天然产物化学全套提取分离方法课件.ppt

天然药物化学,ChemistryofNaturalMedicines,卫生部规划教材,ChemistryofNaturalProducts,第一章,总论（Generation）,本章内容,第一节绪论第二节生物合成第三节提取分离方法第四节结构研究方法,第三节提取分离方法,一、提取法：1.溶剂提取法（extractionwithsolvent）原理：相似相溶常用提取溶剂极性顺序：环己烷、甲苯石油醚（3060、6090）乙醚氯仿（CHCl3，常用二氯甲烷代替）乙酸乙酯（EtOAc）正丁醇（BuOH）丙酮乙醇（EtOH）RP-8RP-2。,第三节提取分离方法（MethodsofExtractionandIsolation）,P24,流动相(洗脱剂)：MeOH-H2O，CH3CN-H2O洗脱顺序：分离极性大的成分，极性大者先洗脱下来,流动相(洗脱剂)：MeOH-H2O，CH3CN-H2O,加压液相柱色谱法,普通柱色谱：固定相粒径大柱效低耗时长溶剂用量大,加压柱色谱：固定相粒径小柱效高时间短溶剂用量小,P24,2019/12/14,27,可编辑,加压液相色谱：a).中低压液相色谱：lobar柱b).高压（效）液相色谱：HPLCc).超高效液相色谱法：UPLC,泵,检测器,液滴逆流色谱(DCCC)：一种液-液分配色谱，流动相呈液滴形式垂直上升或下降，通过固定相的液柱，实现物质的逆流色谱分离。特点：不易乳化，样品可定量回收，分离效果好，特别适合于分离皂苷等水溶性成分。,第三节提取分离方法（MethodsofExtractionandIsolation）,液滴逆流色谱(DCCC)示意图,P26,高速逆流色谱（HSCCC）,第三节提取分离方法（MethodsofExtractionandIsolation）,通过特定的高速行星式旋转所产生的离心力场作用，使无载体支持的固定相稳定地保留在蛇形管内，并使流动相单向、低速通过固定相，实现连续逆流萃取分离物质的目的。用于各种物质的分离，包括蛋白、酶、三萜、生物碱、皂苷等。,P26,3.1吸附分类：物理吸附：相似相吸，吸附解析发生迅速。吸附剂如硅胶、氧化铝、活性炭等；化学吸附：不可逆性。如碱性氧化铝对酚酸性成分的吸附，硅胶对生物碱的吸附等。半化学吸附：聚酰胺对酚酸类、醌类的氢键吸附。,第三节提取分离方法,3.根据物质的吸附性差别进行分离吸附色谱法,P27,物理吸附：吸附原理：相似相吸影响吸附过程的三要素：吸附剂（固定相）溶质（被分离物质）溶剂（洗脱剂，展开剂，流动相）,第三节提取分离方法,P28,3.2硅胶、氧化铝：极性吸附剂：载样量大，吸附力强硅胶：应用最广，适用于各类成分分离氧化铝：有中性、酸性、碱性氧化铝。碱性氧化铝不适合于分离酸性成分，多用于分离生物碱。,第三节提取分离方法,P28,3.2硅胶、氧化铝：被分离物质吸附力与结构的关系被分离物质极性大，吸附力强，Rf值小，洗脱难，后被洗脱下来。官能团极性大小相对一般排列顺序：-COOHAr-OHR-OHR-NH2,RNHR,RNRRR-CO-NRRRCHORCORRCOORRORRH,第三节提取分离方法,P28,溶剂(洗脱剂)的极性与洗脱力的关系洗脱剂极性越大,洗脱力越强.,练习:从黄花夹竹桃果仁中分离到七种强心苷成分,比较极性大小和硅胶柱上洗脱顺序.,第三节提取分离方法,第三节提取分离方法,答案：,1.极性大小：黄夹苷A黄夹苷B次苷D次苷C次苷A次苷B2.硅胶柱上的出柱顺序：后先,3.3活性炭非极性吸附剂吸附力与结构的关系被分离物质极性越小，吸附越牢固。洗脱力与溶剂的关系100%醇含水醇H2O应用:脱色等。,第三节提取分离方法,P28,3.4聚酰胺(Polyamide)色谱法：是由己酰胺聚合成的一类高分子化合物。,第三节提取分离方法,分离原理：主要通过酰胺键与酚羟基、酸、醌等形成氢键，产生吸附作用。吸附力取决于形成氢键缔合的能力。,P31,3.4聚酰胺吸附力与结构的关系a.形成氢键的基团数目越多,吸附力越强;b.形成分子内氢键者,吸附力减少;,第三节提取分离方法,P31,c.芳香化程度越高或共轭键越多,吸附力越强;,第三节提取分离方法,溶剂的洗脱能力水醇丙酮ASiO2-TLCRf:ABCPolyamideTLC,Rf:CBA,第三节提取分离方法,答案：,3.5大孔吸附树脂(macro-reticularresin)组成:苯乙烯，二乙烯苯和致孔剂分离原理:吸附(范德华力和氢键)和分子筛作用(多孔性结构)树脂类型:非极性、中极性和极性三种。非极性：由苯乙烯和二乙烯苯缩合而成，故又称芳香吸附树脂。如D101型弱极性：如AB-8型。极性：含酰氨基、氰基、酚羟基等含氮、氧、硫不同极性功能的吸附树脂。,第三节提取分离方法,P32,3.5大孔吸附树脂洗脱剂:H2O及不同比例的含水醇。洗脱分离:H2O洗:糖,水溶性色素30%EtOH/H2O:极性大的成分50-75%EtOH:皂苷类95%EtOH:极性小成分应用:除多糖,水溶性色素,富集苷类成分,第三节提取分离方法,透析法:半透膜,分子筛滤过作用超滤法:分子大小不同,扩散速度不同超速离心法:溶质在超速离心作用下具有不同的沉降性或浮游性凝胶滤过法:分子筛的作用(凝胶渗透色谱,分子筛滤过,排阻色谱),被分离物质按分子由大到小的顺序流出色谱柱.,4.根据物质分子大小差别进行分离凝胶滤过法,第三节提取分离方法,4.1主要的几种方法,P34,被分离物质按分子量由大到小的顺序流出色谱柱.,4.2凝胶种类:葡聚糖凝胶(SephadexG):只适于在水中应用,分离多糖、蛋白质等.羟丙基葡聚糖凝胶(SephadexLH-20)：适用于各类化合物的分离，除具有分子筛的特性外，还起到反相分配色谱的效果。常用溶剂有甲醇-水、氯仿-甲醇等。,第三节提取分离方法,4.根据物质分子大小差别进行分离凝胶滤过法,P35,4.3.膜分离技术原理：利用小分子物质在溶液中可通过具有一定孔径的膜，而大分子物质不能通过的性质进行分离。常用于蛋白质、多肽、多糖等与小分子物质的分离。分类：微滤（0.1m）、超滤（10100nm）、纳滤（110nm）、反渗透（1nm）应用：大豆蛋白的工业化生产（超滤）、生产注射液、口服液、医用酒精、医疗用水等,四、提取分离方法,P37,5.根据物质离解程度不同进行分离离子交换法固定相：离子交换树脂（聚苯乙烯高分子化合物，引入交换基团）分类：阳离子交换树脂：强酸型RSO3-H+弱酸型RCOO-H+阴离子交换树脂：强碱型RN+(CH3)3Cl-弱碱型RN