CRP及临床应用.ppt

C-反应蛋白及临床应用,1,ProteinStructureCRP结构,2,CRP介绍,由5个结构相同的未糖基化多肽亚单位连接而成，其亚单位由187个氨基酸组成，电镜下呈环状对称的五面体，不溶于水，结晶为菱形，可能被硫酸钠沉淀，不耐热(5630min即被破坏)其电泳迁移率在和N蛋白正常.,3,CRP介绍,在急性炎症病人血清中出现可以结合肺炎球菌细胞壁C-多糖的蛋白质(1941年发现)，命名C-反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)CRP可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。,4,C反应蛋白的生理和生化,在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合成迅速。正常合成率为l10mgd，急性炎症时每天合成超过lg/d。在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中20是合成CRP。当IL-6刺激物缺乏时，在24h内合成率降至正常。循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结合，可快速的被清除。,5,CRP的生物学功能-机理,结合外源性物质细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。CRP保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各种炎症介子的能力。,6,CRP的生物学功能-机理,结合配体的CRP激活下列生物系统，导致配体的消除：CRP对补体系统的激活.CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性。CRP的调理性质，调理即刺激细胞吞噬作用。CRP和血小板激活因子(PAF)结合抑制PAF刺激的血小板聚集。,7,CRP的生物学功能-机理,CRP具有多效性的作用。当抑制干扰素的合成时，CRP可诱导IL-1受体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放.CRP也可诱导炎症反应。CRP向上-调节内皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL-8，增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1的表达和活性、增加IL-1,IL-6,IL-18,和肿瘤坏死因子的释放.,8,CRP的生物学功能-机理,识别和启动靶效应细胞及其产物将入侵微生物吞噬溶解从而从组织中清除。,9,方法灵敏度参考献试管内沉淀试验-JExpMed1930;52561毛细管内沉淀试验1020mg/LAmJMed1950;8445改良平板双扩散法1020mg/LIntArchAllergy1962改良琼脂柱扩散法3.0mg/LProcSocExpBiol1955改良单扩散法1.0mg/LActaPatholMicrobiolScand琼脂糖凝胶电泳法1.0mg/LClinChimActa1969放射电免疫扩散法10g/LJClinLabInvest1973补体结合试验0.6mg/LProcSocExpBiol1954胶乳凝集试验1.0mg/LNature(London)1961高敏乳胶增强浊度0.35mg/mlDadeGermany2000荧光抗体法Nature(London)1961放射免疫测定法3g/LJLabClinMed1976,检测方法,10,CRP检测方法-免疫浊度法,可溶性CRP-Ag与可溶性抗CRP-Ab反应,形成可见的网络状沉淀性IC复合物点.IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见的浊度。在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊度法两类。许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测定项目。,11,CRP检测方法-胶乳凝集试验(LAT),将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见的凝集物。胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试剂稳定性佳。,12,检测方法-标记免疫测定,ELISA和免疫发光法和化学发光法等都可用于CRP的测定。化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无同位素污染,试剂稳定,分析速度快。CRP-POCT(床边试验)法ELISA干片法。把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。被测CRP与载体的PC结合。被酶标记的抗CRP单抗结合。可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。,13,检测方法-胶乳增强试验（shCRP）：,常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检测出CRP10mg/L。该检测方法具有较高的灵敏度。超敏C反应蛋白（hs-CRP）是使用高敏感的检测方法，即检测方法具有检测到0.3mg/L的CRP的能力.这个水平（0.110mg/L）的C反应蛋白又被称为超敏C反应蛋白（hsCRP）。,14,CRP检测的评估,1、半定量：胶乳凝集试验等已弃用。2、定量：散射免疫比浊法、透射免疫比浊法：是目前常用方法。检测限度为5150mgL，CV5%。胶乳增强试验-shCRP检测：很大程度提高了敏感度。酶免疫分析和荧光免疫分析：有潜在的灵敏度优势。胶乳增强试验-shCRP检测方法很大程度提高了敏感度。CRP检测对标本的采集也无特殊要求。高浓度的类风湿因子可产生CRP假性升高。CRP筛查的费用远小于其他心血管检查的费用。,15,临床应用_参考范围,16,临床意义,器质性疾病的筛选急性或慢性炎症如伴有细菌感染。自身免疫或免疫复合物病。组织坏死和恶性肿瘤。,17,临床意义感染的诊断与鉴别,CRP在细菌感染发生后68h即开始升高，2448h达到高峰，在感染消除后其含量急骤下降，一周内可恢复正常。CRP在病毒感染时无显著升高。革兰阴性感染：可发生最高水平的CRP，有时高达500mgL。革兰阳性菌感染和寄生虫感染：通常引起中等程度的反应，典型的是在100mgL左右。病毒感染：引起的反应最轻，通常不超过50mgL，极少超过100mgL。在细菌感染的急性期，CRP显著升高在病毒感染时CRP水平正常或轻微升高,18,临床意义,C反应蛋白是心血管疾病较强的危险指标，C反应蛋白水平可预测将来心肌梗塞及中风的危险性。C反应蛋白含量2.1mg/L的人与100mgL预示严重的疾病过程并常表示细菌感染的存在。,23,临床意义-抗生素的治疗监测,系列血浆CRP的测定，可用来作为下列情况的治疗监测：在许多感染时最有效使用抗生素治疗。根据CRP水平的变化来决定抗炎药物的剂量。在CRP下降至正常时，中断抗菌素治疗。在高危人群缺少微生物学诊断时，为抗生素治疗的指引。,24,临床意义-抗生素的治疗监测,25,临床意义-外科,患者施行手术后2472h,血中CRP水平明显升高,约在第57天恢复正常。凡骤升后持续高水平多预示合并感染。对中、大手术患者,在术前和术后37天各作常规检测一次。凡术后57天CRP仍持续高水平者,理应怀疑合并感染,并配合治疗作随访监测。,26,临床意义-外科,有研究显示：应用ROC曲线评价血清CRP、白细胞总数和中性粒细胞对急性阑尾炎的诊断效率由高到低排序为CRP白细胞总数中性粒细胞，针对老年患者排序为CRP中性粒细胞白细胞总数,27,临床意义-内科,肺炎:CRP100mg/L，强烈提示细菌感染，如化脓性支气管炎或肺炎;典型的病毒性肺炎不会超过50mg/L。心血管病，在痛疼开始后数小时内，CRP升高，3-4d达高峰，在CK-MB回到正常后7-10d也降至正常。代谢综合征代谢综合征分组，根据CRP水平可将为低危险组，3mg/,28,临床意义-妇产科,盆腔炎和子宫附件炎.CRP值升高盆腔肿块和子宫肌瘤通常多为阴性。诊断胎膜早破宫内感染.胎膜早破时，如母亲CRP在产前6-19h超过50mg/L可作为出现AIS的标准；产后第一天出现的AIS的CRP将比正常分娩时高出2-3倍。无并发症的CT和NG感染不会引起CRP升高。但扩散到盆腔可引起急时相反应。,29,临床意义-儿科,新生儿浓毒血症:出生3天前CRP10mg/L表示感染.如果CRP在24h内没有超过10mg/L，多无新生儿感染.小儿发热:患病超过12h，CRP显著40mg/L，ESR显著30mm/h应关注为细菌性感染。脑膜炎:CRP20mg/L提示为细菌感染的可能；100mg/L时具有细菌感染诊断价值。结脑CRP在20-60mg/L。成功的治疗可使CRP在一周内降至正常。,30,小结,CRP是一五球体结构的高度保守的急时相蛋白。为宿主先天性免疫应答的一部分，在机体平衡和自身保护中起着重要贡献。血CRP浓度的升