蛋白质含量测定.doc

_实验题目:蛋白质含量的测定一、实验目的:1、掌握微量凯氏法测定蛋白质总氮量的原理.2、掌握样品的消化、蒸馏吸收及滴定方法与含氮量的计算方法。二、实验原理1、凯氏定氮法：样品经加硫酸消化使蛋白质分解，其中氮素与硫酸化合成硫酸铵。然后加碱蒸馏使氨游离，用硼酸液吸收后，再用盐酸或硫酸滴定根据盐酸消耗量，再乘以一定的数值即为蛋白含量，其化学反应式如下。2NH2(CH2)2COOH+13H2S04 (NH4)2S04+6C02+12S02+16H2(NH4)2SO4+2NAOH 2NH2+2H2O+NA2SO42NH3+4H3BO3 (NH4)2B4O7+5H2O (NH4)2B407+H2S04+5H20-(NH4)9SO4+4H2BO21）、有机物中的铵根在强热和CuSO4，浓H2SO4 作用下，硝化生成（NH4）2SO42）、在凯氏定氮器中与碱作用，通过蒸馏释放出NH3，收集于H3BO3 溶液中3）、用已知浓度的H2SO4（或HCl）标准溶液滴定，根据HCl消耗的量计算出氮的含量，然后乘以相应的换算因子，既得蛋白质的含量。2、KDN-08A定氮仪蛋白质测定仪（定氮仪）以国际凯氏定氮法为依据，进行设计制造的，此仪器主机采用蒸气自动控制发生器，在液位稳压器的配合下，使蒸气在数十秒时间内平稳输出供蒸馏器使用。第一执行机关控制下的碱液流经蒸馏管进入定量消化管，使固定在酸液里的氨在碱性条件下挥发。第二执行机关控制下的蒸气对碱性条件的试样再进行蒸馏，使氨彻底挥发，挥发的氨被冷凝器冷凝下来，完全地被固定在硼酸之中，然后用标准酸对其滴定到终点，计算出氮的含量，再乘以换算蛋白质的系数得出蛋白质的含量。三、试剂与仪器硫酸钾、 硫酸铜 、 硫酸、 2硼酸溶液、 40氢氧化钠溶液混合指示剂：把溶解于95乙醇的0.l溴甲酚绿溶液10毫升和溶于95乙醇的0.l甲基红溶液2毫升混合而成0.01M HCL标准溶液或0.01M硫酸标准溶液。凯氏微量定氮仪一套（KDN-08A定氮仪）。四、实验步骤1、样品处理：精密称取0.22.0g固体样品或25g半固体样品或吸取1020ml液体样品（约相当氮30-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20毫升硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角斜支于有小孔的石棉网上，小火加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5小时。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸铵同一方法做试剂空白试验。2、按图装好定氮装置，于水蒸气发生器内装水约2/3处加甲基红指示剂数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3、想接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示剂1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化液由小玻璃杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其缓慢流入反应室，立即将玻璃盖塞紧，并加水于小玻璃杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏，蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接收瓶，使冷凝管下端离开液皿，再蒸馏1min，然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.01N硫酸或0.01N盐酸标准溶液定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10.0ml试剂空白消化液按3操作。五、数据处理1、硫酸标准溶液的标定：Na2CO3的浓度：标准硫酸溶液的浓度：则 标准硫酸溶液的平均浓度：第一次测定绝对偏差: 同理可得： 相对平均偏差：表1：标准硫酸溶液的标定序号123消耗标准溶液体积（ml）20.0219.9219.98硫酸溶液的浓度（mol/L）0.01010.01020.0101硫酸溶液的平均浓度（mol/L）0.0101个别测定的绝对偏差0.0000-0.00010.0000相对平均偏差（%）0.332、牛奶中蛋白质的测定：牛奶中蛋白质的含量（g/100ml）：表2：牛奶中蛋白质的测定项目牛奶的体积（ml）10空白试样消耗标准硫酸溶液的体积（ml）4.32牛奶试样消耗标准硫酸溶液的体积（ml）7.33牛奶中蛋白质的含量（