（药理学专业论文）hl1细胞系ikach功能特征及对电刺激的反应.pdf

目录 中文摘要1 英文摘要5 研究论文h l 1 细胞系i k a 西功能特征及对电刺激的反应 前言1 0 一日吾“l 材料与方法1 1 结果15 附图18 讨论2 8 结论3l 参考文献31 综述3 4 致谢4 3 个人简历4 4 中文摘要 h l - i 细胞系lk 功能特征及对电刺激的反应 摘要 h l 1 细胞是心房肌细胞系，它来源于a t 1 小鼠心房肿瘤组织。h l 1 细胞可进行传代培养，培养过程中可观察到h l 1 细胞具有自主收缩性， 并保持与心房肌细胞相似的生物化学特性和电生理学特征。h l 1 细胞具 有胚胎期心房肌细胞的超微结构。应用r t - p c r 技术研究h l 。1 细胞的基 因表达，其基因表达特征与成年小鼠心房肌细胞基因表达很相近，包括q 肌球蛋白重链、q 肌动蛋白、间隙连接蛋白4 3 以及心房钠脲肽因子。 采用膜片钳技术，在h l 1 细胞上可记录到延迟内向钾电流i k r 样的电流， 在h l 1 细胞上还可记录到与c a 2 + 通道电流相似的电流，但还没有得到确 切验证。h l 1 细胞系由于其显而易见的优点( 可长期传代培养，易获得 等) ，有很多潜在的应用价值。目前的证据表明h l 1 细胞在很多方面都 与成年小鼠心房肌细胞的生理生化特征和电生理特征很相近，但同时也需 要更多的实验证据来丰富对h l 1 细胞系的认识，以便更好地利用它。 i k a c h 钾通道在心房肌细胞发挥重要作用，但对于h l 1 细胞中是否存在 功能性i k a c h 尚不得知。因此，本部分将针对h l 1 细胞的内向整流钾电 流i k a c l l 进行研究。 在心房肌细胞存在有乙酰胆碱激活的内向整流钾电流i k a c h ，它在心 房肌细胞动作电位复极化过程中发挥重要作用。现已知道，g i r k l ( 瞄r 3 1 ) 和g i r k 4 ( k i r 3 4 ) 是构成i k a c l l 的分子基础。在哺乳动物体内，g i r k l 和g i r k 4 主要分布于心房肌细胞和窦房结细胞，对调节心脏兴奋性起重 要作用。心脏中分布着交感神经与迷走神经纤维，迷走神经兴奋释放神经 递质乙酰胆碱( a c e t y l c h o l i n e ，a c h ) ，与心肌细胞膜上的m 2 受体结合， 激活相偶联的对p t x 敏感的g i 蛋白，从而诱发内向整流钾电流i k a c l l 。 另外，其他与p t x 敏感的g ( g i g o ) 蛋白偶联的的受体如a 】嘌呤受体 以及e d g 家族的神经鞘脂类受体也可以激活i k a c h 。i k a c h 在心房肌细胞 动作电位复极化的过程中发挥重要作用。迷走神经张力过高可过度激活 i k a c h 通道，使心房细胞的有效不应期( e r p ) 和动作电位时程( a p d ) 缩短而离散度增加，导致房内折返的发生，成为可能的心房颤动的诱发和 中文摘要 维持机制。心房颤动与i k a c h 有着密切关系。有两种观点，一种认为i k a c h 上调是诱发心房颤动的原因，另一种观点认为心房颤动会引起i k a c h 上调。 因此i k a c h 是心房肌细胞非常重要的钾离子电流，对其功能调节及机制的 深入研究对了解包括心房颤动等在内的心脏疾病有重要意义，而h l 1 细 胞系在这方面有重要的潜在价值。 本研究将首先验证h l 1 细胞是否存在i k a c h ，对此将使用乙酰胆碱 及腺苷诱发i k a c h ，用特异性阻断剂t e r t i a p i n q 对诱发的电流进行鉴别， 在此基础上对i k a c = l l 的其它特征，如去敏化( d e s e n s i t i z a t i o n ) 等进行研究。 我们还以电压为6v 频率为3h z 刺激h l 1 细胞1 2 小时，比较刺激前后 i k a c ! h 的变化。上述研究结果将为应用h l - i 细胞系研究心肌细胞电生理 特征打下基础。 目的：研究h l 1 细胞是否存在i k a c h 及其特征；研究电刺激对h l 1 细胞i k a c h 功能的影响。 方法：培养h l 1 细胞。复苏细胞前一天先在培养瓶中加入明胶和纤 维结合蛋白3 7 孵育，第二天复苏细胞转入培养瓶中培养，4 小时后更换 培养基。细胞铺片前先加入明胶和纤维结合蛋白3 7 孵育。用o 0 5 t r y p s i n e d t a 把培养瓶中的细胞消化下来，将细胞悬液均匀的滴在玻璃 片上，3 7 温箱中培养。 利用乙酰胆碱和腺苷激活心肌细胞i k a c h 。乙酰胆碱( a c e t y l c h o l i n e ， a c h ) ，与心肌细胞膜上的m 2 受体结合，激活相偶联的对p t x 敏感的g i 蛋白，从而诱发内向整流钾电流i k a c m 。但是由于a c h 对m 受体的特异 性不强，除m 2 外还可激活g q 偶联蛋白m l 受体等，后者会抑制g i r k 通 道，因此我们还选用腺苷( a d e n o s i n e ) 作为i k a c h 激活剂。腺苷( a d e n o s i n e ) 通过与其a l 受体结合，激活相偶联g i 蛋白进而激活g i r k 通道。利用腺 苷对i k a c h 电流的激活，以及t e r t i a p i n q 对是i k a c h 的特异性阻断作用， 对h l 1 细胞的i k a c h 进行研究。 利用i o n o p t i xc p a c e1 0 0p a c e r 以电压为6v 、频率为3h z 电刺激 h l 1 细胞，比较刺激的细胞和未刺激的细胞i k a c h 经上述刺激前后功能 的变化。 结果： ( 1 ) 基础内向整流钾电流存在的证据。实验所用电压钳制程序为持 骥骤目鎏璺( 哗蜘尉翼觐十产3 ) o u i d i p o t u ! u 洲0 i 鬃翠冰粝- y 睥串戮q 彭 刚唠翠圈骤目+ 产3 朝辞l 色碎妊娶觐+ 产3 瞽菊卫骤目叫掣朝磁印买驯 a mo 。翠2 ￥戟骤印耵( 唑拥尉冥娶，n ) x 工工 0 i 椠翠泓粝y 睥中戮 、 彭硝畴翠杲椠圉骤目户n 明群i 刍碎妊亲觐，n 瞽鸦卫骤印叫掣明辅a m 0 9 骤印叫掣明酉醣朝刨业少鞋驻甲娶驯a t uo 咄a t u0 9 。鬃码印副翠硫 髯中锈摹犟叫椠。骤印翳哇骤印唱羽，瞬狲珥目明坐刚畴i i h ( 杪) 。弩硫砖旱硫帛旦 絮骤目戥璇肆稍l 歪澎砸肆削士粝劐刨到轴朝抖刨。酱砸碴翠阜# 一刚田j ； 哪笤门，豺叼v ) t i 明显刚畴i i h 醣鼹酱彰驰丁、独澎彩i 设戥明翠型薪 斟弛剧辘2 翠百f 敬擞百日理2 士粝坳一影羽习勤明骤审戥璇蚓辙刮辗2 删0 i 士粝量髫u i t us ￥靴弓华骤印u o v b i i 劫鳓蛭群搬戮莓蟛娶i 设戥 明翠型澎斟碰郡辑2 翠骤胃叼v m i 朝戥联詈靴百日辑2 蜊o i - f - 粝。弩 砸璃辛阜毋显著骤目叼v m i 明丁当刚唠i - i h 上潼砸 j 狂。撇莓蟛耍骤印 哪m i i 散到，明翠型萄斟( 辙邵j | ；显2 ) 哗睡联翠曲。芬诳冯罩明骤印蛩著一 z 丑姑朝叼v x i 朝刚嘭哪髫门，。亚斟璃军朝例m i 当刚畴i 。1 h ( ) 。骤审归v 朝戥璇辱韶唑撒刮 辊2 联鸦翠型硝畴i 。i h 翠醣璁酱粝娶丁娶畔四砷鲲士明a t u 。e 8 。明 f l 歪截苗县摹妍罩s t u o n 裂戡与a t u0 6 。妻a m0 8 。翠再砷# 腿明骤印鎏百业 蜘尉b u ! 出! m 1 娜o i 唑蜘尉飘哲甜叼v m i 礁乜毋骤目掣掣娶蛹尉+ 产q 州o o g 礁卫骤印研百骤印叫掣县璇也毋肆部协晔独剧输2 与。u o v ) i i 戥獭鞠荟1 v 朝治卧目噩妁朝酒酶x z d 旨裂娶诵也舁韶目勘明舁鄱哗 睡璇一暂朝叼v 上凿隘k j 雅。蜘尉+ 产aw t lo o g 联词世骤砷即骤印 鸪骤嚣叫掣明戥璇碰邵辑2 瞳誊舀丁刚畴i 。1 h 翠哗睡獬岫v 椠勘辙 副辘2i a f l0 i 上出现 扎挺瑚巯摹衅砰。群丑朝翠型骤印吣v x i ( 乙) 。骤印岛婴嚣叫甲辨目中骤审掣掣啦霉朝腰誊邕丁询醣骐娶群 珂单鲲击+ m 朝a t u 乙8 朝崦勘茑* y - 影罩s t u o n 与娶捌a m0 8 。翠码日皱 召明艇崔舀骤印叫e i d 鎏蜘尉+ 产a 删o o g 目亚辑磐目骤毳刨甲朗酉醣 阜骑唧骤印弭审掣甲朝腰咨鲁蟛华鼻。骤审揖骤毳掣e i d 号b 审骤目刨掣 朝】委警融丑锈华具眦雅。露6 i d 朝琶抱卓著业磐审蚂叫、 彭鬃犁磐串叫q 彭研 骤目掣q 彭面也轴卫鞋翠业婴印叫甲朝酉醣面乜期粤辫翠珂目副刚畴 i 。1 h 丑。a t uo 计睡( d t u e j ) 莓蚁a m0 e i 。w g 鞴a t u0 8 。华珥申0 事黔澎 善骅￥牟 麟重印2 塘罩2 县 部：弛邵输2 ：鞋哦2 桑觐士掣岛：目噩05 当刚畴i 。 i h ：殴嚣姜 ，+ 弗- 秘 - 。币独翠逻骤印q 3 v n i 明刚畴i 1 h 翦而且 璇晔审。撤莓蟛耍叼v - ) i ii 磁戥朝翠型萄斟弛酬辘2 翠 i 茸芬诳璃罩翠型 毋叼v ) i i 鲷刚畴i - i h 朝戥璇辙酣辘2 甲辩一峨嗡i 朝哪髫叼，刨。叼v m i 骤肆蚂骤舞叫掣朝县獭独邵辐2 翠掣显瞽刚嘭i - i h 晕巯半目世那图 尴蜘副科哲姑叼v m i 普b 。u ! 出! 瑚，蜘尉邶0 ib u ! 如! u 9 l 唑w t l0 0 9 + 产a 骥也a 叼v ) i i 骤目曲骤嚣刨掣明县獬斑酣输2 翠掣刚畴i 。 i h ：拱粝 一 。粥雅朝 叼v m i 狲割诵世獭晔目硝畴i 。 - i h 翠醣擎凿弱菊释。( g o 0 d , 4 d n d ) g o 。o 千 e 。乙瞠6 z 0 - t - l e 椠f i 暂髟翠毋骤印明叼v ) i i 朝髯磐肆翻2 ( g o 。0 d - = i d v d ) s i 0 千i 抄。z 瞠8 0 。o 千i c 鬃眙髟瑁露骤印明叼v ) i i 朝髯磐擞酣辊2 甲 刚畴i 。 i h 朝璇哗士易咄璇胖半醣擎酱粝。砒甄朝骤申g 婆鞍晔潍羽骤 目蜘目b 。u ! d e ! u o , 唑+ 乙它a 士粝g 鞴叼v i 明髯磐曼韶瞠搬郡输2 甘誊融 f i 髻影半辑船曹瓤目滥。驻羽身桑刚畴i - i h 朝i 勒学奖崭抖刨与期刨期 f 乙i 刚畴i - i h 璇哗繇华朝z h 鬃索瞬a9 椠珥目丽器獭晔印j 9 0 附 0 0 io o g c i 。3 目卷锈萃。蛐缮明鸦辁叼v ) i i 当硝畴 - i h 牲搬哗审( s ) 。蜘喇 莒辫￥牟 英文摘要 f u n c t i o n a lc h a r a c t e r i s t i c so fi k a c hi nh l - 1c e l ll i n ea n di t s r e s p o n s et oe l e c t r i c a ls t i m u l a t i o n a b s t r a c t h l - 1c e l l sa r eac a r d i a cm u s c l ec e l ll i n ed e r i v e df r o ma i _ 1m o u s ea t r i a l c a r d i o m y o c y t et u m o rl i n e a g e h l - 1c e l l sc a l lb es e r i a l l yp a s s a g e dw h i l e p r e s e r v i n g t h e a b i l i t y t oc o n t r a c ta n dr e t a i n i n gt h e i rb i o c h e m i c a la n d e l e c t r o p h y s i o l o g i c a lp r o p e r t i e s u l t r a s t r u c t u r a l c h a r a c t e r i s t i c s t y p i c a l o f e m b r y o n i ca t r i a lc a r d i a cm u s c l ec e l l sw e r ef o u n di nt h ec u l t u r e dh l 一1c e l l s r e v e r s e t r a n s c r i p t a s e - p c ra n a l y s e sc o n f i r m e dt h a tt h ep a t t e r no ft h e i rg e n e e x p r e s s i o ni ss i m i l a rt ot h a to fa d u l ta t r i a lm y o c y t e s ，i n c l u d i n ge x p r e s s i o no f a - c a r d i a cm y o s i nh e a v yc h a i n ，a - c a r d i a ca c t i n ，a n dc o n n e x i n 4 3 ai k r - l i k e c u r r e n tw a sr e c o r d e di nh l 一1c e l l s ；l t y p ec a l c i u mc u r r e n tw a sa l s or e c o r d e d i nh l 一1c e l l sb u th a sy e tt ob ed e f i n e d h l - 1c e l l sh a v em a n yp o t e n t i a l a p p l i c a t i o n sb e c a u s eo fi t so b v i o u sa d v a n t a g e se g t h e i re a s ya v a i l a b i l i t ya n d p a s s a g e a b i l i t y t h e r ea r ee v i d e n c e ss h o w i n gt h es i m i l a r i t yo fi l l 一1c e l l st ot h e a d u l tm i c ea t r i a l m y o c y t e s i nt h e i r p h y s i o l o g i c a l ，b i o c h e m i c a l a n d e l e c t r o p h y s i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s b u tw en e e dt ok n o wm o r ea b o u th l 一1 c e l l l i n ei no r d e rt ou s ei tw e l l i k a c hp l a y sa ni m p o r t a n tr o l ei na t r i a l m y o c y t e s ，b u tw h e t h e rt h e r ei si k a c hi nh l 一1c e l l sr e m a i n su n k n o w n t h e p r e s e n tw o r ka i m st oi n v e s t i g a t et h ei n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc u r r e n ti k a c h i nh l 1c e l l s i n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc u r r e n ti k a c ha c t i v a t e db ya c e t y l c h o l i n ei s i m p o r t a n ti na c t i o np o t e n t i a lr e p o l a r i z a t i o ni na t r i a lm y o c y t e s m u s c a r i n i ck + c h a n n e l s ( k a c h ) i nt h eh e a r ta leh e t e r o t e t r a m e r i ca n dc o m p o s e do ft w o s u b u n i t s ，g i r k1 ( k i r 3 1 ) a n dg i r k 4 ( k i r 3 4 ) i nm a m m a l s ，g i r k1a n d g i r k 4a r ed i s t r i b u t e di nt h ea t r i a lm y o c y t e sa n ds i n o a t r i a ln o d ec e l l sa n dp l a y a ni m p o r t a n tr o l ei nr e g u l a t i n gt h ee x c i t a b i l i t yo ft h eh e a r t t h ek a c hc h a n n e l s a r e o p e n e db ym er e c e p t o r a c t i v a t i o ni n r e s p o n s e t o p a r a s y m p a t h e t i c s t i m u l a t i o n t h i si sb e l i e v e dt ob et h em a i np a t h w a yt o a c t i v a t eg i r k 5 英文摘要 c h a n n e l sv i ap t x s e n s i t i v eg p r o t e i n s i na d d i t i o n ，o t h e rp t x s e n s i t i v eg ( g i g o ) p r o t e i n c o u p l e dr e c e p t o r ss u c ha st h ea 1p u r i n e r g i cr e c e p t o r s ，t h ee d g r e c e p t o rf a m i l ya n ds p i n g o m y l i n er e c e p t o r sc a na l s oa c t i v a t ei k a c h i k a c h p l a y sa ni m p o r t a n tr o l ei nt h ea c t i o np o t e n t i a lr e p o l a r i z a t i o ni na t r i a lm y o c y t e s e x c e s s i v ea c t i v a t i o no fi k a c hc a u s e db yh y p e r t o n i c i t yo fv a g u sn e r v e sm a y s h o r t e ne r pa n da p d ，r e s u l t i n gi nt h eo c c u r r e n c eo fr e e n t r y t h i si sa p o s s i b l eu n d e r l y i n gm e c h a n i s mf o ra t r i a lf i b r i l l a t i o n c u r r e n t l yt h e r ea r et w o v i e w p o i n t s ：o n ei st h a tu p r e g u l a t i o no fi k a c hc a u s e s a t r i a lf i b r i l l a t i o n ，t h e o t h e ri st h a ta t r i a lf i b r i l l a t i o nc a nc a u s ei k a c bu p r e g u l a t i o n s oi k a c hi sav e r y i m p o r t a n tp o t a s s i u m i o nc u r r e n ti na t r i a l m y o c y t e s r e s e a r c h o ft h e m e c h a n i s ma n dr e g u l a t i o no fi k a c hi so fg r e a ts i g n i f i c a n c et ot h ei n v e s t i g a t i o n o fa t r i a lf i b r i l l a t i o n h l - 1c e l l sh a v ep o t e n t i a lu s e f u l n e s sf o rt h er e s e a r c ho f a t r i a lf i b r i l l a t i o n t h 【i ss t u d yf i r s tv e r i f i e dt h ee x i s t e n c eo fi k a c hi ni l l - lc e i l s w eu s e d a c e t y l c h o l i n ea n da d e n o s i n et oi n d u c ei k a c ha n du s e dt e r t i a p i n qt oi d e n t i f y t h i sc u r r e n t w r ea l s os t u d i e do t h e rc h a r a c t e r i s t i c so fi k a c hi nh l lc e l l ss u c h a si t sd e s e n s i t i z a t i o n f u r t h e r m o r e ，w es t i m u l a t e dt h eh l 一1c e l l su s i n ga o v o l t a g eo f6v a t3h zf o r12h o u r s ，a n dc o m p a r e di k a c hb e t w e e np a c e dc e l l s a n dn o n - p a c e dc e l l s t h er e s u l t sa r et h eg r o u n d w o r kf o rf u t u r er e s e a r c h o b j e e t i v e ：t os t u d yt h ee x i s t e n c eo fi k a c hi nh l - 1c e l l sa n di t s c h a r a c t e r i s t i c s ；t os t u d yt h ee f f e c t so fe l e c t r i c a ls t i m u l a t i o no nt h ef u n c t i o no f i k a c hi nh l lc e l l s 、 m e t h o d s ：h l 一1c e l l sa r ec u l t u r e di nc l a y c o m bm e d i u m b e f o r e c u l t u r i n gc e l l s ，t i s s u ec u l t u r ef l a s k sw e r ec o a t e dw i t hg e l a t i n f i b r o n e c t i n ( 2 m l 1 1 2 5o r6m l t 7 5f l a s k ) t h ef l a s k sw e r ec a p p e da n di n c u b a t e da t37 o v e m i g h t t h en e x tm o r n i n g ，t h eg e l a t i n f i b r o n e c t i nw a sr e m o v e df r o mt h e c u l t u r ef l a s k ，a n dt h ec e l l sw e r et h a w e da n dt r a n s f e r r e di n t ot h ef l a s kq u i c k l y t h em e d i u mw a sr e p l a c e db y2m 1o ff r e s hs u p p l e m e n t e dc l a y c o m bm e d i u m 4h o u r sl a t e r b e f o r e c u l t u r i n gc e l l s ，c o v e rg l a s s e s w e r ec o a t e d w i t h g e l a t i n f i b r o n e c t i n 1 1 1 ec e l l sw e r et r a n s f e r e d f r o mt h ef l a s kt ot h ec o v e r g l a s s e s ，a n di n c u b a t e da t3 7 6 llillilliillillil 英文摘要 w eu s e da c e t y l c h o l i n ea n da d e n o s i n et oa c t i v a t ei k a c h a c e t y l c h o l i n e ( a c h ) b i n d st om 2r e c e p t o r si nt h ec e l lm e m b r a n e ，w h i c hi nt u r na c t i v a t e s p t x s e n s i t i v eg ip r o t e i n sa n dt h u si n d u c e si n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc u r r e n t i k a c l l h o w e v e r , b e c a u s ea c hn o to n l y a c t i v a t e sm 2r e c e p t o r sb u ta l s o a c t i v a t e sg q c o u p l e dm lr e c e p t o r st h a ti n h i b i tg i i c h a n n e l s ，w ea l s ou s e d a d e n o s i n et oa c t i v a t ei k a c l l a d e n o s i n e ( a d o ) b i n d st oa 1 r e c e p t o r , a n d a c t i v a t e sg ip r o t e i nr e s u l t i n gi nt h ea c t i v a t i o no ft h eg i r kc h a n n e l s w r eu s e d t e r t i a p i n qt oi n h i b i ti k a c h i nh l - 1c e l l sr e s e a r c h w es t i m u l a t e dh l 1c e l l su s i n gav o l t a g eo f6v a t3h zw i t hai o n o p t i x c p a c e10 0p a c e r , a n dc o m p a r e di k a c hi np a c e da n dn o n p a c e dc e l l s r e s u l t s ： ( 1 ) t h ee v i d e n c ef o rt h ee x i s t e n c eo ft h ei n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u m c u r r e n t t h ep r o t o c o lf o rc u r r e n tr e c o r d i n g s ：t h eh l - 1c e l l sw e r eh e l da t 一8 0 m y , a n dt h e nar a m pv o l t a g ef r o m - 1 2 0t o + 2 0m vw a sa p p l i e d i nt h eh l - 1 c e l l s ，a no b v i o u si n w a r dc u r r e n tw a ss e e na tn e g a t i v em e m b r a n ep o t e n t i a l s w h i l ea no u t w a r dc u r r e n tw a so b s e r v e da tp o s s i t i v em e m b r a n ep o t e n t i a l s ，t h e l a t t e rn o tb e i n gt h es u b je c to ft h i ss t u d y f i r s t ，t h ec u r r e n tw a sc h a r a c t e r i s t i co f i n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc h a n n e l s i t si n h i b i t i o nb y5 0 0g mb a z 十s u g g e s t s t h a tt h i sc u r r e n tw a sm e d i a t e db yi n w a r d l yr e c t i f y i n gp o t a s s i u mc h a n n e l s b a 2 + - s e n s i t i v ec o m p o n e n to ft h ec u r r e n t ，w h i c hw a ss u b t r a c t i o n c o n s t r u c t e d ， r e v e r s e da t 8 0 m v , av a l u ec l o s et ot h ee q u i l i b r i u mp o t e n t i a lf o rp o t a s s i u m c h a n n e l s ( e k ) s ot h e r ee x i s t e da ni n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc u r r e n ti nt h e b a s a lc u r r e n t ( 2 ) e x i s t e n c eo fi k a c hc u r r e n t i nh l 1c e l l s f i r s tw eu s e d10g ma c ht o i n d u c ei k a c h t h e r ew a sa ni n w a r dr e c t i f i e rp o t a s s i u mc u r r e n t i tw a si n h i b i t e d b y5 0 0g m b a 2 + t h e nw eu s e d10g ma d ot oa c t i v a t ei k a c h a d oa c t i v a t e d a 1r e c e p t o rt h a tc o u p l e dt og ip r o t e i na n di k a c hw a si n d u c e d s i m i l a rt ot h e a c h i n d u c e dc u r r e n t ，t h ec u r r e n ti n d u c e db ya d ow a si n h i b i t e db y5 0 0g m b a 2 + i tw a sa l s oi n h i b i t e db y10n mt e r t i a p i n q i t sr e v e r s a lp o t e n t i a lw a s a r o u n d 8 0m v , av a l u ec l o s et oe k a l lt h ee v i d e n c ei n d i c a t e si k a c he x i s t e di n h i ，1c e l l s 英文摘要 ( 3 ) t h ed e s e n s i t i s a t i o no fi k a c hi nh l lc e l l s i nt h ep r e s e n c eo ft h e a g o n i s ta c h ( 1 0g m ) ，t h ea m p l i t u d eo fi k a c hg r a d u a l l yd e c l i n e d b e s i d e s ，t h e i k a c hm a n i f e s t e das m a l l e ra m p l i t u d ef o l l o w i n gt h ea p p l i c a t i o no f10p ma c h f o ras e c o n dt i m e i tw a ss i m i l a rt ot h ed e s e n s i t i s a t i o no fa c hi na t r i a l m y o c y t e s w ea l s ou s e d10 “ma d o t oa c t i v a t ei k a c h ，b u tn od e s e n s i t i s a t i o n o c c u r r e d ( 4 ) v o l t a g e - d e p e n d e n ts o d i u mc u r r e n ta n dc a l c i u mc u r r e n ti nh l 一1c e l l s w ef o u n dt w od i f f e r e n ti n w a r dc u r r e n t sa t - 6 0m va n d 3 0m v r e s p e c t i v e l y a p p l i c a t i o no ft t x10n m b l o c k e dt h ei n w a r dc u r r e n ta c t i v a t e da t 一6 0m v , s u g g e s t i n gi n v o l v e m e n to fav o l t a g e d e p e n d e n tn a + c u r r e n t a p p l i c a t i o no f b o t ht r x ( 10n m ) a n dn i m o d i p i n e ( 10r t m ) ，ac a 计c u r r e n ta n t a g o n i s t ， b l c o k e db o t hi n w a r dc u r r e n t s ，s u g g e s t i n gi n v o l v e m e n to fav o l m g e d e p e n d e n t c a 2 + c u r r e n ta t 3 0m v ( 5 ) w es t i m u l a t e dh l - 1c e l l sf o r12h o u r su s i n gav o l t a g eo f6v a t3h z w i t hac p a c e10 0p a c e r w es t i m u l a t e dh l 1c e l l sa n dm e a n w h i l ew e c u l t u r e dn o n p a c e dc e l l s i nt h es a m ec o n d i t i o nf o rc o m p a r i s o n i k a c hw a s i n d u c e db y100 ma c ha n d10 肛ma d or e s p e c t i v e l y i k a c hw a si n h i b i t e d e i t h e rb y5 0 0 州b a 2 + o rb y10 n mt e r t i a p i n - 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1c e l l sa n dm e a n w h i l ew ec u l t u r e dn o n p a c e d c e l l si nt h es a m ec o n d i t i o nf o rc o m p a r i s o n n l er e s u l ti n d i c a t e st h a t e l e c t r i c a ls t i m u l a t i o nr e d u c e dt h ei k a c hf u n c t i o ni nh l 1c e l l s 英文摘要 k e y