（食品科学与工程专业论文）蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究.pdf

s t u d yo ne x t r a c t i o no ff l a v o n o i d sa n di t s a n t i o x i d a n tac t i v i t i e sf r o mp r o p o l i s at h e s i ss u b m i t t e dt o s h a a n x iu n i v e r s i t yo fs c i e n c ea n dt e c h n o l o g y i np a r t i a lf u l f i l l m e n to ft h er e q u i r e m e n tf o rt h ed e g r e eo f m a s t e ro fe n g i n e e r i n g d i s s e r t a t i o ns u p e r v i s o r ：p r o f e s s o r y a n g f u l i a n m a y , 2 0 1 0 7川7川i-99 7，iiil舢y 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 摘要 蜂胶是自然界中黄酮类物质含量最高、种类最多的物质之一，具有广泛 的生物药理学价值。蜂胶作为天然的营养保健食品和药品，因其富含抗氧化 剂一黄酮，越来越受到人们的普遍关注，为了使蜂胶中的黄酮发挥更好的社 会效益和经济效益，改进蜂胶黄酮的提取工艺，提高得率以及降低生产成本 是目前亟需解决的问题。本文以蜂胶为原料，通过单因素试验、正交试验和 均匀设计试验确立了蜂胶黄酮的最佳提取工艺条件，研究了蜂胶提取液清除 自由基和抗油脂氧化作用的能力。 首先以芦丁为标准品，利用紫外一可见分光光度法，得出蜂胶黄酮提取 的标准工作曲线，标准曲线的回归方程为：c = o 0 6 4 x - - 0 0 6 4 7 ，其相关系数 r 2 = o 9 9 9 7 呈良好的线性关系；对蜂胶中蜂蜡进行了水浴法、水蒸气法、石 油醚法提取工艺的研究，研究结果表明：蜂蜡的感官指标依次为：石油醚法 优于水蒸气法，水蒸气法优于水浴法；蜂蜡得率依次为：石油醚法优于水浴 法，水浴法优于水蒸气法；黄酮损失率依次为：石油醚法优于水浴法和水蒸 气法，水浴法和水蒸气法相当；石油醚法提取蜂蜡的工艺中，石油醚( 6 0 9 0 ) 为三种沸程的石油醚( 3 0 - 6 0 ，6 0 9 0 ，9 0 - - 1 2 0 ) 中最佳的 提取蜂蜡溶剂。 在提取蜂胶黄酮的工艺过程中，对蜂胶分别进行了半仿生法提取、模 拟半仿生法提取、超声波法浸提和乙醇法浸提。通过单因素试验、正交试 验和均匀设计实验确定最佳提取工艺。研究结果表明，半仿生法提取( 正 交试验) ，提取时间5 0 m i n 、料液比l ：3 0 ( g m 1 ) 、在7 0 条件下提取，黄 酮得率为2 5 0 8 。模拟半仿生法提取( 正交试验) ，提取时间7 5 m i n 、料液 比1 ：2 5 ( g m 1 ) 、在7 0 。c 条件下提取，黄酮得率为3 2 0 6 。超声波法浸提 ( 均匀设计试验) ，乙醇浓度1 0 0 0 6 、回流时间o 5h 、在9 0 条件下提取， 黄酮得率为3 5 0 6 。乙醇法浸提( 单因素试验和正交试验) ，乙醇浓度9 5 、固液比1 ：8 、提取时间1 6 小时、在2 0 条件下提取，黄酮得率为3 1 2 。 分别进行了四种不同提取方法所得提取物的总抗氧化活性的测定、清 除羟自由基能力测定以及清除超氧阴离子能力测定。测定结果均表明：蜂 胶的半仿生提取物抗氧化活性大大优于其它三种方法；考察了蜂胶半仿生 提取物对猪油和菜籽油的抗氧化能力以及蜂胶的半仿生提取物与其他增效 剂之间的协同增效作用。结果表明蜂胶半仿生提取物对猪油和菜籽油的抗 氧化作用明显，在与其他常用增效剂的协同增效方面表现出很大的潜力。 关键词：蜂胶，黄酮类物质，半仿生法，抗氧化性 s t u d yo ne x t r a c t i o no ff l a v o n i d sa n di t s a n t i o x i d a n ta c t i v i t i e sf r o mp r o p o l i s a b s t r a c t p r o p o l i si st h en a t u r a lp r o d u c t o fb e e ，w h i c hc o n t a i n sh i g h e s tc o n c e n t r a t i o n a n dm o s tk i n d so f f l a v o n o i d si nt h ew o r l d ，w i t hw i d e l yb i o l o g i c a la n d p h a r m a c o l o g i c a lv a l u e a sn a t u r a ln u t r i e n t - r i c hh e a l t hf o o df o rh u m a nb e i n g s ， p r o p o l i si sa ni m p o r t a n t s o u r c eo fn a t u r a la n t i o x i d a n t sd u et oi t sr i c hf l a v o n o i d s c o m p o u n d s t oa m p l i f yt h eg r e a ts o c i a la n de c o n o m i cb e n e f i t s ，i ti su r g e n tt o i m p r o v ee x t r a c t i o nt e c h n o l o g yo fp r o p o l i s ，i n c r e a s et h ee x t r a c t i o nr a t ea n d d e c r e a s ep r o d u c i n gc o s t s t h ep r o c e s s i n gt e c h n o l o g yo fp r o p o l i sf l a v o n i o d sf r o m p r o p o l i sw e r eo p t i m i z e db yu s i n gs i n g l ef a c t o re x p e r i m e n t ，o r t h o g o n a la n d u n i f o r md e s i g ne x p e r i m e n t ，a n df l a v o n i o d sw e r ee n r i c h e db ym a c r o p o r o u s a d s o r p t i o nr e s i n t h ea b i l i t yo fp r o p o l i sc l e a ra w a yf r e er a d i c a la n d i t s a n t i o x i d a t i o nw e r ea l s os t u d i e d f i r s t ，s p e c t r o p h o t o m e t r ym e t h o dw a s u s e dt op l o tt h es t a n d a r dc u r v eo f r u t i n t h er e g r e s s i o ne q u a t i o nw a s ：c = o 0 6 4 x - - 0 0 6 4 7a n dt h ec o r r e l a t i o n c o e f f i c i e n tr z0 9 9 9 7 ；t h r e eb e e s w a xf r o mp r o p o l i sw e r ec o m p a r e dw h i c ho n ei n w a t e rb a t hm e t h o d ，w a t e rv a p o rm e t h o d ，p e t r o l e u me t h e rr e s e a r c h ，t h er e s u l t s s h o wt h a t ：s e n s o r yi n d i c a t o r sb e e s w a xf r o mg o o dt op o o rw e r ea sf o l l o w s ： p e t r o l e u me t h e re x t r a c t i o no fb e e s w a x w a t e rv a p o re x t r a c t i o no fb e e s w a x w a t e rb a t he x t r a c t i o nb e e s w a x ；b e e s w a xy i e l dd e c r e a s i n go r d e ra sf o l l o w s ： p e t r o l e u me t h e re x t r a c t i o no fb e e s w a x w a t e r b a t he x t r a c t i o nb e e s w a x w a t e r v a p o re x t r a c t i o no fb e e s w a x ；f l a v o n o i d sl o s sr a t ed e c r e a s i n go r d e ra sf o l l o w s ： p e t r o l e u m e t h e re x t r a c t i o no fb e e s w a x w a t e rb a t he x t r a c t i o nb e e s w a x = w a t e r v a p o r e x t r a c t i o no fb e e s w a x ；p e t r o l e u me t h e r ( 6 0 9 0 。c ) o ft h et h r e ek i n d so f b o i l i n gr a n g eo f p e t r o l e u me t h e r ( 3 0 6 0 。c ，6 0 9 0 。c ，9 0 1 2 0 。c ) i st h eb e s t e x t r a c t i o ns o l v e n tf o rb e e s w a xe x t r a c t i o n i nt h ee x t r a c t i o np r o c e s so ft h ef l a v o n o i d sf r o mp r o p o l i s ，t h ep a i r so f p r o p o l i sw e r ec a r d e do u ts e m i b i o n i ce x t r a c t i o n ，s i m u l a t i o ns e m i b i o n i c e x t r a c t i o n ，u l t r a s o n i ce x t r a c t i o na n de t h a n o le x t r a c t i o n t h es i n g l e f a c t o rt e s t ， o r t h o g o n a lt e s ta n du n i f o r md e s i g ne x p e r i m e n tw e r ed e s i g n e dt od e t e r m i n e t h e o p t i m a le x t r a c t i o np r o c e s s t h er e s u l t ss h o w e dt 1 1 a tf o rs e m i b i o n i c e x t r a c t i o n ( o r t h o g o n a lt e s t ) t h ey i e l do ff l a v o n o i d sw a s2 5 0 8 w h e n1 ：3 0 ( g m 1 ) a st h er a t i oo fr a wm a t e r i a lt os o l v e n tf o r5 0 m i na t7 0 t h er e s u l t ss h o w e dt h a t f o rs i m u l a t es e m i b i o n i ce x t r a c t i o n ( o r t h o g o n a lt e s t ) t h ey i e l do ff l a v o n o i d sw a s 3 2 0 6 w h e n1 ：2 5 ( g m 1 ) a st h er a t i oo fr a wm a t e r i a lt os o l v e n tf o r7 5 m i na t7 0 t h er e s u l t ss h o w e dt h a tf o ru l t r a s o n i ce x t r a c t i o n ( u n i f o r md e s i g ne x p e r i m e n t ) t l l ey i e l do ff l a v o n o i d sw a s3 5 0 6 w h e np r o p o l i sw a ss o a k e di n10 0 a q u e o u s e t h a n o lt os o l v e n tf o r0 5 ha t9 0 t h er e s u l t ss h o w e dt h a tf o re t h a n o l e x t r a c t i o n ( s i n g l e f a c t o re x p e r i m e n t sa n do r t h o g o n a lt e s t ) t h ey i e l do ff l a v o n o i d s w a s31 2 0 w h e n p r o p o l i sw a ss o a k e di n9 5 a q u e o u se t h a n o l ，1 ：8a st h er a t i o o fr a wm a t e r i a lt os o l v e n tf o r1 6 ha t2 0 t h et o t a la n t i o x i d a n ta c t i v i t yw e r em e a s u r e df o rd i f f e r e n te x t r a c t i o n m e t h o d sr e s p e c t i v e l y t h er e s u l t ss h o wt h a t ：p r o p o l i se x t r a c to ft h es e m i b i o n i c a n t i o x i d a n ta c t i v i t yi sm u c h h i g h e rt h a nt h eo t h e rt h r e em e t h o d s ；t h e 目录 摘要一i a b s t r a c t i l 文献综述1 1 1 概述1 1 2 蜂胶的组成1 1 2 1 黄酮类化合物2 1 2 2 蜂胶中黄酮类化合物2 1 3 蜂胶的理化性质4 1 4 蜂胶的生物活性4 1 4 1 蜂胶的抗氧化活性4 1 4 2 蜂胶的抗菌活性5 1 4 3 蜂胶的抗病毒活性5 1 4 4 蜂胶的抗肿瘤活性5 1 4 5 蜂胶的成模性5 1 4 6 蜂胶的安全性5 1 4 7 蜂胶的其他生理活性作用6 1 5 蜂胶中黄酮的提取技术6 1 5 1 使用不同溶剂的室温浸泡法6 1 5 2 加热提取法。6 1 5 3 超临界提取法6 1 5 4 硼高分子电解质法6 1 5 5 半仿生提取法6 1 5 6 超声波辅助提取技术7 1 6 蜂胶的开发前景和应用现状7 1 6 1 蜂胶在食品保鲜中的应用8 1 6 2 蜂胶在医疗和食品保健中的应用8 1 6 3 蜂胶在日用化工方面的应用8 1 6 4 蜂胶在农牧业方面的应用8 1 7 本课题的目的、意义及内容9 2 蜂胶中蜂蜡的分离一1 0 2 1 材料与设备1 1 2 1 1 主要材料与试剂1 1 v 2 1 2 主要仪器与设备1 l 2 2 试验方法1 l 2 2 1 提取方案的确定1 1 2 2 2 蜂蜡的提取方法确定1 3 2 3 结果与讨论1 4 2 3 1 蜂蜡中黄酮曲线方程建立1 4 2 3 2 蜂蜡的提取1 5 2 3 3 三种蜂蜡提取方法的比较1 7 2 4 小结1 9 3 蜂胶中黄酮的提取研究2 0 3 1 半仿生法提取2 0 3 1 1 材料与设备2 0 3 1 2 试验方法2 0 3 1 3 结果与讨论2 2 3 2 模拟半仿生法提取2 5 3 2 1 材料与设备2 5 3 2 2 试验方法2 5 3 2 3 结果与讨论2 6 3 3 超声波法提取2 9 3 3 1 材料与设备2 9 3 3 2 试验方法2 9 3 3 3 结果与讨论3 0 3 4 乙醇浸泡法提取3 2 3 4 1 材料与设备k 3 2 3 4 2 试验方法3 2 3 4 3 结果与讨论。3 3 3 5 四种提取方法的比较3 6 3 6 ，j 、结3 6 4 蜂胶的抗氧化作用研究3 8 4 1 材料与设备3 9 4 1 1 材料与试剂3 9 4 1 2 主要仪器3 9 4 2 试验方法4 0 v i 4 2 1 抗氧化能力的测定4 0 4 2 2 蜂胶半仿生提取物对食用油脂的抗氧化作用研究4 2 4 3 结果与讨论4 3 4 3 1 抗氧化能力的测定4 3 4 3 2 提取物对食用油脂抗氧化能力的测定4 7 4 4 ，j 、结。5 0 5 结论5l 致谢5 2 参考文献5 3 硕士学位期间发表的论文目录5 7 原创性声明及关于学位论文使用授权的声明5 8 i 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 1 文献综述 1 1 概述 蜂胶( p r o p o l i s ) 被誉为“紫色黄金”， 在日本被称为“现代万能药”。 蜂胶是蜜蜂采集植物树脂混合其分泌物加工而成的胶状物，也是胶源植物的遗传物 质和蜜蜂内分泌物的复杂混合物1 一。见图1 1 蜜蜂将蜂胶涂在蜂巢的入口和图1 2 是毛胶 的照片。 图1 - 1蜜蜂将蜂胶涂在蜂巢的入口图1 2 毛胶 f i g 1 - 1b e es p r e a dp r o p o l i so nt h eh i v ee n t r a n c ef i g 1 2r a wg e l 蜂胶对人体健康十分有益且无毒副作用，蜂胶被誉为“神奇的小药库”、 “健康的 保护神 ，是2 1 世纪人类保健的新宠儿。蜂胶主要产于中国、俄罗斯、美国、巴西、墨 西哥、波兰、阿根廷和德国。我国年产蜂胶3 5 0 吨左右，居世界第一位。人类应用蜂胶 的历史可以追溯到几千年前。3 0 0 0 年以前的古埃及人已利用蜂胶为防腐材料来保护尸 体，古代印加人用蜂胶防治传染病，古希腊和古罗马帝国也都有关于蜂胶的记载，公元 六世纪的阿拉伯文献记载：蜂胶可以净化血液。在二十世纪爆发的第二次世界大战中， 苏联红军在战场救护中就曾使用过蜂胶。有资料显示：东方蜜蜂一般不采集蜂胶，西方 蜜蜂往往有采集蜂胶的习性【3 4 1 。蜂胶具有很多医疗和保健功效，现已成为各国科学家 研究的热点。2 0 世纪初以来，蜂胶己引起人们的重视，同时针对蜂胶的研究也逐渐展 开。在中国也被列为国家“九五 重点科技攻关项目之一，并是国家“9 4 8 科技成果 推广项目。 1 2 蜂胶的组成 陕西科技大学硕士学位论文 德国学者k u s t e n m a c h e r 是进行蜂胶化学成分分析的第一人，他于1 9 1 0 年鉴定出肉桂 醇与肉桂酸【5 】。继此各国科学家开始借助不同的仪器和方法对蜂胶成份进行了大量的研 究分析试验。迄今为止已鉴定的蜂胶成分有2 0 0 多种 6 1 ，从化合物来讲，主要有黄酮类化 合物、有机酸类化合物、醛、酯、醇类化合物以及烯、烃、萜类化合物等【7 l 。 蜂胶有“黄酮类化合物的宝库 之称【8 】。蜂胶中的黄酮类化合物具有抗菌、消炎、 止痛、降血脂、杀毒、促进组织再生和增强机体免疫能力等功划9 , 1 0 】。由于黄酮类化合 物的种种优势，目前常将黄酮类化合物的含量作为蜂胶制品最主要的质量指标【l l 】。 1 2 1 黄酮类化合物 由于黄酮类化合物都是呈黄色( f l a v u s ) 和具有4 位羰基，因此，黄酮类化合物 ( f l a v o n o i d s ) 的名称来自黄酮( f l a v o n e ) ，黄酮类化合物具有多种生理作用：芦丁等具有调 节心脏功能；杜鹃素等具有止咳作用；槲皮素等对高血压等有神奇的效果；汉黄岑等有 抗肿瘤的奇效；黄岑等可消炎杀菌；新橙皮甙二氢查耳酮比蔗糖甜2 0 0 0 倍 1 2 ，可做甜 味剂等等。 1 2 2 蜂胶中黄酮类化合物 全世界蜂胶中已经分离鉴定的黄酮类化合物有7 0 多种。这7 0 多种黄酮类化合物可分 为以下几类【1 3 】。黄酮：黄酮类化合物的组成和数量受产地和胶源植物的影响很大。理论 上不存在完全相同的蜂胶；黄烷酮：黄烷酮有比较突出的抗菌性，在医疗和保健品中有 很多应用；查尔酮。 蜂胶中常见黄酮类化合物的结构式如图1 3 。 2 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 陕西科技大学硕士学位论文 h 3 c o c h 3 0 o h o ho 飙李豢 h h o h o h o ho 生松繁 o hoo ho 枘本秘因芹黄索 图1 3 蜂胶中常见的黄酮类化合物的结构式 f i g 1 - 3s t m c t u r eo fc o m m o nf l a v o n o i d si np r o p o l i s h 1 3 蜂胶的理化性质 蜂胶在常温常压下为棕褐色有特殊气味的不透明固体，存放时间过长可变为红棕色 味微苦嚼时粘牙【1 4 】的不透明固体。蜂胶低于1 5 。c 时为硬脆固体，温度超过3 6 c 开始变软。 比重为1 1 2 7 0 k g m 3 ，不溶于水而易溶于丙酮、3 氢氧化钠溶液、苯和酒精1 5 】。 1 4 蜂胶的生物活性 1 4 1 蜂胶的抗氧化活性 蜂胶被称为“双重抗氧化剂”【1 6 1 。蜂胶中的主要抗氧化成分有：咖啡酸苯乙酯( c a p e ) ， 醇、酮、酸、醛、黄酮，萜烯类化合物，a r t e p i l l i n c 等。咖啡酸苯乙酯主要是通过抑制酶 活，降低s o d 的消耗达到抗氧化的日的，r a p t a t 1 7 l 等研究确定出高良姜素和白杨素抗氧 化、清除阴离子自由基能力最强；醇、酮、酸、醛、黄酮和萜烯类化合物主要是通过抑 制羟基自由基和过氧化阴离子的产生起到抗氧化作用；h a y a s h i t 1 s l 等研究发现狁p i l l i n c 的含量直接影响蜂胶的抗亚油酸氧化能力。 4 蜂胶中黄酮炎物质的提取及其抗氧化性的研究 1 4 2 蜂胶的抗菌活性 蜂胶对细菌、霉菌、真菌有较强的抑制作用。m e t e s t a t i n 研究了蜂胶对细菌、霉菌的 抑制作用，研究结果发现：所有菌株均对蜂胶提取液敏感，即蜂胶对所有试验菌株均有 抑制作用；o z c a n 2 0 等研究了蜂胶对真菌的抑制能力，测定结果显示：链格孢敷和青霉 属对所有蜂胶提取液均敏感。t o s i l 2 1 1 等研究不同溶剂蜂胶提取液的抗菌活性，结果发现： 不同提取液均具有抗菌活性且抗菌活性各不相同。 1 4 3 蜂胶的抗病毒活性 a m o r o s 等研究发现：蜂胶可以抑制病毒d n a 和r n a 的合成【2 3 1 ，从而可以达到抗疱 疹病毒一i ( h s v _ 一1 ) 、抗口炎病毒( v s v ) h s v 一2 、腺病毒2 和脊髓灰质炎病毒一2 等几种 d n a 和r n a 病毒的目的。同时，h a r i s h 等研究发现，蜂胶可以一定程度抑制h 病毒l 。 1 4 4 蜂胶的抗肿瘤活性 x g 研究表明：蜂胶的抗肿瘤活性主要体现在增强免疫作用方面。早在1 9 9 0 年就有口本 学者发现分角的提取物具有较强的抗恶性肿瘤活性；最近由相关报道称蜂胶中a r t e p i l l i nc 具有巨噬细胞赋活的作用，可杀死癌细胞，体现强的抗肿瘤活性。 1 4 5 蜂胶的成模性 蜂胶好的成模性体现在它可以减少果蔬的有氧呼吸，降低营养成分的损失，达到很 高的果蔬保鲜目的幽】。 1 4 6 蜂胶的安全性 关于蜂胶安全性的考虑早在9 1 年卫生部按照食品安全性毒理学评价程序就已系 统的进行了实验，结果未有任何一项的阳性反应；在蜂胶保健食品安全性测试方面，傅 剑云等进行了一系列的动物性试验检测，观察期内未出现大( 小) 鼠中毒和死亡的现象【2 7 1 。 ( 1 ) 蜂胶的毒性 李海山【2 8 】进行了蜂胶乙醇提取物( e e p ) m j 齐u 的毒性试验，没出现任何阳性反应，结 果显示蜂胶乙醇提取物( e e p ) 带i j 剂是比较安全的：d o b r o w o l s k i 2 9 1 等进行了蜂胶关于小鼠 的动物试验，观察发现没有小鼠死亡；a r v o u e t - - g r a n d 3 0 等进行了蜂胶提取物对小鼠的 动物试验，结果发现蜂胶提取物对小鼠口服的l d s o 大于7 3 4 0 m g k g ；日本食品分析中心 进行了巴西、中国蜂胶乙醇提取物的急性毒性试验，推测蜂胶的口服剂量l d s o 是3 6 0 0 m g k g 【3 1 1 ；g h i s a l b e r t i 研究发现，猫可以忍受1 0 0 m g k g 蜂胶乙醇提取物的皮下处理； b u r d o c k 3 2 1 进行了蜂胶口服的大剂量试验，试验未出现参试动物死亡。诸多研究结果表 明：蜂胶是安全的。 ( 2 ) 蜂胶的过敏性 对于蜂胶的过敏是次生性的、少数的，原因是复杂的。研究发现，蜂胶的主要致敏 源是：3 一甲基一2 一丁烯咖啡酸( 5 4 ) ，咖啡酸苯乙酯( 8 ) 3 3 1 , 大多数对于蜂胶过敏的 5 陕西科技大学硕士学位论文 人往往只是对胶原植物有一定的过敏反应，因此是次生的和少数的；蜂胶的过敏反应其 实是对过敏源发植物过敏的人体内发生的交叉反应瞰】。 ( 3 ) 蜂胶中铅含量的测定 鉴于对蜂胶中铅含量测定的必要性，徐明借鉴相关的国家标准【3 5 1 ，将干法灰化与湿 法消化相结合测定了蜂胶中的铅含量。 1 4 7 蜂胶的其他生理活性作用 蜂胶还有增强免疫作用、抗突变以及很强的麻醉能力、改善人体微循环作用及增强 药效能力，在创伤、烧伤、护肤、美容等领域也得到广泛的应用 3 6 - 3 8 】，并具有很强的止 痛、护肤、除臭、分解色素、止痒、促进组织再生、抗疲劳等作用。蜂胶被美誉为“2 0 世纪人类发现的最伟大的天然物质 3 9 1 。 1 5 蜂胶中黄酮的提取技术 国内外报道的有关蜂胶的提取方法较多，如：溶剂浸泡法、水浴回流乙醇提取法、 硼高分子电解质法、超声波辅助提取法、微波辅助提取方法等，概括起来有以下几种。 1 5 1 使用不同溶剂的室温浸泡法 不同溶剂的室温浸泡法简单，所需温度不高，条件易于控制，一般提取时间较长。 常用方法主要有：蜂胶的乙醇提取法、蜂胶的乙醇快速提取法、蜂胶的乙二醇提取法、 蜂胶的水提取法、蜂胶的油提取法、水溶性干粉状蜂胶提取法、蜂胶的乙酸乙酯提取法。 1 5 2 加热提取法 ( 1 ) 水浴回流乙醇提取法 ( 2 ) 水溶性衍生物提取法 ( 3 ) 二氯甲烷加热提取法 1 5 3 超临界提取法 超临界c 0 2 提取技术被认为是当前最先进的提取技术。该方法是非热提取，可避免 有效成分的热损失，提取纯度高：缺点是：设备投资较高，只能选择脂类物质，蜂胶的 提取率也较低。 1 5 4 硼高分子电解质法 硼高分子电解质法是日本科学家的最新成果，主要原理是将硼高分子电解物与蜂胶 的纤维素混合，电解质不断分解蜂胶，得到生物活性好的提取物。 1 5 5 半仿生提取法 1 9 9 5 年张兆旺等【加】利用“灰思维方式”提出了“半仿生提取法( s e m i b i o n i ce x t r a c t i o n m e t h o d ，简称s b e 法) 的提取新概念。“半仿生提取法”能体现中医临床用药的综合作用 特点，符合口服给药经胃肠道转运吸收的原理。具体方法是药料先用一定的酸水取继 以碱水提取，提取液经过滤、浓缩，制成制剂，模拟口服给药及药物经胃肠道转运的原 6 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 理，为经消化道给药的中药试剂设计的一种提取工艺【4 1 1 。这方法沿袭的高温煎煮法，长 时间高温煎煮会影响了许多有效活性成分的药效。为此有人建议将提取温度改为接近人 体的温度，并且引进酶催化，使药物转化成人体易于吸收的综合活性混合物，这样更符 合辩证施治的中医药理论。 半仿生提取法已成功应用于提取杜仲叶黄酮i 4 2 1 、葛根黄酮4 3 1 。国内已有关于半仿生 法提取香椿叶脚】、苦参【4 5 】中黄酮的相关报道。但蜂胶中总黄酮的半仿生提取工艺研究尚 未见报道。 1 5 6 超声波辅助提取法 超声波辅助提取法是黄酮提取实验中应用最多的一种一起辅助提取法，优点是：操 作简单、省时、得率高、无污染，同时还可以最大限度的保留样品中的有效成分。缺点 是：由于超声波提取是利用超声波的空化作用和其次级效应加速成分的扩散释放，使之 快速充分的与溶剂混合提取，往往会有一定量的小分子杂质溶出影响提取物的纯度：其 次，超声波提取对于容器的要求也较高，不同的容器对提取结果影响较大。 此外，还有人将微波提取法，高压加工技术提取等方法也应用于蜂胶的提取。 1 6 蜂胶的开发前景和应用现状 蜂胶作为天然的防腐保鲜剂和医疗保健品，将其添加于食品中既可发挥其防腐保鲜、 抗氧化作用，又可达到食疗效果。目前食品安全问题已成为制约我国食品走向国际的重 要因素，因此提高食品的安全性已成为行业亟须解决的技术性问题。 随着中国成功地加入w t o 的到来，中国的保健品行业将会受到很大的冲击，假冒伪 劣和粗制滥造的保健品将会悄然退出历史舞台，取而代之的是药食兼用、安全、无毒副 作用、无污染的绿色保健品，绿色保健品将成为主宰市场的新宠儿，而蜂胶、花粉和蜂 王浆由于富含长寿因子而迎合了人们追求返璞归真的养生心理，同时也顺应了世界保健 品研制与开发的趋势。对蜂胶、花粉和蜂王浆中所含的天然免疫因子和奇妙物质进行提 取加工制的的蜂胶制品，具有天然防腐剂、提取完全、对人体肠道有益细菌、有害细菌 可双向选择等特点，不像人工合成的抗生素没有区别地对有益细菌和致病细菌都起到很 强的杀灭功效，这种抗生素长期服用会有食欲下降、精神不振等副作用。而蜂胶类保健 品的安全无害是蜜蜂在同自然界的长期进化过程中所找到的答案。同时我们坚信，随着 科学的发展和分析手段的不断改进，蜂胶、花粉和蜂王浆的药理学成份和保健功能将会 得到更进一步的发掘，此类保健品的开发应用前景广阔。蜂胶类制品几乎都由蜂胶、花 粉和蜂王浆三种物质合成的，这三种基准物质的药理学成份、功效都不相同，它们既可 单独食用，也可按比例混在起食用。进行有效的提取后，它们之间的成份、功效将会 达到相辅相成的效果，更能发挥祛病强身、营养保健的强大作用，从而更好地为人类的 7 陕西科技大学硕士学位论文 健康做出贡献，因此该类保健品利用价值很高，市场潜力很大。 1 6 1 蜂胶在食品保鲜中的应用 ( 1 ) 蜂胶在果蔬保鲜中的应用 蜂胶在果蔬保鲜中的应用越来越多。已成功应用于生产的有：苹果、人参、葡萄、 番茄和菜豆。在研究中的还有：哈密瓜、菠萝、豆角、青辣椒等等。 ( 2 ) 蜂胶在肉及肉制品保鲜中的应用 汤风霞等研究了蜂胶对猪肉的保鲜，初步研究发现蜂胶醇提液对新鲜猪肉有很好的 保鲜效果。 ( 3 ) 蜂胶在蛋、奶及其制品保鲜中的应用 宋心仿研究发现：应用蜂胶对鸡蛋进行保鲜的过程中，蜂胶可以大大的提高鸡蛋的 保质期，其中喷洒式的方法大大优于将鸡蛋浸泡在蜂胶液中的保鲜效果4 6 】； 蜂胶对奶及其制品的保鲜研究较多。主要集中在液态乳制品方面，利用蜂胶对致病 菌有一定的抑制作用而广泛应用。y a n gsy 1 4 7 1 等研究了蜂胶对酸奶的保鲜，效果明显。 ( 4 ) 蜂胶在水产品保鲜中的应用 蜂胶已成功应用于鱼、虾类的保鲜，蜂胶对水产品中的细菌、致病菌有一定的抑制 作用，大大提高了鱼、虾类水产品的保鲜期。 1 6 2 蜂胶在医疗和食品保健中的应用 蜂胶在医疗方面的应用广泛：蜂胶的消炎、止痛功能越来越多地用于烧伤、烫伤的 治疗；蜂胶有很好的抑制肿瘤神效，可以抑制肿瘤细胞的新陈代谢，越来越多的抗癌药 物中引入了蜂胶；蜂胶还有降血脂、降血糖的神奇功效，清除血管垃圾，因此获得心血 管“清道夫”的美誉；由于蜂胶有如此多的神奇功能，越来越多的蜂胶保健品进入人们 的生活：蜂胶乳饮品、蜂胶碳酸饮料等等。 1 6 3 蜂胶在日用化工方面的应用 蜂胶有消炎、止痛、杀菌、促进组织再生作用，有利于保护皮肤，防止某些皮肤病， 有助于坏死皮脱落；促进表皮更新，目前有蜂胶牙膏、沐浴露、护肤霜、洗发水、蜂胶 酊、洗面奶、洗手液、香皂等产品热销，蜂胶中由于有萜烯类、芳香酸及酯等物质的存 在，有特殊香气，用作香水不仅香气溢人，还可以用来驱逐蚊蝇。 1 6 4 蜂胶在农牧业方面的应用 蜂胶有抗氧化、抗菌、抑制植物萌芽等生长的作用，并且蜂胶中酮类、酚类、醇类、 醛类物质有抗菌、防腐的作用。故用于蜂胶植物调节剂、防腐剂、杀虫剂等方面。蜂胶 有促进动物生长发育的功效，可作为饲料添加剂，试验研究发现：用添加蜂胶的饲料喂 养猪，同等时间内比没添加蜂胶的饲料喂养的猪体重上升快，节省饲料。有最新报道， 蜂胶对蜂螨有麻醉杀灭作用，蜂胶杀螨剂的应用将使蜂产品中农药残留和蜂螨产生抗药 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 性的问题得到解决。 1 7 本课题的目的、意义及内容 纵观文献资料可以看出，人们对蜂蜜、蜂王浆和蜂花粉的研究起步较早，对它们的 功能了解较多，应用较广，而对蜂胶的研究则较少，起步也较晚。目前，对蜂胶的开发 正处于热点，它是蜜蜂的又一代高级蜂产品。生产蜂胶的厂家大多数是中小型企业，技 术含量低，对蜂胶的加工和利用程度很低。若能提高蜂产品的加工技术含量，其附加值 将会大幅度增加，将刺激蜂产品行业的成长与壮大，促进全球经济的进一步发展。 因此，开展蜂胶黄酮提取方法及性能的研究，同时让蜂胶更好地造福人类，具有着 广泛的经济及社会效益。本文的研究成果和结论经过进一步的深入可以投入到实际生产 运用中，还可以为中药有效成分提取的研究提供一定科学依据，具有较高的实用价值和 学术参考价值。论文的主要研究内容包括：( 1 ) 蜂胶中蜂蜡的分离；( 2 ) 蜂胶中黄酮类 化合物提取工艺的研究；( 3 ) 蜂胶中黄酮类化合物抗氧化作用的初步研究。 9 陕西科技大学硕士学位论文 2 蜂胶中蜂蜡的分离 蜂蜡又称蜜蜡，见图2 1 散落在花粉间的白色蜡鳞，图2 2 白色蜂蜡建造的新巢脾。 蜂胶中的蜂蜡不溶于水，易溶于有机化合物，以往蜂胶有效成分提取过程中，很少有人 考虑蜂蜡对产品质量的影响，但蜂蜡的存在会影响蜂胶黄酮的提取和分析测定，且残留 在蜂胶中的蜂蜡在食用后不能为人体吸收，是无效成分，降低了蜂胶的品质，故在提取 蜂胶黄酮时需要去除蜂蜡，这样才更适合用于生产保健品，抗氧化剂及药品。 图2 1 散落在花粉间的白色蜡鳞 f i g 2 - 1s c a t t e r e dw h i t ew a xs c a l ea m o n gt h ep o l l e n 图2 2 白色蜂蜡建造的新巢脾 f i g 2 2t h en e wh o n e y c o m bo fw h i t e b e e s w a x 蜂蜡是由约两周龄蜜蜂( 工蜂) 腹部的4 对蜡腺分泌的物质。它的成分是棕榈酸蜂花 ( 醇) 酯和蜂酸等混合物。蜂蜡的主要成分为高级烷烃、游离脂肪酸、有机酸类、游离 脂肪醇和碳水化合物。此外，还有类胡萝b 素、维生素a 、芳香物质等。蜂蜡的商品等 级是按颜色拉划分的。而蜂蜡颜色在一定程度上取决于蜜蜂所吃的花粉。蜂蜡溶于乙醚、 四氯化碳、氯仿，部分溶于冷的苯、二硫化碳和沸腾的乙醇，少量溶于冷的乙醇，但只 是其中的游离酸溶解在乙醇中，而酯类则不溶解。蜂蜡在常温下不溶于水和矿物油。蜂 蜡的物理常数见表2 1 。 9 2 1 蜂蜡的物理常数 t a b l e 2 - 1t h ep h y s i c a lc o n s t a n t so f b e e s w a x 1 0 蜂胶中黄酮类物质的提取及其抗氧化性的研究 蜂胶中蜂蜡的分离提取是蜂胶中黄酮类物质提取工艺研