称取0.5g Ampicillin置于10ml塑料离心管中。2加入5ml灭菌水，充分混合溶解之后定容至10ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（200微升一管）后，置于20保存。卡那霉素组分浓度 50mg/ml卡那霉素配制量 50ml配制方法 1称取2.5g 卡那霉素置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容50ml。30.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。RNase A组分浓度 10mg/ml RNase A 配制量 50ml配制方法 1取0.5g RNase A置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容50ml。3100煮沸15min,缓慢冷却至室温，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。IPTG组分浓度 24mg/ml IPTG 配制量 50ml配制方法 1称取1.2g IPTG置于50ml塑料离心管中。2加入40ml灭菌水，充分混合溶解之后定容50ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。X-Gal组分浓度 20mg/ml X-Gal 配制量 50ml配制方法 1称取1g X-Gal置于50ml塑料离心管中。2加入40mlDMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解之后定容至50ml。3小份分装（1ml一管）后，置于20保存。DTT组分浓度 1M DTT 配制量 10ml配制方法 1称取1.54g DTT置于15ml塑料离心管中。2加入8ml的10mM NaAc（pH5.2），充分混合溶解之后定容至10ml。3用0.22m滤膜过滤除菌，小份分装（1ml一管）后，置于20保存。EDTA溶液组分浓度 0.5M EDTA配制量1L配制方法 1称取186.1g Na2EDTA?2H2O置于1L烧杯中。2加入800ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。3用NaOH调节调节pH值至8.0（约20gNaOH），当pH接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。4小份分装后，高温高压灭菌，室温保存。LB(Luria-Bertani)培养液、平板的配制配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10gNaCl 10g摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在 15 1bf/in2(1.034105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min。LB 琼脂平板的配制：先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖 15g /L，同法高压蒸汽灭菌 20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需3050ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4备用。琼脂糖凝胶的配制根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。P1、P2、P3的配制P1 的配制在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA?2H2O 3.72g，用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20SDS 50ml，调整容积至 1 升。P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。常用缓冲液：TEpH 7.410mmol/LTris?Cl (pH7.4)1mmol/L EDTA(pH8.0)pH 7.610mmol/LTris?Cl (pH7.6)1mmol/L EDTA(pH8.0)pH 8.010mmol/LTris?Cl (pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)STE(亦称 TEN)0.1mmol/L NaCl10mmol/LTris?Cl (pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)STET0.1mmol/L NaCl10mmol/LTris?Cl (pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)5%Triton X-100TNT10mmol/LTris?Cl (pH8.0)150mmol/L NaCl0.05% Tween 20电泳缓冲液Tris-乙酸（TAE）：50浓贮存液（每升）：242g Tris 碱57.1ml 冰乙酸100ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释50倍。Tris-磷酸（TPE）：10浓贮存液（每升）：108g Tris 碱15.5ml 85磷酸（1.679g /ml）40ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释10倍。Tris-硼酸（TBE）：5浓贮存液（每升）：54g Tris 碱27.5g 硼酸20ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)使用时再稀释10倍。碱性缓冲液：1使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH2ml 0.5mmol/L EDTA(pH8.0)Tris-甘氨酸：5浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3）50ml 10%SDS（电泳级）2SDS 凝胶加样缓冲液100mmol/L Tris?HCl(pH6.8)200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）4%SDS（电泳级）0.2溴酚蓝20甘油30丙烯酰胺：将29g 丙烯酰胺和1gN,N亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。1mol/L CaCl2：在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2.6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于20。2.5mol/L CaCl2：在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2.6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于20。80mM CaCl2(500ml) 0.08*110.99*0.5=4.4393g1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于20。0.5mol/L EDTA(pH8.0)：372.24*0.5*0.2=37.224g二水乙二胺四乙酸二钠，在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用大约5g的NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后DEPC水定容至200ml，分装后高压灭菌备用。溴化乙锭（10mg/ml）：在100ml水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。1mol/LMgCl2：在800ml水中溶解203.3gMgCl2?6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。酚：氯仿：把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris?Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris?Cl(pH7.6)液层，保存于4。磷酸缓冲盐溶液（PBS）：在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 升，高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。乙酸钾溶液（用于碱裂解）：在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml;水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。1mol/L tris.HCl：在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入约50ml浓HCl调节pH至所需值。pH HCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。Tris 缓冲盐溶液（TBS）：在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。5mmol/LNH4Ac 溶液：秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液：秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4冰箱贮存备用。10%十二烷基硫酸钠（SDS）：在900ml水中溶解100g 电泳级SDS，加热至68助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：1 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量121.1 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 按下表量加入浓盐酸调节所需要的pH值。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。10TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0)组份浓度：100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA配制量：1 L配制方法：1. 量取下列溶液，置于1 L烧杯中。2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。3. 将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。4. 室温保存。1.5 M Tris-HCl (pH8.8)组份浓度：1.5 M Tris-HCl配制量：1 L配制方法：1. 称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 用浓盐酸调节pH值至8.8。4. 将溶液定容至1 L。5. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高1，溶液的pH值大约降低0.03个单位。4m LiCl 200ml(DEPC处理) 48.33g溶解定容至200mlPBS Buffer组份浓度：137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4配制量：1 L配制方法：1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。3. 滴加浓盐酸将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。4. 高温高压灭菌后，室温保存。注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。10 M 醋酸铵组份浓度：10 M 醋酸铵配制量：100 ml配制方法： 1. 称量77.1 g醋酸铵置于100200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至100 ml。3. 使用0.22 mm滤膜过滤除菌。4. 密封瓶口于室温保存。注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1. 使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须在160对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。2. 操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚应贮存于-20，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68水浴中使苯酚充分融解。 加入羟基喹啉（8-Quinolinol）至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。 加入等体积的1 M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤。 加入等体积的0.1 M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力搅拌器搅拌15分钟，静置使其充分分层后，除去上层水相。 重复操作步骤，稍微残留部分上层水相。 使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。 将苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。苯酚/氯仿/异戊醇 (25 : 24 : 1)配制方法：1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1）。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4保存。10% (W/V) SDS组份浓度：10% (W/V)SDS配制量：100ml配制方法：1.称量10g高纯度的SDS置于100-200ml烧杯中，加入约80ml的去离子水，68加入溶解2.滴加浓盐酸调节pH值至7.23.将溶液定容至100ml后，室温保存。2 N NaOH组份浓度：2 N NaOH配制量：100 ml配制方法：1. 量取80 ml去离子水置于100200 ml塑料烧杯中（NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂）。2. 称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液体积定容至100 ml。4. 将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。2.5 N HCl组份浓度：2.5 N HCl配制量：100 ml配制方法：1. 在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓盐酸（11.6 N），均匀混合。2. 室温保存。5 M NaCl组份浓度：5 M NaCl配制量：1 L配制方法：1. 称取292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。2. 加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。3. 高温高压灭菌后，4保存。3 M 醋酸钠(pH5.2)组份浓度：3M 醋酸钠 配制量：100ml配制方法： 1.称量40.8g NaAc3H2O置于100-200ml烧杯中，加入月40ml的去离子水搅拌溶解2.加入约10ml冰醋酸调节pH值至5.23.加去离子水将溶液定容至100ml4高温高压灭菌后，室温保存。20% (W/V) Glucose组份浓度：20% (W/V) Glucose配制量：100 ml配制方法：1. 称取20 g Glucose置于