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,生物样品前处理,1,简介,2,前处理技术,1、直接稀释法：简单、回收率高、成本低，但选择性差，应用有限2、超滤法：多用于测定游离药物浓度3、蛋白沉淀法：几乎适用于所有小分子化合物，简单快速，回收率高，但选择性差，基质效应严重4、液液提取法：基质效应降低，低成本，重复性好；但难以自动化，不适用于水溶性化合物的提取，极性相差较大的化合物同时提取困难5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富集与净化；但成本较高,3,液液提取法,利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。,两相的分离需借助两相的密度差来实现原理：相似相溶分配系数：kA=yA/xAyA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率选择性系数（分离系数）：=kA/kB=萃取剂的选择：1、选择性好：表现为选择性系数大。2、萃取容量大：表现为分配系数大。3、萃取剂与原溶剂的互溶度。4、萃取剂和原溶剂有较大的密度差。5、化学稳定性耐酸耐碱、抗氧化还原、耐热、无腐蚀。6、安全性好。7、经济性好。Tips:PH和温度对萃取有一定影响。,4,常用液液提取溶剂,注：“*”表示与水互溶,偶极矩越小，极性越小,5,固相提取法,HLB(Hydrophilic-LipophilicBalanceCopolymer)材料的优点,水可浸润反相保留PH1-14范围内稳定没有裸露硅羟基,6,固相提取法,7,固相提取法,8,固相提取法,改变化合物PH，酸性保留，碱性洗脱,9,固相提取法,改变化合物PH，碱性保留，酸性洗脱,10,固相提取法,改变吸附剂PH，碱性保留，酸性洗脱,11,固相提取法,改变吸附剂PH，酸性保留，碱性洗脱,12,LC-MS-MS方法需考虑的问题,基质效应,样品中除被检测化合物外的成分，对化合物测定造成影响的效应。两种方式检测基质效应：柱后灌流法（定性），样品处理比较法（定量）。解决方案：1、改变样品前处理方法。（液液提取和固相提取法可降低基质效应）2、优化色谱条件。（将干扰物和待测物分离）3、优化质谱条件。（更换离子源，APCI源优于ESI源）4、同位素内标。（终极办法，最有效）,生物基质中的磷脂化合物易导致基质效应，大多数表现为基质抑制。建议：LC-MS-MS方法时监测m/z184m/z184离子对。,13,LC-MS-MS方法需考虑的问题,非特异性吸附,在低蛋白含量的生物基质（尿液，脑脊液，透析液等）中，化合物在存放/转移过程中与容器材料发生特异性结合的现象。在相应的生物基质中或水中测试，做转管实验。通常更换储存材料，或者在基质中加入一定量表面活性剂可消除非特异性吸附现象。常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等,1、表面活性剂需确立一个浓度范
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