高中生物 专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课件5 新人教版选修1.ppt

课题2土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 尿素 co nh2 2 重要的农业氮肥 只能被土壤中细菌分解为nh3才能被植物吸收利用co nh2 2 h2oco2 2nh3 分离产生脲酶的细菌 一 课题背景 二 研究思路 一 筛选菌株提出的问题 如何寻找耐高温的酶 解决问题的思路 寻找耐高温环境 原理 高温淘汰其他菌 选出耐高温细菌 耐高温菌种提取耐高温酶 一 筛选菌株kh2po41 4gnahpo42 1gmgso4h2o0 2g葡萄糖10 0g尿素1 0g琼脂15 0g将上述物质溶解后 用蒸馏水定容到1000ml 该培养基的配方中 为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌 为什么 碳源 葡萄糖 尿素 氮源 尿素 能 只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存 一 筛选菌株1 选择培养基 允许特定种类的微生物生长 同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基 2 菌株 纯且活状态所保存的菌种 二 统计菌落数目 1 活体计数法 稀释涂布平板 1 操作方法 稀释涂布平板 统计菌落数 2 原理 1个菌落 1个活菌 3 统计原则 选30 300个菌落的平板统计 每个稀释度取3个平板取其平均值 为什么 例 两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数 从对应稀释倍数为106的培养基中 得到以下两种统计结果 1 甲同学在该浓度下涂布了一个平板 统计的菌落数为230 2 乙同学在该浓度下涂布了a b c三个平板 统计的菌落数分别为21 212 256 该同学以这三个平板上菌落数的平均值163作为统计结果 你认为这两位同学的作法正确吗 如果有问题 错在哪 甲 没有重复实验 至少涂布3个平板 乙 a组结果误差过大 不应用于计算平均值 二 统计菌落数目1 活菌计数法 4 统计结果 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低 因此统计结果一般用菌落数表示 每克样品中的菌株数 c v mc 某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 v 所用稀释液的体积 m 稀释倍数 为什么 2 显微镜直接计数 如何对细菌进行计数 利用选择培养基进行尿素分解菌的分离过程中 从对应稀释倍数为106的培养基中 a b两同学分别得到以下两种统计结果 1 a同学筛选出150个菌落 2 b同学筛选出50个菌落 b认为a的培养基被杂菌污染了 或培养基中混入了其他含氮物质 因而导致不能分解尿素的细菌也能在该培养基中生长 a确认自己的操作无误 但也拿不出能令人信服的证据 请你帮助a同学改进实验 提供具有说明了的证据 设置对照 同等条件下 培养空白培养基 三 设置对照1 设置对照的目的 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响 提高实验结果的可信度 对照实验是指除了被测试的条件外 其他条件都相同的实验 四 实验过程 一 土壤取样1 天然培养基和合成培养基 2 土壤取样 1 取样的位置 土壤 天然培养基 含有大量的微生物 其中70 90 是细菌 在富含有机质的土壤层的3 8cm处中分布着绝大多数的细菌 2 取样要求 铲去表层土 二 样品稀释 1 测细菌数 一般用104 105 106稀释液 2 测放线菌 一般用103 104 105稀释液 3 测真菌数 一般用102 103 104稀释液原则 确保平板上的菌落数在30 300之间 三 微生物的培养与观察1 接种 用适当的稀释液作涂布平板2 培养 细菌 30 37 1 2d 放线菌 25 28 5 7d 霉菌 25 28 3 4d 3 观察 a 每24h统计一次菌落数目b 以 稳定菌落 为观察对象 四 鉴定 筛选后必鉴定鉴别培养基 不影响微生物的生存酚红培养基 鉴定分解尿素的细菌 原理 脲酶催化尿素分解成氨 培养基碱性增强 酚红变红 脲酶阳性 1 作样品系列稀释液 2 用适当的稀释液涂布平板 在一定的培养条件下 相同的培养基 温度及培养时间 同种微生物表现出相同而稳定的菌落特征 关注菌落的形态 大小 边缘 突起 颜色 质地等等