（运动人体科学专业论文）运动后大鼠血清ctni及ck、ckmb、ldh变化的比较研究.pdf

许敬：运动后大鼠血清c t n i 及c k 、c k 一蚰、l d h 变化的比较研究 中文摘要 大量研究已表明：c t n i 是心肌细胞特异性分子标志物。c y n i 仅存在于心肌细胞， 且在心肌无其他亚型，与骨骼肌肌钙蛋白( s t n i ) 氨基酸序列约有4 0 不同源性，n 末端有3 1 个额外的氨基酸，使其有独特的心肌抗原性。外周血中c t n l 的升高仅来源 心肌细胞损伤。在m m d 时即可被检出。故其特异性、敏感性优于血清酶学指标。可 用于鉴别是骨骼肌损伤还是心肌损伤。血清的酶学c k ，c k m b ，l d h 等除存在于心 肌细胞以外，尚存在于其他多种组织，尤其是骨骼肌细胞。加之测定方法设计方面的 0 不够完美，出现临床上有心肌损伤的“假阳性”，且在有微小心肌损伤时不能被检测 出。所以，将酶学检测与e t n i 检测联合运用意义更大。目的：本研究通过检测运动 后大鼠血清c t n i 和c k ，c k m b ，l d h 及将之进行比较，探讨它们在运动医学中的 应用价值。方法：大鼠分为对照组，游泳力竭即刻组，游泳4 5 小时后6 小时1 8 小 时，2 4 小时组，分别测定其血清c t n i ，c k ，c k m b ，l d h 。c t n i 检测用改良b o d o r 双抗夹心酶联免疫法。c k - m b 测定用免疫抑制法。结果：游泳力竭后即刻组，大 负荷运动后6 小时，1 8 小时，2 4 小时组c t i l i 的o d 值与对照组相比，差异均无显著 性。游泳力竭后即刻组c k ，c k m b ，l d h 升高，与对照组相比，p 0 0 1 ，差异 ， 有显著性。大负荷运动后厶小时组c k ，c k - m b l d h 升高，与对照组相比，p a q q r ) 不会影响氨基酸的组成，除非这些碱基对是位于外显子剪接调节 序列上，但如内含子3 、4 、6 和1 2 的上游中存在碱基替代和序列长度的变化将影响 剪接，如内含子3 的一个c t c t t 序列的插入性缺失将导致在转录延长中跳过外显子 4 ，这个外显子剪接上的变化产生c t n tl 和c t n t4 ，因此这个选择性剪接的相关研究 将有助于了解心衰终末期c t n t 4 重新表达的分子机制。内含子1 2 的多态性则很好地 利用了受体位点3 端第一个a g ，使外显子1 3 被选择性剪接。 2 3 4c t n t 基因的调节 2 3 4 1 肌肉特异性剪接增强子( m s e s ) r y a n 等研究胚胎骨骼肌、胚胎心肌和成人心肌发现c t n t 基因可选择外显子5 ， 可在胚胎骨骼肌和胚胎心肌的m r n a 中找到，但不存在于成人心肌的m t l n a 中；并 发现内含予4 的最后9 9 个核苷酸和内含子5 始端的1 4 2 个核苷酸内存在一个富含瞟 呤的剪接增强子( e e h a n c e r ) ，它是一个组成剪接的元件，而不是调控细胞特异性剪接 的因子。现已确定有4 种内含子元件，1 个位于选择性外显子的上游，存在于内含子 4 中；3 个位于下游，存在于内含子5 中，它们用于增强介导外显子胚胎型剪接类型； 并认为4 个元件中至少3 个元件间的相互作用是调节异系选择性外显子剪接位点的必 要和充分条件【3 3 1 。 2 3 4 2 内含子剪接增强子( 1 s e ) c a r l o 等发现在脊椎动物体内，c t n t 微小外显子下游内含子中有一段1 3 4 n t 序 列，这条序列中含有6 个富含g ，长度为7 - n t 的重复序列，它是微小外显子剪接所需 的特异性增强子，它的缺失将导致微小外显子在转录时被跳过【3 3 1 。 许敬：运动后太鼠血清c t n i 及c k 、c k g , b 、l d h 变化的比较研究旦 2 3 4 3 转录增强子( t e f 一1 ) t e f 1 是s v 4 0 病毒增强子的转录调节子，与位于c t n t 启动区的m c a t 元件 的结合因子有关。s t a r k 等【o j 发现人t e f 1 有两种t e f 1 异构体：t e f 1 a 和下一1 b ， 两者与c t n t m c a t 的结合具高度亲和力和序列特异性。t e f 1 b 蛋白c 末端有一个 含有1 3 个氨基酸的外显予，它与异种d n a 结合区域结合时可激活转录，而t e f 1 a 则不含有这个外显子，不能与此结合区域作用，所以t e f 1 异构体可能在心肌细胞 c t n t m c a t 依赖性启动区调节中起不同作用。 2 3 4 4 富含丝氨酸精氨酸( s r ) 蛋白 目前研究表明s r 蛋白是直接促进外显子间连接的。n a g e l 等发现：已纯化的 s r 蛋白家族成员s r r l 5 5 是通过自身结合在鸟c t n t 可选择剪接的外显子5 上，具有 高度特异性；外显子5 上至少有两个与s r p 5 5 结合位点：外显子5 序列的突变( 包 括外显子5 在体内或体外的增加或减少) 与s r p 5 5 不同效应有关。s t a r k 等h 3 】则发现， 外显子2 3 4 与6 的复合体也含有一个s r 蛋白结合位点，与外显子5 上的s r 蛋白结 合位点相比，这个位点更具有竞争力。因此可以推断相关的s r 蛋白与外显子结合的 强弱决定选择性剪接的类型。 3e t n 检测的方法原理及影响因素 3 1 检测方法和原理 3 1 1 e t n i 的检测方法和原理 1 9 8 7 年英国c u m m i n s l 4 4 1 等建立了放射免疫法( r i a ) 测定血液中c t n i ，用分子 筛和色谱方法制备c t n i 抗体，抗原由人心脏中提纯的c t n i ，用垃5 i 标记的兔抗人c t n i 多克隆抗体。测定时间需2 铀3 6 小时，灵敏度较低，为1 0pg l ，与骨骼肌的交叉反 应率约为2 ，不适用于a m i 的早期诊断及微小心肌损伤( m i n o r m y o c a r d i a ld a m a g e ， 扬州大学硕士学位论文 m m d ) 诊断。 同年c u m m i n s 【4 5 】等又首次报道用酶联免疫法测定a m i 血清c t n ，对照组血清 c l w 均为阴性。灵敏度1 0 1 1 g l 。 b o d o r 等【4 6 】以9 株抗人c t n i 单抗中筛选出2 8 1 9 和2 f 6 6 二株m c a b ，建t r y - - 步双抗夹心的e l i s a 。用2 8 1 9 m c a b 作为包被抗体和放大系统，用对硝基磷酸作显 色底物。测定时间为3 5 小时，检测灵敏度为1 9 ug l ，变异系数( c v ) 为1 0 - - - 2 0 ， 工作曲线范围为0 - 1 0 0 t t g l 。测定标本中加入1 0 0 0 0 pg l 的骨骼肌t n i 对结果无干 扰，交叉反应率小于0 1 ，2 8 7 例非心脏疾病住院患者的c t n i 3 9 1 t g l ，1 5 9 例无 心脏病患者血清未测出c t n i ，4 9 例骨骼肌损伤者血清c t n i 1 9 pg l 。该法耗时较短， 灵敏度较高，且与骨骼肌无交叉反应。 l o r u e 等用m e a b 8 e 1 作包被抗体，p o d 标记的m c a b l1 e 1 2 作为第2 抗体，用 一步法测定c t i l i 。该法室温3 0 r a i n 完成，线性范围o 2 0 2 0 1 1g a b ( 检测限为0 2ug ，l ) ， 批，内c v 2 7 一8 4 ，批间c v 2 9 0 一2 2 4 ，1 4 5 名健康志愿者测定值均 7ug l ，为阳性。与美国l a n d e n s o n 实验室s t r a t u s 自动分析仪 检测结果比较，结果略低，但阳性与阴性相符 4 8 】。 法国巴斯德公司首先建立酶免疫化学发光测定法( c l 认) ，在s t r a t u st a b 上吸附 有m c a b ( s t r a t u s 所用m c a b 的识别位点在于c t n i 的氨基末端h 9 1 ) ，加入标本后再与 a l p 标记的m c a b 结合，用4 甲醛伞形酮磷酸脂显色，检测荧光强度，整个测定仅 需2 0 m i n ，灵敏度为o 0 1ug l ，c v 6 4 ，参考范围上限为o 0 3ug l ，诊断a m i 的界值( c u t - o f f ) 0 3 3pg l 。该系统快速准确，适用于急诊，但需特殊的检测设备。 第一个被美国食品和药物管理局( f d a ) 认证用于检测c t n i 的是d a d es t r a t u si i 检测法【5 0 1 。这是一种先进的自动双位点荧光酶免疫定量检测法，使用两种c t n i 单 许敬：运动后大鼠血清e t n i 及c k 、c k 一船、l i ? i t 变化的比较研究 旦 克隆抗体，特异性高，灵敏度为o 3 5 “g i ，参考值0 3 5 9 9 l 。当a m ii 缶界值为1 5 9 9 l 时，不精密性( c v ) 小于或等于1 0 ，检测时间为1 0 m i n 。 许多检测法( 作为y 轴) 多与d a d es t r a t u s i i 检测法检测结果比较，其回归方程 斜率：b e c k m a na c c e r s 是0 1 0 0 ，b e h r i n go p u sp l u s 是1 5 9 ，a b b o t ta xs y m 为3 5 0 ， f i r s tm e d i c a l 是o 1 8 ，b i o s i t et r i a g e 是0 4 0 ，c h i r o na c s l 8 0 是1 1 3 ，b a y e ri m m u n oi 是o 8 1 1 1 0 l 。 a x s y m 检测法是一种近几年来才开始应用的c t n i 检测法，它的基本原理与 s t r a t u s 法有相似之处，是一种以特异性c t n i 单克隆抗体为捕获抗体，以c t n i 多克隆 抗体作酶标记抗体，建立两步夹心酶免疫法，检测游离e t r d 和复合体中c t n i 。该法 首先将包被着c t n i 单克隆抗体的微粒、碱性磷酸酶( s l p ) 标记的c t n i 多克隆抗体 以及标本中的c t n i 相混合，然后加入底物m u p ( 4 一m e t h y l u m - b e l l i f e r y 1 p h o s p h a t e ) ， 产生荧光物质的比率与样本中c t n i 的浓度有荚，该方法与s t r a t u s 检测法有显著相关 性( r = 0 8 8 ) 即a x s y m = 3 5 0 ( s t r a t u s 检测法) 1 1 0 ，两种方法对a m i 检测的一致性 为9 5 3 。该方法灵敏度为o 1 4 士0 0 5 i _ t g l ，p o c 曲线所确定的a m i 临界值为2 0 r t g l ；， 总不精密性为6 3 1 0 2 ，检测时间为1 5 2 0 m i n 。 r x l h m 检测法是以两个特异性的单克隆抗体为基础的一步酶免疫检测法，检测 时间为1 7 m i n ，灵敏度为o 1 p g e ，方法简便。e l i s a 快速定量检测c t n i 所需时间为 1 0 m i n ，灵敏度为o o l g g r c ，诊断a m i 的闽值为o 1 5 p g e ，初始敏感度为6 3 。延长 至4 小时后敏感度提高至9 8 ，比s t r a t u s 检测法( 初始和4 小时后敏感度分别为4 8 和8 5 ) 更敏感，且能提供更好的预后信息。 l i a i s o ne t n i 检测法1 5 1 1 选择的抗体针对3 0 11 0 氨基酸残基具有较高的特异性，与 d a d es t r a t u s i i 检测法比较，检测速度更快，结果更准确，敏感性更高。 g e 等旧用带有e t n i 稳定区的重组c t n i 免疫b a l b c 鼠，产生一个新的m a b ： i - 3 e 3i g g 。用不同的c t n i 片段检验后显示，i - 3 e 3i g g 所识别的抗原表位定位区在稳 定区5 5 9 4 氨基酸残基之间。无论是人c t n i 还是重组c t n i ，无论是游离c t n i 还是c t n i 复合物，只要有c t n i 稳定区，i - 3 e 3i g g 均有高度亲和力，且与s 无交叉反应。 扬州大学硕士学位论文 由于缺乏共同的标定标准和或使用的抗体与不同的c t n i 形式有交叉反应，所以 用不同检测系统。测得的c t n l 浓度( 正常参考值从 o 2 pg ，l 至 3 1pg l 不等) ， 相差可达1 0 倍以上。如a c c e s s 测定值最低，有些甚至比o p u sp l u s 结果低2 0 倍，这 些极端结果采用d a d es t r a t u s l l 分析系统测定，结果大约是o p u s p l u s 分析法的1 - 3 倍。 研究发现f 4 9 】，s t r a t u s 和o p u s 所用抗体的识别点位于c t n l 的氨基末端，丽a c c e s s 所 用抗体的识别点位于c t n i 的羧基末端。相对而言，血中c t n i 的氨基末端较稳定，较 少降解。 由于人c t n i 氨基末端和羧基末端是最强的抗原表位区，但这个区域对氧化、还 原和磷酸化较为敏感，还易被内源性蛋白水解酶水解，不同的状态具备不同的免疫活 性。由于t n c 的保护，最稳定区域在3 0 1 1 0 氨基酸残基之间，仅用针对c t n i 氨基末 端或和羧基末端的抗体将会降低敏感性。因此建议c t n i 夹心免疫分析法选择的抗体 应优先识别稳定区，才能提高c t n i 检测的敏感性及可重复性，有助于实现c t n i 检测 标准化。 1 9 9 8 年h e e s c h e n 等5 3 1 采用固相层析技术结合金标法，推出一种新的快速床旁检 测血清c t r t i 方法，其检出时间范围宽，检测灵敏度高( 0 1 n g l ) ，与骨骼肌异构体无 交叉反应，测定只需1 5 分钟。 3 1 2 c t n t 的检测方法和原理 1 9 8 9 年k a t u s 等脾】首次报道用e l i s a 分析法测定c t n t 。第一代c e n t ( c t n t1 ) 商品化试剂于1 9 9 2 年进入市场。c t n t 检测试剂采用的是夹心法，固相采用多克隆抗 体包被的聚氯乙烯试管，液相采用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体。c t n t1 使用两 种肌钙蛋白t 特异的单克隆抗体心肌肌钙蛋白t 特异抗体m 7 为捕捉抗体和肌钙蛋 白t 特异抗体1 8 1 0 作为标记抗体，使c t n t1 的敏感性较最早的e l i s a 分析法高5 倍。但临床表明：c t n t1 对患有严重骨骼肌损伤病人及部分晚期肾功能衰竭病人会产 生假阳性。 1 9 9 5 年，b o d o r 等发现正常再生骨骼肌可以表达c t n t 5 5 】1 5 6 1 。 1 9 9 7 年第二代c t n t e l i s a 分析法( c t n t 2 ) 商品化试剂问世。e t n t 2 使用高度 许敬：运动后大鼠血清e t n i 及c k 、c k m b 、l d h 变化的比较研究 2 l 心肌特异的抗体m 11 7 取代了e t n tl 中与骨骼肌有交叉反应的抗体1 8 1 0 。与c t n t1 相比较，c t n t 2 具有相同的诊断敏感性和更高的心肌特异性，分析时间由原来的9 0 m i n 降低至4 5 m i n 而不影响分析的准确性和临床特异性。第三代产品c t n t3 运用重组人 基因技术代替c t n t2 的牛血清，在增加特异性和灵敏度的同时，测定的线性范围达 2 5ug l ，分析时间缩短到 6 5 岁更加明显，c t n i 升高者更易出现心 电图( e l e c t r o c a r d i o g r a m , e c g ) 缺血性改变。 b e n a m e r 等嗍比较观察1 9 5 例u a p 患者在入院第一个2 4 小时内e t n l 增高者， 心脏事件发生率明显增加。 l u s h e r 等【蚓研究了u a 患者血清c t n l 水平及其与预后的关系：认为c t n i 增高组 3 0 天内心脏事件( a m i ，心源性猝死) 发生率( 分别为1 2 5 ，2 3 ) ，明显高于c t n i 正常组( 分别为4 和7 ) ，认为u a 患者血清c t r d 增高对其在3 0 天内发生心脏事 件是一个独立的预测指标，c t n l 正常者有较好的预后。 c t n l 和c t n t 有助于选择治疗和指导预防 1 0 0 。有研究显示入院时的c t n i 结果是 病人4 2 天内死亡率的独立危险预报因子【9 8 1 ，特别在症状发生后6 小时以上，c t n l 结 果可判断预后，而此时c k m b 在参考范围内】。o h m a n 等1 0 2 i 认为c l u 比e c g 或 c k m b 质量更有价值。n e w b y 1 叫等提出：a m i 后8 小时c t n t 结果可预测一年后的 死亡率。若再结合c t n i 和e c g 可提高其预测能力 1 0 4 1 。 o l a t i d o y e 等 1 0 5 研究一组u a 患者，入院后血清c t n j 以3 1 n m l 为诊断值将患 者分为阳性组和阴性组，两组3 0 天心脏事件发生率分别为2 7 3 和5 8 ，一年内c t n 许敬：运动后大鼠血清c t n i 及c k 、c k - i , i i 、l d h 变化的比较研究望 阳性组有6 8 患者未发生心脏事件，c t n i 阴性组有9 0 患者未发生心脏事件。c t n i 阳性组一年内发生心脏事件的危险度为2 6 ( 9 5 可信限1 3 5 1 ) 。认为u a 患者c t n i 增高预示患者短期( 3 0 天) 预后和长期( 1 年) 预后均不良。 5 5 监测溶栓疗效，确定心肌再灌注 胸痛缓解，s t 段改变正常化以及再灌注( r e p e r f u s i o n ) ，t l , 律失常是冠脉再通指标， 然而仅表现于1 5 病人。外周血c k 、c k m b 酶活性变化曲线，对再灌注的效果只可 作粗略的回顾性评价。成功监测溶栓治疗患者的再灌注，可使一部分溶栓失败的病人 受益于进一步的介入治疗。 t a n a s i j e v i c 等1 0 6 】对3 0 位m i 接受溶栓治疗患者血液m g b ，c k m b 和c t n i5 - ) - 另l j 测定，血样采自溶栓开始时( t o ) 和6 0 m i n ( t 6 0 ) 。溶栓6 0m i n 后用血管造影术显示 疗效作为对照，发现与冠脉依旧闭塞的患者相比，发生冠脉再灌注的患者各血清标志 物在i 白时的平均浓度、t 6 0 与t o 浓度比以及6 0 m i n 内浓度上升斜率都高得多。表明： 溶栓时t o 和t 6 0 两个时间点m 曲，c k m b ，c t n i 的浓度监测以及各指数的计算，对 于评价再灌注成功与否具有高度的敏感性和特异性。 当被阻塞的冠脉再通时，心肌中的e t n 被血流冲刷出来，引起c t n 升高，峰值 时间提前，并呈双峰改变。第1 天由于梗塞开通后，血流进入病变部位，将游离的c t n t 冲洗入血液而出现第1 个峰；在第4 天可观察到第2 个较小的峰( 主要来自c t n 复合 物中的c t n t ) 。这两个峰值的比率有助于判断是否出现再灌注：如第1 峰值大于第2 峰值，即比值 1 0 ，往往说明出现再灌注。早期冠脉再灌注的指示物c k m b 、m g b 、 c t n t 、e t n i 在灌注成功后的早期动力学基本相似，但a p p l e 等f 1 0 7 1 发现c t n t 和c t n i 9 0 m i n 冠脉再灌注平均指数显著大于c k m b 和m g b 。 张寄南等【1 0 8 】报道：a v i i 溶栓后血管再通患者血清c t n i 水平其峰值提前6 小时， 在溶栓后8 1 2 小时血管再通组c t n i 值显著高于溶栓未通组。认为a m i 溶栓过程中 连续检测血清c t n i 可能成为判断冠脉再通的指标。 5 6o t ni 与冠状动脉狭窄的关系 扬州大学硬士学位论文 b e n a m e r 1 0 9 1 研究1 0 0 例u a 患者冠状动脉造影狭窄形态与c 1 关系，结果显示： e t n i 增高组，高危冠状动脉解剖形态( 包括受累血管：c 型狭窄、冠状动脉内血栓和 不正常t i m i 血流) 发生率明显高于c t n l 正常值( 分别为5 4 和2 5 ) 。冠状动脉狭 窄形态与经皮冠状动脉腔内成形术( p t c a ) 及支架术的成功率及术后并发症的关系 密切相关。认为c t n i 可预测u a 患者复杂冠状动脉形态，从而通过血清c t n l 浓度可 帮助病人选择适当的治疗方案。 5 7 圳i 后心功能预测 汪涛等【1 1 0 l 研究a m i 患者血清c t n t 峰值( 双峰者取首峰) 与其心功能的关系发 现：c t n t 峰值与左室射血分数( l v e f ) 值呈非常显著的负相关，与心功能k i u i p 分 级、左室舒末容积、左室缩末容积呈非常显著的正相关。随访6 个月后，在急性期血 清e t n t 峰值较高的患者预后较差；当血清c t n t 峰值小于8 pg ，l 时，l v e f 值有所 改善，当血清c t n t 峰值为8 1 5ue e l 时，l v e f 值下降，而死于心力衰竭的a m i 患 者的血清c t n t 峰值均大于1 5 l ag l 。 5 8 对梗塞范围的判断价值 a m l 2 4 小时后血清e t n t 峰值与心肌梗塞范围呈显著正相关，即c t n t 峰值越高， 梗塞范围越大。当血清e t n t 峰值大于1 0 u 班时，梗塞范围大于3 0 。a m i 前期c t n t 峰值与梗塞范围呈等级相关而无直线相关。表明a m i 后期e t n t 峰值是判断梗塞范围 的参考指标，且与前壁、下壁a m 均有良好的相关性。m 1 2 4 小时后，血清c t n t 峰 值代表了心肌结构蛋白持续分解最大值和分解程度，峰值的高低主要取决于心肌组织 坏死的数量，因而更能反映梗塞范创“1 1 。由于c t r l t 峰值多出现在发病后第4 天， r e m p p i s 等【2 1 认为测定第3 天第5 天的c t n t 值能更好地反映心肌缺血损伤的动态 变化过程、判断梗塞范围大小及其预后。 李静、胡大一等叫研究揭示：c t n l 峰值与梗塞面积指数呈正相关，与l v e f 呈 负相关，其相关性好于c k m b 峰值。1 6 8 小时累加e c t n l 与梗塞面积指数相关性比 许敬：运动后大鼠血清c t n i 及c k 、c k 一蚰、l d h 变化的比较研究 e t n i 峰值明显提高。 但a m i 后存在药物作用或外科的再灌注现象，对m i 面积判断有一定影响，值 得注意。 5 9 确定围手术期有无a m l 由于手术应激可诱发心脏意外事件。而c k m b 由于骨骼肌损伤出现假阳性，所 以选用c t n 更为特异。 c u m m i n s 等1 1 3 1 对1 0 8 例非心脏手术患者进行c t l l i 的测定，发现8 例出现围手 术期a m i ( p m i ) 的患者均有c t n i 升高( c t n i 3 1 “g l ) ，但其中只有6 例c k - m b 升高。1 0 0 例无a m i 的患者中9 9 例c t n i 2 0 0 6 ( l - p ) 8( l - p ) 4 l d1 3 5 0 0 08 1 82 4 7 2“1 0 日3 5 未报告未报告 2 0 0 - - , 3 8 0 6 4 0 0 4 ( p l ) 8( p l ) 4 o 1 4 加3 6 0 4 0 总 总l dl d l d l1 3 5 0 0 08 1 82 4 7 26 1 0 日5 1 0 未报告未报告 l d l 几d 2 0 7 5l c t n t3 9 7 0 0 3 ，比l d l l d 2 1 更能准确提早诊断a m i 。 6 2 2 3h b d h 羟丁酸脱氯酶( h b d h ) 实际上是利用q 一酮丁酸取代丙酮酸作为底物时所测的 l d 活性。由于l d 的h 亚基对此底物亲和力大，所以h b d h 基本反映l d l 和l d 2 的活性。 6 2 2 4c k ( c r e a t i r ek i n a s e ) 、c k - m b ( c r e a t i n ek i n a s e - m b ) 肌酸激酶( c k ) 参与细胞内的能量代谢，催化a t p 生成的反应。以肌肉组织含 量为最多。心肌细胞胞浆含有大量c k ，其绝对含量超过其他酶。血中半衰期1 5 小时， a m 后4 8 小时升高，1 2 2 4 小时达高峰，3 - 4 天恢复正常。1 9 6 5 年v i n c e n t l l 2 1 】等提 许敬：运动后犬鼠血清c t n i 及c k 、c k - m b 、l d h 变化的比较研究 3 5 出c k 与l d 、a s t 联合使用，可提高a m i 诊断的特异性。1 9 6 6 年，c k 同工酶在不 同组织中的量被确定m 】。c k 同工酶由m 和b 两个亚基构成，形成c k - b b ，c k m m ， c k m b 三种同工酶。c k b b 主要分布在脑、肺、胃肠道平滑肌等，c k m m 广泛分 布在骨骼肌和心肌中，c k m b 则主要分布在心肌中。琼脂糖电泳可分别测定出血清 中c k 三种同工酶的含量。正常参考值：c k b b 无或微量，c k m m9 5 1 0 0 ，c k m b 0 5 。 c k m b 分子量8 6 0 0 0 ，血中半衰期1 2 + 4 小时。a m i 后4 - 8 小时升高，1 2 - 2 0 小时达高峰，2 3 天恢复正常。七十年代初，大量研究揭示c k m b 在敏感性、特异 性方面均优于其他血清酶标志物。被公认为诊断a m i 的“金标准” 1 2 3 。c k m b 的 检测，最常用的是免疫抑制法测定其活性。该方法设计的前提是由于c k - b b 在正常 人血清中极少，可将c k - b b 忽略不计。其原理在于用特异的抗c k - m 亚基的抗体完 全抑制c k m m 和c k m b 中m 亚基的活性，然后测定c k b 的活性，结果乘以2 即 为c k - m b 活性。当血清中c k - b b 增加而用免疫抑制法测定c k - m b 时，由于b b 不 受抑制，其活性已l o o $ 9 出，且还要乘以2 ，成倍地扩大了误差，以致出现c k - m b 值等于或大于总c k 活性的反常现象。此时测得的“c k - m b ”并不代表真正的c k - m b 水平，如果以此作为判断a m i 的标准就可能造成误诊、漏诊。所以在采用免疫抑制 法测定c k ，m b 时要特别注意：c k - m b 3 0 ；要按公式计算c k m b 占总c k 的 值并判断其影响因子。若c k m b 占总c k 2 5 表明存在着心肌梗塞以外的因子， 即表明有异常同工酶存在，包括c k b b 或巨c k l 、巨c k 2 。当富含c k b b 的脑、 肺、胃肠道平滑肌等组织缺氧缺血、炎症、甚至肿瘤等有关疾病导致c k - b b 逸入血 液中，可造成c k - m b 的假阳性。巨c k l 是c k 同工酶与自身抗体的复合物，也有少 数为c k - m m 与i g g 或l e a 的复合物。巨c k 2 是一种低聚的线粒体c k ，又称c k m t ， 存在于细胞线粒体膜上，当线粒体崩解时c k m t 进入血液中。c k m t 的抗原性与 c k m 和c k - b 不同，故抗m 的抗体不能抑制c k m t ，导致c k m b 假阳性。因此， 当c k m b 占总c k 2 5 ，有时甚至 5 0 ，结合临床症状可排除心肌梗塞，同时又应 扬州大学硕士学位论文 高度警惕c k b b 或巨c k 的存在，查找引起异常同工酶存在的病因，以免误诊、漏 诊。七十年代末，v a s u d e v a n 等1 1 2 4 1 用离子交换层析法检测l d 同工酶，发现l d l l d 2 比值升高较迟，在c k m b 升高又恢复到正常时( a m i4 8 小时后) 显得更有价值。提 出将c k m b 与l d i l d 2 联合运用。八十年代中期，采用酶质量的免疫分析法及用单 克隆抗体的放免分析检测，大大提高了c k m b 敏感性和特异性，使a m i 后2 q 小 时即可检出c k - m b 升高【踏】。应用免疫分析c k m b 质量始于1 9 8 8 年，现已证实 c k m b 质量测定的分析性能优于其活性测定| 1 2 6 。 6 2 2 5m g b ( m y o g i o b i n ) 肌红蛋白( m g b ) 是存在于心肌和骨骼肌和甲状腺胞浆中的亚铁血红素蛋白，不 存在于平滑肌中。在细胞内储存和运输氧气，参与葡萄糖的氧化。分子量1 7 5 0 0 ，半 衰期1 5 r a i n 。男性参考值2 0 8 0ug l ，女性1 0 7 0l ag ，l 。a m i 后i 4 小时升高，0 7 小时达高峰，2 4 小时恢复正常。是a m i 后升高最早的生化标志物之一。m o n t a g u e 等 1 2 7 | 报道8 9 例疑为a m i 的急诊病人中，入院时m g b 的诊断敏感性为5 6 。而入院2 小时后为1 0 0 。m g b 虽无心肌特异性，但其在心肌和骨骼肌中含量丰富，a m i 后能 迅速地从坏死的心肌中释放出来，具有高度的敏感性。故m g b 阴性特别有助于排除 a m i 的诊断。血中m g b 迅速从肾脏排泄，所以测定m g b 又有助于观察a m i 病程中 有无再梗塞发生，以及梗塞有无扩展。m g b 还是a m i 溶栓治疗中评价有否再灌注的 较敏感而准确的指标。但在骨骼肌疾病( 多肌炎、皮肌炎、肌肉拉伤) 、红斑狼疮、 休克、神经肌肉疾病、肾功能不全、甲状腺疾病及局部缺血炎症时亦见m g b 升高。 7 展望 7 1 n a c b 关于冠心病时心肌标志物的应用建议 美国临床生化科学院( n a t i o n a la s s o c i a t i o no fc l i n i c a lb i o c h e m i s t r y , n a c b ) 于 1 9 9 8 年起草了一份关于冠状动脉疾病时心肌标志物应用建议的初稿，广泛征求专家意 见后作了修改