医学检验毕业论文-乙肝两对半常见模式中前S1抗原与HBV-DNA的相关性探讨.doc

乙肝两对半常见模式中前s1抗原与hbv-dna的相关性探讨医学检验专业 指导老师 学生摘要：目的 了解乙肝病毒前s1抗原(pre-s1)与hbv-dna含量的相互关系及意义；方法 用elisa法检测前s1抗原、hbv血清标志物，用荧光定量聚合酶连反应(pcr)技术检测hbv-dna；结果 前s1抗原与hbv-dna含量有一定相关性，r=0.9744，可以较好地反应hbv的存在或复制情况；结论 pre-s1是hbv感染与复制的可靠指标，可弥补两对半的不足缺陷，与hbv-dna联合动态检测有助于临床诊断，疗效观察及预后判断。关健词：乙肝；hbv-dna；pre-s1；pcr我国的hbv感染率很高，长期以来对病毒性乙型肝炎的诊断和疗效观察、预后判断主要多依靠乙肝两对半的检测，但是hbv基因组易突变，引起hbsag亚型，或hbsag阴性，引起hbeag阴性hbeab阳性1，从而导致临床漏诊，目前前s1抗原和hbv-dna已成为hbv检测常用的新指标，前s1抗原是hbv的前s1基因编码，具有很强的免疫原性，对hbv附着肝细胞诱导特异性免疫反应有重要作用3。hbv-dna直接反映血中hbv含量4，本文就pre-s1抗原与hbv-dna水平的相关性作一探讨。1. 材料和方法1. 1标本选择：选择2006年1月至2月绵阳市中心医院门诊及住院病人317例，男214例，女103例，年龄373岁。1. 2试剂与检测方法：1.2.1 乙型肝炎病毒前s1抗原检测：采用elisa法测定，检测试剂由中国科学院上海生物研究所研制，上海阿尔法生物技术有限公司生产的hbv前s1抗原诊断试剂盒。1.2.2 hbv-dna：采用荧光定量聚合酶连反应(pcr)技术检测，检测试剂由深圳市匹基生物股分有限公司提供的hbv pcr荧光定量检测试剂盒，正常参考值：1103拷贝/ml。1.2.3 乙肝血清标志物的检测：采用elisa法检测hbvm：hbsag、hbsab、hbeag、hbeab、hbcab。试剂由华美生物工程公司提供。具体的检测及判断方法按试剂盒说明书进行。1. 3仪器：bio rad model550型酶标分析仪，bio-rad icycler荧光pcr检测仪。1. 4统计学分析：计数资料采用2检验，相关性用相关检验，关系密切性用关联性检验。2. 结果2.1 pre-s1和hbv-dna在各hbvm中阳性率见表一 两对半模式例数npre-s1（+）%hbv-dna（+）% +-+-+ 9780（82.5）93（95.9） +-+ 10127（26.7）16（15.8） +-+ 4212（28.6）17（40.5）- 230（0.00）0（0.00）-+- 170（0.00）0（0.00）-+-+ 152（13.3）3（20.0）-+ 120（0.00）0（0.00）-+-+ 100（0.00）0（0.00）注：将hbv-dna1.00e+03视为阴性，hbv-dna1.00e+03视为阳性根据pre-s1蛋白和hbv-dna在各hbv-m中的阳性检出率，计算出两者检出率的相关系数和直线回归方程：r=0.9744，y=1.183x+2.683。根据表一做行列表资料2检验，2=678.2145，p0.005，说明两者存在相互关联性。进一步计算pearson列联系数c=0.7380，由此可知，前s抗原和hbv-dna之间存在一定的关联性，关系密切。2.2前s1抗原和hbv-dna的关系 见表二前s1抗原例数nhbv-dna（+）hbv-dna（-）（+）1219625（-）19633163合计317129188经使用配对资料2检验分析，2=1.1034，0.25p0.50，因此可以认为两种结果相同，差异无显著性意义。2.3hbv-dna含量与pre-s1抗原阳性率的关系见表三：hbv-dna含量例数npre-s1阴性pre-s1阳性%1.00e+0746046（100）3. 讨论乙肝病毒检测的传统标志物主要是hbsag、hbsab、hbeag、hbeab、hbcab，hbeag是反映hbv复制的主要标志物。目前，pre-s1和hbv-dna已经成为hbv检测常用的新指标，pre-s1抗原是乙肝hbsag的组成部分，有hbv的s区基因的前s1基因编码，前s1抗原氨基酸序列中2147片段是hbv与肝细胞结合位点，与hbv入侵肝细胞诱导特异性免疫反应有关2。hbv-dna是直接反映血清中hbv含量，是目前hbv检测中最灵敏、特异的指标。二者对hbv感染的诊断和疗效观察具有重要的意义。3.1表1的结果表明，前s1抗原和hbv-dna阳性主要集中在“+-+-+”模式中，pre-s1抗原阳性检出率为82.5%，hbv-dna阳性检出率为95.9%，为阳性检出率最高组。据表一作相关性检验，前s1抗原和hbv-dna呈直线正相关，相关系数r=0.9744，直线回归方程为：y=1.183x+2.683。表明两者相关密切，但同时表明，hbv-dna阳性率比前s1抗原高，前s1抗原检测不能完全替代hbv-dna的检测7。3.2表2，在129例hbv-dna（+）中前s1抗原（+）121例占93.8%，在121例s1抗原（+）中hbv-dna（+）96例占79.4%，hbv-dna（+）而前s1抗原（-）有33例，前s1抗原漏查率为10.4%，s1抗原（+）而hbv-dna（-）有25例，hbv-dna的漏查率为7.9%，这说明前s1抗原和hbv-dna是相伴存在的。经使用配对资料2检验分析，2=1.1034，0.25p0.50，因此可以认为两种结果相同，差异无显著性意义。3.3表3中把317例标本按照hbv-dna含量高低分成了5组，比较不同hbv-dna含量组中pre-s1抗原的阳性检出率，结果表明pre-s1阳性检出率随hbv-dna拷贝数升高而升高5，同时表明s1抗原阳性可能间接地反映hbv的高拷贝复制6，这亦表明pre-s1与hbv-dna明显相关。综上所述，前s1抗原含有hbv与肝细胞结合位点，对乙肝病毒附着于肝细胞诱导特异性免疫反应有重要作用，hbv-dna直接反映血清中乙肝病毒的含量，二者联合动态检测对于乙肝的诊断、疗效观察和预后判断有非常重要的意义。参考文献：1. 彭文伟主编 传染病学（m）北京：人民卫生出版社 2004 21502. 刘春明 梁秀芳 彭媛等 乙肝前s1蛋白与乙肝标志物联合测定临床意义的探讨（j）江西医学检验 2005.23（1）.783. 胡晓林 张海燕 焦连亭 乙型肝炎病毒前s1抗原在乙肝临床诊断中的意义（j）江西医学检验 2005.23（1）924. 张新利 党淑萍 乙肝病毒dna与血清标志物的关系分析（j）现代检验医学杂志 2003.18（5）555. 邓君 杜琼 文安阳 杨明清 乙肝患者血清hbv-dna水平hbv标志物及肝脏功能的