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文档简介

a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测,知识结构,二、a-淀粉酶的固定化与淀粉水解作用的检测,一、固定化技术基础知识,一、固定化技术基础知识,固定化技术：利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括吸附法、包埋法、化学结合法（将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到载体上）。,包埋法,化学结合法,物理吸附法,细胞多采用包埋法固定,酶更适合采用化学结合和物理吸附法固定化,反应方式,不管是固相柱还是固相悬浮体，回收后，在一定条件下贮存，还可以利用。,1.使底物溶液通过装有固相酶的柱，柱留出液即为酶催化的产物。,2.有时也可将固相酶或固定化细胞悬浮于底物溶液中，一定时间后溶液即成酶催化的产物。,实验原理,-淀粉酶,-淀粉酶,糖化淀粉酶,淀粉,糊精,麦芽糖,葡萄糖,二、-淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测,运用吸附法将-淀粉酶的固定在石英砂上。一定浓度的淀粉溶液经过固定化的-淀粉酶催化后，生成糊精，使流出液加入KI-I2指示液后呈红色，表明水解产物糊精生产。,固定化装置层析柱,实验材料制备,5mmol/LKI-I2溶液称取0.127g碘和0.83g碘化钾。加蒸馏水100ml。,a-淀粉酶的固定化在烧杯中将5mga-淀粉酶溶于4ml蒸馏水中。再加入5g石英砂，不时搅拌，30分钟后装入层析柱中。用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱以除去未吸附的游离淀粉酶，流速控制为1ml/min。,可溶性淀粉溶液取50mg可溶性淀粉溶于100ml热水中，搅拌均匀。,实验步骤,2.试验后，用10倍体积的蒸馏水洗涤此层析柱，放置在4冰箱里，几天后再重复上述实验，看是否有相同结果。,1.将灌注了固定化酶的层析柱放在铁架台上，用滴管滴加淀粉溶液，使淀粉溶液已0.3mL/min的流速过柱。在流出5mL后接收2mL流出液，加入1-2滴KI-I2溶液，观察颜色。用水稀释1倍后再观察颜色。,HST,层析住,实验结果,12341、2mL水+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液、2mL淀粉滤液+12滴KI-I2溶液+稀释1倍,实验注意事项,a.控制滴灌流速。0.3mL/min的流速，我们就可以控制每分钟滴管流出量为每分钟6滴（6=0.3mL/50uL）。这样做的目的是控制流速让淀粉和淀粉酶充分接触，反应。,b.显色。在流出5mL后接取2mL过滤液，然后向试管中加入1
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