菌种制作技术.ppt

第六讲二、三级菌种制作技术,食用菌生产技术课程组,二、三级菌种制作技术,一.二、三级菌种培养基的配制二.二、三级菌种培养基的灭菌三.二、三级菌种的接种四.二、三级菌种的培养五.二、三级菌种的质量鉴定,原种和栽培种的生产技术,原种和栽培种的生产，无论是培养基成分，配制方法和灭菌方法基本上是相同的。1）原种：是由试管斜面培养基培养的母种作种源接种而成，主要用于繁殖栽培种，也可直接用于生产。（母种原种）2）栽培种：由原种作种源扩大而成，只能用于生产。（原种栽培种),二、三级菌种制作流程,配制培养基,灭菌,二级菌种,培养,接种,培养,接种,灭菌,配制培养基,三级菌种,一级菌种,二级菌种,(二、三级菌种制作过程大同小异),原种、栽培种的制作流程按配方称取原料拌料装瓶（袋）打洞（孔径1cm深至瓶底）灭菌（1.5kgcm2，1.52h）冷却接种（接入黄豆大小一块）培养（2527）菌丝长满瓶（袋）培养7d8d扩大成栽培种。,一.二、三级菌种培养基的配制,（一）配制总原则1选择适宜的营养物质。2营养物质间配制的比例要恰当。3选择经济实用、来源广泛的原料。4适宜的pH值和含水量。,培养基（料）配制原则掌握碳氮比例食用菌对碳和氮的需要有一个比例，简称碳氮比（C）。菌丝体生长阶段：C=201；子实体形成阶段：C=30401；C过高，菌丝体生长过旺，而子实体小、产量低。,选好培养材料首先选不含杀菌物质的木屑杉、松、樟等树种，含酚、酯、精油等杀菌物质，会抑制食用菌生长。要用必须经过处理，如：蒸煮、晒等。根据食用菌的喜好选木屑如：培养香菇用桦木屑就比椴木屑好；培养金针菇用构，楮等木屑就比用榆、槐等木屑好。,注意物理性状培养原料要注意颗粒粗细、质地软硬程度，以及持水性能等物理性状。调节酸碱度各种食用菌需要的pH值不同，配制培养料时，应选用NaOH、石灰、盐酸或过磷酸钙等物质调节pH值。霉菌比食用菌喜欢更低的pH值，生产上有时为了控制这类杂菌的发生，往往将pH值适当调高0.51。,原料选择的注意事项（几点说明）木屑：树种：除松树、杉树、柏树、樟树、芸香属、按属等树种之外，绝大多数阔叶树和木屑都可以利用。（因其中含有酚、酯、精油等杀菌物质）粗细：不宜过细，以免培养基过湿或通气不良。,选择：根据食用菌分解能力选择，分解能力较强的食用菌采用硬质阔叶树木屑，反之采用软质树种木屑。如：金针菇分解能力较弱，以含单宁较少木屑为宜，木屑越陈越好；茯苓菌分解能力较强，可采用颗粒粗的松木屑或松木钉。,米糠、麸皮作用作用：补充氮源和维生素。稻草、麦秸、木屑、棉籽壳等纤维素原料，含氮量低。如：木屑含氮量0.03%以下。麸皮：含氮量比米糠多，但维生素不如米糠。米糠：含氮量比麸皮少。用量：一般10%20%，过多易引起污染。,加糖的作用初期补充碳源，用量1%5%。诱导胞外酶的产生。纤维素原料，食用菌利用缓慢。加入少量白糖作为食用菌初期补充碳源，促进菌丝快速生长，同时诱导纤维素酶的产生，更好地利用纤维素。,Ca2作用提供食用菌钙离子：原料中加石膏、CaCO3或过磷酸钙、骨粉提供食用菌钙离子；钙不断中和食用菌产生的有机酸；钙还能中和单宁；减少过量K、Mg对菌丝中毒，促进菌丝生长。,1、常用培养料的配方和配制方法,（二）培养基常用的配方,粪草培养基（适用于蘑菇）稻草或麦秸20kg、粪肥（干）30kg、石膏500g、水适量。方法：稻草切成2cm长粪肥混合发酵石膏调水装瓶灭菌,1、常用培养料的配方和配制方法,稻草麸皮培养基（草菇）干稻草78%、麸皮或米糠20%、蔗糖1%、过磷酸钙1%、水适量方法：稻草切成2cm长发酵蔗糖麸皮过磷酸钙,木屑米糠培养基（香菇、木耳、猴头、平菇等）木屑78%、麸皮或米糠20%、石膏1%、蔗糖1%、水适量。木屑、麸皮、黄豆粉培养基（银耳）木屑50kg、麸皮15kg、黄豆粉1kg、蔗糖0.75kg、MgSO40.25kg、水7075kg。棉籽壳培养基（平菇、猴头、金针菇）棉籽壳99.7%、蔗糖0.1%、石膏0.2%、水适量。,1、常用培养料的配方和配制方法,（三）培养基配制步骤,称料,拌料,调节pH值,分装培养料,清洁（洗或擦）瓶、袋外壁,封口,1.不溶性主、辅料混拌均匀,2.可溶性辅料溶于水后拌入主辅料,3.注意检查含水量（手测法等）,比实际要求的pH值调高1左右,容器：菌种瓶、菌种袋,要求：上紧下松，外紧内松，中间一个洞,二.二、三级菌种培养基的灭菌,1灭菌方法及要求高压蒸汽灭菌：压力1.5kg/cm2，温度126-128，时间1-2h（谷粒和经过堆制发酵的粪草培养基应达到2-2.5h）。常压蒸汽灭菌：100，保持10-12h,卧式高压蒸汽灭菌锅,2灭菌效果检验随机取几瓶（袋）置于25-30温度下空白培养4-6天，会出现以下情况：全部感杂少数感杂全部没有杂菌3、高压蒸汽灭菌锅的使用方法按照仪器操作说明操作！,分析原因,？,三.二、三级菌种的接种,概念：菌种移至新培养基上的过程关键：无菌操作,接种,接种环境消毒灭菌酒精棉球消毒双手操作器具消毒灭菌开启的管口、瓶口靠近灯焰拔出的棉塞勿触及任何地方动作快、准、稳,无菌操作要点,注意：1、严格挑选待接的菌种质量；2、勿接入表面老菌丝及老种块。,四.二、三级菌种的培养,菌种的培养实际就是对菌丝体的培养,培养条件,场所清洁,空气清新,光线暗,温度约25,空气湿度60%70%,培养方法,勿堆放过挤,及时剔除污染瓶（袋）,栽培种的菌袋缺氧时可刺孔增氧,控制菌龄（菌丝长满7-10天后使用）,五.二、三级菌种的质量鉴定,菌丝白（或呈该菌种应有的颜色）均匀、粗壮、有菇香味接种后萌发快,无杂色、无黄水、无结皮、无原基、无干缩脱壁等现象,菌种出售必须贴有菌种质量合格标签，标明菌种种类、级别、品种、生产单位和接种日期。,合格菌种,杂菌检查（菌种检查）接种后的原种，一般在3d5d左右菌丝恢复生长，应每天全面检查杂菌情况，如有污染及时剔除。（正常为白色，若混有其它色泽，应及时处理）；如发现接种块无新菌丝萌发，则认为是死菌，应及时补种。正常：菌丝白色杂菌：黄、红、绿、黑死菌：补种,菌种制作过程中，只要做到,选择正确的配方和优质原料,严格灭菌,优良的二、三级菌种,严格无菌操作,科学培育,选择优良菌种,六、制种、保藏中易碰到的问题及处理方法1、母种污染处理细菌污染底部取菌：可根据细菌只发生在培养基表面，而真菌菌丝能穿透到培养基内部的特点，用无菌操作法敲破试管取出培养基，在培养基的底部挑取一小块带有菌丝的培养基，移植到另一试管中培养，可得到纯正的母种。,1、母种污染处理细菌污染覆盖培养：将熔化培养基冷却到40，倒在已污染细菌的斜面上，使之形成厚约20cm的覆盖层，当食用菌菌丝透过培养基形成新的菌落时，即可挑取转管纯化。,1、母种污染处理真菌污染若污染的是青霉、黄霉、木霉等真菌，只要母种菌丝与这些杂菌没有相联或尚有一部分菌丝没有相联，并且这些杂菌的菌丝还没有产生孢子时，可以用无菌方法仔细挑取没有相联的一部分菌丝，移植到另外的试管中继续培育，就能得到纯正的母种。,2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？根据杂菌开始发生的部位，大致有以下几种污染原因：若杂菌同时在培养基的上、中、下部位发生，主要是由于培养基灭菌不彻底造成的。若杂菌开始发生在接种块上，这很可能是母种或原种已经感染了杂菌；或者是由于接种工具不严格（消毒），把杂菌带入。,2、原种、栽培种被杂菌污染的原因有哪些？怎样鉴别？若杂菌先在培养基表面发生，这是由于接种过程中无菌操作不严而引起的。若杂菌是在接种后若干天才发生的，而且是发生在瓶口往下挂的，这说明杂菌是从棉花塞侵入培养基的。引起的原因是培养室湿度过大、棉塞受潮，造成霉菌滋生所致。,3、为什么母种不能多次转管移植？母种转管次数多了会削弱菌丝的生活力，降低出菇率，甚至造成菌丝不孕而不能形成子实体。因此母种培育可以一次多培育几支试管，不要反复多次分离转管，以确保菌丝旺盛的生活力。（发生变异）,4、优良菌种的标准是什么？各种食用菌菌种，既有特定的质量标准，也有共同的质量标准。这些共同的质量标准主要是纯、壮两条。纯：除银耳菌种，其余各种栽培食用菌均是一种菌丝体的纯培养物，不得混入杂菌或纯培养物以外的其它菌种。例如：香菇7925菌种，只能是7925菌株菌丝体的纯培养。,复习思考题,1简述二、三级菌种的制作流程。2根据实际操作说明如何