湖南省长沙市长郡卫星远程学校高中生物《专题二 课题1 微生物的实验室培养》课件 新人教版选修1.ppt

微生物的实验室培养 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称 一 微生物 微生物 病毒细菌放线菌真菌原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称 一 微生物 1 分类 特点 小简低 微生物 病毒细菌放线菌真菌原生动物 原核生物界 原生生物界 真菌界 病毒界 是一切肉眼看不见或看不清楚的微小生物的总称 1 分类 一 微生物 芽孢 细菌形成的椭圆形的休眠体 芽孢的壁很厚 对干旱 低温 高温等恶劣的环境有很强的抵抗力 芽孢又小又轻 可以随风飘散 当环境适宜 如温度 水分适宜 的时候 芽孢又可以萌发 形成一个细菌 放线菌 1 结构 单细胞原核生物分支状的菌丝 基内菌丝 气生菌丝 2 繁殖 孢子丝 孢子 菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时 就会形成一个肉眼可见的 具有一定形态结构的子细胞群体 叫做菌落 细菌的菌落特征因种而异 菌落 菌落 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时 就会形成一个肉眼可见的 具有一定形态结构的子细胞群体 叫做菌落 菌落是鉴定菌种的重要依据 2 营养及功能 微生物化学元素组成 2 营养及功能 c h o n p s 微生物化学元素组成 c h o n p s 五大营养物质 碳源 氮源 生长因子 水 无机盐 微生物化学元素组成 2 营养及功能 二 培养基 培养基 培养液 是由人工方法配制而成的 专供微生物生长繁殖使用的混合营养基质 1 按物理状态分 固体培养基和液体培养基 半固体培养基 2 按功能分 选择培养基和鉴别培养基 3 按成分分 天然培养基和合成培养基 1 培养基的类型 固体培养基 菌落 液体培养基 表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长 半固体培养基 2 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 2 不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方 3 不管哪种培养基 一般都含有水 碳源 氮源 无机盐等营养物质 另外还需要满足微生物生长对ph 特殊营养物质以及氧气的要求 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成 4 培养基的用途 4 培养基的用途 液体培养基 增殖 工业生产固体培养基 纯化 分离 鉴定 活菌计数 保藏菌种半固体培养基 三 无菌技术 三 无菌技术 1 无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中 所有防止杂菌污染的方法 1 无菌技术的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中 所有防止杂菌污染的方法 成功地培养微生物的关键 三 无菌技术 1 消毒的定义 2 消毒与灭菌的概念及两者的区别 2 灭菌的定义 1 消毒的定义 2 消毒与灭菌的概念及两者的区别 2 灭菌的定义 3 常用的消毒与灭菌的方法 灭菌的方法 灼烧灭菌 灭菌的方法 灭菌的方法 灼烧灭菌 干热灭菌 160 170 下加热1 2h 高压蒸汽灭菌100kpa 121 下维持15 30min 旁栏思考 1 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外 还有什么目的 1 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外 还有什么目的 答 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染 旁栏思考 2 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 如果需要 请选择合适的方法 1 培养细菌用的培养基与培养皿 2 玻棒 试管 烧瓶和吸管 3 实验操作者的双手 2 请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌 如果需要 请选择合适的方法 1 培养细菌用的培养基与培养皿 2 玻棒 试管 烧瓶和吸管 3 实验操作者的双手 答 1 2 需要灭菌 3 需要消毒 微生物实验室培养的基本操作程序 1 器具的灭菌2 培养基的配制3 培养基的灭菌4 倒平板5 微生物接种6 恒温箱中培养7 菌种的保存 四 实验操作 四 实验操作 1 计算 称量2 溶化3 调ph ph为7 64 过滤 这一步可以省去 5 分装 分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上 以免沾污棉塞而引起污染 分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜 6 加塞7 包扎 操作步骤 8 灭菌 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中 塞上棉花塞 包上牛皮纸 再放入高压蒸汽灭菌锅 在压力为100kpa 温度为121 灭菌15 30min 将培养基用旧报纸包裹 放入干热灭菌箱内 在160 170 下灭菌2h 9 倒平板 待培养基冷却到50 左右时 在酒精灯附近倒平板 倒平板操作见课本 2d后观察平板 无杂菌污染才可用来接种 倒平板技术 将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上 右手拿装有培养基的锥形瓶 左手拨出棉塞 1 2 3 4 倒平板技术 右手拿锥形瓶 使瓶口迅速通过火焰 1 2 3 4 倒平板技术 1 2 3 4 倒平板技术 1 2 3 4 等待平板冷却凝固 大约需5 10min 然后 将平板倒过来放置 使皿盖在下 皿底在上 9 倒平板 待培养基冷却到50 左右时 在酒精灯附近倒平板 倒平板操作见课本 2d后观察平板 无杂菌污染才可用来接种 10 无菌检查 将灭菌的培养基放入37 的温室中培养24 48小时 以检查灭菌是否彻底 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 问题讨论 答 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时 就可以进行倒平板了 问题讨论 1 培养基灭菌后 需要冷却到50 左右时 才能用来倒平板 你用什么办法来估计培养基的温度 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 2 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰 答 通过灼烧灭菌 防止瓶口的微生物污染培养基 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 3 平板冷凝后 为什么要将平板倒置 答 平板冷凝后 皿盖上会凝结水珠 凝固后的培养基表面的湿度也比较高 将平板倒置 既可以使培养基表面的水分更好地挥发 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基 造成污染 4 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 为什么 4 在倒平板的过程中 如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位 这个平板还能用来培养微生物吗 为什么 答 空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生 因此最好不要用这个平板培养微生物 二 纯化大肠杆菌 接种方法有 平板划线法和稀释涂布平板法 微生物的接种技术 平板划线的操作方法 一旦划破 会造成划线不均匀 难以达到分离单菌落的目的 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落 菌落会沿着划破处生长 会形成一个条状的菌落 一旦划破 会造成划线不均匀 难以达到分离单菌落的目的 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落 菌落会沿着划破处生长 会形成一个条状的菌落 问题讨论 1 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环 在划线操作结束时 仍然需要灼烧接种环吗 为什么 答 第一步灼烧是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 每次划线前灼烧是为了杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种 使下一次划线时 接种环上的菌种直接来源上次划线的末端 从而通过划线次数的增加 使每次划线时菌种的数目逐渐减少 以便得到菌落 划线结束后灼烧 能及时杀死接种环上残留的菌种 避免细菌污染环境和感染操作者 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 答 以免接种环温度太高 杀死菌种 2 在灼烧接种环之后 为什么要等其冷却后再进行划线 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 答 划线后 线条末端细菌的数目比线条起始处要少 每次从上一次划线的末端开始 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少 最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落 3 在作第二次以及其后的划线操作时 为什么总是从上一次划线的末端开始划线 稀释涂布平板法 1 将分别盛有9ml水的6支试管灭菌 并按101 106的顺序编号 2 用移液管吸取1ml培养的菌液 注入第二支试管中 用手指轻压移液管上的橡皮头 吹吸三次 使菌液与水充分混匀 3 从101倍稀释的试管中吸取1ml稀释液 注入102倍稀释的试管中 重复第2步的操作 依次类推 直到完成最后一支试管的稀释 注意 移液管需要经过灭菌 操作时 试管口和移液管离火焰1 2cm处 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 问题讨论 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求 想一想 第2步应如何进行无菌操作 应从操作的各个细节保证 无菌 例如 酒精灯与培养皿的距离要合适 吸管头不要接触任何其他物体 吸管要在酒精灯火焰周围等等 问题讨论 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 微生物的恒温培养 菌种的保存 1 临时保藏 接种到固体斜面培养基 菌落长成后置于4 冰箱保存 2 长期保存 甘油冷冻管藏法 四 课题成果评价 一 培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温1 2d后无菌落生长 说明培养基的制备是成功的 否则需要重新制备 二 接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色 形状 大小基本一致 并符合大肠杆菌菌落的特点 则说明接种操作是符合要求的 如果培养基上出现了其他菌落 则说明接种过程中 无菌操作还未达到要求 需要分析原因 再次练习 三 是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同 及时观察记录的同学会发现这一点 并能观察到其他一些细微的变化 这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯 例1 有关微生物营养物质的叙述中 正确的 a 是碳源的物质不可能同时是氮源b 凡碳源都提供能量c 除水以外的无机物只提供无机盐d 无机氮源也能提供能量 典例解析 典例解析 d 例1 有关微生物营养物质的叙述中 正确的 a 是碳源的物质不可能同时是氮源b 凡碳源都提供能量c 除水以外的无机物只提供无机盐d