（病原生物学专业论文）铜绿蝇蛹发育形态学用于死后间隔时间推断的研究.pdf

中文摘要 铜绿蝇蛹发育形态学用于死后间隔时间推断的研究 摘要 目的：研究不同温度下铜绿蝇伍u c i l i ac u p r i n 力蛹的生 长发育情况，明确其发育形态随时间的变化规律，为刑事案 件中死后间隔时f 司( p o s t m o r t e mi n t e r v a l ，p m i ) 的推断提供科 学依据，同时积累石家庄地区嗜尸性蝇类发育生物学资料。 方法：在河北医科大学校园内以兔内脏诱捕铜绿蝇成 蝇，带回实验室，在生化培养箱内连续饲养，以第三代成蝇 作为母代开始实验。用猪肝诱成蝇产卵，将所产新鲜卵移置 于猪肉上，分别放在1 6 、2 0 、2 4 、2 8 、3 2 的生化 培养箱中饲养，在以上各温度条件下，湿度( 5 0 一6 0 ) 及光 周期固定不变，食物数量维持在相对稳定的范围内。自5 0 幼虫化蛹开始，将蛹连同沙土移入新瓶内，每隔1 2 h 取样1 次， 直至半数羽化。每次皆取1 0 头标本，用4 的甲醛固定液固定 2 4 h q ，然后放入7 5 酒精中保存。称量各组蛹重，用均数4 - 标准差表示，并绘制不同恒温下蛹重随时间的变化曲线。在 体视显微镜下观察蛹壳颜色，用数码相机拍刚2 1 ，用图像分 析软件提取r g b 值，绘制不同恒温下r g b 值随发育时间的 变化曲线，并做成蛹壳颜色的标准色版。在体视显微镜下剥 开蛹壳，观察蛹体形态发育的变化规律，找出时间标志性特 征，并据此将蛹的发育进程进行阶段划分；比较不同恒温下 发育规律的不同。数据用s p s s l l 5 软件处理。 结果： 1 蛹体组织形态变化 中文摘要 1 1 蛹期阶段的划分 体视显微镜下观察戮壳内燎体组织麸缩短幼虫状态到 成蝇的全变态发育过程，并发现7 个可标志其形态发育随时 闻交仡的特征：i 桶体分头、魏、馥；l l 头曦骨菇壁；疆l 漂 头出现；呼吸角破壳；v 翅与足出现及褐化：鬃毛出现 及韬化；硼复眼轮廓形成及色素纯进程。 根据上述特征把蛹期粗略划分为9 个阶段： 前蛹期；虫体呈缩短幼虫状，未免呼吸角，头咽骨与蛹 体组织紧密结合。 隐头期：蛹前端出现凹陷，可见原头及一对小乳头状的呼 吸惫，头嘿骨贴壁。 显头期：蛹体分头、胸和腹；呼吸角呈牛角状：蛹体呈 自色，全身无鬃；腹瑟爨现足及翅；复眼轮熬形成。 棕翅期；足根部呈浅棕色，翅出现浅棕色翅脉；蛹体出 现浅色鬃毫，复睽黄色。 黑鬃胸期：胸部背面及头部出现稀疏的黑色鬃琵；腹部 沿嚣菝节鲶出魂浅棕色琵；是檄部交爨，翅躲呈黑色。 黑鬃腹期：腹部稀疏分布黑色鬃蒜：胸部鬃毛变浓密。 半红敝期：簧眼后半部呈鲜红色，腹部鬃耄变浓密。 红眼期；复眼全部鲜红色，体鬃进一步浓密。 预成虫期：笈眼呈深红色，整个蛹已具成患雏形，有膜镪 被。 1 2 不同温度下铜绿蝇蛹的发育进程 记录到达蛹期各发霄阶段的时闻，绘割铜绿蝇蛹的发努 进獠表，可得出以下结论： 不同懂湿下，锯绿蠛蛹发育至某一阶段鞭霈的时闻嚣巢 中文摘要 一阶段持续的时间一般随温度的增高而缩短。莱一恒温下蛹 鳇各令阶段拷续时阙不均匀：显头期占据了蛹麓摺当长豹时 间，蛹的开始阶段和临近羽化阶段持续时间短，即形态变化 较大。 2 蛹壳颜色 体视显徽镜下观察表鹈，在适宜锱绿蝇发育酶恒定温度 下，蛹壳颜色随时问呈现逐渐加深趋势。各温度下蛹壳颜色 的嘲倍数瘗随蛹的生长发育均是现宙大到小的变化趋势， 以r 戗变化最明显，但此变化不均匀，在化蛹初期和临近羽 化时变化较大，中间交化平缓。蛹壳颜色的标准色敝珂用予 肉眼辍略估算蛹期及进而推断p m i ， 3 蛹麓 在适宜铜绿蝇发育的恒定温度条件下，蛹蓬随时阅延长 而减少。并鼠，蛹羹的变化也是不均匀的：头两天下降迅速， 恧后趋手平缓；温度越高，援重涟时阅下降趋势越暌显。 结论：研究结果表明，在死亡调查时，铜绿蝇蛹可作为 一耪现场证据，在汪知现场巧境瀑度的篱提下，爵依据蛹壳 内蛹体组织的形态发育变化来推断蛹期，同时结合蛹壳颜色 的标准色蔽，参考蛹重随时闻兹变鬟二情况综舍分橱，扶覆为 死后间隔时间( p m i ) 的推断提供科学依据。 关键词；嗜尸性蝇类；死后间隔时间；铜绿蝇；蛹壳颜 色；呼吸角 英文摘要 p u p a lm o r p h o g e n e s i s o fl u c i l i ac u p r i n a ( d i p t e r a ： c a u i p h o r i d a e ) i nd i f f e r e n tc o n s t a n tt e m p e r a t u r e a n d i t ss i g n i f i c a n c ei nf o r e n s i cm e d i c i n e a b s t r a c t o b j e e t i v e ：t h i ss t u d y c o n c e r n st h e c h r o n o l o g y o f d e v e l o p m e n t w i t h i n p u p a r i u mo fl u c i l i ac u p r i n a ( d i p t e r a ： c a l l i p h o r i d a e ) t od e t e r m i n e t h e p o s t m o r t e m i n t e r v a l f e m 0 e s t i m a t i o nw h i c hi sb a s e do nt h ed e v e l o p m e n tr a t e sa n d s u c c e s s i o n p a t t e r n s o f n e c r o p h a g o u s f l i e sa n d p r o v i d e f u n d a m e n t a ld a t at of o r e n s i ce n t o m o l o g y m e t h o d s ：f l i e sw e r ec o l l e c t e dw i t ha ne n t o m o l o g i c a ln e t o n ad e a dr a b b i ti n n a r d sf r o mt h eo u t d o o r s t h ea d u l t so fl u c i l i a c u p r i n a w e r eb r e di nl a b o r a t o r yw h e r et h e y w e r er e a r e d s u c c e s s i v e l yi nab i o c h e m i c a lc u l t u r eb o x ，p r o v i d e dw i t had i e t o fs u g e r , p o w d e r e dm i l ka n dw a t e r , u n t i lt h i r dg e n e r a t i o n t h e n 7 0 - 8 0a d u l t sw e r em a i n t a i n e d i n s e p a r a t ec a g e s w i t h d e c o m p o s i n gp o r kl i v e rt ol a ye g g s a f t e r2h o u r ( m a x i m u m ) ， e g g sw e r ec o l l e c t e dt ot r a n s p o r t e dt oi n c u b a t o r sw i t hp o r km e a t a s f o o d ，w h e r et h e y w e r em a i n t a i n e du n d e rc o n s t a n t t e m p e r a t u r e ( 1 6 。c ，2 0 c ，2 4 c ，2 8 c ，3 2 c ) a t5 0 - - 6 0 r h t h e p h o t o p e f i o da n df o o ds u p p l yw e r ek e p tu n c h a n g e d t h et y p ec o l l e c t i o nw e r ed o n ew h e n5 0 o ft h el a r v a e s h a dp u p a t e d 1 0p u p a ep e rs a m p l e i n gw e r ec o l l e c t e de v e r y1 2 h o u r su n t i l5 0 a d u l t se m e r g e d k e e pt h es p e c i m e n si ns i m p l e 4 荚炙摘要 f i x a t i v ea tf i r s t2 4 h t h e nt r a n s f e rt h e mi n t o7 5 a l c o h o lf o r f u r t h e rp r e s e r v a t i o n m e a s u r e m e n t so fp u p a lw e i g h t sw e r em a d ea td i f f e r e n t t e m p e r a t u r ea n dt h em e a nv a l u eo fe a c hs a m p l eo f t e np u p a r e w a su s e dt oe s t a b l i s ht h eg r o w t hc h iv e s a l lt h ew e i g h t sd a t a w e r er e c o r d e dw i 斑t h ef o r mo f m e a n - 圭s d t h ep u p a ls p e c i m e n s w e r eo b s e r v e du n d e ras t e r e o m i c r o s c o p e r e c o r dt h er e g u l a r i t y o f c h a n g i n gc o l o u ro f p u p a r i u mw i 饿d e v e l o p m e n t a n dm a k ea s t a n d a r dc o l o u rp l a t eo ft h ep u p a r i u ma td i f f e r e n tt e m p e r a t u r e s u n d e rt h es t e r e o m i c r o s e o p e ，d i s s e c tt h ep u p a lc a s ea n dm a k e m i n u t eo b s e r v a t i o no ft h em o r p h o l o g i cc h a n g e sa c c o r d i n gt o p u p a lg r o w t h t r yt of i n ds o m em o r p h o l o g i c a lf e a t u r e s t ob e a g e - m a r k e r s i l l u s t r a t et h ec h r o n o l o g y o fp u p a r i aa td i f f e r e n t c o n s t a n tt e m p e r a t u r e d a t a w e r e a n a l y z e du s i n g s p s s i1 5w h e n m a d e s t a t i s t i c a l a n a l y s i s o ft h ep u p a lw e i g h t s p u p a l p i c t u r e s w e r e d i s p o s e dw i t hp 珏g 霸0 i s 毯o 疑 r e s u l t ： lc h r o n o m e t r i c a lm o r p h o l o g i cc h a n g e so f p u p as t a g e s s e v e na g e m a r k e r so fp u p a lm o r p h o l o g i c a lf e a t u r e sw e r e c o l l e c t e da sf o l l o w s ：lb o d yc o n f i g u r a t i o n ；i ic e p h a l o p h a r y n g e a l s k e l e t o n ；i i i a r c h i c e p h a l o n ；p u p a lr e s p i r a t o r yh o r no , a b r ) ；v a r t u s ；v i s e t a e ；v i i c o m p o u n de y e ( c e ) a c c o r d i n gt ot h ef e a t u r e s ，t h ep u p a lp e r i o do f 五e u p r i n a c a nb ed i v i d e di n t o9d e v e l o p m e n t a ls t a g e s ：p r e p u p a ls t a g e ； c r y p t o c e p h a l i cs t a g e ；p h a n e r o c e p h a l i cs t a g e ；b r o w nt h o r a xs e r e 英文摘要 s t a g e ；t a n n e d t h o r a xs e t a e s t a g e ；t a n n e d a b d o m e ns e t a e s t a g e ；p a r tp i g m e n t e de y es t a g e ；e n t i r ep i g m e n t e de y es t a g e ； p r e a d u l ts t a g e t h er e s u l t ss h o wt h a ts o m em o r p h o l o g i c a lc h a n g e sw i t h i n t h ep u p a r i u mc a nb eu s e da sa g e m a r k e r s a c c o r d i n gt ot h i s ，t h e p u p a lp e r i o dc a nb ed i v i d e di n t o9d e v e l o p m e n t a ls t a g e s t h e t i m er e q u i r e df o rd e v e l o p i n gi n t oe a c hs t a g ea td i f f e r e n tc o n s t a n t t e m p e r a t u r e w a s i n v e r s e l yp r o p o r t i o n a l t ot h e t e m p e r a t u r e ， n a m e l y , s h o r t e r i n h i g h e rt e m p e r a t u r ea n dl o n g e ri n l o w t e m p e r a t u r e f u r t h e r m o r e ，t h ed e v e l o p i n gt i m ef o r e a c hs t a g e l a s t e di n h o m o g e n e o u s l y ：s h o r t e ri nb o t ht h eb e g i n n i n g ( p r e p u p a l s t a g e ，c r y p t o c e p h a l i cs t a g e ) a n d t h e n e a r - e m e r g e n c es t a g e p h a n e r o c e p h a l i cs t a g et o o kag r e a tp a r to ft h ee n t i r ep u p a l p e r i o d t h ee m e r g e n c eo f p u p a lr e s p i r a t o r yh o r n s ( p r mc a nb e u s e da sai n d i c a t o rt o d i s t i n g u i s hc r y p t o c e p h a l i cp u p aa n d p h a n e r o c e p h a l i cp u p a a tt h el a t t e r , ap a i ro fp u p a lr e s p i r a t o r y h o r n sw a sf o u n dl a t e r a l l yj u s tp r i o rt ot h ep o s t e r i o rb o u n d a r yo f t h ef i r s ta b d o m i n a ls e g m e n t a tc r y p t o c e p h a l i cs t a g e ，t h ep u p a l r e s p i r a t o r yh o mw a ss m a l l ，c o r p o r am a m m i l l a r i a ，c a r n a t i o n w i t h p u p ag r o w i n g ，t h i sh o r ns l i g h t l yp r o t r u d e df r o mt h ec e n t e ro f g l o b u l e s o nt h eb u b b l e m e m b r a n e ，c o m i f o r m , b r o w n p r h e m e r g i n gt i m ea td i f f e r e n tc o n s t a n tt e m p e r a t u r ew a si n v e r s e l y p r o p o r t i o n a lt ot e m p e r a t u r e ，a t1 6 c ，2 0 c ，2 4 c ，2 8 。c ，3 2 ，i t r e s p e c t i v e l yi s6 0 h ，4 8 h ，3 2 h ，2 4 h ，1 2 h t h ea p p e a r i n go ft h ec e p h a l o p h a r y n g e a ls k e l e t o no nt h e 6 英文摘奖 p u p a lc a s ec a nb ea m a r k e rt od e t e r m i n ew h e t h e ri td e v e l o p e d i n t ot h es e c o n dp u p a ls t a g e ，t h a t i s c r y p t o c e p h a l i cs t a g e a t p r e p u p as t a g e ，c e p h a l o p h a r y n g e a ls k e l e t o nw a st i g h t l yf i x e di n t h ep u p ab o d y , w h i c hw a se x t r e m e l yr e s e m b l ew i t ht h eo n eo f t i l i r d i n s t a rl a r v a ei nb o t hs t r u c t u r ea n dp o s i t i o n ，s oi tc a l ln o tb e s e e nf r o mo u t s i d eo ft h ep u p a r i u m t h e p r o f i l e o fc o m p o u n de y e ( c e ) c o m p l e t e l yf o r m e d d u r i n gp h a n e r o c e p h a l i cs t a g e , b e c a m ey e l l o w o rw h i t ey e l l o wa t b r o w nt h o r a xs e t a es t a g e 。a tp a r tp i g m e n t e de y es t a g e ，p o s t e r i o r o ft h ec e i n i t i a l l yb e c a m eb r i g h tr e d , t h e nt h er e da r e ag r a d u a l l y e x p a n d e du n t i le n t i r ep i g m e n t e de y es t a g ew h e n t h ew h o l ee y e b e c a m ec h e r r y a tp r e a d u l t s t a g e ，c e w a sc r i m s o n a st h e o b s e r v a t i o ns h o w e d , t h ey e l l o ws t a g el a s t e dl o n g e rt h a nt h e p i g m e n t e ds t a g e t h eh i g h e rt h et e m p e r a t u r ew a s ，t h ef a s t e rt h e c e c h a n g e d 。 2c o l o u ro f p u p a r i u m a tac e r t a i nc o n s t a n tt e m p e r a t u r e , t h ec o l o u ro fp u p a f i u m d e e p e nw i t hd e v e l o p i n gt i m e t h ec h a n g ew a s ：l i g h t e ry e l l o w , y e l l o w , b r u n n e u c ，p i t c h y b r u n n e u e m a i n t a i n e dt h el o n g e s tt i m e 。 3p u p a lw e i g h t a tac e r t a i nc o n s t a n tt e m p e r a t u r e ，i ts h o w sg r a d u a l l y l i g h t e n i n gi nw e i g h tw i t ht h eg r o w i n ga n dd e v e l o p i n go fp u p a t h ec h a n g e sw a si n v e r s e l yp r o p o r t i o n a lt od i f f e r e n tt e m p e r a t u r e ， n a m e l y , f a s t e r i n h i g h e rt e m p e r a t u r e a n ds l o w e ri nl o w t e m p e r a t u r e f u r t h e r m o r e ，t h ea m p l i t u d e o f l i g h t e n i n g w a s i n h o m o g e n e o u s ：d e e p l y a tf i r s t 2 4 h o u r s ，g e n t l y f o r p o s t 英文摘要 h o u r s ，t h e ns h a r p l ya tt h en e a r - e m e r g e n c es t a g e c o n c l u s i o n s ：t h i ss t u d yd e m o n s t r a t e dt h en e c e s s i t yo f f u r t h e rr e s e a r c hi nt h ef e a t u r e so fp u p a ls t a g ew h i c ht o o kn e a r l y h a l fp a r to ft h ei m m a t u r es t a g eo fn e c r o p h a g o u sf l i e s t h i s r e s e a r c hm a i n l yr e f e r r e dt oc h r o n o m e t r i c a lm o r p h o l o g y , c o l o u r o f p u p a r i u ma n dp u p a lw e i g h t b a s e do nr e s u l t sf r o mt h i ss t u d y , d e d u c i n go np m ic o u l db em o r ee x t e n s i v eb e s i d e sl a r v a ls t a g e f o rt h er e s u l tw e r ec o l l e c t e du n d e rl a b o r a t o r yc o n d i t i t o n s ，i t w o u l db em o r em e a n f u li nf o r e n s i cm e d i c i n ei fe x p e r i m e n tw a s c a r r i e do n i m i t a t i n gn a t u r a le n v i r o n m e n t k e y w o r d s ：l u c i l i ac u p r i n a ；f o r e n s i ce n t o m o l o g y ；p u p a ； p o s t m o r t e mi n t e r v a l p m i ) ；p u p a lr e s p i r a t o r yh o r n s ( p 】毽。 3 研究论文 铜绿蝇蛹发育形态学用于死后间隔时间推断的研究 前言 法医昆虫学是运用昆虫学及其它自然科学的基础理论 与先进技术，研究与某些犯罪案件有关的昆虫和其它节肢动 物，解决司法实践特别是刑事案件侦破中有关问题的一门医 学分支学科1 1 7 】。死后间隔时间( p m i ) ，即死亡发生至尸体被 发现的时间间隔的推断，是其主要研究内容之一【1 3 1 。蝇类是 最先到达尸体的嗜尸性昆虫之一，其生长发育进程的研究一 直是推断中短期死后间隔时间的关键【3 3 1 。蝇蛹是死亡现场发 现最多的虫态之一，蛹期约占整个幼期一半的时间【4 l ，因此， 为了准确及时地推断死亡间隔时间。蝇蛹发育时间的确定就 显得至关重要。蛹期是蝇幼虫期到成虫期的过度，有很多明 显的形态学变化，深入研究此期，寻找时间标志性指标对p m i 的推断无疑有着重要意义。 嗜尸性蝇蛹应用于死后间隔时间推断的研究，主要包括 种类鉴定和日龄推断2 个方面的内容【1 8 】，本文研究主要限于 后者。蛹期的日龄特征可分为两类：( 1 ) 蛹壳外部形态特征； ( 2 ) 蛹壳内裸蛹的形态特征【8 l 。第一个从法医学角度研究蝇蛹 的是g r e e n b e r g 【2 1 1 ，他在1 9 9 5 年对丽蝇蛹的某些情况作了研 究，指出：( 1 ) 蛹期占整个成虫前期的4 0 以上，通过详细标 记蛹的年龄可获得有价值的时间证据。( 2 ) 蛹壳从白色到黑褐 色的转变可提供前1 0 个多小时的颜色标志，随着蛹壳硬化的 完成，随后蛹期的发育情况有重要的法医学意义。 ( 3 ) g r e e n b e r g 还研究了不同时期内部结构发育的情况，并制定 研究论文 了蛹发育时间表，为p m i 的推断提供时间依据。国内，王江 峰陡鬈等对丝光绿蟋等5 秘鬻冤蝇耱熬匿嫒及其裸蛹戆形态变 化的研究，划分了蛹期，并列出了不同恒温下不同调奁时刻 所划分各除段静露闯，进一步提淹了根据昆盎检验死亡对蠢 的精确性。 本文选取的蝇种是瑟蝇科绿蝇蓓的铜绿爨，我篱主要分 布在东、南部，主要孳生于腐败动物尸体中，夏、秋季是它 的繁殖高峰期。铜绿蝇虽然不是石家巍地区韵优势蝇种，值 其喜在腐败动物尸体周围滋生的特性，使得它在夏秋攀尸体 上占据一定优势；根据是石家庄市防疫站2 0 0 3 年对市区蝇类 种科和生物特性的调查中，铜绿蝇是继大头金蝇、丝光绿蝇、 棕尾别麻蝇之后第4 常见嗜尸性蝇类，比例为2 8 p j 。这足以 说明毋展铜绿蝇生物特性尤其楚发育形态学麴硬究魄重要 性，本文对铜绿蝇蛹在备个恒温下的形态学变化进行了观 察，鏊在筛选出菜些霹焉子判鹾矮发鸯爨重闯的形态特征，并 根据这些特征将蛹期各生长阶段加以较详细地划分，为石家 疰逸区嘻尸经蝇类材料酶富益於充，弊为p m i 攫藜提供更广 泛的基础资料和科学依据。 研究论文 材料与方法 1 成蝇的采集 在河北医科大学校园内，用兔内脏诱捕铜绿蝇成蝇，带 回研究室，置于养蝇笼内，放入m g c 3 0 0 b 型智能光照培养 箱内饲育，笼内放一水槽，内放一块儿大小适宜的海绵( 供 苍蝇饮水时停落用) ，每天换加水一次，使湿度保持在 5 0 6 0 ；使用表面皿盛上饲料( 奶粉：糖= 1 ：1 ) ，为保持新 鲜，两天更换一次；设定生化培养箱的光周期为1 2 小时：1 2 d x 时。 2 蝇卵的诱集 用猪肉诱室内饲育的第三代铜绿蝇成蝇产卵：将猪肉切 2 c m x 2 c m x l c m 的小块，并在其表面切几条缝，置于表面皿内 的湿纱布上，仔细观察。当成蝇产卵时开始计时，并把产出 时间相差不超过半小时的卵块移入另一5 0 地的烧杯内，将 此烧杯放入盛有2 3 土层5 0 0 m l 的大烧杯内，用尼龙纱布封口 饲养，预备留标本。设定生化培养箱的温度依次为1 6 ，2 0 ， 2 4 ，2 8 ，3 2 重复以上步骤。 3 标本的留取 待幼虫孵出后，每天加两次肉，保持肉的柔软程度适中， 利于幼虫取食，同时维持湿度相对稳定，在各个不同温度条 件下，自5 0 幼虫化蛹开始，将蛹连同沙土移入新瓶内，每 隔1 2 h 取样1 次，直至半数羽化。每次皆取1 0 头标本，用4 的 甲醛固定液固定2 4 h ，然后放入7 5 酒精中保存。化蛹的标准 是：当用大头针刺激幼虫时，幼虫对刺激没有伸展或移动等 反应【1 4 1 。 研究论文 4 称蛹重 从保存液中用镊子小心夹取出所留取的蛹标本，放在滤 纸上吸干蛹壳表面水分，待称重。校准好电子天平( 提前预 热l 小时) ，按不同温度，标本留取的顺序，逐一称量单个蛹 重( 近似值0 1 m g ) ，记录。用统计软件分析数据，并同时绘 制不同温度下蛹重随时间的变化曲线。 5 观察蛹壳颜色及蛹体组织结构 在体视显微镜下观察蛹壳颜色，将r g b 配色表中r g b 分量分别为1 9 0 的灰色( g r e y ) 色卡设立为参照卡，并用c a n n o n p o w e r s h o t s 3 型数码相机拍照；所得照片以参照卡为标准对其 亮度、明暗度等校准到视差允许范围内；用p h o t o s h o p 软 件中的裁切工具裁切蛹第三腹节背部中线左右l c m 2 的蛹壳 面积，用颜色取样器( 颜色取样器选项栏中的取样大小设为 “5x5 ”，即一次读取5x5 像素区域的平均值) 随机选取此范 围内1 0 个像素点，读取各点r g b 值，计算其平均值，以此 值表示该蛹壳颜色，绘制r ，g 忸值随蛹生长发育的变化曲线； 还原刚g b 数值，填充为标准的单一色卡，做为蛹壳颜色的 标准色版。 在体视显微镜下用昆虫针和眼科镊子仔细挑开蛹壳，观 察蛹内虫体的形态变化，找出发育过程中具有时间标志性的 特征，并据此进行阶段划分，记录不同温度下达到上述发育 阶段的时间，列出蛹发育进程表。 6 统计学分析 本文测得的数据用均数4 - 标准差( m e a n 士s d ) 表示；处理数 据用s p s s l l 5 软件；处理图片用p h o t o s h o p 软件。 研究论定 缱藻 l 不问温度下，铜绿蝇蛹壳内蛹体组织随发育时间的形态变 凭 1 1 解剖蛹壳，体视显微镜下观察7 个具有时间标志性的蛹期 褥短：l 蛹露分头、麓、黢；t i 头嚆篱熬壁；珏l 藏头赛瑰；1 v 呼吸角破壳；v 翅姆足出现及褐化；v i 獭毛出现及褐化；v i i 复鼹耱廓彩成及色豢优进程。 每个特诬的发肖变化如下： l 蛹熬整体形态：礴短幼虫状。其较多熬滚；b 分秀头、 胸、黢三部分，无粘液。 l l 头唾骨：a 头戆骨与螨俸缓织紧密结合蛹前端凹陷， 头咽幢与蛹体分离，紧贴燎壳内壁，从嶷外清曦可见。 磁原头：a 正前方出现垒双夺球状酶原头；b 原头长大， 显著。 呼吸殆：a 对肉德、小乳头状呼吸角饿子原文夕 侧； b 呼暇蹩交缨长，棕色，牛角装，位手复鬏岳方。 v 翅与足：a 腹面出现对称分布的三对足及一对翅。自 色、斜下囊露紧辩蛹薅。转是鬏豁交搽瓣垂，麓窭瑰褐色遂 脉；c 足根部变黑色，末端可见褐色的跗节；趔脉呈黑色。d 是全帮呈黑色，翅大赛黑色。 鬃：a 全身无鬃，蛹体组织呈白色或浅黄色；b 胸部背 蘑窭魏鬃，曼缓捩、浅棕色、分数，在憨瑟部聚或一束，要“矿形， 鬃柬寒端达腹部中段；头部开始出现浅色纤龟。c 胸部背磷 及头都窭瑷稀疏丽粗大懿黑色鬃毛；麓部沿各羧蒂整磁瑶浅 棕色琵。d 腹部稳蠛分布照色鬃憋；头糊部具肖较浓密的黑 研究论文 色鬃，胸部鬃毛呈很明显的黑“v ”形，透过蛹壳清晰可见：e 头鼹羧都均具有浓密豹黑色鬃毛。 复眼：a 轮廓形成；b 黄白色或黄色：c 后半部呈鲜红色； d 全帮鲜红色；e 全部深红色。 根据上述特征把蛹期粗略划分为9 个阶段，如下： 翁蛹期：虫体星缩短幼虫获，前部尚未凹陷，未见呼吸 角，组织开始分解，具粘液，蛹壳很难剥离，头咽骨与蛹体 组织紧密结合，鼠蛹壳矫不可觅。 隐头期：蛹前端出现凹陷，_ 芷前方可见呈双小球状的原 头，原头外侧出现一对小乳头状的呼吸角。头咽骨紧贴蛹壳 内壁，从壳终清曦可见。 短头期：原头长大，头、胸和腹部很明显，呼吸角变细 长，棕色，星牛楚状，傻予蛹竞第一黢节背侧焉缘嚣侧。此 时，蛹体全身无鬃，呈白色或浅黄色。腹面出现对称分布的 三对足及一对翅，鑫色、斜下囊渴紧贴蟋俸。复葭轮辫形成。 棕翅期：足根部呈浅棕色，翅出现浅棕色翅脉。胸部背 面窭现鬃，星须状、浅棕色、分散，在胸螽部聚戒一束，璧v 形， 鬃束末端达腹部中段；头部复眼周围开始出现浅棕色纤毛： 复眼黄色。 照鬃胸期：胸部背面及头部嫩现稀疏的黑色鬃毛，腹部 沿各腹节处出现浅棕色毛；足根部变黑色，束端可见褐色的 跗节，翅脉里黑色。 黑鬃腹期：腹部稀疏分布黑色鬃毛；胸部鬃毛变浓密： 足全部呈黑色，翅大部黑色。 半红眼期：复眼后半部呈鲜红色，腹部鬃琵变浓密。 经眼嬲；复眼全都鲜红色，体鬃进一步浓密。 研究论丈 预成虫期：复眼呈深红色，胸和腹部均有浓厚的鬃毛， 整令蛹基具残虫雏形，但囊于貘的包被，足、邂及鬃德均爨鑫 在虫体上( 见f i g 1 ：a v ) 。 l 。2 鬃襄检索表 铜蝇蛹期各发育阶段检索表 k e y t od i f f e r e n t d e v e l o p m e n t a ls t a g e so f l u c i l i ac u p r i n a 1 蛹体组织未分为头，胸、腹兰部分壳内具较多粘液2 1 蟋体缝织分整、薅、骧三部分。壳走无稳渡。4 2 蛹黼部无凹陷及原头。沫见呼吸角。3 2 蛹前部凹陷。诞前方具鼹小球状的原头，j 、球两侧为l 对呼吸角 3 3 头稍骨来羹占蘸，蛹竞， 不可冕魏蛹鬟 3 头咽骨贴壁。蛹壳外清晰可见隐头期 4 翅国足颜色岛蛹体一致，都为肉色擞头期 4 蘧岛迁辗部麓稼色，蛹体篷蕊浅色鬃毫| 6 5 仅头胸部具稀疏的黑色鬃毛黑鬃胸期 5 。头、胸部鬃壤变浓密，腹部出现稀疏黑色鬃毛黑鬃腹期 6 复黻呈黄色栋翅期 6 复服后半部摄红色半红眼期 7 复臌全部为鳞红色级眼鞭 7 复黻全部为深红色预成虫期 1 3 不同温度下铜绿蝇蛹发育进程 分别记泶不同温度下，蝇蛹到达上述各阶段的时间，并 绘制不同恒温下铜绿蝇蛹莠发育阶段进程表( 见t a b l e l ) 。在 不同恒温下，铜绿蝇蛹发商至某阶段所需的时间和某一阶 段持续的时阍一般隧温度的增裹褥缩短。在1 6 、2 0 、2 4 、2 8 、3 2 下，蛹期持续时间分别为2 8 8 h 、2 0 4 h 、1 5 6 h 、 1 3 2 h 、9 6 h ；进入显头期时阕分聚荛6 0 h 、4 8 h 、3 6 h 、2 4 h 、 1 2 h ，显头期持续时间分别为1 4 4 h 、1 0 8 h 、9 6 h 、7 2 h 、6 0 h 。 在透宣钢绿蝇发育能菜一恒滠下，蛹韵各个阶段持续时 间不均匀：蛹的开始阶段和临近羽化时备阶段持续时间短， 1 5 研究论文 即形态变化较大；显头期占据了蛹期相当长的时间，在1 64 c 、 2 0 、2 4 、2 8 、3 2 下，显头鬏占蛹絮整个发育时闻跑 例分别为5 0 、5 2 9 、5 3 8 、5 4 5 、6 2 5 。( 见f i g 3 5 ) 1 4 本文所采取豹7 个特蔹孛，头程夤黏壁、藤头出现、鹭暇 角破壳出现在蛹发育前期；翅与足出现及褐化、鬃毛出现及 福化、复鼹的色素优主要瘸子蛹后期阶段的划分。 1 4 1 呼吸角 呼吸角出现在蛹壳上的时间比较豳定，均在显头期。隐 头期，呼吸角呈肉色，乳头状，位于小球状原头外侧，但在 蛹壳上不可见。在1 6 。c 、2 0 、2 4 、2 8 、3 2 下，出现 时间分别是：3 6 h 、2 4 h 、2 4 h 、1 2 h 、 1 2 h 。显头期，此角 变细长，棕色，警牛角状，从蛹壳第4 体节背侧方的小球状 膜的下方破壳恧出，从蛹蹇上清晰可见，此时阅分别为：6 0 h 、 4 8 h 、3 6 h 、2 4 h 、1 2 h 。棕翅期及以后随着蛹鬃的出现及褐化， 呼吸焦蕨色逐渐掇深，嚣形状缳持不变。 1 4 2 头咽骨贴壁 头咽管粪占壁麓获鬃宠主辨爨翦螭鬻程隐头蛹的唯一标 志。本研究发现头咽骨出现在蛹壳上的时间固定在隐头期。 不嗣恒温下，湿度越高磁现越晕。前蛹麓，虫体呈缩短幼虫 状前部尚米凹陷，即隐成威头部尚未形成，此时头咽骨与蛹 体缝织紧密结合，位置鲻构基本和3 龄幼虫稻似，敬从蛹壳 外不可见；隐头期，蛹前端出现凹陷，原头开始形成，造成头 咽骨与蛹体组织分离，紧贴蛹壳内壁，从壳外清晰可见。 l 。4 3 翅与足 翅与足的出现及褐化程度具有很强的时间标志性，尤其 在利用裸蛹形态发育推断蛹期鲍研究孛。翅与是的形成窝蠛 研究论丈 体组织头、胸、腹的出现是同步的，故可作为显头期的标志 之一，蓝期翅与足颜色与蛹体保持一致，均隽鑫色。蟋钵的 褐化始于棕翅期，此时翅与足根部首先变浅棕色；黑鬃胸期， 鬏部交黑；罴鬃腹期，翅与是全帮变黑；霹觅，蘧与髭的褐 化程度是蛹詹期很强的时间性指标，可结合鬃蔼的褐化来推 断蛹麓。 1 4 4 复眼的变化 复眼的色素纯进程是蛹发育薅期接断时闻的有力指标。 在适合蛹体发育的某一恒温下，复眼呈黄色持续时间较长， 占据棕逐期、黑鬃胸期、黑鬃腹期。迸入半红眼期后发展较 快。滠度越商，变化越快：在2 4 及以上，复目艮颜色从开始 变红判成蝇羽化，基本在1 2 小时内完成。在1 6 、2 0 下， 这三个阶段的开始时阆分别为2 5 2 h 、2 7 6 h 、2 8 8 h 和1 8 0 h 、 1 9 2 h 、2 0 4 h 。 2 不阅温度下，钢绿蝇蟪轰颜色陡发窘时阗的变纯 体视显微镜下观察表明，在适宜铜绿蝇发商的恒定温度 条终下，蛹囊颜色隧嚣重阗燕现逐渐翻深趋势：第一天一般为 黄白色、黄色，逐渐变为红褐色，红褐色蛹壳占据蛹期绝大 部分时闻，巍到临迓仡蝾瞄，峦予透_ 遭蛹壳可看裂蠢部溺体 组织，此时的蛹以全身布满黑褐色鬃毛，所以蛹壳颜色呈褐 色到爨褐色。可觅，其在纯蛹初期和睡近溺纯时交优较大。 剁用图像分析软件得出的各温度下蛹壳颜色的r g b 数 值随捅的生长发育均呈现寤大n 4 , 的交化趋势，但既变化不 均匀，在化蛹初期和临近羽化时变化较大，中间变化平缓。 其中r 值变化最明髭，化蛹初期可达1 8 6 ，而临近羽化时仅为 5 6 ；g 墨珏b 值变化幅度小。滠度越离，r g b