维生素类药物的分析ppt课件.ppt

维生素类药物的分析TheAnalysisofVitamines,1,维生素是维持人体正常生理机能所必需的生物活性物质。如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。例如:VA缺乏夜盲症VB1缺乏脚气病,概述,2,按溶解性分类,VA、VD、VE、VK等,B族（VB1、VB2等）、VC、烟酸、叶酸、泛酸等,脂溶性维生素：,水溶性维生素：,3,第一节维生素A的分析,一结构与性质1化学结构,R=HVA醇VA1R=COCH3VA醋酸酯R=COC15H31VA棕榈酸酯,4,（1）环己烯+共轭多烯侧链；（2）天然VA侧链为全反式；（3）天然来源主要是鱼肝油，为醋酸酯，棕榈酸酯等,目前多由人工合成。,结构特点：,5,a.紫外吸收具有共轭多烯侧链紫外吸收。最大吸收波长在325328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同。,2.性质,不溶于水，溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。,b.溶解性：,6,共轭多烯侧链性质非常活泼.,c.不稳定性,7,C,H,2,O,H,O,C,H,2,O,H,O,C,H,O,C,O,O,H,维生素A的氧化产物（无生物活性）：,环氧化物,维生素A醛,维生素A酸,or,8,d.与SbCl3作用（Carr-Price反应）维生素A在氯仿中与SbCl3试剂作用，产生不稳定的蓝色。鉴别含量测定,9,1.三氯化锑反应,二.鉴别试验,维生素A在饱和无水三氯化锑的无醇氯仿溶液中即显蓝色，渐变成紫红色。,2.紫外吸收光谱VA的无水乙醇溶液在326nm有最大吸收。,10,确认醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：VA和其标准品用环己烷溶解展开剂：环己烷乙醚（80：20）板：硅胶G显色：SbCl3T.S.Rf：VA醇0.08VA醋酸酯0.41VA棕榈酸酯0.75,3、TLC,11,三含量测定,1、概述共轭多烯的结构具有特征的紫外吸收。相关物质结构相似,维生素A最大吸收波长附近也有吸收，对测定有影响。Morton和Stubbs等人提出了三点校正法。,紫外分光光度法三点校正法,12,三点校正法:,在三个波长处测得吸收度，根据校正公式计算含量，故称为“三点校正法”。,13,2.原理（根据、假定）,1、物质对光的吸收具有加和性，即,2、维生素A中的无关吸收在310340nm范围内近似一条直线。,14,效价为维生素A1的40%，max345350nm,3.相关物质的吸收,a.维生素A的衍生物,维生素A2去氢维生素A,15,效价低于维生素A1，max385390nm,b.维生素A的氧化产物,维生素A3去水维生素A,16,c.合成时的中间体,侧连有4个双键应有24（16）种异构体。目前，包括维生素A在内，共发现有6种异构体。它们是：,e.维生素A异构体,d.鲸醇,维生素A醇的二聚体，没有生物活性,17,18,新维生素Aa,新维生素Ab,19,新维生素Ac,异维生素Aa,20,异维生素Ab,维生素A,21,1：维生素A的max2、3：分别在1两侧,4、三个波长的选择方法,等波长差法：两个波长分别在1两侧12nm处，即,1=328nm;2=316nm;3=340nm,22,VA在这两个波长下的吸光度应该等于1下的吸光度的，即,1=325nm;2=310nm;3=334nm,等吸光度法：,23,5.方法,Ch.p收载有2种方法。,第一法（适用于酯式维生素A的测定）,a.操作方法,规定波长：300、316、328、340和360,24,max不在326329nm，第二法测定。,b.计算方法,（1）最大吸收波长确认,max在326329nm，第一法测定。,25,26,（2）计算吸收度比及比值差,首先要计算吸收度比值。,然后计算吸收度的比值差。,27,28,29,（3）计算校正吸收度,吸收度校正公式：,30,（4）换算因数,定义：每一个数值所相当的效价。,1IU=0.344g全反式维生素A醋酸酯，1g的维生素A醋酸酯就相当于,31,维生素A醋酸酯,维生素A醋酸酯,：,1530（环己烷、328）,32,消除植物油干扰：适合VA醇,第二法（皂化法）：,在波长300、310、325、334nm处测定吸收度，找出max。,1g维生素A醇所含VA的国际单位数=,1830,b.计算,33,c.校正公式A325（校）=6.815A325-2.555A310-4.260A334,d.判断,max不在323327nm或A300/A325大于0.73，先纯化后再测定。,max在323327nm之间且A300/A325小于或等于0.73，则：,34,35,（1）VA遇光易氧化变质，操作应半暗室中快速进行，所用试剂不得含氧化性物质，以防VA受紫外线或氧化性物质破坏。,注意事项,（2）用三校正法测定时，一点在max处，其余两点均为吸收曲线的上升和下降陡坡处。对波长的正确性要求严格。340nm处，若波长误差0.5nm，可影响结果-3.12.07%。所以测定时所用仪器的波长读数应注意，必要时应作标准对照。,36,第二节维生素B1的分析,一、化学结构与性质1.结构：,氯化4-甲基-3（2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基）甲基-5-（2-羟乙基）噻唑嗡离子盐酸盐,37,a.氨基嘧啶次甲基噻唑环季铵化合物b.碱性基团：嘧啶环上的氨基噻唑环上的季铵与酸成盐,2.结构特点：,38,硫色素反应VB1噻唑环在碱性条件下可被铁氰化钾K3Fe(CN)6等一些氧化剂氧化后，与嘧啶环上的氨基缩合成具有荧光的硫色素。,3.性质：,加碱分解后与醋酸铅反应VB1与NaOH试液一起加热，分解产生NaS，可与PbAc2反应生成PbS的黑色沉淀。,39,沉淀反应VB1的含氮杂环，能和生物碱沉淀试剂反应产生沉淀。如：VB1与硅钨酸反应可生成组成一定的沉淀。重量法测定VB1含量。,硫胺显碱性具有两个碱性基团:嘧啶环上的氨基、噻唑环上的季铵可以和酸成盐。如：盐酸硫胺、硝酸硫胺,40,维生素B1的水溶液显氯化物的特征反应。紫外吸收特性,41,二.鉴别试验,1.硫色素荧光反应,42,可与某些生物碱沉淀试剂生成组成恒定的沉淀如：与碘化汞钾产生淡黄色沉淀与碘生成红色沉淀与硅钨酸生成白色沉淀与苦味酸生成扇形白色结晶,2、沉淀反应：,3、加碱分解后与醋酸铅反应,43,非水滴定法（Ch.P所用方法）硅钨酸重量法银量法硫色素荧光法紫外分光光度法比色法络合滴定法,三.含量测定,44,1、原理：VB1分子中含有已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中，在醋酸汞存在下，均可被高氯酸滴定。2、方法：溶剂：冰醋酸（醋酸汞）指示剂：喹哪定红-亚甲蓝混合指示液滴定剂：高氯酸终点：天蓝色T=16.86mg/ml,（一）非水溶液滴定法（Ch.PVB1原料药）,45,VB1分子中具有共轭双键结构。,（二）紫外分光光度法（Ch.PVB1制剂）,（三）硫色素荧光法,硫色素反应所形成的硫色素与VB1的浓度成正比，可用于含量测定。,46,第三节维生素C的分析,一.化学结构,二稀醇,内酯,手性碳,47,维生素C分子中具有2个手性C原子，具有4种光学异构体。其中生理活性最强的是L（+）-抗坏血酸,结构特点：,具有内酯结构。碱性下可水解。,具有烯二醇基。还原性，能够被氧化成去氢抗坏血酸。酸性,能与碱成盐。,48,D(-)-异抗坏血酸,L(+)-异抗坏血酸,L(+)-抗坏血酸,D(-)-抗坏血酸,49,1.酸性烯二醇结构酸性。C3-OH，pKa=4.17(共轭效应)酸性强，C2-OH，pKa=11.57(邻位羰基)酸性极弱，表现为一元酸。能与NaHCO3作用生成钠盐。,二性质与鉴别试验,50,2.还原性,（烯二醇基）,去氢抗坏血酸,51,3、糖类的反应,VC,HCl,-CO2,水解,-H2O,戊糖,糠醛,吡咯,蓝色,4.荧光反应,5.UR,BP,52,三、杂质检查,1、溶液的澄清度与颜色检查,内酯结构,水解,-CO2,糠醛,有色聚合物,Ch.P（2005）VC原料、片剂、注射液,2、铁、铜离子的检查,Ch.P（2005）VC原料,53,四、含量测定,1.碘量法,原理,54,操作,终点颜色：无色蓝色1ml0.1mol/L碘液1ml相当于8.806mgC6H8O6,55,反应条件：酸性（使VC在空气中氧化速度减慢）溶剂：新沸放冷的水（减少水中溶解氧的影响）。,讨论,还原性物质的影响及排除VC注射液中常加有亚硫酸盐如NaHSO3作为抗氧剂。排除：加入丙酮或甲醛,56,+,57,原理：在酸性下2,6-二氯吲哚酚氧化型是红色的;还原型是无色的酸性下直接用2,6-二氯吲哚酚滴定，用滴定剂自身的颜色变化指示终点，不需要另外的指示剂。,2、2,6-二氯吲哚酚滴定法,58,终点的颜色是溶液由无色变为红色。,氧化型（红色）,还原型（无色）,+,+,59,一化学结构与性质,第五节维生素E的分析,60,1、硝酸反应本品，无水乙醇溶解，加硝酸，75加热约15分钟，显橙红色。2、水解后氧化反应本品，在碱性条件下水解，得-生育酚，在联吡啶和三氯化铁试液的作用下，反应产生血红色配离子。,二、鉴别试验,61,3、UV吸收VE的0.01%无水乙醇液：max=284nm；min=254nm4、三氯化铁反应,62,检查游离生育酚:取0.1g样品，按铈量法用Ce(SO4)2(0.01mol/L)滴定，以二苯胺为指示剂，消耗Ce(SO4)2液不得超过1.0ml。,三、杂质检查,63,1、色谱条件及系统适应性试验色谱柱：2m4mmI.D.硼硅玻璃柱，内装硅藻土（80100目）固定相：硅酮（OV-17）载气：N2，,四、含量测定,气相色谱法,64,柱温：265内标：正三十二烷检测器