（分析化学专业论文）顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用.pdf

摘要 顺序注射分析是于1 9 9 0 年诞生的一种新的溶液处理技术。近年来发展起来的顺序注 射分析系统均采用计算机控制，主要由一个多通道选择阀、一个可以正反向推动或抽吸溶 液的泵和检测器组成。具有消耗试剂和样品少，自动控制方便精确，特别适用于过程分析 和多组分同时分析等优点。本论文将顺序注射分析技术应用于药物和食品分析中，共由六 章组成。 第一章：概述了s i a 的基本原理和仪器装置，详细综述了近年来s 认在药物和食品分析中 的应用，共引用文献7 4 篇。 第二章：基于在盐酸介质中，对苯二胺和亚硝酸钠反应生成重氮盐，重氮盐可与药物发生 重氮偶合反应，建立了顺序注射分光光度法测定盐酸酚苄明和甲氧氯普胺的新方法。 第 三章：基于在盐酸介质中磺胺醋酰钠亚硝酸钠1 萘胺的重氮化偶合反应，在不同的酸 度下，1 萘胺自身重氮偶合反应的反应速率和磺胺醋酰钠重氮化后再与1 萘胺发生重氮偶 合反应的反应速率的不同，分别建立了顺序注射阻抑和加速两种动力学分光光度法测定药 物中的磺胺醋酰钠。 第四章：基于f e 3 + 催化k b 帕3 氧化邻联甲苯胺生成有色物质，结合顺序注射分析技术，建 立了测定茶叶、头发及药物中铁的新方法。 第i 章：基于f e 3 + 催化k b 内3 氧化邻联甲苯胺生成有色物质，结合流动注射和在线分离预 浓集技术，建立了测定天然水中痕量铁的新方法。 第六章：总结论文的创新点，展望了今后的发展趋势。 关键词：顺序注射分析，流动注射分析，在线预浓集，分光光度法，盐酸酚苄明，甲氧氯 普胺，磺胺醋酰钠，铁 a b s t r a c t s e q e m i a l 埘e c t i o na n a l y s i s ( s i a ) 、v a si 曲d d u c e db yr u z i c k aa n dm a r s h a l l m1 9 9 0a sa n e ws o l u t i o nd i s p o s i n gt e c h n i q u c t h es y s t c m 、嬲c o m p o s e do fas e l e c t i o nva _ l v e ，as y r i n g e p u m pa i l das p e c 廿o p h o t o m e t e rn o wt t l 工o u 曲d e t e c t o lo p e r a t i n gp a r 鲫t e r sf o rm ei n s t r 哪e n t s e t u p ，d a t ac o l l e c t i o na n dp r o c e s s i n gw e r ep e r f o m l c db yac o m p u t e r 1 h ea d v a n t a g e sa n d p o t e n t i a i so fs is y s t e m s ，n 锄e i y ，i o ws a r n p i ea n dr e a g e n tc o n s u m p t i o n 缸d 王l i g hr e l i a b i l i t ya n d a u t o m a t i cm a n i p u l a t i o n ，a r ee s p e c i a 王l ys i l i t a b l ef o rt l l ep r o c e s sm o m t 嘶n g 甜l ds j m u l t a l l e o l l s d e t e r n l i n a t i o no f m u l t i c o m p o n e n t s s t u d i e s0 nt l l ea p p l i c 鲥o no f s i at o 也ep h a n l l a c e 嘶c a la n d f o o da n a l y s i sw e r ec a r r i e do mi nt l l i st h e s i s t h ep 印e rc o n s i s t so fs i 】( c h a p t e r s 1 nc h 印t e r l ，t h e 两n c i p l ea j l da p p 蝴so fs nw a s a r i z e d t h ec u r r e n td e v e l o p m e n t o fs i a w a sr e v i e w e df o rm ep h 枷a c e u t i c a l sa i l df o o da n a l y s i s 7 4r e f e r e n c e sw e r cc i t e di nt l l i s s e c t i o n i n c h a p t c r2 ，n e ws i ak m e t i cs p e c 佃3 p h o t o m e t r i c m e m o d sf o rd e t c r r n i n a d o no f p h e n o x y b e n 髓m i n eh y d r o c h l o r i d e 柚dm e t o c l o p r 锄i d ei 芏lp h a r r n b c e m i c a lh a v eb e e nd e s c 曲e d t h et w om e m o d sw e r eb a s e do nt h ed i a z o t i s a t i o no f p - p h e n y l e n e d i 蛐m e 谢t hs o d i u mn i 砸t ea n d c o u p l i n g 、析t hp h e n o x y b e n z a m i n eh y d r o c h l o r i d ea n dm e t o c i o p r a 】 n i d ei n h y d r o c h l o r i ca c i d m e d i m c h 印t e f3 ，p f o p o s e dt w om e t h o d sf o rt h ed e e 柚正n a t i o no fs m f h c e 删d es o d i u mb a s e do n t 1 1 ed i a z o t i s 撕o no fs u l e t 锄i d es o d i u 耐1 一n a p h 也y l 锄沁、v i t hs o d i u r nn j 硫ea 1 1 dc o u p l i n g w i t h1 一n a p h t h y l a r n i n ei na c i d i cm e d i 眦ni sd i 船r e n tm a tm er e a c t i o nr a t e so f 也ed i a z o t i s 撕o n b e t v v e e n 1 - n a p h m y l 锄i n e 、i t l ls o d i 啪1 1 i t r i t em dc o u p l m g 埘血1 一i l a p h t h y l a m i n e a n d s u l f ；l c e t 锄i d es o d i 啪谢t 壬ls o d i 啪时岍t ea n dc o u p l i n g 谢t l l1 - n 印h m y l 啪i n ei nd i f f e r 锄ta c i d i c m e d i 眦 c h a p t e r4 ，p r e s e n t e dan e ws p e c 打o p h o t o m “cm e m o d f o rt l l ed e t e n n i l l a t i o no fi r o ni nf o o d a i l dp h a n n a c e u t i c a l u s i n gs e q u e n t i a l 炳e c t i o na n a l y s i s t h em e 山o d 、sb a s e do nm e i m n c a t a i y z e do x i d a t i o no f d i a i i l i n o d i t o l y lb yp o t a s s i u mb r o m a t e i n c h a p t e r5 ，an e wf l o w e c t i o nc a 士a l 蚵cs p e c 拍p h o t o m e 埘cm e n l o df o ro n - 1 i n e p r e c o n c e n t r a t i o no fi r o no n t o8 - h y d r o x y q i n d i n ei i 砌o b i l i z e do ns i l i c ag e l 锄dd e t c 珊i n a t i o no f i m ni nn a t u r a lw a 士e r h a sb e e nd e s c r i b e d t h em e 也o di sb a s e do nac o m b i n a t i o no fi r o n c a t a l y z e d o x i d a t i o no fd i 眦i n o d i t 0 1 y lb yp o t a s s i 砌b r o m a t e 1 i i nc h 印t c r6 ，t 1 1 em a i nc o n t e n t sc o n c e m e di nm i sd i s s e r t a t i o nw e r es u r m n a r i z e d ，a n dm e m t u r ew o r kh a sb e e ns u g g e s t e d k e y w o r d s ：s e q u e n t i a ii n j e c t i o na n a i y s i s ，f l o wi 巧e c t i o na i l a l y s i s ，o n - l i n ep r e c o n c e n t r a t i o 玛 s p e c 廿0 p h o t o m e 研ca 1 1 a l y s i s ，p h e n o x y b e n z 锄i n ch y d r o c h l o r i d e ，m e t o c l o p r 啪i d e ，s u l f a c e t a i i l i d e s o d i u m i r o n i i f 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 第一章顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 1 9 7 5 年r u z i c k a 和h 柚s e n 提出了一种新的溶液处理方法流动注射分析法( f o l w i n j e c t i o na n a 】y s i s ，简称f i a ) ，经过3 0 年的发展己广泛应用于各种溶液分析领域。流动注 射分析具有实验设备简单、价格便宜，试样可在线处理，分析速度快，节省样品和试剂， 可在非平衡念条件下测定，并可以与不同类型的检测器联用等显著优点2 翔。目前，f i a 技 术已广泛应用于临床化验、药物分析、环境监测、食品分析、冶金地质分析和过程分析等 领域1 4 】。特别是在分离与预浓集技术、固定酶技术、利用不稳定反应和中间产物分析等方 面发挥着其它分析方法所不能比拟的作用【5 i 。但流动注射分析也存在着一些不足之处，如 蠕动泵长时间运转的稳定性比较欠缺，复杂分析任务引起流路的复杂化进而影响分析工作 的可靠性，另外工作人员对f i a 系统的掌握仍需要相当的技巧和经验。由于上述的这些缺 点，使得流动注射分析法至今难以在例行分析中发挥其自动分析的应有作用。 1 9 9 0 年r u z i c k a 和m a r s h a l l l 6 】提出了顺序注射分析( s e q u e n t i a l 珂e c t i o n a 皿a l y s i s ，简称 s l a ) 。作为流动注射分析的一个分支，顺序注射还有以下特点；1 系统硬件简单可靠，计 算机控制，真m 实现了单道分析，容易实现集成化和微型化。2 可用同一装置完成不同项 目的分析而不需改变流路设置，特别适用于过程分析和复杂的分析操作。3 试样和试剂消 耗很少，适用于长时间监测和威试剂较贵、样品来源受到限制的分析。另外还可以用单标 准或多标准自动校正，对样品自动稀释，实现真正的自动化【4 】。总之，顺序注射技术克服 了流动注射中的一些缺陷，促进流动注射技术的普及与发展，适应生化体系等复杂体系的 分析，特别是在在线过程分析和自动化智能化分析方面已经达到了自动化和智能化的新水 平。目前顺序注射分析作为一种绿色、经济、高效多能、自动化程度高，并且易于与其它 技术联用的新的溶液处理技术【7 - 13 1 ，己成为流动注射分析研究中最活跃的领域之一，并广 泛应用于分析化学和其他领域，例如：药物分析、食品分析、环境分析、工业分析、生物 监测、免疫检测和化学计量学等。短短十多年间，顺序注射分析已迅速发展1 1 ”。 1 1 顺序注射分析的原理及仪器装置 1 1 1 顺序注射分析原理 顺序注射分析系统( 见图1 1 ) 的核心部件是一个多通道的选择阎，此阀的各个通道 位置分别与检测器、样品、试剂等通道相连，公共通道与一个可以正反向推动或抽吸溶液 的泵相通。通过泵顺序地从不同的通道吸入一定体积的样品、试剂与载流溶液到泵与阀之 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 幽1 1 顺序注射分析系统 c ：载流；s p ：注射泵；p ：蠕动泵；s v ：选择阎；h c ：储存管； r c ：反应管；r ：试剂；s ：样品；d ：检测器；w ：废液 图1 2 试剂混合重叠侧面图 ( a ) 表示吸取样鼎s 和试剂r 到储存管；( ”表示样品s 和试剂r 在被推进到反应管和吸收池的 过稗中重整与混合：( c ) 表示被检测器检测到的混合与重叠程度的侧面图；s ：样品区带；r t 试 荆区带；o z ：重叠和混合区带：h ：信号峰高 问的储存管中，然后将这些溶液区带逆向推至吸收池。在这一过程中样品和试剂的区带之 2 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 问在管道中由于径向扩散和轴向对流的作用而相互渗透，从而引起试剂与样品区带的重叠 与混合，导致反应产物的形成( 见图1 2 ) 。这样就可以在检测器中得到与流动注射分析相 类似的峰型信号。s m 除具有f i a 的优点之外，还具有系统硬件可靠，试样和试剂的混合 程度、反应时间可完全通过计算机软件控制，最大程度地减少了操作中的人为干预，容易 实现集成化和微型化等特点。 1 1 2 顺序注射分析仪器装置 近年发展起来的顺序注射分析系统均采用计算机控制，它主要是有一个多通道选择 阀、一个可以正反向推动或抽吸溶液的泵、泵与阀之间的溶液储存管、适量的连接管道和 检测器组成。商品化的顺序注射分析系统由a l i t e a m i s i 型组合式流动注射一顺序注射分析 系统，由f i al a b 卅软件实现控制和数据采集与处理，采用组合式结构，可以完成流动 注射分析和顺序注射分析功能。作者实验室的顺序注射分析系统是f 队l a b 3 5 0 0 顺序注射 分析仪( 美国f l a l a b 仪器公司) ，由一个注射泵、一个8 通道的选择阀、一个1 0m m 的 z 一型流通池和一个u s b 2 0 0 0 u v _ v i s 分光光度计( 美国海洋光纤公司) ，以及一些聚四氟 乙烯管组成，该系统采用f i a l a b 软件( f i a l a b5 oe ) ，完全由计算机控制。有关顺序注射 分析仪器的研制见文献1 1 7 “j 。 1 2 顺序注射分析在药物分析和食品分析中的应用 随着科学技术的发展和人们生活水平的提高，人们的食品消费观念也发生了很大的变 化，食品消费已从简单的充饥发展到追求食品营养和保健。为了适应这种变化，各种各样 的新产品不断被开发并投放市场，那么，对食品进行快速，准确的分析，从而对其营养成 份和卫q t 状况进行评价，有着重要意义。药物是预防、治疗、诊断疾病和帮助机体恢复正 常机能的物质。药品质量的优劣直接影响到药品的安全性和有效性，关系到用药者的健康 和生命安危。另外现代药物分析和食品分析现场化、家庭化的呼声越来越高。作为食品及 药品生产企业和政府监管机构，对食品及药品品质的控制则要求能实现现场无损检测，快 速获得检测结果，这也就要求分析仪器的微型化、智能化。而现代药物和食品分析无论是 分析领域，还是分析技术都已经大大拓展。从静态发展到动态分析，从体外发展到体内分 析，从品质分析发展到生物活性分析，从单一技术发展到联用技术，从小样本分析发展到 高通量分析，从人工分析发展到计算机辅助分析。总之，现代的方法自动化、智能化程度 越来越高，试剂和样品的消耗量越来越少，分析速度也越来越快。 顺序注射技术作为一种新的溶液处理手段，已经用于许多领域，由于顺序注射分析具 有其自身的很多优点，例如低消耗、低污染、易于微型化、自动化和在线过程分析，使它 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 在环境科学、生命科学、药学、食品检验等领域发挥了重要的作用。据不完全统计，到目 | j 为l 卜已有7 0 多篇综述发表，其中以c l a i r e 等】论述的最为全面，这篇综述总结了顺序 注射分析方法在食品分析、药物分析、免疫和生化分析、环境分析、放射分析、工业过程 分析以及化学计量学等九个方面的应用，共引用文献3 0 l 篇。s 0 1 i c h 等综述了顺序注射 技术在药物分析方面的应用，引用文献5 4 篇。本文仅对近几年顺序注射分析方法在药物 和食品分析中的应用做一综述。 1 2 1 顺序注射分析在药物分析中的应用 传统的药物分析大多依靠色谱法，丽在药物含量测定时常用的方法还有分光光度法、 荧光法、滴定法和电化学方法。然而，在实际药物含量测定时越来越注重自动化、低消耗、 快速和高效，这样就需要有一种新型的仪器装置能够适合各种分析检测手段。流动注射分 析技术产生后，很快应用到了药物分析中，并取得了骄人的成绩，这方面的应用在专著【2 田 中有专门的综述，在方肇伦1 4 】的专著流动注射分析法中也有这方面的综述，还有近来 的一些综述陋2 7 1 。另外近年来又发展起来的微顺序注射“阀上实验室”( m i c m s i a l o v ) 、 顺序注射色谱法( s e q u e n t i a li n j e c t i o nc h r o m a 幻g 国p b y ，s i c ) 和微珠注射分析( b e a d 8 c t i o n ， b i ) 技术使得顺序注射分析技术在药物分析方面有很大的发展潜能田l 。 顺序注射技术与各种分析检测手段结合已经广泛用于各种药物制剂的测定。这些检测 方法主要有分光光度法、化学发光法、荧光法、电位法、安培生物传感器等。 表1 】中列出了近几年的顺序注射分析在药物分析中的具体应用f 2 8 4 7 1 。 1 2 1 1 分光光度分析法 s l a 分光光度法是顺序注射分析法在药物分析中应用最广泛的方法。这种方法主要是 基于一些可以生色的反应，或者是可以使吸光度发生变化的反应，通过顺序注射技术和分 光光度( u v i v i s ) 检测技术联用对分析物进行检测。l a p a n 觚扛l o p p a k l l l l n1 2 8 】等采用顺序注射 和流动注射分光光度法，基于在酸性介质中扑热息痛和亚硝酸钠的亚硝化反应，形成亚硝 基衍生物，用氢氧化钠处理后成为稳定的黄色产物，在4 3 01 1 i n 波长处检测药物中的扑热 息痛，该方法的检测限可以达到6 5m g 几，进样频率为6 0 ，h 。b e y e n e 【2 9 1 等基于在铁氰化钾 的存在下盐酸苯肾上腺素与4 ，氨替比林发生缩合反应，建立了顺序注射分光光度法测定药 物制剂中的盐酸苯肾上腺素，在5 0 3 姗波长处检测缩合产物，线性范围是0 5 1 7 5m g ，l ， 检测限为o 0 9m 班，进样频率为6 0 ，1 1 。 1 2 1 2 化学发光分析法 化学发光法的应用为流动注射分析的发展提供了动力因素【3 叭。而将顺序注射技术和化 4 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 学发光检测手段有机的结合，已经成为药物检钡4 中的一大亮点。p a s e k o v a 和p o l a s e k 用化 学发光法来测定硫胺类药剂3 1 1 和局部麻醉剂3 卫。基于在硫酸介质中高锰酸钾氧化硫胺类药 物，在氧化的过程中发光，为了提高检测灵敏度，他们从多种增敏物质( 蚁酸、六偏磷酸 钠、乙醇醛、戊二醛和若丹明b ) 中选择了o 1m o l l 的戊二醛作为增敏剂，此方法已用于 对药物制剂中磺胺、磺胺醋酰、磺胺二甲嘧啶、s u l p h a 如船o l e 、s u l p 啪e t o x y p y r i d a z i n e 和 磺胺脒含量的测定；测定局部麻醉剂时用的是同样的原理，在硫酸介质中盐酸普鲁卡因、 苯坐卡因和盐酸丁卡因被高锰酸氧化发光，试验了4 羟基联苯、若丹明b 、乙醇醛、戊二 醛和蚁酸对体系的增敏作用，最后选择了o 3 7m o l l 的蚁酸为增敏剂，该方法已用于对药 物制剂中盐酸普鲁卡因、苯坐卡因和盐酸丁卡因含量的测定。p o l a s e k 和j a b o r 利用顺序注 射化学发光法对抗菌药物甲氧苄氨嘧啶的含量进行测定1 3 射，基于在酸性条件下高锰酸钾氧 化甲氧苄氨嘧啶发光，用六甲基磷酸为增敏剂，利用计算机辅助单纯形优化了吸取顺序、 流路参数、试剂浓度及体积的影响，线性范围0 5 l o om l ( r = o 9 9 9 4 ) 或2 0 l o om l ( r = 0 9 9 9 9 ) ，检测限为o 1m l ，进样频率为3 4 l l ，己用于药物片剂中甲氧苄氨嘧啶含 量的测定，且常见赋形剂和药物添加剂不干扰测定。 1 2 1 3 荧光分析法 荧光分析法以其高灵敏度在分析应用中占有重要的地位，而它与顺序注射技术联用的 分析方法在药物检测中也有较重要的应用。e c o n o m o u 和1 k r n c l i s 等应用s i a 荧光分析法 测定了药物制剂中的硼 3 钾，基于变色酸遇到碱性物质会产生荧光猝灭，而变色酸与硼酸络 合后荧光急剧增强，在xe x = 3 1 3n m ，九e m = 3 6 0 衄时检测，该方法的检测范围为8 3 0 l ，检测限为3 斗l 。a l 一鼬n d y 和a 1 w i s h a l l i 建立了一种简单、选择性好、灵敏度高的 发光方法测定药物中的吡罗昔康f 3 5 】，该方法基于在e u 3 + 与吡罗昔康络合后会使荧光增强， 吡罗昔康。e u 3 十的信号在入e x = 3 5 8 姗和xe m = 6 1 5 砌处检测，线性范围为1 0 0 2 0 0 0 p p b 和1 0 0 1 0 0 0p p b ，检测限为2 3 0p p b 。对药物制剂进行测定，回收率为1 0 1 0 士o 3 和 9 8 8 士2 7 。 1 2 1 4 电位分析法 在电位分析法中经常用到的是离子选择性电极法和电位滴定法1 2 3 】。e m m a 和a l b e n t o 建立了离子选择性电极分析法测定青霉素g 【3 6 】。他们对自己做的电极进行了评估，并且研 究了电极对青霉素g 的选择性及分析应用。首先他们选用不同的聚合体膜p v c ( 聚氯乙 稀( p o l yv i n y lc h l o r i d e ) ) 和e v a ( 乙烯- 醋酸乙烯共聚物( e t h y l j n y l a c e t a t e ) ) ，以5 ，l o ，1 5 ，2 0 - 四苯基卟啉二酸( t p p ) m n ( ) ( m n ( i i i ) t p p c 1 ) 作为电化学活性物质；其次在膜中加 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 入不同的添加剂四对辛基溴化铵( 阳离子添加剂) 和四苯基硼酸钠( 阴离子添加剂) 来改 变电极的性能，通过普通检测特征、选择性和寿命三方面的比较来确定这些电极的性能。 为了完成对实际样品的分析，选择了两种组成形式的膜，一种是由3 3 o ( w w ) 的p v c 、 6 6 o ( w w ) 的。一n p o e 和1 o ( w ，w ) m n ( ) t p p c l 组成的类型a ( 咖e a ) ，另一种 表1 质序注射分析在药物分析中的应用 扑热息痛药物制剂光度法 盐酸苯肾上 腺素 甲氧苄氨嘧 啶 硼 吡罗昔康 药物制剂光度法 药物片剂化学发光 药物制剂荧光法 药物制剂荧光法 青霉素- g药物制荆 l - 甲状腺索 d 甲状腺素药物制剂 l 一三碘甲状 歙氨酸 t y p e a t y p e b 管电极 安培生物 传感器 4 0 0 1 0 0 0 m g ，l 1 0 0 0 2 5 0 0m g ，l 2 0 0 1 0 0 0m g 几 1 0 0 0 2 5 0 0m g ，l o 5 1 7 5m g ，l o 5 1 0 0 蜘l 2 0 1 0 0 峙m l 8 3 5 0 呜儿 1 0 0 2 0 0 0p p b 1 0 0 1 0 0 0p p b 2 1 0 1 0 1m o i l 5 1 0 一l o m o l ，l 2 x l o 1 x l o 一2 m o l ，l 1 0 7 8 0n 舢 5 0 5 0 0n m o 【几 1 5 3 8 0n m l 铋药物制剂 光度法 o o 7 5m g ，l 盐酸哌唑嗪药物片剂荧光法0 0 2 2 4 3m g ，l 扑热息痛 咖啡因 阿司匹林 m 酎i i ) 维生素c 赖诺 孚利 氢溴酸芬忒 醇 阿莫州林 o 5 7 5p m l 药物片剂 s i c ，u v 0 5 5 0 雌，m l 0 5 5 0 陛加l 药物制剂光度法0 2 0 m 叽 药物片荆 药物片剂 药物制剂 药物制剂 s i a 化学 一 发 光度法 0 0 3 1 0m g ，l 光度法o 5 4 0m g ，l 光度法 一 7 0 l g ，l 6 5 m g ，l o ，0 9 m g ，l 0 1 峙，m l 3 “蚰 2 3 o p p b 8 5 2n g m l 2 0 n m o i ，l 1 2 n g m l o 2 5 m g ，l 0 0 0 7 m g ，l 0 5 “g ，m l 0 3 瑚加儿 o 3 坩，m l o 2 4 m g ，l 5 0 1 0 一8 m o 儿 0 1 m g ，l o 1 m 班 2 53 6 2 03 9 7 2 7 0 6 船 捞 弘 弘 ” ” 啪 叭 旺 档 甜 钙 舶 钉 一 踮 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 是由3 3 o ( w w ) 的p v c 、6 6 0 ( w ，w ) 的o _ n p o e 、1 o ( w v ) m n ( ) t p p c l 和 l o m o l 的四苯基硼酸钠组成的类型b ( t y p eb ) 。用t y p e a 电极检测青霉素- g ，检测范围 为2 1 0 q 1 0 _ 1m o l ，l ，它的能斯特响应值约为一5 9m v ，d e c ，再现性为圭o 5m v ，天；用t y p e b 电极检测青霉素一g ，检测范围为5 1 0 _ 5 1 0 _ 1i n o l l ，能斯特响应值约为一6 lm v d e c ， 再现性为士o 3m v 天。最后这些膜( 帅ea 和t y p eb ) 被用来制成管状电极，并与顺序注 射技术联用来测定药物中的青霉素g ，线性范围为2 1 0 。l o - 1m o l l ，能斯特响应值分 别为一5 9 3 士0 8 和一5 7 3 士1 2m v ，d e c 。用帅eb 膜制成的管状电极用于对药物青霉素一g 进 行检测，误差为o 1 和1 - 2 ( n = 4 ) ，进样频率为2 5 h 。对卡托普利的测定3 7 ，3 刖，用到 了比色法和电位滴定法，基于在酸性介质中卡托普利钯络合物显色进行比色法测定，而电 位滴定法是对含有lo _ 3m o 儿a g ( i ) 的卡托普利溶液进行电位滴定来测定。作者将这两种 方法进行了比较，结果发现比色法选择性好，对复杂样品的灵敏度高，而电位滴定法的重 现性更好。 1 2 1 5 安培生物传感器 顺序注射与安培生物传感器联用，在药物检测中也有很多的应用。s t e 加和v a l ls t a d e n 利用顺序注射和安培生物传感器对l 甲状腺素、d 甲状腺素和l - 三碘甲状腺氨酸三种药物 进行同时测定，它们的线性范围分别为1 0 7 8 0n 咖l 、5 0 5 0 0 啪o l l 和1 5 3 8 0 n g m l ，检测限分别为8 5 2n g m l 、2 0m o l 几和1 2i l g ，m l ，进样频率为2 0 h 。 1 2 2 顺序注射分析在食品分析中的应用 顺序注射分析法以其自身的优势，在食品分析中得到了应用与发展，目前在这方面发 表的文献已经超过了3 0 篇h 引。1 9 8 5 年h u s b e d 和k 枷e r 等第一次将流动注射分析法用于 在线检测酶和蛋白质m 1 ，这种在线分析法被后来出现的顺序注射分析法所继承，这两种在 线的溶液处理技术已经在工业过程控制和监测中表现出其明显的优势，随着微顺序注射分 析( m i c m s i a ) 的出现，在线连续监测的自动化会交得更加完美，而“阀上实验室”( l o v ) 装置的出现使溶液循环流通的监控成为可能。上述顺序注射分析方法的应用使得食品分析 的前景更加美好。 顺序注射技术与各种分析检测手段结合已经广泛用于各种食品的测定。这些检测方法 主要有分光光度法、化学发光法、电化学方法和安培生物传感器等。 表1 2 中列出了2 0 0 2 年以来顺序注射分析在食品分析中的具体应用h 9 7 0 】。 1 2 2 1 分光光度分析法 s l a 分光光度法是顺序注射分析法在食品分析中应用最多的方法。m a r c e l a 和a n t o i l i o 7 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 利用顺序注射分光光度法测定了l 苹果酸【5 0 】和二氧化硫【5 l 】。他们利用二氧化硫、甲醛和副 玫瑰红反应显色，建立了顺序注射分光光度法测定酒中的游离( 舭e ) s 0 2 和总( t o t a l ) s 0 2 ， 游离s 0 2 的检测范围为2 4 0m g l ，总s 0 2 的检测范围为2 5 2 5 0m l ，进样频率为1 6 h ， 测定了十个不同样品并与标准方法对照。他们还建立了动力学顺序注射分光光度法检测葡 萄酒中的l 苹果酸。基于在l 苹果酸盐脱氢酶的催化下，l 苹果酸盐被氧化成草酰乙酸盐 并形成n a d h ，采用顺序注射停流技术，停流时n a d + 和酶到达检测器，在波长为3 4 0 锄 处检测吸光度来检测体系的反应速率，即通过检测n a d a 来检测l 苹果酸，线性范围为 o o l o 1 5 叽，检测限为0 0 0 9 l ，迸样频率为2 2 l l ，对1 6 个酒样进行测定并与标准方 法对照。 1 2 2 2 化学发光分析法 pa _ f r i c i a 和b o a v e n 姐a 等利用顺序注射化学发光法测定了酸乳酪中的乳酸1 5 甜，他们利用 在生化酶和乳酸盐反应后与六氰合铁酸根( i i i ) 一起催化h 2 0 2 氧化鲁米诺发光，乳酸盐 氧化酶被固定在多孔硅胶珠子上，产生的光信号用分光光度计读取并由微电子计进行存贮 和进一步处理，该方法的检测范围为1 0 1 2 5m g l ，检测限为1 2l n g l ，进样频率为5 5 l l ， 该方法用于对乳酸酪样品的分析，测定结果与传统方法( b o e h r i i l g e ru v - k i t ) 测定出的结 果一致。 1 2 2 3 电化学方法 在食品分析中顺序注射技术主要与电位分析法和电位滴定法两种电化学方法联用。v a n s t a d e n 和m a s h a i l l b a 等用顺序注射电位滴定法测定了软饮料的总酸度【53 1 ，他们用0 1m o 儿 的n a c l 来调节溶液的离子强度，该方法简单易操作，线性范围为0 1 o 6 ( w ) ，进样 频率为4 5 h ，用于对南非软饮料总酸度的测定，测定结果与标准方法对照。z a r a t e 和a r a u j o 等建立了一种自动分析法检测酒中游离钾和总钾【州，顺序注射分析联用电位检测和在线微 波消解，由于顺序注射系统和微波消解系统的联用，样品进行了在线消解，这样省去了样 品的预处理，测定游离钾时，进样体积为1 1 0 “l ，而测定总钾时要用3 9 0 “l 的h 2 0 2 和适 量的样品在微波炉中用7 0 0w 消解6 0s ，然后再进行检测，该方法的进样频率为1 4 m ，对 十种不同的酒样进行检测，测定结果与火焰发射光度法对照。 1 2 2 4 安培生物传感器 将顺序注射技术与安培生物传感器检测技术联用，目前在食品分析中也得到了一定的 发展，尤其是在过程分析中的应用。l a p a 和l i i n a 等利用顺序注射安培生物传感器分析法 同时监测生物发酵反应器中的葡萄糖和乙醇【5 5 】，这是一种在线过程分析方法，该方法基于 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 9 顺序注射分析及其在药物和食品分析中的应用 固定在小孔玻璃上的氧化酶的接触反应来进行，对葡萄糖检测的线性范围为5 7 5 0m g ，l ( r s d = 1 2 ) ，对乙醇检测的线性范围为0 1 5 3 0m l ( r s d - 2 2 ) ，已用于实际发酵过程 的分析，通过监测可以对发酵过程中乙醇的含量进行调整，进样频率为5 0 n 1 。 1 2 3 在线过程分析 因单道的s i a 可采用可靠性好但价格较蠕动泵贵的柱塞泵或注射泵，具有不改变流路 就可以分析多种组分的特点，是过程分析中理想的溶液处理与分析方法。在多通道阀的各 个通道连接不同物种的酶反应器可以完成发酵过程中重要物种的实时监测。h i l n c h is h u 等 建立起固定酶反应器顺序注射分析系统，试样从大量发酵物基体中通过膜过滤分离进入 s i a 流路。如把d 一乳酸脱氢酶和l 一氨基丙酸转氨酶混合固定在多孔玻璃上，在线检测整个 发酵过程中乳酸的浓度，用阳j 歇式操作使辅酶用量大大减少1 7 2 】。l u k k a r i 【7 3 l 等用气体扩 散半透膜在线检测发酵过程中总氨氮和游离氨的含量。荣维民等研究了用顺序注射化学发 光法，同时测定发酵过程中的葡萄糖、乳酸和青霉素【7 “，测定葡萄糖和乳酸时分别用葡萄 糖氧化酶和乳酸氧化酶，它们通过酶转化反应，葡萄糖转化为葡萄糖6 内酯并伴有h 2 0 2 生成( 乳酸的反应与葡萄糖的类似) ，再通过h 2 0 2 与鲁米诺反应产生发光，用化学发光法 检测器进行检测，测定青霉素时采用下面方法，首先以青霉噻唑酸的形式通过固定有青霉 素酶的柱子，并逆向推进多通道阀，推进过程中青霉噻唑酸与碘反应同时碘又与鲁米诺反 应产生化学发光，进而通过化学发光检测器检测，该方法用同一套顺序注射装置对发酵罐 中的以上三种成份进行检测，可以达到一周自动连续检测的水平。 2 l 世纪相当长时间内试样i i 处理在分析方法中仍将是“瓶颈”环节，s i a 是改变这种 状态的有效途径之一。自动化的前处理包括几乎所有形式在线分离( 过滤、渗析、柱吸着、 溶液萃取、沉淀与共沉淀及气液分离) 同时也包括在线稀释及消解。在线处理系统的效率 将逐渐接近多数检测方法从而使整个分析方法的效率显著提高，同时在线处理系统也将更 加专业化。现代工业生产中及自然和生命现象的观测中越来越多的要求提供完整过程中化 学成分动态变化的实时信息。s m 在过程分析中的优势作用将进一步体现出来。另外随着 近几年微顺序注射分析( m i c r o s i a ) 、l o v ( l a b o n - v a l v e ) ( 也称为l a v ( l 曲一a t - v a l v e ) ) 、 s i l o v 和b i l o v 等技术的出现和应用，s i a 分析系统的微型化、集成化、自动化和便携 化方面的优势将进一步得到体现。 顺序注射分光光度法测定药物中的盐酸酚苄明和甲氧氯曾胺 第二章顺序注射分光光度法测定药物中的 盐酸酚苄明和甲氧氯普胺 摘要基于在盐酸介质中，对苯二胺和亚硝酸钠反应生成重氯盐，重氨盐与药物发生重氦 偶合反应结合顺序注射分光光度法，建立了测定盐酸酚苄明和甲氧氯普胺的新方法。测定 盐酸酚苄明，线性范围为l o 4 0 0 “咖l ，检测限( 3 倍的标准偏差斜率) 为8 “咖l ， 进样频率为6 鲋1 。测定甲氧氯普胺，线性范围为2 0 2 5 0u g ，m l ，检测限( 3 倍的标准偏 差斜率) 为1 2 “斯n l ，进样频率为7 5 h 。该方法已成功地用于药物中盐酸酚苄明和甲氧 氧普胺的测定，测定结果与药典规定方法对照，并经统计学处理，结果表明两种方法无显 著性差异。 关键词顺序注射分析；分光光度法：药物；盐酸酚苄明；甲氧氯普胺 引言 盐酸酚苄明( p l l e n o x y b e l l z m i n eh y d m c h i o r i d c ，n 一( 1 一甲幕一2 一苯氧乙基) - n ( 2 一氯乙基) 苯甲胺盐酸盐，又名叫竹林胺) 足一种a 受体阻滞剂，能选择性阻断前列腺中n 一受体， 对前列腺增生症引起的非机械性梗阻所致的排尿困难有特效。目前检测方法主要是单点校 正法”1 ，但单点校j 下法相对于标准曲线法误差较大，并且往往不能消除浑浊药品和背景吸 收的干扰；另外还有一阶导数光谱法i ”l ，但是该方法操作繁琐。并且自动化程度低。甲氧 氯普胺( m e t o c l o p r a 商d e ，n 【( 2 二乙氨基) 乙基 _ 4 一氨基一2 一甲氧基一5 氯苯甲酰胺，简称m c p ) 是一种镇叶药，对于恶心、呕吐、食欲不振、急性胃炎和胃气胀都具有良好的疗效，因此 是一种治疗胃病的常用药。目前测定m c p 的方法有荧光法【”、分光光度法f 8 4 ”、化学发 光法口”、高效液相色醴法( h p l c ) 陋8 ”、气质联用( g c - m s ) 【”、f i a 一化学发光法l 舯”、 阳极溶出伏安法( 州和p v c 一模传感器电位法州。光度法操作繁琐，反应时间长，消耗试剂 量大；色谱法仪器昂贵，不易推广。总之，这些方法都有自动化程度低的缺点。而用顺序 注射分析j 杰测定盐酸酚苄明尚未见报道，顺序注射分析法测定甲氧氯普胺仅有一篇州。本 文发现在盐酸介质中，重氮盐可以与盐酸酚苄明和甲氧氯普胺反应，生成红色产物，利用 光度法进行检测，建立了顺序注射分光光度法测定药物中的盐酸酚苄明和甲氧氯普胺的新 方法。该方法分析速度快，常见离子和药物赋形剂不干扰测定，用于药物中盐酸酚苄明和 甲氧氯普胺含量的测定，并与药典方法对照，结果令人满意。 甲氧氯普胺含量的测定，并与药典方法对照，结果令人满意。 顺序注射分光光度法测定药物中的盐酸酚苄明和甲氧氯普胺 2 1 反应机理的研究 对苯二胺在赫酸存在下，能与亚硝酸钠作用，生成重氮盐： v h 2 2 0 + 2 n a n o z 盟一 n h 2 +厂 2 + 斟5 n + l n 三n l _ j 重氮盐与药物发生重氮偶合反应，生成有色偶合产物。结合微量、自动、快速、密闭 的顺序注射技术，建立了对这两种药物定量测定的新方法。考察了两种药物反应的停流曲 线( 见图2 1 ) ，结果表明，随着停流时间的延长，空白溶液的吸光度值a o 比样品溶液的吸 光度值a 增加的速度快，即随着反应时间的延长，a 反而减小，所以选择非停流法进行 检测。 d 8 06 a 04 02 00 0 a 0 a 0 2 04 0 6 08 口0 t i m e ( g ) 2 口4 a 6 a8 0 e ( ：) b 图2 1 停流曲线 a 盐酸酚苄明的停流曲线；b ，甲氧氯普胺的停流曲线 曲线l ，含样品时的吸光度值；曲线2 ，空白的吸光度值 2 2 实验部分 2 2 1 仪器与试剂 f n l a b 3 5 0 0 顺序注射分析仪( f 认l a b 仪器股份有限公司，美国) ，u s b 2 0 0 0 u v i s 光谱仪( 分析仪器股份有限公司，美国) ；反应管的内径和长度分别为o 5m m 和1 0 0c m ， 储存管的内径和长度分别为o 5m m 和2 0 0c m ，其它管内径为o 7m m 。l oi n mz 型流通池。 1 2 n 铲0 沁 顺序注射分光光度法测定药物中的盐酸酚苄明和甲氧氯普胺 盐酸酚苄明( 中国药品生物制品检定所) 对照品溶液：1m g ，m l ；甲氧氯普胺( 中国 药品生物制品检定所) 对照品溶液：1m 咖l ：n a n 0 2 溶液：o 1 0m o l ，l ；h c l ：o 0 5m o l l ； 对苯二胺：0 1m o l 几，称取o 5 4 0 7g 对苯二胺溶于