（分析化学专业论文）卷烟烟气自由基检测与清除研究.pdf

中文摘要 卷烟燃烧后可产生数以千计的化合物，其中包含大量活性很高的自由基a 吸烟产生的自由基主要分为两类：一类是焦油中稳定的醌半醌自由基和稠环芳 烃自由基等自由基；另一类是烟气气相中活性高，不稳定的自由基，主要是烷类 自由基和烷氧自由基。近年来对吸烟和健康问题的研究发现，卷烟烟气中的自由 基是引起癌症等各种疾病的重要原因，而烟气气相自由基的毒性比焦油相自由基 更大。因此，研究卷烟烟气气相自由基检测方法，开发高效的自由基清除剂，降 低烟气中的自由基，提高吸烟的安全性，是一个具有十分重要社会效益的课题。 在烟气自由基检测方面，目前还没有一个公认的标准方法。焦油中的自由基 比较稳定，容易用e s r 直接检测，但气相自由基由于其性质活泼，难以直接用 e s r 检测，需用自旋捕集的方法来检测，使得分析程序繁琐，分析时间长。因此， 建立一个简单、快速检测卷烟烟气自由基的方法，是烟气自由基研究的一个重要 方向。 卷烟产品由于其特殊性，理想的烟气自由基清除剂的加入不能改变其原有吸 味，自由基清除剂需要在较长一段时间内保持稳定，添加清除剂的成本和工艺需 要适合工业化大生产。本论文主要工作包括以下几个方面： 1 、卷烟烟气气相自由基化学发光检测方法研究 本文首次将化学发光检测器联入吸烟机流路，基于烟气气相自由基氧化鲁米 诺产生发光，建立了一种化学发光在线检测卷烟烟气气相自由基的新方法。设计 了一个新的反应器，将反应器联入吸烟机气体流路，使吸烟机抽吸卷烟的同时， 烟气经过反应器，烟气中气相自由基与反应器中的鲁米诺溶液反应产生化学发 光，考察了鲁米诺浓度、反应溶液体积等因素对化学发光的影响，建立了一个能 直接在线实时监测在模拟吸烟情况下烟气气相自由基含量的化学发光分析方法。 本方法具有仪器和操作简单、分析速度快，容易实现自动化分析等优点。 2 、天然抗氧化剂清除氧自由基活性研究 为了研究天然抗氧化剂清除氧自由基的作用，本文采用流动注射技术使 f e n t o n 反应在线产生o h ，鲁米诺化学发光快速检测，建立了一种流动注射化学 发光检测羟基自由基的方法，具有分析速度快，精度高，容易实现自动化和连续 分析等优点。用所建立的流动注射化学发光方法和黄嘌呤氧化酶一次黄嘌呤一鲁米 诺体系，考察了茶多酚、阿魏酸、银杏提取物、迷迭香提取物、甘草次酸提取物、 绞股兰提取物、三七总皂甙等七种中草药提取物清除羟基自由基和超氧阴离子自 由基的活性。 实验结果发现，七种物质均能清除羟基自由基和超氧阴离子自由基，不同 提取物清除两种自由基的能力有较大差异，不同提取物对羟基自由基的半抑制浓 度( i c 5 0 ) 分别为茶多酚3 1 p g ，m l ，阿魏酸3 5 5 肛g m l ，银杏提取物2 9 5 陷，i i l l ，迷迭 香提取物6 2 4 斗g d ，甘草次酸提取物1 0 3 肛m l ，绞股兰提取物3 9 1 “g m 1 ，三 七提取物5 8 7 岭m l 。以茶多酚、可魏酸和银杏提取物最强，三七总皂甙最弱； 不同提取物清除超氧阴离子自由基的半抑制浓度( i c 5 0 ) 分别为茶多酚o 0 4 2 p m l ， 阿魏酸o 0 4 5 “g m l ，银杏提取物0 4 5 肛咖l ，迷迭香提取物0 0 2 5 g m l ，甘草次 酸提取物1 6 8 肛g m 1 ，绞股兰提取物1 4 0 8 “m l ，三七提取物1 6 7 岭m l 。以迷迭 香、茶多酚和阿魏酸清除效果最好，银杏提取物次之，三七总皂甙最弱。茶多酚 和阿魏酸清除清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力都很强。 3 、烟气气相自由基清除及低自由基卷烟研制 本文考察了阿魏酸、茶多酚、迷迭香和银杏时提取物等对清除活性氧具有明 显效果的天然抗氧化剂和其他一些物质对卷烟烟气气相自由基的清除作用，研究 了添加工艺和清除剂配方，确定了以c l n 溶液处理活性炭得到复合活性炭并添 加到醋纤中制成二元复合滤嘴的工艺方法清除卷烟烟气气相自由基，对烤烟型卷 烟烟气气相自由基清除率可达2 9 4 。对该复合滤嘴制得的卷烟保存4 个月后检 测，其烟气气相自由基清除率为2 9 6 ，与4 个月前的清除率2 9 4 相比没有明 显改变，说明该复合滤嘴清除烟气气相自由基的效果在较长一段时问内不随时间 而变化，其清除卷烟烟气气相自由基的效果十分稳定。使用该复合滤嘴对卷烟吸 味不产生异味，经计算使用该二元复合滤嘴成本每大箱只增加4 3 元，完全可应 用于工业化大生产。 2 a b s t r a c t t 0 b a c c o - b u m 血gc i g a r e t t e sy i e l dt 1 1 0 u s a l l d so fc h e m i c a lc o m p o u n d sa 1 1 dm a n y r e a c t i v es p e c i e so f 舶er a d i c a l sw h e nt o b a c c oi sb u m e d c i g a r e t t es m o k e ( c s ) c o n t a i n h i g hc o n c e r n r a t i o no ft w od i s t i n c t l yd i f r e r e n tp o p u l a t i o n so f 矗e er a d i c a l s ，o n ei s l o n g l i v e d a n ds t a b l ef e er a d i c a l ss u c ha s q u i n i n ea n dp o l y c y c l i c a r o m a t i c h y d r o c a r b o nr a d i c a l si i l 曲l ct a r t h eo t l l c ri sr e a c t i v ea n ds h o n - 1 i v e d 矗e em d i c a l si n g a s p h a s eo fc i g a r e t t es m o k ei n c l u d i n go x y g e n - a i l dc a r b o n - c e n t e r e d 丘e er a d i c a l s f r e er a d i c a l ss p e c i e si nc i g a r e n es m o k ca r ek n o 、nt oc a u s em a n yd i s e a s e ss u c ha s c a n c e r a n d 锄o n gt h e mg a s p h a s ef r e er a d i c a l si sm o r eh a m f u lt ot h eh u m 柚b o d y _ t h c r c f o r e ，d e v c l o p m e mo fc sg a s - p h a s ef r e e m d i c a l sd e t e c t i o nm e t h o da n d m a i l u f 她t u r eo fl o wf k er a d i c a l sc i g a r e t c et oi m p r o v et h es a f e t yo fs m o k i i 培h a v e i m p o r t a n ts o c i a ls i g n i f i c a n c e t h e r ei sn os t a n d 盯dm e m o di nm e a s 删n gt h e 矗e er a d i c a l si nc i g a r e t t es m o k ea t p r e s e n t ，m e 厅e er a d i c a l si nt a ri se a s yt om e a s u r eb ye s rb e c a u s et h e ya r es t a b l e b u t t h eg a s - p h a s ef b er a d i c a l si sn o te a s yt om e a s u r eb e c a u s e 廿l e ya r er e a c t i v ea n d s h o r t - l i v c d ，s ot l l e ym u s tb ea n a l y z e da f i e rs p i i lt r a p p i n g ，w h i c hi si n c o n v e n i e n ta n d t i m ec o n s u m i n g s od e v e l o p i n gas i m p l ea n dr a p i dm e t h o dt om e a s u r e g a s - p h a s e 疔e e r a d i c a l si si 埘l p o r t a n t f o rs p e c i a l i t yo fc i g a r e t t ep r o d u c t s ，t h ea d d i t i v e si nc 培a r e t t ec a i l t c h a l l g ei t s o r i g i n a lt a s t ca n dm e 丘e er a d i c a ls c a v e n g e r ss h o u l db es t a b l ei nap e r i o d ，t h ea d d i t i o n t e c l l l l i q u ea n d 廿l ep r i c eo ft l l e 舭er a d i c a ls c a v e l l g e r si sa l s oi m p o m m tf o r i n d u s t r i a l i z a t i o n t h i sd i s s e r t a t i o n 、v a sm a i f l l yc o n c e m e d 埘mt h ef o l l o 晰n ga s p e c t s o f g a s p h 髂e 舭er a d i c a l si nc i g a r e 慨s m o k c 1 d e t e r m i n a t i o no f 擎a - p h a s e n t er a d i c a l s i n c i g a r e t t e s m o k e b y c h e m i l u m i n e s c e n c e t h ed e v e l o p m e n to fan o v e lc h e m i l u m i n e s c e n c e ( c l )s y s t e m f o rt l l e d e t e r r n i n a t i o no fg a s p h a s ef k em d i c a l si n c i g a r e t 七es m o k ei sp r e s e n t e d t h e c h e m i l u m i n e s c e n c ep r o d u c e db yo x i d a t i o no fl u m i n 0 1b yg a s - p h a s e 矗e er a d i c a l si n 3 a l k a l i n em e d i 啪h a sb e e ni n v e s t i g a t e d an e wr e a c t o ri sd e s i g n e da 1 1 dc o n n e c t e dm t h en o wp a mo fc i g a r c t t es m o k i n gm a c h i n e w h e nm ec i g a r e t t es m o k i n gm a c h j n e w o r k s ，t h eg a s - p h a s ef e cr a d i c a l so x i d i z e1 u m i n o lt op r o d u c e 曲l e r n i l u r n i n e s c e n c e w h i l et h eg a s - p h a s es m o k en o wb ym er e a c t o lt h ee 行b c to fc o n c e n t r a t i o no f1 u m i n a l a n dv o l u m eo fr e a c 廿o ns 0 1 “o no nc li n t e f l s i t yw a si n v e s t i g a t e d an o v e l c h e r n i l 啪i n e s c e n c e ( c l ) m i 浊o di sd e v e l o p e df o r 曲t e m i n a t i o no fg a s p h a s e 肫e r a d i c a l si n c i g 盯e t l es m o k e ，“a l s op o w c r 血lf o rt l l ec o n t i 肌o u sa i l d r c a l t i m e m o n i t o r i n gg a s - p h a 盘e er a d i c a l si ns m o k i n gp r o c e s s e s i nc o m p 盯i s o nw i t ho t l l e r m e t h o d sr 印o r t e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fg a s - p h a s ef r e er a d i c a l s ，t l l ep r o p o s e d m e t h o do 侬幅p o t e n t i a la d v 觚t a g e so fs i m p l i c i 吼r a p i d i t y ，a i l de a s ya c h i c v e r n c mo f a u t o m a t i z a t i o n t h ep r o p o s e dm e m o dh a sb e e n s u c c e s s f m l y印p l i e d t om e d c t c m l 血a t i o no fg 踮- p h a s ef k er a d i c a l s 血c i g a r e t t es m o k e 2 s t u d yo fs c 吖e n g i n gr e a c t i v eo x y g e nf r e er a d i c a l sc a p a c n yo fs e v e nh e r b a l e x t r a c t s an o wi 内e c t i o nc h e m i l u m i n e s c e n c em e t l l o di sd e v e l o p e df o rd e t e m i n a t i o no f h y d r 0 x y l 舶er a d i c a l ( 0 h ) ，w h i c ho 能r s 舭a d v 姐诅g e so fr a p i d i t y ，h i 曲p r e c i s i o n 柚dc a s ya c h i c v c m e n to fa u t o m a t i z a t i o na n dc o n t 抽u o u s l ya l l a l y s i s t h es c a v e n g i n g r e a c t i v eo x y g e n 矗e er a d i c a l sc 印a b i l i t i e so fs e v e nc h i n e s eh e r b a le x t r a c t s ( f e n l l i c a c i d ( f a ) ，g i l l k g ob i l o b a ( g b ) ，t e ap o l y p h e n o l s ( 仲) ，r 0 s e m a r ) r ，g l y c y r r h e t i n i c a c i d ( g a ) ，g y n o s t e m m ap e m 印h y l l m ( g p ) ，n o t 0 西n s e n gt r i t e i p c n e s ( n t ) ) w e r e s t u d i e db yt h ea b o v ed e v e l o p e dm e t l l o da i l dh x x o d l m i n o ls y s t e m t h er e s u l t ss h o w e d 血a ta l le x t r a c t se x h i b i ts c a v e n g i n ge 船c to n o ha 1 1 d o _ ， t h ei c 5 0o ft p ，f a ，g b ，r o s e m 姒g a ，g pa n dn ts c a v e n g i n g o hw a s3 1 扯咖1 ， 3 5 5 p g m l ，2 9 5 p g m l ，6 2 4 i l g ，m l ，1 0 3 “g m l ，3 9 1l g r n ia n d5 8 7 l g r n lr e s p e c t i v e l y ， a n dt h e i ri c 5 0o f t p ，f a ，g b ，r o s e m 哪g a ，g pa n dn ts c a v e n g i n g o _ w a s o 0 4 2 肛g ，m l ，o 0 4 5 扯g ，m l ，o 4 5 扯g m l ，0 0 2 5 p g ，m 1 ，1 6 8 肛g ，m l ，1 4 0 8 p g m l 舭d 1 6 7 扯g m lr e s p e c t i v c l y 。f e m l i ca c i da i l dt c ap o l y p h e n 0 1 sh a v em eb e t t e rs c a v e n g i n g c a p a b i l i t i e so n o ha n do 4 3 s t u d yo fs c a v e n g i n gg a s - 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s c a l em 如u f h c t i l r eo f t o b a c c oi n d u s 乜了 5 第一章卷烟烟气自由基检测与清除方法研究进展 卷烟燃烧后可产生数以千计的化合物，其中包含大量活性很高的自由基。吸 烟产生的自由基主要分为两类：一类是焦油中稳定的自由基，主要是醌，半醌 ( q q h ) 自由基和稠环芳烃( p a h s ) 自由基；另一类是烟气气相中活性高， 不稳定的自由基，主要是烷类自由基( r ) 和烷氧自由基( r o ) ”】。近年来对吸烟和 健康问题研究发现，卷烟烟气中的自由基是弓 起各种疾病的重要原因，卷烟烟气 自由基的直接毒性是分布在卷烟烟气中的某些自由基可直接损伤细胞和酶等物 质，可与d n a 结合使细胞转化，产生突变；其间接毒性是能在体内激活和产生 大量活性更高毒性更大的其他自由基，如超氧自由基和羟基自由基，从而导致多 种病变【l 。因此，开发和利用高效无毒的自由基清除剂，降低烟气中的自由基， 将大大提高吸烟的安全性，具有十分重要的社会效益。 1 1 自由基的化学、生物学作用及其危害 自由基常为带有不成对电子的原子、分予或离子，具有顺磁性，大多数自由 基的性质极为活泼，具有很高的反应活性，参与大量的化学反应。自由基有很重 要的生物学功能，参与某些基因的调制表达和细胞功能的调控、一些物质的生物 合成、多种酶反应、信号传导、体内防御机制如对肿瘤细胞和入侵微生物的杀伤 和生理调节等；另方面，它有某些病理生物学作用，如d n a 损伤、生物膜氧 化损伤、神经损伤等，自由基还与衰老、动脉粥样硬化、心肌损伤、高血压等循 环系统疾病、肺部疾病、胃溃疡等消化系统疾病、阿尔茨海默病和帕金森瘸等神 经系统疾病、休克、多器官功能不全和肿瘤等很多疾病有关【3 一 。 卷烟烟气被国际癌症研究会0 a r c ) 定为i 级致痛物鄂，p r y o r 等肾，7 1 认为烟气 中高浓度的活性氧自由基与吸烟致癌有关。烟气中的自由基分布在气相和粒相 ( 焦油) 中1 2 j ，每支烟约产生1 1 0 ”个自由基，烟气中这些高浓度的自由基会消 耗生物体内的抗氧化系统( a o d s ) 中的抗氧化剂，产生氧化应激( o x i d a i i v e s t r e s s ) 捧】，导致自由基攻击不饱和脂肪酸、蛋白质、氨基酸和d n a ，使之发生变 性【弘1 2 j 而产生疾病。当吸烟者停止吸烟后，反应氧化应激水平的全血谷胱甘肽浓 度有显著提高”。卷烟烟气焦油中q q h - 和p a h s 是两类具有重要生物活性的自 由基，当q q h 进入人肺后，与氧反应，消耗氧储备，生成的活性氧自由基再 与d n a 结合，导致一系列毒理效应1 2 1 。在较低温度下，q q h 能催化p a h s 自氧化作用，生成致癌的酚和醌。气相自由基性质更加活泼，能进攻细胞膜引起 膜脂质过氧化，使膜的流动性变大【1 4 ，使a l - 抗蛋白酶( a lp i ) 失活呲1 5 ，16 1 。气相 自由基主要作用于肺的末梢部分，与周围型肺癌的发生有关，有关吸烟致癌的机 制可见综述【1 7 】。吸烟同样是动脉粥样硬化和心肌梗塞的主要因素1 9 j 。 1 2 烟气自由基的种类、性质与检测方法 在卷烟烟气自由基检测中运用最广泛的是电子自旋共振( e s r ) 技术，1 9 5 8 年i n g r a l l l 等2 m 2 1 】首次在卷烟焦油中检测到了长寿命的自旋共振信号，认为这些 信号来自p a h s 的未偶电子，而后p r y o r 等队1 2 ，1 6 1 的研究也证实了其信号来自 p a h s 自由基。对焦油中e s r 信号来源的深入研究j 发现，焦油中含有几种稳定 的自由基，通过电子自旋共振可直接检测到，总浓度约为6 1 0 “个自由基支烟 或3 1 0 m 个自由基幢焦油，有q q h - 、p a h s 、石墨碳和无机磷自由基。粒相自 由基主要是q q h 自由基，约占8 5 ，其e s r 信号很容易饱和，一般在2 m w 就可以饱和，很容易观察到；p a h s 自由基的e s r 信号不易饱和，其饱和功率在 1 0 0 m w ，但室温下不易观察到；与前2 种自由基不同的是，石墨碳自由基的e s r 信号具有各向异性和不对称性，低场部分较宽：无机磷自由基的e s r 也是各向 异性波谱。 烟气气相中自由基多为不稳定自由基如一氧化氮( n 0 ) 、二氧化氮( n 0 2 ) 、 r o 、r 和氧自由基( o _ ，h 2 0 2 ，0 h - ) 等，性质异常活泼，寿命短，不能用e s r 直接检测，一般需要用自旋捕集剂捕集以后检测，因此研究起步相对较晚。最初 的研究是b l u l l m 等1 2 2 】采用溶剂自旋捕集技术在烟气气相中检测到n 0 自由基； 而后，p f y o r 等阻2 4 】用固态捕集法减少无关反应，在气相中检测到了大量的r o 和 r 自由基； c h u r c h 【2 5 1 对烟气气相自由基的研究进行了综述。2 0 世纪9 0 年代后 主要侧重于烟气自由基的毒性研究，只有少量有关烟气自由基本身性质和检测的 研究，如s 蛐1 a g a 啪等 2 6 2 7 1 开发了一种可在水溶液中捕集到烟气中n o 自由基的 技术，f l i c k e r 【2 q 采用 玎，l c 检测了烟气气相中的碳中心自由基。r o - 和r 咱由基 寿命虽然很短( 1 s ) ”引，但它们在烟气中存在5 m i l l 后仍然能被检测到。对于这种 矛盾的现象，p r y o r 等1 2 ，1 6 ，2 4 】提出了一个吸烟过程中烟气气相自由基形成的稳态 假说，认为卷烟燃烧最初生成的n o 与烟气流中的氧气反应生成n 0 2 ，n 0 2 又与 烟气中的烯烃反应生成r ，r j 艮容易被氧化成r o 。并通过模拟试验得到的类似 烟气气相自由基的e s r 波谱证实了此假说： n r + 0 2 一 n o 2 n o + 0 2 。一2 n 0 2 n 0 2 +冲罩卫叱 扫iscm芒一10ile面z 3 3 2 清除o h 抗氧化剂浓度( c ) 与抑制率( i ) 的关系 用上述流动注射化学发光体系研究清除o h 中七种抗氧化剂浓度( c ) 与抑 制率( i ) 的关系见表1 。 表1 七种中草药提取物清除o h 浓度( c ) 与抑制率( i ) 的关系 中草药浓度 发光强度抑制率 线性回归方程i c 5 0 ( p g m 1 ) 惭) ( 肛g ，m 1 ) 结果表明，七种中草药提取物都具有清除羟基自由基的能力，在本实验浓度 范围内对羟基自由基清除率与中草药提取物浓度之间存在很好的线性相关。不同 提取物对羟基自由基的清除能力区别较大，半抑制浓度( i c 5 0 ) 分别为茶多酚 3 ，l 恤g m l ，阿魏酸3 。5 5 雌m l ，银杏提取物2 9 5 峙m l ，迷迭香提取物6 2 4 p m l ， 甘草次酸提取物l o 3 “g m j ，绞股兰提取物3 9 1 哪n l ，三七提取物5 8 7 卧m 。以 茶多酚、阿魏酸和银杏提取物清除效果最好，迷迭香和甘草次酸次之，绞股兰和 三七总皂甙最弱。 3 3 3 清除o i 抗氧化剂浓度( c ) 与抑制率( i ) 的关系 用上述次黄嘌呤黄嘌呤氧化酶一鲁米诺体系研究清除o 中七种抗氧化剂浓 度( c ) 与抑制率( i ) 的关系见表2 。 表2 七种中草药提取物清除o - 浓度( c ) 与抑制率( i ) 的关系 迷迭香提取物 o1 6 2 l0 y = 4 1 4 + 1 8 4 6 x 3 5 o 0 11 2 5 7 0 0 1 2 5 1 1 8 5 o 0 2 9 3 6 2 2 4 6 2 6 9 4 2 2 6 o 0 2 58 1 8 4 9 5 4 n = 4 o 0 2 5 r = o 9 9 7 8 结果表明，七种中草药提取物都具有清除超氧阴离子自由基的能力，在本实 验浓度范围内对超氧阴离子自由基清除率与中草药提取物浓度之间存在很好的 线性相关。不同提取物对超氧阴离子自由基的清除能力区别较大，半抑制浓度 ( i c 5 0 ) 分别为茶多酚0 0 4 2 p g m l ，阿魏酸0 0 4 5 肛g m l ，银杏提取物o 4 5 g m 1 ，迷 迭香提取物o 0 2 5 岭i n l ，甘草次酸提取物1 6 8 肛g m l ，绞股兰提取物1 4 0 8 “g m l ， 三七提取物1 6 7 p g m l 。以迷迭香、茶多酚和阿魏酸清除效果最好，银杏提取物次 之，然后是甘草次酸和绞股兰，三七总皂甙最弱。茶多酚和阿魏酸清除两种自由 基的能力都很强。 3 4 结论 本文所建立的流动注射化学发光检测羟基自由基的方法，能方便、快速的检 测羟基自由基和天然抗氧化剂清除羟基自由基的能力。在本实验浓度范围内，阿 魏酸、银杏提取物、茶多酚、迷迭香提取物、甘草次酸提取物、绞股兰提取物、 三七总皂甙都具有清除羟基自由基和超氧阴离子自由基的能力，七种抗氧化剂对 o h 和o _ 清除率与浓度之间存在很好的线性相关。不同提取物对羟基自由基的 清除能力不同，以茶多酚、阿魏酸和银杏提取物清除效果最好， i c 5 0 分别为 3 1 肛m l 、3 5 5 p g m l 和2 9 5 肛咖l ；迷迭香和甘草次酸次之，i c 5 0 分别为6 2 4 “g m l 和1 0 3 h 咖l ；绞股兰和三七提取物最弱，i c 5 0 分别为3 9 1 p g m l 和5 8 7 岭m l 。 不同提取物对超氧阴离子自由基的清除能力区别较大，半抑制浓度( i c 5 0 ) 分别为 茶多酚0 0 4 2 峙，m l ，阿魏酸o 0 4 5 p g m l ，银杏提取物o 4 5 g m l ，迷迭香提取物 o 0 2 5 m l ，甘草次酸提取物1 6 8 p 咖i ，绞股兰提取物1 4 0 8 g m l ，三七提取物 1 6 7 g “。以迷迭香、茶多酚和阿魏酸清除效果最好，银杏提取物次之，然后是 甘草次酸和绞股兰，三七总皂甙最弱。阿魏酸和茶多酚清除两种自由基的能力都 很强。为从中草药中筛选高效、无毒的抗氧自由基药物提供了理论依据。 3 7 参考文献 1 方允中，郑荣梁自由基生物学的理论与应用北京：科学出版社，2 0 0 2 2 赵保路氧自由基和天然抗氧化剂北京：科学出版社，1 9 9 9 3 许申鸿，杭瑚葡萄籽和葡萄皮清除自由基作用的研究食品科学，1 9 9 9 ， 2 0 ( 1 2 ) ：2 8 3 0 4 方若莹，方国明，俞越汉，胡天喜茶多酚和槲皮素对全血吞噬细胞产生活性 氧的抑制作用浙江大学学报：自然科学版，1 9 9 8 ，3 2 ( 2 ) ：1 6 3 1 6 7 5 蔡志强，赵希岳，李亮，李尔炀三种天然抗氧化剂清除自由基作用的研究 中国药科大学学报，2 0 0 4 ，3 5 ( 2 ) ：1 9 0 1 9 2 6 张英，吴晓琴，俞卓裕竹叶和银杏叶总黄酮含量及其抗自由基活性的比较研 究中国中药杂志，2 0 0 2 ，2 7 ( 4 ) ：2 5 4 2 5 7 7 徐向荣，王文华，李华斌化学发光法测定f e n t o n 反应中的羟自由基及其 应用环境科学，1 9 9 8 ，1 9 ( 2 ) ：5 1 5 4 8 陈季武，胡天喜测定0 h 产生与清除的化学发光法体系生物化学与生 物物理进展，1 9 9 2 ，1 9 ( 2 ) ：1 3 6 1 4 0 9 r u z i c k aj ，h a l l s e ne h r e c e n td e v e l o p m e n t si nf l o w 蝎e c t i o na n a l y s i s ： 伊a d i e mt e c h 血q u e sa n dh y d r o d y n 锄i ci n j e c t i o n a n a l c h i m a c t a ，1 9 8 3 ，1 4 5 ： 1 1 5 1o r i l z i c k aj ，h a n s e ne h f l o wi n j e c t i o na n a l y s i s n e wy 0 r k ：w i l e y ，2 n de d n ， 1 9 8 8 1 1 f e n t o nh j h 0 x i d a t i o no ft a i 切d ca c i di nt l l ep r e s e n c eo fi m n j c h e m s o c ，1 8 9 4 ，6 5 ：8 9 9 9 1 0 1 2 h a b e rf ，w e i s sj ，7 n l cc a t a l y t i