病载体应用于基因治疗PPT课件.ppt

病毒载体应用于基因治疗 1 病毒载体概述 要求 1 携带外源基因并能包装成感染性病毒颗粒2 介导外源基因转移和表达3 对机体不致病 容量 自身基因组大小的105 110 组成 1 病毒复制和包装元件2 病毒基因3 插入的外源基因或元件4 病毒外壳 外膜 用途 基因转移和表达1 基因治疗2 疫苗3 器官移植4 组织工程5 转基因动物6 基因功能研究 2 直接体内法 invivo 3 间接体内法 exvivo 4 病毒载体的靶向性 转导靶向性 转录靶向性 特异性 改造病毒外壳 外膜 连接靶向性结合分子 Modifiedvirus cell 组织特异性启动子 肿瘤选择性启动子 细胞周期调控启动子 肿瘤血管内皮导向启动子 双特异性启动子 病毒增殖的特异性转录调控 5 逆转录病毒 Retrovirus 结构 逆转录病毒 Retrovirus 是RNA病毒 它有三个结构蛋白基因 env 编码gpl20和gp41两种包膜糖蛋白 gag 编码病毒衣壳 基质等结构蛋白的基因 pol 编码逆转录酶 p66 p51 蛋白水解酶和整合酶 6 逆转录病毒的生活周期进入宿主细胞双链RNA逆转录酶双链DNA前病毒整合到宿主细胞基因组DNA中宿主细胞RNA聚合酶IImRNA病毒RNA基因组作为合成相应病毒蛋白质的模板包装成新的病毒颗粒 离开宿主 7 LTR gag pol env LTR 长末端重复序列 调节和启动转录 产生病毒核心蛋白 产生逆转录酶 产生病毒外膜蛋白 包装信号 DNA前病毒的结构特征 8 逆转录病毒载体的构建 常用的是莫洛尼小鼠白血病病毒 MoMLV 构建的各类逆转录病毒载体 LTR gag pol env LTR 长末端重复序列 调节和启动转录 包装信号 目的基因 标记基因 9 LTR gag pol env LTR Gag蛋白 PoL蛋白 Env蛋白 包装细胞系 LTR LTR 靶细胞 目的基因 标记基因 LTR LTR 目的基因 标记基因 1 2 3 4 5 假病毒颗粒的产生并感染靶细胞 逆转录病毒载体 重组逆转录病毒 核酸部分只能是逆转录病毒载体 辅病毒 10 逆转录病毒载体应用实例 11 Stage 20G3embryos Stage 28G3embryos 12 腺病毒 Adenovirus 结构 腺病毒是一种无外壳的双链DNA病毒 基因组长约36kb 衣壳 capsid 呈规则的20面体结构 直径约80 110nm 衣壳含有240个六联体 hexon 12个五联体 penton 和12根纤毛 fiber 五联体 penton 和纤毛的头节区 knob 可与细胞表面的病毒受体结合 在病毒感染细胞过程中起着非常重要的作用 knob 13 腺病毒感染通路 1 结合细胞表面受体2 内吞作用进入细胞3 转位到细胞核4 释放病毒DNA 14 腺病毒载体应用实例 1 中国科学院生化研究所刘新垣院士提出了癌症的靶向双基因病毒治疗策略 用重组腺病毒ZD55 MnSOD和重组腺病毒ZD55 TRAIL联合治疗人结肠直肠癌 并且该腺病毒EIA基因自身的启动子被hTERT启动子所取代 使得该重组腺病毒变成一种依赖端粒酶的条件复制型增殖病毒 MnSOD Manganesesuperoxidedismutase isalatenttumorsuppressorgene TRAIL Tumornecrosisfactor relatedapoptosis inducingligandgenes ZD55 TRAILwasshowntoinducetheMnSODexpressioninSW620cells 15 a withoutadenoviraltransduction b transducedwithZD55 MnSOD c transducedwithZD55 TRAIL d transducedwiththecombinationofZD55 MnSODwithZD55 TRAIL 16 腺病毒载体应用实例 2 Her2 humanepidermalgrowthfactorreceptor 2 原癌基因人类表皮生长因子受体基因 是一种人癌细胞表面的biomarker 17 DARPin Designedankyrinrepeatprotein Target Her2 18 19 其他病毒载体 巨细胞病毒载体 Animal RhesusmacaquesSIV Simianimmunodeficiencyvi