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区分沙门氏菌和金黄色葡萄球菌,范聪聪,1,目的：,用革兰氏染色法区分金黄色葡萄球和沙门氏菌,2,原理：,通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇或丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。,3,药品：,金黄色葡萄球菌，沙门氏菌；草酸铵结晶紫，番红水溶液，碘液，95%乙醇，仪器：载玻片，接种环，酒精灯，打火机，吸水纸，显微镜，香柏油，擦镜纸，废水缸,4,操作步骤：,1）涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，把沙门氏菌和金黄色葡萄球菌分别涂在两个载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层，涂布面不宜过大,5,2）干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形,6,2019/12/12,7,3）固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60），放置待冷后，进行染色。,8,4）初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，流水冲洗,媒染：将碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，流水冲洗,吸,脱色：斜置载玻片，滴加95%乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗,9,复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止,10,5）干燥、观察：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察沙门氏菌和金黄色葡萄球的形态及颜色。,11,结果：,金黄色葡萄球菌被染成紫色为革兰阳性菌，沙门氏菌被染成红色为革兰阴性菌,12,注意事项：,1选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。2.涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。
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