（基础兽医学专业论文）复方头孢噻呋长效注射液的研制及其药动学研究.pdf

河南农业大学学位论文独创性声明、使用授权及知识产权归属承诺书 学位论 文题鬟复方头孢罐呋长效注射液的研制及其药动学研究 学位 级别 导师 姓名 硕士研究生 学生 姓名 武博达 | 喜翌| 基础簧医学 胡功致教授 学位论文 是否保密 如需保密，解密时间年月旦 独创性声明 本人星交论文是在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果，除了文中 特别加以标注和致谢的地方外，文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成 果，也不包括为获得河南农业大学或其他教育机构的学位或证书丽使用过的材 料，指导教师对此进行了审定。与我一同工作的同志对本研究所傲的任何贡献 均已在论文中做了翡确的说嬲，并表示了谢意。 特此声明。 研究生签名： 日靴穆年 言霎一 嘲舻绉哆日 学位论文使用授权及知识产权归属承诺 本人完全了解河南农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印 刷本和电子版本，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等 复制手段保存、汇编学位论文。本人同意河南农业大学可以用不同方式在不同 媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 本人完全了解河南农业大学知识产权保护办法的有关规定，在毕业离 | 开河南农业大学后， | 位为河南农业大学， 业 就在校期闻从事的科研工作发表的所有论文，第一署名单 试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河南农 大学所有，否则，承担相应的法律责任。 注：保密学位论文在解密后适用于 研究生签名：它民脊狂导师签名： 日期； 翼7 卜了pt 审p毡r；g“醚2 ： 月名，6躲敷 导 夕 瓣 院 期 学 墨 致谢 本论文是在导师胡功政教授的精心指导下完成的，导师在论文选题、试验 设计与操作及论文的撰写、定稿过程中都给了我无微不至的亲近关怀。导师渊博 的知识、严谨求实的治学作风、精诚敬业的精神和敏锐的思维给予我启迪和教诲， 使我受益终身。在此谨表示我最衷心的感谢和最诚挚的祝福! 感谢课题组王艳玲教授、杨国宇教授、李宏基副教授等老师在完成课程学 习及研究课题中的指导和帮助! 感谢药理教研室的刘建华老师、潘玉善老师、张素梅老师、苑丽老师、生理 生化实验室的王月影老师、病理实验室的杨玉荣老师等在试验过程中给予我的无 私帮助。 试验期间，师姐匡秀华、付秀玲、师兄司红彬、孙亚伟给予了热心指导和帮 助，同届研究生贾艳华、吴华、李胜利、晁利刚等也给予了许多帮助，谨此一并 表示由衷的感谢! 复方头孢噻呋长效注射液的研制及其药动学研究 ( 摘要) 本试验璧在透过研究复方头拖噻呋长效注射液的研铡方法及其药动学特征，为长效注射 液漪研制帮临床合理阉药提供理论依据。 首先通过体外抗菌试验测定不同配比头孢噻呋与舒巴坦的最小抑菌浓度和最小杀菌浓 度筛选出复方药物的最佳配比。采用分散法制作复方头孢噻呋长效注射液，处方设计采用正 交试验法：固定处方中其他敷料的含量，改变辅料a 、磷脂、词盘的含量，以混悬液的沉降 容积比、髯分数性考察处方辘料对混悬液稳定性的影响。结果袭明，只有当三者维持在一定 量躲比铡时，混悬液在沉降容积比、再分散性方覆才能表现最好效果。本试验采用高效液楣 色谱法，建立了在盘浆中测定头维噻狭及其去曦喃甲酰头孢噻呋相关的代谢物、舒巴坦的方 法；该法灵敏度高，操作简单 浓度在0 2 5 一- - 4 0 9 鲥l t l l 时线性较好。 动物体内药动学结果表明，自制复方头孢噻呋长效注射液的生物利用度是8 9 4 3 ，达 峰时间是i 4 7 h ，药物半衰期为1 5 5 3 h ；市售注射液的生物利用度是5 6 2 ，达峰时间是0 6 9 h ， 药物半衰期为9 。3 2 h ；复方头孢噻呋长效注射液的生物利用度离予市售普通制剂6 0 6 。 莼动学数据结果表臻，皇铡复方头孢噻呋长效注射液达到了缓释和提高生物利用度的霉的。 复方头孢瞳呋长效注射液的研制在国内尚属首例，药物质燕评定、药物体内药动学研究 及生物利用度的测定结果表明长效注射液具有稳定性较好、长效缓释等优点，有着良好的开 发应用前景。 关键词：头孢噻呋；长效j 生射液；h p l c ；药物动力学 1 文献综述 1 1 头孢噻呋概述： 头孢噻呋( c e f t i o f u r ) 又名赛得福，是第一个专门用于动物的第3 代头孢菌素类抗生 素。头孢噻呋是美国法玛西亚普强公司于2 0 世纪8 0 年代研制出的动物专用抗生素，1 9 8 8 年， 美国药品与食品管理局f d a 批准了头孢噻呋钠用于治疗牛呼吸道细菌性疾病，此后f d a 又陆续 批准了头孢噻呋钠及盐酸头孢噻呋用于1 日龄鸡、火鸡、猪、山羊及绵羊等。头孢噻呋主要 作用于转肽酶而阻断细菌细胞壁的合成。呈现杀菌效力，对革兰氏阳性菌及革兰氏阴性菌均 具有超广谱强效抗菌作用，尤其对猪肺疫、猪放线杆菌性胸膜肺炎、猪链球菌病、仔猪黄白 痢等常见的临床畜禽疾病具有良好的治疗效果。经国外临床大量验证，本药具有抗菌谱广、 高效、毒副作用小、药残极低和动物专用等其他抗生素无法比拟的优势。然而，随着头孢噻 呋药物广泛应用，细菌对药物耐药性也日趋严重；细菌对头孢噻呋的耐药性主要表现为b 一 内酰胺酶对p 一内酰胺环的水解性，从而使头孢噻呋失去抗菌活性。 1 1 1 理化性质： 头孢噻呋为类白色粉末，不溶于水，热分解温度为2 1 2 ，p i t 为7 o n 的溶解度为8 = g m l 。 头孢噻呋的分子式为c 1 9 h 1 7 n 5 0 7 s 3 ，分子量为5 2 3 5 5 ，化学名为 6 r 一 6 a ，7b ( z ) 7 一 ( a 一氨基一4 一噻唑基) ( 甲氧亚氨基) 乙酰 氨基卜3 一 ( 2 - 呋喃羰基) 硫代 甲基 8 一 氧代一5 一硫杂一卜氮杂双环 4 ，2 ，o 辛一2 一烯一2 一羧酸，结构式见图1 。多制成钠盐用于 临床。 h 武 c o oh o o 图1 头孢噻呋的化学结构 f i 9 1 c h 铷l i c a is t r u o t u r a if o r n u l ao fc e f t i o f u r 1 1 。2 抗菌活性： 头孢噻呋抗菌活性极强，对革兰氏阳性菌、阴性菌及厌氧菌都有高效，而且对各种能产 生1 3 一内酰胺酶的细菌也有效。王付民等曾报道头孢噻呋对临床分离的2 4 株鸡大肠杆菌的 最小抑菌浓度为0 2ug m t ；张春辉等旺1 测定头孢噻呋对临床分离的4 7 株鸡大肠杆菌的m i c 为 0 2pg m 1 s a l m o n 等b 1 就头孢噻呋及其主要代谢物去呋喃羰基头孢噻呋( d f c ) 对5 3 9 株兽医 临床分离的病原菌的抑菌试验表明，二者对革兰氏阴性菌的抗菌活性相同或接近，m i c 值 相著不超过一个稀释倍数。对葡萄球菌属，头孢噻呋的m i c 为1hg m l ，d f c 的 l i c 9 。为4 o 8 0 i lg m l ：对从牛、马体内分离到的链球菌属，头孢噻呋的m i c 鲫o 0 0 1 9ug m l ，d f c 的m i c 9 0 2 为0 0 3l jg m l ，两种药物对所测菌属都高度敏感。s h r y o c k t r 等h 报道，头孢噻呋对5 5 株牛嘈 血杆菌的m i 0 1 2 51 tg m l ，抗蘑活性强子红霉素、氨苄青霉素、替米考星( t i l m i c o s i n ) 、 土霉素、挂褒霉素和泰乐菌素。y a n c y 等嘲对9 属l ? 种从兽医旗床分离的牛、猪、羊、马、 家禽、狗、猫的2 6 株瘸骧菌的抑菌试验表明，除金黄色葡萄球菌外，头孢噻呋对几乎所有菌 株( 包括产一内酰胺酶的菌株) 的抗菌活性均强于氨苄青霉素；d i x o n 等潮从热带鱼体内分离 出4 2 株气单胞菌属的所有菌株对头孢噻呋敏感，但对氨苄青霉素( 7 l ) 和四环素不敏感。 w a t t s l jl 等h 1 报道，从未分娩奶牛乳腺中分离出1 4 9 4 株病原菌，头孢噻呋对其中1 3 5 株金黄色 葡萄球菌、1 2 2 2 株葡萄球菌属、1 5 株肠球菌属、4 2 株链球菌属、6 0 株革兰氏雕性肠道蓬属m i c 9 0 分别为l 、l 、艇、2 、ll lg m l 。w a t t s 。强等隅1 报道，头燕噻呋对在美国1 9 8 8 - - ，1 9 9 2 年阀从牛 呼吸道分离出豹8 8 0 株病原菌( 溶矗性和多杀性巴氏杆菌、嗜盘杆菌) 的稀i c 9 0 o 0 6i lg m l 。 p o s t 稀等嘲报道，从患呼l 毅道病牛体内分离出的4 2 1 株溶血性巴氏杆菌和1 5 8 株多杀性巴氏杆 菌对头孢噻呋均敏感。v a n d u i j k e r e n e 等n 报道，从新西兰马分离出的6 2 株病原菌对头孢噻呋 皆敏感。c e r v a n t e scc 等报道，头孢噻呋对从1 5 9 匹马中分离出的4 2 株大肠杆菌、2 8 株肺 炎克雷伯氏菌、2 9 株沙门氏菌属、l l 株肠道菌属和4 9 株假单胞菡属的m i c 9 0 分别为 4 0 5pg m l 、li jg m l 、王錾g m l 、4 2 弘g m l 茅爨4 8 罄g m l 1 。1 3 药物动力学： 。1 。3 。1 吸收分布：头孢噻呋的药代动力学特征是注射吸收迅速，有效盘药浓度维持时间长。 消除缓慢，表观分布容积好，生物利用度高。头孢噻呋肌肉或皮下注射吸收逐速，达峰快， 盘中药物浓度高，猪、马、羊、犬、禽肌肉或皮下注射头孢噻呋的峰浓度和达峰时间见表1 h 玎。 头孢噻呋在动物体内的表观分布容积较小，般都小于11 k g 。头孢噻呋在肉牛、奶牛、泌 乳山羊、非泌乳山羊、驼羊体内的表现分布容积或稳态分布容积介于0 1 9 0 4 0 1 k 9 2 ：间2 坤1 。头孢噻呋在动物的有些组织内也可以达到相当高的浓度，b r o w n s a 等给牛分别腿虑、皮 下注射2 2 氆g k g 的头孢噻呋钠，最大血药浓度c m a x 及达峰对润k ，分别为( 1 3 9 3 。5 5 ) l lg 吨及0 。5 6 2 。o h ，( 1 3 。6 3 8 5 ) 驻g m l 及0 6 7 3 o h ，药时曲线下面积a u c o 一啪分 别为( 1 0 8 3 5 l lg h m l ，( 1 0 5 2 9 8 ) ug h m l 表明肌肉、皮下注射2 种方式的药动学 特征及生物利用度是相似的u 引。猪( 5 ，2 m g k g ) 、绵羊( 2 2 m g k g ) 多剂量肌注头孢噻呋后各种 组织中以肾脏中药物浓度最高，分别为4 。4 7i ig m l 、9 0 2l jg m l 、5 5 4pg m l ：其次是肺，分 别为2 9 3ug m l 、6 0 3 耻g m l 、1 1 8 婪g m l ：再次失肝脏、脂肪和肌肉，故该药适合治疗呼吸 道疾病和泌尿道的感染 。c r a i g m i l l 虬以1 1 和2 。2 m g k g 的剂量给2 4 头绵羊分别静脉、肌肉 洼射头孢噻呋，并取血样检测。1 i m g k g 剂量静脉、肌肉注射的消除半衰期t t 2 分别为3 5 0 、 3 8 9 m i n ，2 2m g k g 齐u 量静脉、肌肉注射的消除半衰期分别为2 9 2 、4 5 9 m i n ，肌肉注射的生物利 用为1 0 0 ，a u c o 。与剂邋成正比关系刖 3 表1头孢噻呋在动物体内的一些药动学参数 t a b l e 、1 p h a r m a o o k i n e t i c so fc e f t i o f u ri na n i m a i s 动物剂量m g - k g - 1 途径t 。hc m a x ha u c ug m l l hk r t hv d ( a r k a ) 1 k g - 1 马 2 2i m1 2 54 4 62 4 7 0 6 1 0 一 o 2s c0 7 51 6 6 9 0 5 一一 犬 2 2s c1 0 08 9 1 6 0 4 0 一 一 4 4 1 5 02 6 7 0 1 8 1 0 0 一 一 奶山羊2 2，iv 一一 2 7 1 03 8 30 3 1 2 21 。m1 0 74 5 72 4 1 04 8 0 一 驼羊2 21 。v 一一 3 8 3 93 2 5 0 1 9 2 21 + v 一 一 3 8 0 05 0 l 一 绵羊2 2 1 m0 8 07 1 34 2 0 06 0 0 3 01 。m0 5 41 5 8 02 0 4 0 0 1 7 2 0 一 猪 5 01 。m0 3 3 22 8 3 03 0 7 0 01 5 5 0 一 牛 2 01 。v 一一 7 2 4 0 6 4 80 3 8 ，j 、鸡2 2 6 s c0 8 3 1 6 78 6 6 一一 3 1 5 3 3 8 4 1 2 4 0 4 3 9 0 2 6 0 2 1 9 1 4 5 0 1 4 3 0 7 1 2 6 7 7 1 1 3 2 生物转化： 对头孢噻呋肌注给药在肉牛、奶牛、猪、绵羊体内生物转化进行了广泛的研究，结果表 明，有少量头孢噻呋的1 3 一内酰胺环破坏，生成极性代谢物，绝大部分头孢噻呋很快脱去3 位硫 代基上的呋喃羰基，转化成去呋喃羰基头孢噻呋( d f c ) ，d f c 含未受破坏的1 3 一内酰胺环，是头 孢噻呋有抗菌活性的代谢物，d f c 在血浆、尿液和组织中极少以游离状态或原形存在，可通过 其3 位取代基上的巯基与半胱氨酸、谷胱甘肽形成二硫化合物( 半胱氨酸一d f c 、谷胱甘肽- d f c ) ， 另外d f c 还可与血浆蛋白或组织蛋白结合，形成d f c - 蛋白复合物，d f c 形成蛋白复合物和形成 二硫化合物的过程是可逆的，所以其二硫化合物和蛋白结合物可能充当d f c 在血浆和组织中 的储库，从而也影响其半衰期及作用时间，此外d f c 还可以形成二聚物u 。在牛、羊的血浆中 d f c 是唯一的代谢产物，在所有动物的血浆中，5 0 1 0 0 的d f c 与血浆蛋白结合，其余部分通 常以d f c 一半胱氨酸的形式存在。肉牛、奶牛、猪i 绵羊的尿中头孢噻呋的代谢物可分为极性 代谢物和含d f c 的代谢物两大类，在猪、肉牛、奶牛的尿中极性代谢物的含量不超过总量的1 0 ， 在绵羊的尿中却占4 0 ，说明绵羊对头孢噻呋的代谢能力较其它动物要强。头孢噻呋在动物肾 组织中的相关代谢物主要与组织间质中的大分子结合( 猪占6 2 2 ，绵羊占9 5 7 ) ，肾脏中不 与大分子物质结合的主要是d f c - 半胱氨酸和极性代谢物：猪肝脏中头孢噻呋的代谢产物主要 为d f c 一谷胱甘肽，绵羊的肝脏中，不与大分子物质结合的为极性代谢物( 占9 5 ) 。牛肝脏中， 头孢噻呋代谢物主要以与蛋白结合、游离的d f c 、头孢噻呋和d f c 一半胱氨酸四种形式存在， 肾脏中头孢噻呋代谢物主要以与蛋白结合、游离d f c 和d f c 一半胱氨酸三种形式存在，在肌肉和 肺中，主要以头孢噻呋、与蛋白结合两种形式存在1 。 4 1 1 3 3 排泄： 头孢噻呋在动物体内排泄较为缓慢，主要排泄途径是经肾脏随尿排泄，其次经粪便排 泄。以c 1 4 标记法测得猪、绵羊、牛尿中药物回收率分别为6 1 蹋、9 2 6 和5 7 4 ，粪便中药物 回收率分别为1 0 8 、6 5 和2 9 1 n 明。头孢噻呋在马、犬、奶山羊、驼羊、绵羊、猪、牛、 美冠鹦鹉、亚马逊鹦鹉、小鸡、小火鸡体内的消除半衰期分别为3 1 5 、4 1 2 、2 6 0 、 2 1 9 、2 8 3 、1 4 5 0 、7 1 2 、2 5 0 、7 5 0 、6 7 7 、7 4 5 h n 3 1 5 加猁，其动物种属间差异明显， 绵羊、山羊、马、美冠鹦鹉的消除半衰期较小，可能与这些动物对代谢头孢噻呋的能力较强 有关。头孢噻呋的有效血药浓度维持时间长，在表1 中列出的给药剂量下( t e l i l 等晗u 报道) ， 亚马逊鹦鹉血药浓度维持在0 2l jg m l 以上达2 4 h 。b r o w n s a 等报道，以2 2 m g k g 剂量给7 日龄 和l 、3 、6 、9 月龄肉牛肌注给药，在7 日龄和1 月龄牛，给药后7 2 h 血药浓度维持在o 2 l lg m l 以上，在3 、6 、9 月龄牛，给药后3 6 h 血药浓度维持在0 2i lg m l 以上。b r o w n s a 幢剐报道，大白猪 ( 3 m g k g ) 肌注给药后7 2 h 时的血药浓度为0 2 7 9 m 1 ，约克夏杂交猪( 5 m g k g ) 肌注给药后9 6 h 时 的血药浓度为0 2 2 4i lg m 1 。c r a i g m i l l a l 等瞳列报道，绵羊以2 2 m g k g 的剂量肌注给药，给药后 2 4 h 时的血药浓度为0 3 3 3 g m l 。c o u t i n f 等n 报道，对泌乳山羊以2 2 m g k g 的剂量肌注给药， 其c m a x 和t m a x 分别为4 5 弘咖l 和1 1 7 h 。j a g l a n p s 等报道，马以2 2 m g k g 的剂量肌注给药 后8 、1 2 、1 6 h 时的血药浓度分别为0 9 9 、0 4 7 、0 1 7 g m l 。b r o w n s a 等晗u 报道，犬2 2 m g k g 皮下注射头孢噻呋后2 4 h 血药浓度为0 5 5 6 # p j n 蛆。 1 1 4 临床应用：f d a 报道，给4 2 头自然发生呼吸道疾病、约6 个月龄的牛肌肉注射头孢噻呋 钠( 2 2 m g k g ) ，每日1 次，连续使用3 d 。分别于第4 d 、l o d 、2 8 d 检测结果，治愈率分别为8 6 、 7 4 、7 1 ：死亡率分别为0 、2 d 、7 1 。k e s l e r d j 等瞳印以头孢噻呋治疗1 2 头患呼吸道疾病 的肉牛疗效好，s u s t r o n c k b 等幢町以头孢噻呋治疗1 2 头试验性溶血性巴氏杆菌感染牛，死亡率 显著降低，g u s t i n p 等幢订报道，头孢噻呋治疗1 5 头黑白花奶牛的运输热取得良好疗效， s u s t r o n c k b 等伫町以头孢噻呋气雾剂治疗1 2 头试验性溶血性巴氏杆菌感染支气管肺炎牛显著 降低其死亡率，另外头孢噻呋治疗奶牛的产后子宫炎和牛的蹄病也取得良好效果坦引。张继渝 等口报道，给2 4 0 头人工诱发放线杆菌胸膜肺炎的猪肌肉注射5 m g k g 盐酸头孢噻呋和青链霉 素，治疗7 d 后，盐酸头孢噻呋组痊愈率为8 5 3 ，有效率为9 2 7 ，而青链霉素组的痊愈率为 5 7 8 ，有效率为7 1 1 。f l o z s d 报道哺，给5 5 头自然发生呼吸道感染的马分别注射2 2 m k g 的盐酸头孢噻呋和2 2 m g k g 的氨苄西林钠，治疗2 d 后，2 d 组患病马的体温都降至正常水平， 未再发展为腹泻，盐酸头孢噻呋组有9 2 9 的马症状得到改善，7 8 6 痊愈，而氨苄西林钠组有 9 2 6 的马症状得到改善，只有5 9 3 的马痊愈。 1 2 头孢噻呋的耐药性 1 2 1 耐药的状况：随着抗生素药物的广泛应用，不同种类动物的致病菌对抗生素的耐药性 正与日俱增船2 3 丑川。在大肠杆菌的研究中，许多头孢噻呋的耐药水平均有报道；付秀玲等3 引 报道头孢噻呋对临床分离的3 0 株人肠杆菌的最小抑菌浓度最高达6 4 0i lg m l ，耐药率高达 7 2 ；w h i t e 等1 报道大肠杆菌对头孢噻呋的耐药率达6 9 ：b i s c h o f f ，k m “驯等最近发现 5 从小母牛体内分离的沙门氏菌对头孢噻呋的耐药率达8 6 。s a r a h c d o n a l d s o n 掣跏报道大 肠杆菌对头孢噻呋的耐药率达8 8 5 ：研究证明，9 3 的对头孢噻呋耐药的大肠杆菌对氟 苯尼考和氯霉素也耐药，但所有的大肠杆菌对氟喹诺酮类药物敏感这些对头孢噻呋耐药的 大肠杆菌对许多不同种类的抗生素的m i c 也在增大，o r d e n 等啪3 报道，从腹泻小牛分离的大 肠杆菌的m i c 9 0 明显提高，阿莫西林： 5 1 2i ig m l ，大观霉素： 5 1 2i ig m l ，庆大霉素： 3 2ug m l ，氯霉素：5 1 2l jg m l ，四环素：2 5 6pg m l 。尤其是滥用药物导致耐药菌株的产生、 细菌耐药性增强的严重后果。 1 2 2 耐药的原因：在实际生产中，由于头孢菌素的肆意大量使甩，导致许多致病菌产生耐 药性，大部分头孢菌素的耐药机制是通过b 一内酰胺酶而实现的；据报道，头孢噻呋对大肠 杆菌的耐药性是典型的由于o a y - 2 基因的产生所造成的1 。s a r a h c 等n 刀曾发现，在耐头孢噻 呋的大肠杆菌中，有9 6 的检测到c m y 一2 基因。因此，可以推测本试验中的细菌所产生的e s b l s 含有c m y 一2 基因。而舒巴坦是青霉烷砜类b 一内酰胺酶抑制剂，可抑制临床上常见的质粒和染 色体介导的b 一内酰胺酶，对各型超广谱b 一内酰胺酶( e s b l s ) 也有效。由于细菌耐药性的产 生，在药物正常剂量下，难以有效的杀灭或抑制细菌，提高药物使用剂量也就成了治病的唯 一途径：而单方面加大药物剂量，在治疗疾病的同时，也会大幅度的提高细菌的耐药水平， 从而形成细菌耐药一加大剂量一耐药加重的恶性循环。 1 2 3 提高药效的方法：克服头孢噻呋耐药，提高药物疗效的关键有两点，一是与酶抑制剂 的联用，二是延长有效血药浓度的维持时间，提高药物的生物利用度。舒巴坦( c p - 4 5 8 9 9 ) 是1 9 7 8 年e n g l i k h 报道的，美国p f i z e r 研究室研制成功，并证明具有抑酶作用的青霉烷砜船1 。 青霉烷砜( s u l b a c t a m ，c p - 4 5 8 9 9 ) 是典型的b 一内酰胺酶抑制剂，与b 一内酰胺环类抗生素联合 应用，通过对酶的抑制，保护抗生素免受破坏，提高抗菌活性州1 。影响b 一内酰胺酶抑制 剂化合物活性的因素有：抑带f j n 化合物与b 一内酰胺酶酶的结合程度：b 一内酰胺酶酶的数量： 理化条件如p h 值的影响等等h 引。总的来说，舒巴坦是一个广谱酶抑制剂，对超广谱酶及a m p c 酶作用较差，而且其抑制作用受细菌产生的b 一内酰胺酶的影响h 4 4 5 1 ，也受菌体外膜对抑制 剂的通透性和p h 值的影响汹4 。舒巴坦( s u l b a c t a m ) 首先通过与b 一内酰胺胺酶作用形成酰化 产物( 我们可称为i ) ，然后i 噻唑环开环生成中间体i i ，i i 重排后得到不易水解的b 一氨丙稀酸 类化合物i i i ，酰化产物i 及其开环生成的中间体i i 可水解得到活化酶和水解产物，i i 和i i i 还 可进一步转变为不可逆失活产物，而使酶失活。所以，舒巴坦与抗生素的联合运用能够有效 的抑制b 一内酰胺酶对b 一内酰胺环类抗生素的水解作用，提高药物抗菌疗效。 细菌耐药性的产生首先使药物的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度都较以前有较大的提 高，其次使药物在有效血药浓度的维持时间缩短，大大降低了药物疗效。因此，为了提高药 物疗效，需要加长有效血药浓度维持时间，提高药物生物利用度。 1 3 毒性 头孢噻呋安全范围广，毒性非常小，b e r t h e 报道，小鼠静注和肌注给药的l d 5 0 ( 半数致死 6 量) 分别为2 0 0 0 m g k g 和3 4 0 0 m g k g ，大鼠静注和肌注给药的l d 5 0 则分别为2 2 0 0 m g k g 和 1 2 5 0 m g k g ，而急性口服l d 5 0 则大于7 8 0 0 m g k g 。k a k u k 报道，以管饲法给s d 大白鼠剂量分别为 1 5 0 0 。3 0 0 0 ，6 0 0 0m g k g 的头孢噻呋，连续给药3 0 d 。临床毒性症状为所有剂量组均腹泻，但仅 6 0 0 0 m g k g 组有6 只大鼠由于机械阻塞而死亡。所有用药组均可导致肠道细胞腔变大及粘膜变 平嘲1 。f d a 报道，按最高推荐剂量( 1 m g k g ) 的2 5 倍连续5 d 肌肉注射头孢噻呋，肉牛可以很好地 耐受，没有全身性毒性症状。特殊毒性实验表明，头孢噻呋无“三致”作用及免疫毒性。 1 4 混悬液的概述： 混悬剂( s u s p e n s i o n s ) 系指难溶性固体药物以微粒状态分散于分散介质中形成的非均匀 的液体制剂。混悬剂中药物微粒一般在0 5 1 0pm 之间，小者可为0 1i lm ，大者可达5 0 | im 或更大。混悬剂属于熟力学不稳定的粗分散体系，所用分散介质大多数为水，也可用植物油 m 】。制备混悬剂的条件：凡难溶性药物需制成液体制剂供临床应用时：药物的剂量超过了溶 解度而不能以溶液剂形式应用时：两种溶液混合时药物的溶解度降低而析出固体药物时；为 了使药物产生缓释作用等条件下，都可以考虑制成混悬剂。 1 4 1 混悬液的制作方法： 制备混悬剂时，应使混悬微粒有适当的分散度，粒度均匀，以减少微粒的沉降速度， 使混悬剂处于稳定状态。混悬剂的制备分为分散法和凝聚法。分散法是将粗颗粒德药物粉碎 成符合混悬剂微粒要求的分散程度、再分散于分散介质中制备混悬剂德方法。凝聚法分为物 理凝聚法和化学凝聚法；物理凝聚法是将分子或离子分散状态分散的药物溶液加入于另一分 散介质中凝聚成混悬液的方法；化学凝聚法是用化学反应法使两种药物生成难溶性的药物微 粒，再混悬于分散介质中制备混悬剂的方法。 1 4 2 混悬液的质量评定： 1 4 2 1 微粒大小的测定：混悬剂中微粒的大小不仅关系到混悬剂的质量和稳定性，也会影 响混悬剂的药效和生物利用度。所以测定混悬剂中微粒大小及其分布，是评定混悬剂质量的 重要指标。通常参照中国药典，注射混悬液的药物粒度应控制在1 5i lm 以下，含1 5 2 0 | im ( 间有个别2 0 一- - 5 0 u m ) 者不应超过1 0 。 1 4 2 2 沉降容积比的测定：沉降容积比( s e d i m e n t a t i o nr a t e ) 是指沉降物的容积与沉降前 混悬剂的容积之比。测定方法：将混悬剂放于量筒中，混匀，测定混悬剂的总容积v 。，静置 一定时间后，观察沉降面不再改变时沉降物的容积v ，其沉降容积比f - f = v v o = h h o 沉降容 积比也可用高度表示，h o 为沉降前混悬液的高度，h 为沉降后沉降面的高度。f 值愈大混悬 剂愈稳定。f 值在l o 之间。混悬微粒开始沉降时，沉降高度h 随时间而减少。所以沉降 容积比h h 。是时间的函数，以h h o 为纵坐标，沉降时间t 为横坐标作图，可得沉降曲线， 曲线的起点最高点为1 ，以后逐渐缓慢降低并与横坐标平行。根据沉降曲线的形状可以判断 混悬剂处方设计的优劣。沉降曲线比较平和缓慢降低可认为处方设计优良。 1 4 2 3 重新分散试验：优良的混悬剂经过贮存后再振摇，沉降物应能很快重新分散，这样 7 才能保证用时的均匀性和分剂量的准确性。试验方法：将混悬剂置于l o o m l 量筒内，以每分 钟2 0 转的速度转动，经过一定时间的旋转，量筒底部的沉降物应重新均匀分散，说明混悬 剂再分散良好 8 2 。引言 头孢噻呋是第兰代头孢菌素，拥有较为稳定的b 一内酰胺环，主要通过作用于转肽酶 而阻断细菌细胞壁的合成，达到杀菌的效果；头孢噻呋抗菌谱广，抗蘑活性强，对革兰氏阳 性菌、革兰氏阴性及一些厌氧菌都有很强的抗菌活性；对家畜，家禽的呼吸道疾瘾，消化道 疾病等骞着明显的治疗效果。然磊，随着抗生素药物豹广泛应耀，不网种类动物鲍致病菌对 抗生素豹耐药性正与曙俱增溉鼹堋。在大肠籽菌的研究中，许多头孢噻呋的耐药水平均有报 道；付秀玲等潞报道头孢噻呋对临床分离的3 0 株大肠杆菡的最小抑菌浓度最高达6 4 0l lg m i ， 耐药率高达7 2 ；w h i t e 等嘲报道大肠杆菌对头孢噻呋的耐药率达6 9 ；细菌的耐药机制主 要是产生1 3 一内酰胺酶。舒巴坦( s u l b a c t a m ) 是典型的b 一内酰胺酶抑制剂，与8 一内酰胺环类 抗生素联合应用，能与酶发生不可逆反应，使酶失瀵，保护抗生素免受破坏，提高抗蔑活性 朋1 。舒巴坦与头孢噻呋联用是提高头孢噻呋药效的一个重要的有效途径。 混悬剂( s u s p e n s i o n s ) 系指难溶性固体药物戮微粒状态分散于分散介质中形成的菲均 匀的液体制剂，在混悬剂中部分溶解的药物和小颗粒药物注射后可较短时间内在体内达到血 药峰浓度，从而迅速发挥药效，缓释部分为药物悬浮颗粒，由于它释放缓慢，因而起到长时 间维持有效药物浓度的作用“吼鲫。本试验所研制制剂主要利用延缓释放和延缓吸收的方法， 采用注射用大豆油，与附加剂形成凝胶，以凝胶高分子化台物形式形成凝胶臂架物，制成药 物的浊溶液，从而延缓药物的扩数和溶出。加之药物以微粒状存在于油溶液中，在注射部位 形成贮痒，麸丽延缓吸收。敖本研究扶缓释材料中筛选患注射用大豆油为制剂载体，加入适 宣的附船荆，成功研制出头孢噻呋舒巴垣长效注射液。采用分散法制作复方头孢噻呋长效 混悬注射液，处方设计采用正交试验法；固定处方中其他敷料的含量，改变辅料a 、磷脂、 司盘的含量，以混悬液的沉降溶积比、再分散性考察处方敷料对混悬液稳定性的影响。 在药物动力学研究方面，选用新西兰大白兔为试验动物，分为四组，采用平行试验方 式，通过胍注、静注注射方式给药；建立离效滚楣检溅趣药浓度的方法，慰复方长效注射液 的药物动力学进行研究；根据药物动力学研究结果，在半衰期、吸收常数、生物利用度等方 丽对复方长效注射液和市售制剂进行对比，以显示复方长效注射液的缓释长效性。 9 3 。材料和方法 3 材料： 3 1 1 药品爱高分子材料 头孢噻呋粉针：山东齐鲁动物药业有限公司，含量：9 5 ( 批号；0 7 0 4 0 0 3 0 1 ) ；头孢 噻呋原粉：中国兽药监察所，含量9 8 ；舒巴坦钠：河南大明动物药业公司，含量8 5 ( 批号：2 0 0 6 0 3 1 0 ) ；头孢噻呋、舒巴坦对照品( 中屡药鼯生物药品鉴定所，含量：9 8 ) ；s p a n ( 天津科密欧化学试剂厂，批号：2 0 0 6 1 0 0 8 ) ；卵磷脂( 上海伯奥生物科技有 限公司，含量9 8 ，拢号：2 0 0 3 0 4 0 1 ) ；辘料矗；医用大豆油( 广媸环叶制药有限公闭摄 供，含耋9 5 ，批号：2 0 0 7 0 6 0 4 ) , v i t - e ( 托京天坛药物有限公司，含量，批号： 2 6 1 5 ) 3 1 2 试剂 g n 增菌液( 广东环凯微生物科技有限公司，批号0 6 1 0 0 5 ) ；肌培养基( 杭州天河微生 物试翔有限公镯，批号i0 5 1 2 0 6 ) ：醋酸铵( 广东汕头市西陇化工厂，含量 t 9 8 ，批号： 0 7 0 1 1 0 1 ) ；冰醋酸( 开封市芳晶化学试剂有限公司，含量1 9 9 5 ，批号：2 0 0 7 0 4 2 3 ) ；甲 醇( 天津市科米欧化学试剂鸯限公司，含量 9 9 。8 ，批号：2 0 0 7 0 4 2 3 ) , 去粒子水( 河南 省羹点实验室提供) ；肝素( 北京双旋微生物培养基制品厂，含量9 5 ，批号：0 6 1 2 0 8 ) ； 氢氧化四丁基铵( 天津市科米欧化学试剂有限公司，含量9 9 。8 ，批号：2 0 0 7 1 0 2 3 ) ；四 氢呋喃( 天津市科米欧化学试裁有限公霹，含量i 9 9 8 ，批号：2 0 0 7 0 8 1 2 ) , 磷酸氢二钠 ( 莱阳化工试验厂，含量9 9 0 2 ) ；磷酸二氢钾( 天津市科米欧化学试剂开发中心，含量 9 7 0 ，批号：2 0 0 1 0 5 2 0 ) , 苯甲醇( 天津化学试剂一厂，含量9 5 ，批号：0 4 0 2 0 1 ) 3 3 菌种：标准莹株：a t c c - 2 5 9 2 2 来源予中国兽医药l i 矗监察所：稿床蔫珠：鸡大肠杆菌 4 8 株由药璞实验室分离保存，经过全自动细菌鉴定仪分离鉴定。 3 。1 4 药液的配制：无菌准确称取适量的各种药物，用无菌蒸馏水配制成浓度为2 5 6 轴g ml 的药液l oi n 王，均为傻魇前配铺。 3 1 5 仪器 t u 1 9 0 1 型紫外可见分光光度计：北京普析通用仪器有限责任公司；a b 2 0 4 n 电子分 析天平：梅特勒一托利仪器上海有限公司；赢速匀浆机：金坛市中大仪器厂：研钵： 上海第二医药有限公司；5 0 m l 带赛量筒：b o m e x 公司；麟4 数显恒温水浴锅水浴锅： 黧华电器有限公司；y x q s g 4 6 型手提式压力蒸汽灭菌器：上海医用核予仪器厂；p h s - 2 c 型精密酸度计：上海大酱仪器有限公司：s i g m a 3 硒o 高速离心机：美国s i g m a 公司： 振荡器：天津大学仪器厂；d z f - 6 0 5 0 型寅空干燥箱：上海益恒实验仪器有限公司；高效液 相色谱仪1 l1 0 、泵：德国安捷仑公司；k q - 2 5 0 b 型超声波仪器：昆山市超声仪器有限公司： l o 9 0 1 双内磁力搅拌器：亚荣公闭；新魂兰大白兔t 郑州市农科所。 3 2方法 3 2 1 药物配方的筛选：药物合理配比通过药物的体外抑菌试验进行确定；采用试管二倍稀 释法，细菌浓度为1 0 s c f u m ，予3 7 1 3 培养1 8 - 2 4 d 、对，测定头孢嚷呋鳋巴坦( 1 ：l 、2 ：重、 4 ：1 ) 对产酶大肠杆菌和不产酶大肠杆菌的最小抑蔷浓度( 1 i i c ) 。 将未见细菌生长的各管培养物各吸取0 1 m l 涂布予合适的营养琼脂培养基平板上，在瓶 定的温度下培养1 8 小时，平板上的菌落数小于5 个的最小稀释度的药物浓度即为最低杀菌 浓度( 皿c ) 。 比较不同配比的最小抑菌浓度( m i c ) 和最低杀菌浓度( 姆e ) ，选择最小值为最佳配方。 3 2 1 长效注射液的研制： 3 2 。1 1 处方的筛选优化：多次预试验，确定影响药物沉降容积比和再分数性的生要因素： 辅料的种类和用量等。然后选择多种辅料进行正交设计，以沉降容积比试验作为处方筛选标 准。正交设计筛选处方及彩镌因素考察：采用b ( 3 4 ) 正交设计表捌 选取主要辅料：辅料a ( a ) ，卵麟脂( 赫，司盘( c ) 作为兰因素，每一因素选三水平， 主药含量为2 5 ，其他辅料量不变，用沉降容积比为主要指标来反映混悬液的稳定性以筛 选处方。 3 2 1 2 制作工艺：取注射用大豆油，经漏斗过滤，在1 5 0 干热灭菌l 小时后放冷备用。 于灭菌研钵中，加入少量灭菌注射用油，然骺加入头孢噻呋、舒巴坦，边研磨搅拌振荡边加 入其他敷料，通常研磨3 0 m i r d 2 0 0 m 1 将混悬液转移至适宜容器中，热灭菌注射用油至规定 容量，用匀浆机，叛1 0 0 0 r m i n 的速度，搅拌1 0 m i n 2 0 0 m l ，充分混合均匀，搅拌后分装于 灭菌干燥的安瓿中，熔封，用1 0 0 c 流通蒸气灭菌3 0 分钟，即得。 3 2 2 头孢噻映舒巴坦含量测定方法 3 2 2 1 注射液的前处理方法：量取适量待测品，用p b s 7 0 稀释至一倍体积，用振荡器振 荡2 r a i n s ，再以5 0 0 0 r r a i n 的速度离心3 r a i n s ，取下部分层液，进行测量。 3 2 2 2 测定头孢噻呋舒巴坦含量：采用紫外分光光度法，通过对待测药物波长盼扫描，确 定测定药物的有效波长；分别将适量头孢噻呋钠、舒巴坦混悬液和按处方比例的全敷料加到 容量瓶中，按3 。2 。2 1 混悬液处理方法处理；在波长1 9 0 4 0 0 n m 范围内，用紫外扫描仪分别扫 描全敷料溶液和头孢噻呋、舒巴毽混悬液在p b s 7 0 中的吸收曲线。 3 2 2 3 头孢噻呋检测波长：通过波长扫描，选择头孢噻呋的最大吸收波长，且不受其它因 素的干扰。 3 2 2 4 头孢噻呋标准曲线的测定： 取头孢噻呋对照品5 0 m g ，置于1 0 0 m l 容量瓶中，用p b s 7 0 稀释至刻度，得5 0 9 9 m l 的储螽液；荐分别取适颦储备液，用p b s 7 。0 配成l ，4 ，6 ，l o ，1 2 ，1 6 9 9 m l 系列溶液，分 别在2 9 2 n m ，2 0 2 n m 测定暇光度( a ) 。 3 。2 2 5 舒巴坦检测渡长的确定： 通过舒巴坦的紫外波长扫描，选择舒巴坦的最大吸收波长，且受其它因素干扰最小，溯量最 准确 3 2 2 6 舒巴坦标准曲线的建立： 取舒巴坦对照品5 0 m g ，置于1 0 0 m l 容量瓶中，用p b s 7 0 稀释至刻度，得5 0 l ag m 1 的 储备液；再分别取适量储备液，用p b s 7 0 配成1 ，5 ，1 0 ，2 0 ，3 0 ，4 0l ag m l 系列溶液，测 定在2 0 2 n m 测定吸光度( a ) 。 3 2 3 头孢噻呋舒巴坦回收率试验 精确量取头孢噻呋、舒巴坦适量及处方辅料，按照3 2 。1 1 方法制作一定浓度的混悬液， 并按照3 2 2 1 混悬液的处理方法，对药物进行测量前处理，测量药物的吸光度，计算其回收 率 3 。2 4 头孢噻呋舒巴坦精密度试验 精确量取头孢噻呋、舒巴坦适量及处方辅料，按照3 2 2 1 方法制作一定浓度的混悬液， 并按照3 2 2 1 混悬液的处理方法，对药物进行测量前处理，测定日内差( 每隔2 小时测一次， 连续测定5 次) ，日间差( 隔一天测一次，连续测5 天) 。 3 2 5 长效注射液的质量评定： 3 2 5 1 沉降容积比：参照2 0 0 0 年中国药典旧，取供试品5 0 m l ，置具塞量筒中，密塞，用 力振摇l m i n ，记下混悬物开始的高度h o ，静止3 h ，记下混悬物的最终高度h ，按下式计算： 沉降容积比= h h o 混悬剂的沉降体积比应不低于0 9 3 2 5 2 粒径分布：采用l e i c ad f cc a m e r a 照相系统，对药物粒径进行测量。 3 2 5 3 重分散性试验：混悬剂中的混悬物应分散均匀，不应很快下沉，下沉的混悬物不应 结块，经振摇仍能均匀分散，这样才能保证服用时的均匀性和分剂量的准确性。 方法：将混悬剂置于1 0 0 m l 量筒内，以每分钟2 0 转的速度转动，经过一定时间的旋 转，量筒底部的沉降物应重新均匀分散。 3 2 5 4 经典恒温加速试验： 通过紫外含量测定，在高温条件下，药物的含量随时间呈现正比关系，判定药物的化 学动力学速率为一级反应，所以，根据v a n t h o f f 经验规则泓1 t 1 t 2 = q 1 0 0 1 f r 2 t 1 ) 测出药物的 有效期。取头孢噻呋舒巴坦混悬液分成两组，一组于8 0 水浴锅中，另一组于1 0 0 c 水浴锅 中，分别在0 5 、1 、2 、3 、4 小时时间点取l m l 于1 0 m l 离心管中，再加入p b s 7 。0 磷酸缓冲 液4 m l ，在旋转振荡器上振荡2 m i n ，在离心机中按4 0 0 0 r m i n 离心1 0 m i n ，取出后对下层溶 液进行紫外检测。求出2 5 时的t o 9 3 2 6 药物动力学研究 3 2 6 1 精密称取干燥恒重的头孢噻呋、舒巴坦0 1 9 ，置1 0 0 m l 量瓶中，用0 0 5 m o l l 醋酸 铵溶液溶解后，稀释到刻度，配成1 m g m 1 的储备液，于一4 保存。取储备液5 m l 到5 0 m l 容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，得剑1 0 0 比g m l 的l ：作液液，于4 c 保存 3 2 6 2 血浆中头孢噻呋及去呋喃甲酰头孢噻呋相关代谢物的测定 1 2 色谱条件：圃定相：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；理论板数以头孢噻呋峰计， 应不低于1 5 0 0 。流动相：称取醋酸铵3 9 5 9 ，加1 0 氢氧化四丁基铵溶液5 4 m l ，加去离子 水至7 0 0 m l ，用冰醋酸调节p h 为6 6 6 8 ，荐加甲醇2 0 0 n 1 l 及豳氢呋喃1 1 0 m l ，即得；配 置后，用囊熔漏斗过滤，使用前使用超声波进行超声除气。流速；1 0 m l m i n ，检测波长： 2 1 5 1 5 艘。 祥箍处理：取全斑肝索抗凝，2 0 单位m l ，子3 5 0 0r m i n - 离心1 5m i n 。取血浆与 0 0 5 m o l l 醋酸铵溶液按1 ：1 比例涡旋混合2 分钟，于3 0 0 0r m i l l - i 离心机中离心2m i n ， 取上清夜2 0 u l 注入液相色谱仪。 样品标准曲线的建立：于空白血浆中加入头孢噻呋钠，其浓度控制在0 1 1 0 吮刨眦， 按照头孢噻呋血浆样品处理的方法操作，取1 0 个样