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尿干化学分析1、检测参数检测参数组合(1)用于初诊患者及健康体检使用的811项筛检组合试带。8项：ph、pro、glu、ket、bil、uro、ery 、 hb 、 nit；9项：8项+leu；10项：9项+sg；11项：10项+vitc。l (2)用于已确诊疾病的疗效观察，如尿糖、尿蛋白等单项试带和各种组合型试带。各种组合试带l肾病型四联试带：ph、pro、ery、sg；l糖尿病型五联试带：ph、pro、glu、ket、sg；l肝脏型二联试带：胆红素、尿胆原。2-1 尿液试带测试原理-phl采用酸碱指示剂法。lph试剂块含有甲基红（ph4.66.2）和溴麝香草酚蓝（ph6.07.6）两种酸碱指示剂，在ph4.59.0的范围内，颜色由橙红经黄绿到蓝色变化。2-2 尿液试带测试原理-比重l试带测试膜块区含有多聚电解质甲氧乙烯顺丁烯二酸（methoxyethylene maleic acid）、酸碱指示剂（溴麝香草酚蓝）及缓冲物。l经过处理的多聚电解质的pka改变与尿液中离子浓度相关。l尿液中以盐类形式存在的电解质（m+x-）在水溶媒中解离出m+阳离子，并与离子交换体中的h+置换，释放出h+。l溴麝香草酚蓝（ph6.27.0）以分子型和离子型两种形式共存，不同的比例呈现不同的色泽变化。l分子型居多时呈黄色，离子型居多时呈蓝色。2-3 尿液试带测试原理-尿糖l采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法。lglu试剂块含有葡萄糖氧化酶(god)、过氧化物酶（pod）、色素原（邻联甲苯胺、碘化钾）等。l葡萄糖 + o2 + h2o 葡萄糖酸+h2o2l当色素原脱氢后分子结构发生改变，使色素原呈现由蓝经绿至棕色的色泽变化。l颜色的深浅与glu含量成正比。2-4 尿液试带测试原理-蛋白质l采用ph指示剂蛋白质误差法。l在ph3.2的条件下，溴酚蓝产生的阴离子，与带阳离子的蛋白质结合发生颜色变化。l蛋白质试剂块含有四溴酚蓝、柠檬酸、柠檬酸盐和表面活性剂，四溴酚蓝为酸碱指示剂同时也是灵敏的蛋白显色剂。l当尿液中含有蛋白时，由于蛋白质离子对指示剂相反电荷的吸引而生成复合物，引起指示剂的进一步电离，当超过缓冲范围时，指示剂发生颜色改变。l根据尿液中蛋白质含量高低，试剂膜块发生由黄经绿到蓝的颜色变化，颜色的深浅与蛋白质含量成正比。2-5 尿液试带测试原理-酮体l采用亚硝基铁氰化钠法。l酮体试剂块主要含有亚硝基铁氰化钠、甘氨酸、碱缓冲剂。l在碱性条件下，亚硝基铁氰化钠可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮起反应，试剂膜块发生由黄色到紫色的颜色变化，颜色的深浅与酮体含量成正比。2-6 尿液试带测试原理-胆红素l采用偶氮反应法。l胆红素试剂块主要含有2.4-二氯苯胺重氮盐、缓冲剂及其它表面活性物质。l在强酸性介质里结合胆红素与二氯苯胺重氮盐起偶联反应，生成红色复合物。试剂膜块发生由黄色到红色的颜色变化，颜色的深浅与胆红素含量成正比。2-7 尿液试带测试原理-尿胆原l采用醛反应法或重氮反应法。l尿胆原试剂块主要含有对-二甲氨基苯甲醛、缓冲剂及其它表面活性物质。l在强酸性条件下，尿胆原与对-二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色缩合物。试剂膜块发生由黄色到红色的颜色变化，颜色的深浅与尿胆原含量成正比。胭脂红色（bm）2-8 尿液试带测试原理-隐血l采用血红蛋白类过氧化物酶法。l试剂块主要含有过氧化氢枯烯、四甲替联苯胺（或邻甲联苯胺）、柠檬酸、柠檬酸盐等。l尿液中的血红蛋白或其破坏释放的游离血红蛋白均含有亚铁血红素，亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样活性，可催化过氧化氢枯烯和受体色素原四甲替联苯胺的反应，当色素原脱氢后分子结构发生改变，使无色的四甲替联苯胺变化成为蓝色的邻四甲替联苯胺。l试剂膜块区可发生蓝色或点状蓝色的变化，颜色的深浅与血红蛋白或红细胞含量成正比。2-9 尿液试带测试原理-亚硝酸盐l采用亚硝酸盐还原法。l亚硝酸盐试剂块主要含有对氨基苯砷酸（或氨基磺酸）、n-萘基乙二胺物质。l当尿液中感染的具有硝酸盐还原酶的细菌增加时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，并可将膜块中的氨基苯砷酸重氮化而成重氮盐，以此重氮盐再与n-萘基乙二胺偶联，使膜块呈现红色变化。试剂膜块区发生由黄至红的颜色变化，颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比。紫色（bm）2-10 尿液试带测试原理-白细胞l采用酯酶法。l白细胞试剂块主要含有吲哚酚酯、重氮盐及其它物质。l粒细胞中存在酯酶，它能作用于膜块中的吲哚酚酯，使其产生吲哚酚，吲哚酚与重氮盐发生反应形成紫色缩合物，试剂膜块区发生由黄至紫的颜色变化，颜色的深浅与白细胞含量成正比。蓝紫2-11 尿液试带测试原理-vitcl采用还原法。lvitc试剂膜块区含有2，6-二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠、磷酸氢二钠。lvitc具有1，2-烯二醇还原性基团，在酸性条件下，能将氧化态粉红色的2，6-二氯酚靛酚染料还原为无色的2，6-二氯二对酚胺。l试剂膜块区发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化。 尿试带测试原理3、临床应用3-1 临床应用-phlph的检测主要用于了解体内酸碱平衡情况，监测泌尿系统患者的临床用药情况，同时了解尿ph变化对试带上其它膜块区反应的干扰作用。l检测时应使用新鲜尿液标本。标本放置过久，使ph呈现假阳性结果。l试带在尿液中浸渍时间过长，有使尿ph减低趋势，呈现假阴性结果。3-2 临床应用-比重l尿比重的检测主要用于了解尿液中固体物质的浓度，估计肾脏的浓缩功能。在出入量正常的情况下，比重升高表示尿液浓缩，比重减低则反映肾脏浓缩功能减退。l干化学尿比重测定变化范围为ph6.27.0。l当尿液ph7.0时，应在干化学测定结果的基础上增加0.005作为由于碱性尿损失的补偿。l干化学尿比重测定结果表达值的变化范围在1.0001.030，间隔值为0.005，不能反映较小的比重变化，多用于过高或多低尿比重患者的筛检； l新生儿尿液比重在1.0001.004范围，不宜使用此法。l尿液中蛋白或糖浓度增加将使比重结果增加；尿素大于10g/l或ph小于6.5时，致比重结果减低。3-3 临床应用-尿糖l尿糖检测主要用于内分泌性疾病如糖尿病及其它相关疾病的诊断与治疗监测等。l干化学尿糖检测只与葡萄糖反应，较班氏尿糖法有更高的特异性。l干化学法较班氏法有更高的灵敏度，为25mmol/l 。当葡萄糖含量为1.672.78mmol/l 时，用干化学法即可出现弱阳性，而班氏法只有当其为8.33mmol/l 时才会呈现弱阳性。 l尿液在低葡萄糖浓度（14mmol/l）时，维生素与试带中的试剂发生竞争性抑制反应，使干化学法产生假阴性反应。l维生素和班氏试剂中铜离子作用，使班氏尿糖定性法产生假阳性的结果。l尿液被过氧化物、次氯酸盐、强氧化性清洁剂污染可使尿糖呈现假阳性结果；l尿液中含有l-多巴、大量水杨酸盐、氟化钠、维生素大于500 mg/l、尿酮体大于0.4g/l或尿比重过高，则将使尿糖呈现假阴性结果。3-4 临床应用-酮体l本法对酮体各组成成分的灵敏度不一：乙酰乙酸为50100mg/l，丙酮400700mg/l，与-羟丁酸不发生反应。l不同病因、不同病程酮体成分会发生变化，因此干化学检测所得结果可能与实际总的酮体量有所差异。l尿酮体中丙酮和乙酰乙酸都具有挥发性，因此测定时应使用新鲜尿液标本。l试带受潮，可使尿酮检测呈现假阴性结果l尿液中含有酞、苯丙酮、羟哇啉、l-多巴代谢物、巯甲丙脯酸、甲基多巴，可呈现假阳性结果。3-5 临床应用-尿蛋白l尿液ph是影响测试结果的重要因素之一。l当患者服用奎宁、奎宁丁、嘧啶等药物，或尿液中含有聚乙烯、吡咯酮、洗必泰、磷酸盐、季胺盐消毒剂等时，引起尿液呈强碱性（ph9.0），超过了试带的缓冲能力，使干化学法出现假阳性结果。l当尿液ph3.0时，会引起干化学法出现假阴性结果。l尿蛋白干化学法对尿内蛋白质不同成分的敏感性不一，主要对清蛋白敏感（70100mg/l），而对球蛋白、粘蛋白、本周蛋白不甚敏感。l对于肾病患者，特别是在疾病发展过程中需要系统观察尿蛋白含量的病例，最好使用对白、球蛋白灵敏度一致的磺柳酸法或双缩脲法进行定性和定量实验。l结果表明：滴注青霉素250万2小时、320万3小时、480万5小时，可能对干化学法产生假阴性。l标本内含有其它生殖系统分泌物或较多细胞成分时，可引起假阳性。3-6 临床应用-亚硝酸盐l尿亚硝酸盐是用于尿路细菌感染的快速筛检试验，采用亚硝酸盐还原法，敏感度为0.30.6 mg/l。l尿亚硝酸盐试验阳性结果产生的三个条件：尿液中的致病菌须含有硝酸盐还原酶； 体内有适量硝酸盐的存在； 尿液在膀胱内有足够的停留时间，4h以上且排除药物等干扰因素。l在尿路感染患者的尿液中分离出的病原微生物主要有大肠埃希菌属，klebs氏杆菌属，变形杆菌属，葡萄球菌属，假单胞菌属和粪链球菌属，致病率最高的是大肠埃希菌属。除致病率1的粪链球菌属不含硝酸盐还原酶外，其余均含此酶。l硝酸盐的来源主要是食物中的硝酸盐、体内蛋白质正常代谢和体内氨内源性合成三个方面。l尿液中尿胆原、维生素 c、尿ph大于6、尿量过多，都有可能造成亚硝酸盐假阴性结果。 3-7 临床应用-白细胞l尿白细胞检测主要用于肾脏、泌尿道疾病的诊断、治疗等。l干化学法白细胞检测采用中性粒细胞酯酶法，灵敏度为515/l。l中性粒细胞胞质中含有酯酶，而单核细胞、淋巴细胞胞质中则无酯酶，因此干化学白细胞检测方法只对粒细胞敏感。l尿液标本污染甲醛、或高浓度胆红素、或使用某些药物如呋喃妥因、或有毛滴虫属寄生虫时，干化学法呈现假阳性结果。l尿液中含维生素 c、或尿液中含有大剂量先锋、庆大霉素等药物、或尿蛋白大于5g/l时，干化学法呈现假阴性结果。3-8 临床应用红细胞l干化学法尿隐血检测采用血红蛋白类过氧化物酶法，灵敏度为150300g/l。l尿液中含有肌红蛋白、对热不稳定酶、氧化剂或菌尿，可使干化学法尿隐血测定呈现假阳性结果。l尿液中大量vitc的存在（100 mg/l），可竞争性抑制反应致使产生假阴性结果，另外蛋白质、糖尿也可引起假阴性结果。 3-9 临床应用尿胆原与胆红素l干化学法尿胆红素检测采用偶氮反应法，灵敏度为510mg/l；尿胆原检测采用醛反应法，敏感度为24mg/l。l为避免胆红素在阳光照射下氧化为胆绿素、尿胆原氧化为尿胆素，检测时应使用新鲜尿液标本。l当患者接受大剂量氯丙嗪治疗、或尿液中含有高浓度的维生素 c（500 mg/l）、亚硝酸盐、或含有盐酸苯偶氮吡啶代谢产物时，可因其抑制偶氮反应，使胆红素检测呈现假阴性。l尿液中含有酚噻嗪类或吩嗪类药物时，可使胆红素呈现假阳性。l尿液中一些内源性物质如胆色素原、吲哚、胆红素等和一些药物如酚噻嗪类中、维生素k、磺胺药等，因颜色干扰，对尿胆原检测呈现假阳性；而亚硝酸盐、重氮药物、对氨基水杨酸则对尿胆原检测呈现假阴性。l尿胆原排出量以午后2p.m4p.m达最高峰。3-10 临床应用维生素cl干化学法维生素 c的检测采用还原法，灵敏度依所用试剂带的不同而有所不同，一般为50100 mg/l。l维生素 c在碱性环境中极不稳定，容易分解。l龙胆酸、l-多巴、或ph大于4.0条件下的内源性酚及巯基化合物、尿液中的半胱氨酸和硫代硫酸钠等，使维生素 c检测呈现假阳性。l维生素 c检测的作用在于提示其它项目检测结果的准确性，防止假阴性的出现，使各项干化学检测结果更准确、更科学。 4、尿分析仪参比方法l假阴性或假阳性结果不可避免l尿蛋白的参比方法为磺基水杨酸法l比重的参比方法为折射仪法l尿葡萄糖的确证试验为葡萄糖氧化酶定量法l尿胆红素为harrison法l尿白细胞、红细胞的确证试验为尿沉渣显微镜镜检法5、方法学评价l主要优点：标本用量少（1020m1）；检测速度快、检测项目多，最快10余秒可完成1条多联试带11个项目的检测；检测准确性、重复性好；适用于大批量普查。6、尿干化学分析仪检查与显微镜检查 6-1 红细胞仪器法（），镜检（）l可由于尿液中红细胞常被破坏而释放出血红蛋白，多发生于肾病患者，或某些患者尿液中含有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿，引起红细胞干化学法测定结果的假阳性。l将尿液煮沸冷却后再测试可以排除对热不稳定酶的影响。6-2 红细胞仪器法（），镜检（）l这种情形一般很少。l可发生在尿液中含有大量vitc（100 mg/l）或使用失效试带时。l若使用尿十一联试带，可通过观察vitc的含量来加以判别。6-3 白细胞仪器法（），镜检（）l这种情形可能的解释为：尿液在膀胱贮存时间过长或其它原因致使白细