（应用化学专业论文）化学发光法和荷移分光光度法测定生物和药物分子的研究.pdf

济南大学硕士学位论文 摘要 核酸是体内主要的生物大分子。它是遗传信息的载体，是生物物种延续、物种 进化的决定因素。因此核酸的定量分析在生命科学、生化药物、食品分析及临床检 验中部有着重要作用。酪氨酸在人体内含量的稳定与否直接反映人体的健康状况， 它是合成黑色素和肾上腺素的前体，缺乏酪氨酸人体就会出现代谢异常、智力低下 等疾病。吲哚乙酸( i n d o l e a c e t i ca c i d ，i a a ) 是一种广泛存在于植物体中的植物生长 素，与植物生长发育的规律和代谢过程的调控有密切关系。苯酚是一种重要的化工 原料，同时也是一种高毒有机物，对人畜和环境的危害很大。阿莫西林和氨苄西林 为3 - 内酰胺类抗生素，抗菌谱广，作用强，疗效高，毒性低，临床应用广泛。因此， 对上述几种物质的检测在生化药物、环境检测和临床检验方面就具有重要的意义。 本文致力于寻找新的检测上述物质的试剂，以建立灵敏的定量检测的方法，以 化学发光和分光技术为主要研究手段。同时应用荧光光谱技术进行了机理研究和讨 论。本文共分六部分，第一部分综述了流动注射化学发光法及荷移反应在药物及生 化分析中的研究及应用。 在论文的第二部分采用银纳米粒子催化化学发光法测定酪氨酸。研究表明，在 银纳米粒子存在下，酪氨酸能显著抑制硫酸铈r u ( p h e n ) 3 b r 2 体系的化学发光，且4 a 与酪氨酸的浓度在一定范围内成正比。在最佳实验条件下，酪氨酸的线性范围和检 出限分别是1 0 x 1 0 一一1 o x l o 巧g r n l ，5 x 1 0 母g m l 。该方法用于合成样品中酪氨酸的 测定，结果令人满意。机理研究表明，在反应中，酪氨酸被硫酸铈氧化，银纳米粒 子的加入并没有改变硫酸铈一r u ( p h e n ) 3 b r 2 体系的化学发光体。 在论文的第三部分中，银纳米粒子催化硫酸铈r u ( p h e n ) 3 b r 2 化学发光体系被用 于测定吲哚乙酸。研究表明，在银纳米粒子存在下，吲哚乙酸能显著抑制硫酸铈 - r u ( p h e n ) 3 b r 2 体系的化学发光，且4 七l 与吲哚乙酸的浓度在一定范围内成正比。在 最佳实验条件下，吲哚乙酸的线性范围和检出限分别是1 o x l o 0 x 1 0 g m l ， 9 x 1 0 9 9 m l 。 论文第四部分，应用银纳米粒子催化化学发光体系测定核酸。研究表明，在银 纳米粒子存在下，核酸能显著增强硫酸铈r u ( p h e n ) 3 b r 2 体系的化学发光。在最佳实 验条件下，核酸在1 0 x 1 0 6 - 1 0 x 1 0 。5 9 m l 和1 0 x 1 0 - 7 - 1 0 x 1 0 6 9 m l 范围内与a l c l 成 良好的线性关系，检出限为3 x 1 0 9 9 m l 。 论文第五部分基于苯酚对高锰酸钾甲醛化学发光体系的增敏作用，建立了一种 测定苯酚的化学发光分析新方法。在最优化实验条件下，苯酚浓度在 5 0 x 1 0 9 - 1 0 x 1 0 。6 9 m l 范围内与化学发光强度呈良好的线性关系，回归方程为 i = 0 5 3 9 + 1 9 4 1 1 0 6 c ( c ：g m l ) ，r = 0 ：9 9 9 6 ，检出限为( 3 a ) 3 x 1 0 母咖l ! 论文第六部分介绍了甲酚红荷移分光光度法测定阿莫西林和氨苄西林。阿莫西 林和氨苄西林与甲酚红在丙酮溶液中均发生荷移反应，由此建立了甲酚红荷移分光 光度法测定阿莫西林和氨苄西林含量的新测定方法。摩尔吸光系数分别为1 3 1 x 1 0 4 l t 0 0 1 c m 和1 3 5 1 0 4l m 0 1 c m 。 关键词：化学发光法：荷移反应；核酸；酪氨酸；吲哚乙酸；苯酚；阿莫西林； 氨苄西林 a b s t r a c t n u c l e i ca c i di st h em o s ti m p o r t a n tb i o m a c r o m o l e c u l e n u c l e i ca c i di st h ec a r r i e ro f g e n e t i ci n f o r m a t i o n i ti sa l s ot h ed e t e r m i n a t i o nf a c t o rf o rs p e c i e s c o n t i n u a t i o na n d e v o l u t i o n t y r o s i n ei so n ek i n d so f a m i n oa c i d s ，i th a ss t r a i g h t l yi n f l u e n c e dh u m a nh e a l t h i ti st h ef o r e b o d yo fm e l a n o s ea n de p i n e p h r i n e w ew i l lb e c o m em e t a b o l i z e da b n o r m a l a n dm e n i a lr e t a r d a t i o n 1 n d o l e a c e t i ca c i d ( i a a ) i sap i a mh o r m o n et h a te x i s t si nm o s t p l a n t sa n dr e g u l a t e sg r o w t ha n dd e v e l o p m e n ti np l a n t s p h e n o li so n ek i n do fs i g n i f i c a n t c h e m i c a lm a t e r i a l ，a n di sak i n do fl r i g hp o i s o n o u so r g a n i cs u b s t a n c e s i ti sh a r mt ot h e h u m a nb e i n g s ，a n i m a l sa n de n v i r o n m e n t a m o x i c i l l i na n da m p i c i l l i na r ew i d e l yu s e d b r o a d s p e c t r u ma n t i b i o t i c t h e yh a v eb e e nu s e df o rt h et r e a t m e n to f t h eu r i n a t i o ns y s t e m , t h er e s p i r a t o r ys y s t e m ，b i l i a r yt r a c tr e s u l t i n go ff l ub a c i l l u s ，i nb a c i l l u sd y s e n t e r i a e ，i n b a c i l l u se o l i ，i nt y p h o i db a c i l l u sa n dr h e u m a t o i da r t h r i t i s t h e r e f o r e ，i ti si m p o r t a n tt o d e t e r m i n ea b o v e - m e n t i o n e dm a t e r i a l si na n a l y t i c a ic h e m i s t r y t h i st h e s i sf o c u s e do nt h ed e v e l o p m e n to fn e wm e a n so fc h e m i l u m i n e s c e n c ea n d s p e c t r o p h o t o m e t r yt oe s t a b l i s hm e t h o df o rt h eq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no ft h em a t e r i a l s a b o v e m e n d o n e d w es t u d i e dt h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s m t h i st h e s i si n c l u s e ss i xp a r t s i n t h ef i r s to ft h i st h e s i s ，w ec o m m e n t e do nt h et h e o r y ，p r o g r e s so fc h e m i l u m i n e s e e u c ea n d t h ec h a r g et r a n s f e rr e a c t i o n t h es e c o n dp a r tw ef o u n dt h a tc e ( i v ) c a l lr e a c tw i t hr u ( p h e n ) 3 “t op r o d u c e c h e m i l u m i n e s c e n c e ，b u tt h ei m e n s i t yi sl o w , w h i c hi sg r e a t l ye n h a n c e db ys i l v e r n a n o p a r t i c a l ，a n dt y r o s i n ec a ng r e a t l yi n h i b i tt h ec h e m i l u m i n e s c e n c e t h eo p t i m u m c o n d i t i o n sf o rt h i sc h e m i l u m i n e s c e n c er e a c t i o nw e r es t u d i e di nd e t a i l u s i n ga f l o w - i n j e c t i o ns y s t e m t h ee x p e r i m e n t a lr e s u l t si n d i c a t et h a t ，u n d e ro p t i m u mc o n d i t i o n s ， t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n h i b i t i o ni sl i n e a r l yr e l a t e dt ot h ec o n c e n t r a t i o no ft y r o s i n ei n t h er a n g eo f1 0 1 0 一1 0 1 0 石g m l w i t had e t e c t i o nl i m i t5 x 1 0 g g m l t h i sm e t h o dh a s t h ea d v a n t a g e so fh i g hs e n s i t i v i t y ，f a s tr e s p o n s ea n de a s eo f o p e r a t i o n 1 1 1 i nt h et h i r t hp a r tw ef o u n dt h a ti n d o l e a c e t i ca c i dc a l li n h i b i tt h ec h e m i l u m i n e s c e n c e o fc e ( n ) r u ( p h e n ) 3 “s y s t e ma tt h ea b s e n c eo fs i l v e rn a n o p a r t i c a l t h ee x p e r i m e n t a l r e s u l t si n d i c a t et h a t ，u n d e ro p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n t e n s i t i s l i n e a r l y r e l a t e dt ot h ec o n c e n t r a t i o no fi n d o l e a c e t i ca c i di nt h e r a n g e o f 1 0 1 0 8 _ 6 0 x 1 0 7 9 m l a n d w i t h a d e t e c t i o n l i m i t 9 1 0 9 9 m l t h ef o a hp a r tw ef o u n dt h a tn u c l e i ca c i dc a l le n h a n c e dt h ec h e m i l u m i n e s c e n c e o fc e ( i v ) - r u ( p h e n ) 3 “s y s t e ma tt h ea b s e n c eo fs i l v e rn a n o p a r t i c a l t h ee x p e r i m e n t a l r e s u l t si n d i c a t et h a t , u n d e ro p t i m u mc o n d i t i o n s , t h ec h e m i l u m i n e s c e n c ei n t e n s i t yi s l i n e a r l yr e l a t e dt ot h ec o n c e n t r a t i o no fn u c l e i ca c i di nt h er a n g eo f1 0 x1 0 6 - 1 o xl o 5 g m l a n d1 0 1 0 7 1 0 1 0 石g m l a n d w i t ha d e t e c t i o n l i m i t3 x 1 0 g g m l i nt h ef i f t hp a r tw ef o u n dt h a tp h e n o lc a nr e a c tw i t hp o t a s s i u mp e r m a n g a n a t ei na l l a c i dm e d i u mt op r o d u c ec h e m i l u m i n e s c e n c e ，w h i c hi sg r e a t l ye n h a n c e db yf o r m a l d e h y d e t h ee x p e r i m e n t a lr e s u l t si n d i c a t et h a t , u n d e ro p t i m u f t ic o n d i t i o n s ，t h ec h e m i l u m i n e s c e n c e i n t e n s i t y i s l i n e a r l y r e l a t e dt ot h ec o n c e n t r a t i o no fp h e n o li nt h e r a n g e o f 5 0 x 1 0 9 1 0 1 0 6 9 m l ，w i t had e t e c t i o nl i m i t3 x 1 0 9 9 m l t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n w a s1 2 a t4 0 x l o g m lp h e n o l ( n = l l m e a s u r e m e n t s ) i nt h el a s t p a r t w ei n t r o d u c e dt h ec h a r g et r a n s f e rr e a c t i o no fa m o x i e i l l i na n d a r n p i c i l l i nw i t hc r e s o lr e di na c e t o n es o 、l u t i o n a m o x i c i l l i na n da m p i c i l l i nw i t hc r e s o lr e d f o r m s1 ：1c o m p l e xw i t ht h ea p p a r e n tm o l a ra b s o r p t i v i t yo f1 3 1 x 1 0 4l m o l - k c m ， 1 3 5 x1 0 4l , m o l - t c m 1r e p e c t i v e l y k e yw o r d s ：c h e m i l u m i n e s c e n c e ；c h a r g et r a n s f e r ；n u c l e i ca c i d ；i n d o l e a c e t i ca c i d ； t y r o s i o n ；p h e n o l ；a m o x i c i l l i na n da m p i c i l l i n i v c l ： f i ： d n a ： r n a ： b s a ： e a ： n b s ： r u ( p h e n ) 3 b r 2 , i a a ： l ： a ： c l 彳，c l ： 符号说明 化学发光 流动注射 小牛胸腺脱氧核糖核酸 核糖核酸 牛血清白蛋白 鸡蛋清白蛋白 n 溴代丁二酰亚胺 临菲哕啉钌四丁基溴化胺配合物 吲哚乙酸 荧光强度 吸光度 化学发光值 加入样品后化学发光变化值 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立 进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含 任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出 重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到 本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：墨堂缝。 日期： 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借鉴；本人授权济南大学可以将学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保 存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名：聋丝丛导师签名： 济南大学硕士学位论文 第一章绪论 核酸是由核苷酸聚合而成的生物大分子。它是遗传信息的载体，是生物物种延续、 物种进化的决定因素，如果在其结构上稍有变动、差错、缺少或增多，将会出现突变、 缺陷以及疾患等现象，所以核酸已成为生物化学、遗传学以及其它有关生命的学科的 研究热门课题。核酸的定量测定对于疾病早期诊断具有重大意义。酪氨酸是一种常见 的氨基酸，在人体内酪氨酸含量的稳定与否直接反映人体的健康状况，它是合成黑色 素和肾上腺素的前体，缺乏酪氨酸人体就会出现代谢异常、智力低下等疾病。吲哚乙 酸是一种广泛存在于植物体中的植物生长素，与植物生长发育的规律和代谢过程的调 控有密切关系。阿莫西林和氨苄西林为p 内酰胺类抗生素，临床上主要用于治疗流感 杆菌，痢疾杆菌，大肠杆菌伤寒杆菌，变形杆菌等引起的泌尿系统、呼吸系统、胆 道等的感染。其抗菌谱广，作用强，疗效高，毒性低，临床应用广泛。而苯酚则是一 种重要的化工原料，同时也是一种高毒有机物，对人畜和环境的危害很大。因此，在 化学中对上述物质的分析检测具有重要的意义。 化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方 法。化学发光分析法最大的优点是仪器简单，灵敏度高，线性范围宽，因而近来有 了较大的发展。化学发光分析技术在生物分子及药物的研究中有着广泛的应用。分 光光度分析技术的优点是其仪器简单，易操作，稳定性好等，因而成为一种重要的 分析方法。本论文利用化学发光法测定核酸、酪氨酸、吲哚乙酸和苯酚；建立了荷 移复合物分光光度法测定阿莫西林和氨苄西林的方法。 本章主要介绍流动注射化学发光法的研究进展，荷移反应在药物分析中的研究 进展以及论文的主要内容和特点。 第一节流动注射化学发光法的研究进展 化学发光分析是根据化学反应产生的辐射光的强度来确定物质含量的分析方 法a 化学发光分析法的突出优点是灵敏度高，不需要外来光源，避免了瑞利散射和 拉曼散射等噪音，因而光电倍增管在高压下时具有比荧光法更高的信噪比。它作为 一种有效的痕量分析方法，在材料科学、环境科学和生命科学等领域具有广泛的应 用前景。 化学发光是指吸收了化学反应能的分子由激发态回到基态时所产生的光辐射 现象，广义的化学发光也包括电致化学发光。一个化学反应要产生化学发光现象， 必须满足以下条件：第一是该反应必须提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供， 因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光：第二是要有有 利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受而处于激发态；第三是 激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放光子，或者能够转移它的能量给 另一个分子使之进入激发态并释放光子。 化学发光反应之所以能用于分析测定，是因为化学发光强度与化学反应速度相 关联，因而一切影响反应速度的因素都可以作为建立测定方法的依据。 化学发光反应一般可表示为： a + b _ c + ( 1 ) c c + h v ( 2 ) 化学发光强度( i c l ) 取决于反应的速度( d p d t ) 和化学发光量子效率( 吼l ) c l ( t ) = 吼l d p d t ( 3 ) 式中驴c l 可表示为：口c l = 庐，驴f ，其中驴，为生成激发态产物分子的量子效率，铆 为激发态产物分子的发光量子效率。 对于一定的化学发光反应，吼l 为一定值，其反应速度可按质量作用定律表示 出与反应体系中物质浓度的关系。因此，通过测定化学发光强度就可以测定反应体 系中某种物质的浓度。原则上讲，对任何化学发光反应，只要反应是一级或假一级， 都可以通过公式( 1 ) 进行化学发光定量分析。例如，在上述化学发光反应中，如 果物质b 保持恒定，而物质a 的浓度变化并可视为一级或假级反应，则： ，c l = ，c l ( t ) d t = f 哝l d a ( t ) d t d t = ( p c l c j ( 4 ) 即化学发光强度与a 的浓度成正比。 化学发光分析测定的物质可以分为三类：第一类物质是化学发光反应中的反应 物：第二类物质是化学发光反应中的催化剂、增敏剂或抑制剂；第三类物质是偶合 一2 一 反应中的反应物、催化剂、增敏剂等。这三类物质还可以通过标记的方式用来测定 其他物质，进一步扩大了化学发光分析的应用范围。 化学发光已经证明是种有用的现象，并且在分析化学上得到广泛应用u j 。自 从1 9 2 0 年，g r i n b e r ( z l 首先报道了酸性高锰酸钾作为化学发光试剂的用处，化学发 光法在分析化学上得到快速地发展。流动注射( f l o w i n j e c t i o n ) ，即在热力学非平衡 条件下，在液流中重现地处理试样或试剂区带的定量流动分析技术，它具有高效率、 高精度和快速分析的特点。将其两者相结合，可使f i c l 分析法同时具有以上优点。 在分析化学上获得广泛的应用。本节介绍常用的化学发光体系及其应用进展。 1 鲁米诺体系 鲁米诺体系是最重要的化学发光体系之一。鲁米诺( 3 氨基苯二甲酰肼) 可以被强 氧化剂氧化而处于激发态，激发态发射蓝光同时回到基态。常用的氧化剂有h 2 0 2 、 m n o a 、x 0 3 ( x = 1 2 1 、b r ) 、1 0 4 和f e ( 1 1 1 ) 等。 i 1 过氧化氢作为氧化剂 鲁米诺过氧化氢体系是最简单的鲁米诺体系口j 。过氧化氢价格低廉，且反应产物 无污染，因此。它是鲁米诺化学发光反应中使用最广泛的一种氧化剂。在碱性条件下， 鲁米诺过氧化氢体系可产生化学发光。例如：宋政华等人用鲁米诺体系测定乙酰螺 旋霉素1 4 1 ，检出限达为5 x l o 母g m l ，线性范围为0 0 1 5 0 x 1 0 g m l ；测定利培酮【5 1 ， 检出限为4 x 1 0 。2 9 m l ，线性范围为0 0 1 1 0 x 1 0 9 9 m l 。刘晓玉等人【6 】测定大米样品 中的对硫磷残渣，检出限为8 1 0 9 9 m l ，线性范围为2 x 1 0 。s 1 o x l o 币卧n l 。 1 2f e ( 1 l i ) 作为氧化剂 鲁米诺一铁氰化钟是另一个重要的鲁米诺体系( t q o j 。应用这一体系的大部分药物 需要在碱性环境中得以测定。陈浩汉等人利用抗坏血酸对f e 2 + _ 鲁米诺0 2 化学发光 体系的抑制作用，测定了抗坏血酸，检出限为2 x 1 0 q o g m l ，线性范围达到 1 o l o - 9 1 0 x 1 0 - 6 9 m l 。何彩霞等人利用芦丁对鲁米诺k 3 f e ( c n ) 6 化学发光体系化学 发光强度的抑制作用测定了芦丁。陈华等人发现扑热息痛在碱性条件下，对鲁米诺 一3 一 k 3 f e ( c n ) 6 化学发光体系的化学发光具有强烈的抑制作用。在p h = 4 5 ， n a 2 c 0 3 - n a h c 0 3 介质中，没食子酸对鲁米诺一k 3 f e ( c n ) 6 发光体系有很强的增敏作 用，据此建立了流动注射化学发光增强法测定没食子酸的方法，其检出限为 5 6 l o - 6 m o i l ，线性范围为8 0 x 1 0 4 1 0 x 1 0 击m o ll 。 表1 1 鲁米诺体系化学发光分析的应用 分析物 样品检出限线性范围标准偏差参考文献 a n a l v t e s a m p l em a t r i x - l o dl i n e a rr e s p o n s er a n g e r s d ( ) r e f e r e n c e ：酰螺旋霉紊人尿和人m 清 3 x 1 0 1 2 9 m l i o x l f f o 2 0 l o * g m l 5 04 利培酮药物制剂 4 x1 0 。2 9 m l10 x1 0 “一1 0 x1 0 * g m l 5 0 5 对硫磷残渣大米样品 8 x 1 0 9 9 m l 2 i 矿。1 0 x1 0 。g m l 2 86 原儿茶醛 7 0 xl o - s m o l l0 6 3 0m o i 几 i 1 药物制剂 7 原儿茶酸 5 0 x 1 0 4m o l lo 2 1 0m o l l4 6 多巴胺药物制剂 i 1 4 x 1 0 + g m l4 0 x 1 0 9 - - 4 o x l o 。7 9 m l 8 扑热息痛扑热息痛药片 2 4 x1 0 g g m l 4 0 x 1 0 。l i 0 x 1 0 e g m l 2 ，3 9 卡托普利药物制剂5 0 x1 0 g m l1 0 x i o 。o x l 0 。51 01 0 硫胺药物制剂 i 0 x 1 0 4 m o l l l3 3 x 1 0 9 缶7 1 0 6 m o l l3 01 8 4 0 x 1 0 g g m l8 0 x 1 0 9 + 6 o 1 0 m l 6 o x l 0 7 - 5 o x i o + g m l ( n b s - l u m i n 0 1 ) 异烟肼药物制剂2 3 2 0 3 0 x1 0 * g m l6 , 0 x1 0 。9 2 o x1 0 g m l 2 0 x 1o ，7 - - 2 0 i o m l ( n c s - l u m i n 0 1 ) 安乃近药物和人屎 2 0 x 1 0 ”g m l 5 0 x1 0 - n 一5o x1 0 。s g m l2 5 72 2 1 3 其它氧化剂 用电生的x 0 3 。氧化鲁米诺可产生强化学发光，而潘生丁，l 多巴胺，阿糖胞苷 对鲁米诺化学发光体系有抑制作用。基于此，建立了测定潘生丁、l 多巴胺、阿糖 胞菅的化学发光分析方法。维生素b l 对鲁米诺一k 1 0 4 体系的发光有抑制作用，检出 限为1 o l o 。2 m o l l ，线性范围达到3 3 x 1 0 。2 6 7 1 0 m o l l 。陈小利等利用五氟利 多对鲁米诺一k 1 0 4 体系化学发光的强增敏作用，测定了五氟利多，线性范围为 4 0 x 1 0 - s 1 0 x 1 0 一g m l ，检出限为9 2 x 1 0 一g m e 。此外，n b s ( o r n c s ) ，重铬酸盐【2 1 2 2 1 都可以用作鲁米诺体系的氧化剂。部分鲁米诺体系化学发光分析的应用列于表1 1 中。 2 高锰酸钾体系 高锰酸钾是一种常用的氧化剂，便宜易得，自从1 9 2 0g r i n b c r 2 1 开始将高锰酸钾 用于化学发光体系，后来有很多人研究、应用这一体系。甲醛作为化学发光的增敏剂， 广泛应用于高锰酸钾体系。石杰，赵开楼等人利用扑尔敏对高锰酸钾甲醛体系化学 发光的增敏作用测定扑尔敏，方法检出限为5 0 x l f f 8 m l ，线性范围为 1 o x l o 。7 5 o x l o g m l ，该方法用于测定扑尔敏片剂中扑尔敏的含量；n a w a la a l - 舡f a j 利用该体系测定胃复安检出限达到3 0 x 1 0 一g m l ，线性范围为 6 0 x 1 0 4 - 6 o x l o g m l ；潘瑾利用该体系测定酚妥拉明，方法检出限达到5 0 x 1 0 g g m l ， 线性范围为1 0 1 0 9 - - 2 0 x 1 0 一g m l 。此外，薛元英利用乙二醛作增敏剂建立了高锰酸 钾- 丙米嗪体系测定丙米嗪，方法检出限是1 2 x l o g m l ，线性范围是 4 0 1 0 - 8 - 1 o x l 0 6 9 m l 。 李丽清等人利用连二亚硫酸钠作增敏剂建立了高锰酸钾苯酚体系测定废水中的 苯酚，线性范围为1 0 x 1 0 7 1 0 x 1 0 一e d m l ，检出限是3 o x l 0 一g m l 。李丽清等人利用亚 硫酸钠作增敏剂建立了高锰酸钾吡哌酸体系测定药剂中的吡哌酸，线性范围是 1 o x l o 7 8 o x l o e d m l ，检出限是3 o x l o g m l 。 高锰酸钾体系使用的介质主要是硫酸，盐酸，还有多聚磷酸等。硫酸在高锰酸 钾体系中作为介质应用最广，曾被用于直接测定丫啶黄，异丙嗪，头孢菌素抗生素， 青霉素等。羟氨苄青霉素在硫酸介质中的检出限达到皮克级，为3 0 x 1 0 。2 9 m l ，线 性范围为1 0 1 0 。1 - - 2 o x l o 。9 9 m l ：h u e l o v aj 等人利用舒喘宁对高锰酸钾甲醛硫酸 体系化学发光的增敏作用测定舒喘宁，检出限为3 0 x 1 0 一g m l ，线性范围为 5 0 x 1 0 4 - 1 o x l o g m e ；t o w n s h e n d a 利用心安得对高锰酸钾甲醛硫酸体系化学发光 的增敏作用测定心得安，方法检出限为7 0 x l o g m l ，线性范围为 1 o x l o 币1 7 5 x l f f 5 9 m l 。此外，有人也用锰酸盐作为氧化州3 6 , 3 7 ，在硫酸介质中测 定药物，检出限分别为2 0 x 1 0 一m o l l ，2 0 x 1 0 一g m l 。石杰，赵开楼等人在盐酸介 质中测定阿莫西林，线性范围为5 0 x 1 0 。8 2 o x l o g m l ，检出限为3 0 x 1 0 一g m l 。 张德懿等人利用多聚磷酸对头孢噻肟钠高锰酸钾体系化学发光的增敏作用测定了 头孢噻肟钠，线性范围是2 0 x l o 8 2 o x l o g m l ，2 0 1 0 5 1 2 x 1 0 4 9 m l ，检出限是 2 0 x l o g m l 。部分高锰酸钾体系的应用见表1 2 。 表1 2 高锰酸钾体系化学发光分析的应用 分析物样品棺出限线性范围标准偏差参考文献 a n a l y t e s a m p l em a t r i x l o dl i n e a rr e s p o n s er a n g e r s d 骺) r e f e r e n c e ( 扑尔敏)药物制剂 5 1 0 o m o p l1 o xi o q 0 1 0 5 9 m l0 72 3 胃复安胃复立药片年兀针剂3 0 xl o s g m l6 0 xio o i o g m l 1 62 4 酚妥拉明 生物流质中5 o xi o 。9 9 m l 1 0 x 1 0 4 0 o x l 0 4 9 m l 4 o2 5 i o 1 0 。g m l o 0 l 0 ix 1 0 6 9 m l1 i 头孢氨苄 0 i 1 0 x 1 0 6 9 m l 2 0 x 1 0 g g m lo 0 l 加1 , , 1 0 6 9 m l i 3 头孢羟氨苄药物制剂3 l o i i o 1 0 # g m l 头孢唑林钠 2 0 xl o g g m l o 0 - - i 0 _ 1 0 6 9 m l 1 5 1 0 - - - 5 0 ， 1 0 4 曲n l 青霉索v 钾 1 o 10 乙1 0 xl o - s g m l 阿莫西林药物制剂 1 0 lo 乙i o 1 0 4 9 m l 3 2 氨苄西林 1 0 io 乙1 o x l 0 4 m l 氨苄西林钠 i o x l o v 1 o x l 0 4 9 m l 羟氨苄青霉素人血清和人屎3 o x1 0 。z g m l1 o 州0 。”一2 o x1 0 g g m l5 03 3 舒喘宁药物制舸 3 0 x l o 。8 9 m l 5 0 x1 0 4 1 0 x1 0 。，g m l1 5 33 4 心安得药物制剂7 o x1 0 。s g m l i o x l o l 1 7 5 x l o 4 9 m l o 13 5 抗坏山i 酸维生索2 x1 0 im o l l60 x1 0 4 ，2 o x1 0 m o l l2 3 3 7 3 硫酸铈体系 在药物和生物领域，硫酸铈和硫酸曾被用于化学发光的激发剂，通过能量转移 用于测定罂粟碱。c e ( i v ) 如同高锰酸盐、重铬酸盐或溴酸盐等氧化剂一样在氧化亚 硫酸盐等还原性物质时可产生弱的化学发光反应，因此可以利用此体系直接测定这 些物质。如药物制剂及食物中的抗氧化剂亚硫酸盐、胆酸汁、环己烷氨基磺酸钠、 色氨酸、可的松、氢化可的松、地塞米松、盐酸环丙沙星等一系列药物与硫酸铈反 应可产生化学发光。此外，一些荧光物质如罗丹明b ，罗丹明6 g 等可以作为硫酸 铈体系的增敏荆。p u l g a r i nja 等人利用罗丹明6 g 对硫酸铈噻嗪类氢氯化物体系化 学发光的增敏作用，测定了噻嗪类氢氯化物，线性范围是5 o 1 0 。乙3 o 1 0 g m l ， 一6 一 检出限为3 4 x1 0 g m l ：张群林利用罗丹明6 g 对硫酸铈葛根素体系化学发光的增 敏作用，测定了葛根素，线性范围是1 3 1 0 气8 0 x 1 0 e d m c ，检出限为8 4 x 1 0 o g m e 。 罗丹明b 增敏测定抗坏血酸，线性范围是1 3 1 0 气8 0 1 0 g m l ，检出限是 3 4 x 1 0 4 9 n l ：陈慧等人利用硫酸铈一罗丹明b 体系在硫酸介质中测定小牛胸腺 d n a ，线性范围是2 6 1 0 一o 2 6g m l ，检出限是6 5 x l o 。6 # m l 。喹啉衍生物增强剂 用于测定左旋氧氟沙星，莫喜沙星以及甲磺酸曲伐沙星l j 锄h 将t b 3 + - c p d x 加入 硫酸铈硫酸体系中用于测定人血清和人尿样品中的环丙沙星。用氢化可的松增敏测 定了谷胱甘肽、半胱胺酸。黄玉明在硝酸介质中用硫酸铈测定氯丙嗪氢氯化物，线 性范围是o l 1 0 4 9 m l ，检出限是6 5 x 1 0 母e d m c ；测定芬妥胺，线性范围是 l x l o 9 l l o 击g m l ，检出限达到4 1 0 一o g m l 。硫酸铈体系部分应用见表1 3 所示。 表1 3 硫酸铈体系化学发光分析应用 分析物样品 榆m 限线性范丽标准偏差参考文献 a n a l y t es m n p l em a t r i x l o dl i n e a rr e s p o n s er a n g e r s d ( ) r e f e r e n e e 阿奠西林阿莫两林胶囊 2 0 x 1 0 。s g m l 5 0 i o 。i i 0 x 1 0 锄n l 2 34 0 噻嗪类氢氯化物 药物制剂中3 4 x1 0 7 9 m l 5 0 x 1 0 l 3 o x l 0 4 咖l 2 o 4 7 葛根素药物制剂中 8 4 x i 0 。g m l+ 1 3 x 1 0 a 8 0 x 1 0 7 m l i 8 64 8 i 0 x 1 0 1 1 3 8 1 0 ”1 0 x 1 0 。i o 抗坏血酸新鲜蔬菜中 o 9 24 9 1 1 1 0 l ，lm o l l 小牛胸腺d n a 台成样品 6 5 x i o 6 9 m l 2 6 x1 0 。锄2 6g m lo 9 35 0 左旋瓴氟沙星 1 o x l 0 。7 9 m l 5 0 1 0 7 3 5 x i o 6 9 ，m l 莫喜沙星药 中3 5 x i o s g m l 2 o x1 0 。l 3 o xi o e g m l1 o 一2 55 i 甲磺酸曲伐沙星 8 0 x1 0 ? 咖l8 o x1 0 驰1 0 7g m l 环丙沙星人m 济和人尿 3 ix 1 0 4 0 m o l l 9 o x i o l i o x l 0 。m o l l2 85 2 氯丙嗪氢氯化物药片中 6 5 xl o * $ ：m l+ o ix l o g ：m l4 15 4 半胱氮酸人血清2 5x i o * m o l l3 5 x1 0 4 3 5 xl o m o l l8 45 3 芬妥胺药物制剂中 4 x 1 0 o g m l ix 1 0 4 i x l 0 6 9 m l 3 45 5 4 钌配合物r u ( b i p y ) 3 2 + ( r u ( p h e n ) 3 2 + ) 体系 联吡啶钉r u ( b i p y ) 3 2 + 是一种广泛应用于化学发光体系的试剂，r u ( p h e n ) 3 ”是具有 与r u ( b i p y ) 3 2 相似性质的配合物。r u ( b i p y ) 3 2 + 与会属离子( c u ( i i ) n i ( i i ) 和c o ( i i ) 】) 用于测定依米丁。李相克等人建立了r u ( b i p y ) 3 2 十卡马西平化学发光体系测定卡马西 平，线性范围为8 6 x 1 0 0 x 1 0 3m o l l ，检出限是2 5 1 0 一m o l l 。l e n e h a nce 建立 了r u ( b i p y ) 3 2 十一酸性高锰酸钾- 罂粟碱体系测定罂粟碱。多巴胺和肾上腺素在 r u ( b i p y ) 3 2 + 三苯基胺维生素酸性环境中得到测定。王园朝，何治柯建立了 r u ( p h e n ) 3 2 + - s 0 3 2 硫酸铈体系化学发光法测定葡萄酒中的亚硫酸盐总量，线性范围为 1 0 x 1 0 乙1 o 1 0 4 m o l l ，检出限是1 9 7 x 1 0 m o l l 。张韶虹等人利用r u ( p h e n ) 3 2 + 硫酸 铈化学发光体系测定吲哚乙酸，线性范围为检出限是5 o 1 0 。2 0 x 1 0 6 9 m l ，检出限 达到2 o x l o g g m l 。曹伟等人又将该体系用于蛋白质的测定，方法检出限为 2 5 x 1 0 g m l ，线性范围为6 0 x 1 0 。7 1 0