动物实验基本技术和方法 (NXPowerLite).ppt

第八章动物实验基本技术和方法,一、实验前准备,理论准备：了解动物实验基础知识制定研究计划和方案查阅关于实验方法的参考文献条件准备：仪器、器械、药品运输实验和饲养场所,二、抓取和固定,小鼠,大鼠,豚鼠,家兔,犬,猫的抓取,猴,三、性别、发情、配种与怀孕鉴定,四、编号和标记,1、染色法：浅色动物3.5-5苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）2硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）,2、打耳孔法：小型动物,3、剪趾法：小型动物,4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分5、烙印法：刺号钳，中、大型动物6、针刺法：中、大型动物7、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物8、剪毛法：大动物9、笼子标号,五、分组,随机化分组：避免人为影响例：将14只小鼠随机分成两组。先将小鼠编为I14号，在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。编排如下；,动物编号1234567891011121314随机数日1622779439495443548217379323归组BBABAABABBAAAA奇数代表A织，偶数代表B组A组：356811121314B组：1247910调整分组：接刚才随机数字23继续抄表得随机数字78，用78除以8（因为需要把C组的8个数字调整掉一个），得余数6，所以把A组的第6个动物，即12号动物调整到B组,最终分组A组：3568111314B组：124791012,例：12只大鼠随机分为3组大鼠编号112在随机数字表上任点一数，按任意方向连续抄12个随机数字。每个数分别用3除，记录余数，根据余数分组大鼠编号：1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12随机数字：08，27，01，50，15，29，39，39，43，79，69，10余数：2，0，1，2，0，2，0，0，1，1，0，1组别：B，C，A，B，C，B，C，C，A，A，C，A,A：3，9，10，12B；1，4，6C：2，5，7，8，11调整分组：接刚才随机数字10继续抄表得随机数字61，用61除以5（因为需要把C组的5个数字调整掉一个），得余数1，所以把C组的第1个动物，即2号动物调整到B组。最终分组A：3，9，10，12B；1，2，4，6C：5，7，8，11,六、去毛,1、剪毛：弯头剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。,4、化学脱毛：常用脱毛剂8%硫化钠水溶液硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。,七、给药,1、自动口服：加入饲料或饮水2、投喂药片：掰开口，放到舌根部3、灌胃（i.g)：,4、直肠给药5、呼吸道给药6、滴鼻7、点眼8、经皮肤给药：常用于检测药物、毒物、化妆品等的透皮吸收、局部作用、至敏作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤，大小鼠常采取浸尾方式。9、皮内注射(i.d)：一般用于接种或过敏实验。将药液注射在真皮和表皮之间。,10、皮下注射(s.c)：颈背部、腋下、腿、侧腹11、肌肉注射(i.m)：股部肌肉,12、腹腔注射(i.p)：下腹部腹中线两侧13、静脉注射(i.v)：小鼠：尾静脉大鼠：尾静脉、阴茎静脉、舌下静脉、浅背侧跖静脉,尾静脉注射：大小鼠有上、左、右3根尾静脉阴茎静脉注射,舌下静脉注射浅背侧跖静脉注射,猴的后肢皮下静脉注射,豚鼠：浅背侧跖静脉、耳静脉注射家兔：耳静脉注射猪：耳缘静脉猴：前肢桡静脉、后肢隐静脉注射,猫、狗：前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉注射狗前肢内侧头静脉狗后肢外侧小隐静脉,14、脑腔注射：（1）小鼠小指夹鼠尾，拇指和是指置小鼠头两侧固定，中指和无名指压住鼠身，在注射处消毒后，右手持注射器，以食指固定针芯，垂直刺入针头深度约57mm（2）兔将兔用固定器固定好，剃去头顶的被毛，左手将头皮绷紧，消毒后，右手持锥子，自头顶正中稍偏一侧部位，锥穿头骨，即换以左手固定锥子，右手持注射器，使针头沿锥尖刺入，慢慢拔出锥子，即刻将针头刺入约1020mm，即可推液,15、关节腔注射：16、椎管内注射：注射入蛛网膜下腔17、淋巴囊内注射：蛙和蟾蜍,18、小脑延髓池注射：,八、采血,1、大小鼠：眶静脉丛（窦）：少量多次采大小鼠血。小鼠0.20.3ml，大鼠0.40.6ml摘眼球：用于一次大量采小鼠血，可得到45体重的血量尾静脉：用于少量多次采大小鼠血,剪头：用于一次性大量采小鼠血，可得到0.51.0ml的血量大血管：包括颈动脉（静脉），股动脉（静脉），腋下动脉（静脉），腹主动脉。此方法不常用于小鼠采血，而多用于大鼠一次性大量采血。可得5ml左右血量。心脏采血：小鼠少用，可用于大鼠一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。,2、家兔：耳缘静脉：可反复采血，每次510ml。耳中央静脉：可反复采血，每次1015ml。,心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到80100ml血量颈动静脉采血：用于一次性采血，需要手术，可得血量8010ml。,3、豚鼠：心脏采血：可用于一次性（开胸）或多次采血（不开胸）。一次性开胸采血可得到510ml血量。背跖静脉采血：用于少量反复采血。,4、犬猫：和静脉注射部位相同，前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静脉（动脉）或心脏采血5、猪：心脏采血或耳大静脉采血6、羊：颈静脉采血7、猴：前肢头静脉、后肢皮下静脉或耳缘静脉等。8、禽类：翼下静脉,常用抗凝剂：肝素：抑制凝血酶活力，阻止血小板凝集。纯品肝素1mg125U，10U20U抗1ml血凝集，但通常应用23倍剂量。用法：可配成1%肝素溶液，用时取0.1ml于试管内，100烘干，每管可抗凝510ml血。或用1%肝素溶液湿润采血注射器。肝素可改变蛋白质等电点，当用盐析法分离蛋白作分类测定时，不可用肝素抗凝。,枸橼酸钠：使凝血必需的钙离子失活。常用35%水溶液，碱性较强。草酸盐合剂：草酸铵1.2g，草酸钾0.8g，福尔马林1.0ml，加蒸馏水至100ml。使凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草酸盐合剂0.1ml。氟化钠：每毫升血加6mg。,九、其他体液采集,1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓,6、尿液采集：代谢笼收集导尿管采集膀胱穿刺压迫排尿,十、麻醉,1、麻醉方法：全麻吸入麻醉，静脉注射、腹腔注射。局麻浸润麻醉。根据手术，按皮下、筋膜、肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射到术野周围。,2、麻醉前准备：禁食812h，防止呕吐，可饮水根据实验部位和种类，给动物脱毛。犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌,阿托品：减少支气管和唾液腺分泌，防止气管阻塞。副作用：加快心率。用量：肌肉或皮下注射0.04mg/kg安定：产生镇静作用，加强麻醉效果，使骨骼肌松弛。用量：2.55mg/kg吗啡：产生镇静作用。副作用：抑制呼吸中枢。用量：皮下注射12mg/kg，肌肉注射1020mg/kg.,3、麻醉药物：全麻药物乙醚：强挥发性、易燃。乙醚是最常用的吸入麻醉剂，各种动物适用。机制：抑制中枢神经系统。特点：安全范围大，肌肉完全松弛，对肝肾毒性小，麻醉诱导期和苏醒期较长。副作用：局部刺激大，引起上呼吸道黏膜分泌增加，导致呼吸道阻塞，可用阿托品对抗解救。,巴比妥类：种类很多，有巴比妥钠，戊巴比妥钠，硫喷妥那，苯巴比妥钠等。适用于各种动物。特点；安全范围广，毒性小，麻醉潜伏期短，麻醉维持时间长。可腹腔或静脉给药。机理：阻断神经冲动传递到大脑。副作用：过量使用可导致呼吸肌麻痹而死亡，同时抑制末梢循环，导致血压降低，并影响基础代谢，导致体温降低,氯胺酮：常用其盐酸盐。特点：麻醉潜伏期短，麻醉维持期仅1020min，麻醉浅，安全性高，可重复给药。机制：阻断大脑联络途径。副作用：兴奋心血管系统，使血压升高，心率加快，偶尔引起呕吐。水合氯醛：作用特点和巴比妥类相似。但安全范围小，麻醉剂量和中毒剂量接近，对皮肤和黏膜有较强刺激。,局麻药物普鲁卡因：是无刺激性的局麻药物。特点：麻醉速度快，注射后13分钟就可产生麻醉。可以维持3045分钟。对皮肤和黏膜穿透力很弱，需要注射给药才能产生局麻效果。它可以使血管舒张，易被吸收入血液而失去效果。在其溶液中加入肾上腺素（每100ml加入0.1%肾上腺素0.20.5ml）可以使麻醉时间延长12小时。,利多卡因：效力和穿透力比普鲁卡因强的卡因：化学结构和普鲁卡因类似，效力和穿透力比普鲁卡因强。,4、实验动物的急救呼吸停止：人工呼吸尼可刹米：适用于各种原因的中枢性呼吸衰竭，每次0.25g0.5g，静脉注射。戊四氮：对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致的呼吸衰竭，每次0.1g，静脉注射或心内注射美解眠：对抗巴比妥类和水合氯醛中毒，每次50mg，静脉缓慢注射,心跳停止：心脏按摩针刺或脉冲电刺激肾上腺素：用于心脏骤停的急救。每次0.51.0ml静脉注射碳酸氢钠：纠正急性酸中毒。可注射肾上腺素后立即静脉注射5%碳酸氢钠12ml/kg,十一、处死,1、颈椎脱臼法：小鼠、大鼠2、空气栓塞法：兔、猫、犬等大动物3、放血法：心脏放血或大血管放血4、断头法：小鼠、大鼠5、吸入二氧化碳6、注射巴比妥类药物,十二、动物的大体解剖和脏器识别,（1）切面术语矢状面：是与动物体长轴平行面与地面垂直的切面。其中把动物体等分成左、右对称两半的叫正中矢面；与正中矢面相平行的所有切面均称为矢状面。横断面：是与动物体长轴相垂直的切面，把动物体分成前、后两部分。与器官长轴相垂直