乙肝、HIV、梅毒检测技术2016.9.13.pptx

乙肝 HIV 梅毒实验室检验技术 甘肃省妇幼保健院临床检验中心 赵翠生 综合产前检查服务 检测 孕产妇参加产前检查服务 检测前信息 HBV检测 梅毒检测 HIV检测 全血细胞计数和其它检测 取血样 2 梅毒的实验室检测 3 梅毒 病原体为梅毒螺旋体 属于密螺旋体属 苍白密螺旋体苍白亚种 Treponemapallidumsubspeciespallidum 苍白亚种梅毒苍白螺旋体地方亚种地方性梅毒极细亚种雅司病密螺旋体属品他螺旋体品他病 梅毒血清学试验基本实验室设备 5 筛查时间 6 梅毒的实验室检测方法 显微镜检测法 诊断技术 1 暗视野显微镜检查 2 镀银染色检查血清学检测法 筛查技术 非梅毒螺旋体抗原血清试验 检测非特异性抗体 抗心磷脂抗体 即非特异性抗体 反应素梅毒螺旋体抗原血清试验 检测特异性梅毒螺旋体抗体 梅毒早期诊断的依据之一是病原学检测 即在组织或分泌物中检测到苍白螺旋体 暗视野显微镜镀银染色镜检 梅毒检测技术 8 非梅毒螺旋体抗原血清学试验RPR 快速血浆反应素环状卡片试验 TRUST 甲苯胺红不加热血清试验 VDRL 性病研究实验室试验 梅毒螺旋体抗原血清学试验TPPA 梅毒螺旋体颗粒凝集试验 ELISA 酶联免疫吸附试验 POCT 胶体金技术 快速检测 一站式检测 梅毒检测技术 9 围产期梅毒检测方法特点 用于诊断产检 临产及分娩的孕产妇是否感染梅毒梅毒血清学检测 筛查试验应具有的特点具有较高的灵敏度和特异度操作简单 容易获得 便宜尽可能在 当日 获得结果 10 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体感染可产生非特异性抗体 非梅毒螺旋体抗体 非梅毒螺旋体抗体又称之为反应素 是抗心磷脂等抗原的抗体随菌体和宿主细胞的类脂质抗原量升高除梅毒外 其他医学情况会造成非梅毒螺旋体抗原血清学试验假阳性结果 包括结核 疟疾 妊娠和风湿关节炎 狼疮及硬皮病等自体免疫性疾病 11 非梅毒螺旋体抗原血清学试验的特点 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 快速 简便 便宜敏感性和特异性较高硬下疳后1 2周变为阳性可用于筛查样本评估对治疗的反应鉴别复燃还是再次感染 12 确保非梅毒螺旋体抗原血清学试验质量的关键点 按照标准操作程序 SOPs 进行操作推荐使用评价特性较好的试剂 按照统一的标准报告结果开展实验室质控 QC 和参加室间能力验证 PT 由中国疾病预防控制中心性病中心国家参比实验室提供 13 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 抗体滴度通常与疾病活动度有关治疗后 可能几个月 非梅毒螺旋体抗原血清学试验通常转变为不反应如果用同一种实验 相同试验滴度4倍变化 如从1 16下降到1 4或从1 8上升到1 32 为临床显著变化有些病人 抗体滴度可始终处于较低水平 有时可持续终生 血清固定 注意 病人血清学监测应在同一个实验室使用同一种检测方法 RPR TRUST 进行连续多次检测 RPR和TRUST方法均有效 但检测的滴度结果不能直接进行比较 14 治疗后非梅毒螺旋体抗原血清学试验抗体滴度变化的临床意义 一期梅毒和二期梅毒 成功治疗 抗体滴度应3个月后下降2倍6个月后下降4倍一期梅毒 1年后抗体滴度转阴二期梅毒 2年后抗体滴度转阴晚期梅毒 治疗后抗体滴度缓慢下降50 的病人2年后抗体滴度仍为阳性 15 梅毒螺旋体抗原血清学试验 梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒螺旋体抗原特异性抗体可用于确认非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果 排除其假阳性阳性结果可持续存在 即使治疗后仍可为阳性 梅毒螺旋体抗原血清学试验与疾病的活动度无关 不能用于鉴别现症感染还是既往感染 也不能用于判断疗效 一期梅毒治疗病人中 15 25 可在2 3年后转为血清学阴性 16 妊娠期梅毒检测 所有孕产妇应进行梅毒筛查检测 孕期尽早 如果可能 在孕早期时 以及如果在分娩前 临产时没有筛查检测结果 在分娩时检测筛查检测可应用以下任何一类方法 非梅毒螺旋体抗原血清学试验 滴度 或梅毒螺旋体抗原血清学试验所有筛查检测结果阳性的孕产妇都应用另一类检测方法进行复检确认是否为现症梅毒所有产妇及所生婴儿出院前 产妇梅毒检测结果都应记录在病历中 以确保需要时给予治疗 17 孕产妇梅毒检测流程 阴性反应 阳性反应 阴性反应 阳性反应 HIV感染病人的梅毒血清学试验 一些HIV感染病人 其梅毒血清学试验结果不典型 包括滴度超常高或超常低滴度不断变动如果临床表现提示早期梅毒 而血清学试验结果与此不一致 考虑病灶活检或暗视野显微镜检查 注意 对于大多数HIV感染病人而言 梅毒血清学试验是诊断梅毒感染 随访观察疗效准确 可靠的检测方法 19 梅毒血清学检测结果的解释 包括结核 疟疾 风湿性关节炎或妊娠 20 暴露婴儿的梅毒检测 21 梅毒暴露婴儿先天梅毒检测 母体非梅毒螺旋体和梅毒螺旋体IgG抗体可通过胎盘 所以应谨慎地对婴儿梅毒血清学试验结果进行解释婴儿需要接受预防性治疗还是规范的抗梅毒治疗应根据 母亲确诊梅毒感染母亲治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现 实验室或放射线检查结果母亲及婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较 尽可能在同一个实验室使用相同的试验方法 22 先天梅毒的诊断 先天梅毒的诊断标准 梅毒暴露婴儿具有以下条件之一 任何先天梅毒临床表现暗视野显微镜检梅毒螺旋体阳性 梅毒螺旋体IgM抗体阳性 RPR TRUST检测阳性 滴度比母亲分娩前最近一次滴度高4倍及以上RPR TRUST监测随访中 任何一次滴度不下降或反而上升满18月龄后 TPPA检测阳性 IgM抗体反映近期感染 可帮助鉴别婴儿先天梅毒 但我国尚不能广泛开展 23 梅毒暴露婴儿的评估 梅毒暴露婴儿 婴儿RPR检测婴儿RPR检测不能使用脐带血 因其易被母体血液污染 从而出现假阳性结果检查先天梅毒临床表现 非免疫性水肿 黄疸 肝脾大 鼻炎 皮疹 末端肢体假性麻痹对可疑病灶或体液进行暗视野显微镜检查 24 先天梅毒检测流程 25 梅毒检测小结 早期梅毒诊断可根据在组织或分泌物样本中通过显微检测到苍白螺旋体而诊断应用梅毒血清学试验进行梅毒筛查非梅毒螺旋体抗原血清学试验检测梅毒感染过程中产生的非特异抗体 滴度通常与疾病的活动度有关 因此可用于监测对治疗的反应梅毒螺旋体抗原血清学试验检测对抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体 可用于确认临床诊断或非梅毒螺旋体抗原血清学试验的阳性结果 可反映任何阶段的梅毒暴露先天梅毒的诊断复杂 应根据 母亲梅毒感染状态母亲梅毒治疗情况婴儿梅毒感染的临床表现 实验室或X线检查结果母亲 婴儿非梅毒螺旋体抗原血清学试验滴度水平的比较随访 26 HIV和HBV的实验室检测 HIV和HBV筛查检测 筛查检测用于诊断产检 临产及分娩的孕产妇是否感染HIV和HBVHIV抗体检测乙肝表面抗原 HBsAg 检测筛查检测应具有较高的灵敏度和特异度操作简单 容易获得 便宜尽可能在 当日 获得结果 28 何时使用何种检测 29 HIV试验和检测 30 HIV检测 抗体检测 一个人感染了HIV病毒后 体内将产生特异性抗体对抗HIV病毒 HIV抗体通常在感染后4 6周出现 但也有时也会在感染后3个月才出现从感染HIV病毒到出现特异的HIV抗体的一段时期称为 窗口期 标准的HIV诊断检测是识别HIV抗体 注意 与其他大多数疾病不同 HIV抗体没有保护性作用 31 HIV抗体检测类型 32 HIV检测 病毒核酸检测 这些检测检测HIV感染者血液或血浆中的病毒必须由经过专门培训的实验室人员操作实验室需有资质 并配备专门设备昂贵 不是针对所有人进行的常规检测方法PCR 多聚酶连反应法 检测HIVDNA定性检测血液中是否含有病毒 用于诊断18月龄内婴儿是否感染HIVHIVRNA定量检测病毒载量 用于监测对抗病毒治疗的反应 33 HIV筛查检测结果的含义 HIV筛查检测结果 阴性 受检者没有感染HIV或者受检者已经感染了HIV 但处于窗口期 3个月后再次进行检测HIV筛查检测结果 阳性 病人可能已经感染HIV 但应再次重复检测 另一种方法复检或确诊检测 34 HIV确认试验结果的含义 如果筛查检测结果阳性 两次重复检测中1次或2次检测结果为阳性 需要进行确认试验免疫印迹法 WB 确认试验结果 阳性 病人确认感染HIV阴性 受检者没有感染HIV不确定 结果为 不确定 受检者必须在4周后再次采血 重复前述所有步骤进行检测 35 中国预防艾滋病 梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程 在产前检查服务中开展整合的检测咨询所采用的HIV检测流程 36 产时HIV抗体检测流程 中国预防艾滋病 梅毒和乙肝母婴传播HIV检测流程 37 儿童HIV检测 38 HIV暴露婴儿和儿童的HIV抗体检测 不是所有HIV感染母亲所生儿童都会感染HIV 但是如果对12 18个月以内的婴儿进行HIV抗体检测 所有HIV感染母亲所生婴儿都有可能是HIV检测结果阳性 即使婴儿并没有感染HIV由于母体自身抗体可通过胎盘进入胎儿体内 母体传入的抗体可在婴儿体内持续18个月 所以12 18月龄以内的婴儿不能应用抗体检测方法进行诊断 39 婴儿感染早期诊断 EID HIV病毒检测 DNA PCR HIV病毒检测 DNA PCR 检测细胞内的HIV病毒 能够检测低至1 10拷贝前病毒DNA 以及可在HIV暴露婴儿出生后6周内诊断HIV感染用于HIV暴露婴儿HIV感染早期诊断 EID 40 应用DNA PCR方法进行婴儿感染早期诊断 EID 1 如果可以开展HIVDNA PCR检测 应用干血斑 DBS 在婴儿6周龄时进行PCR检测如果PCR检测结果阳性尽快再次采血再次进行DNA PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性 婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性婴儿出生后3个月再次进行PCR检测 41 应用DNA PCR方法进行婴儿感染早期诊断 EID 2 出生后3个月再次进行HIVDNA PCR检测如果PCR检测结果阳性尽快再次采血再次进行DNA PCR检测如果第二次PCR检测结果阳性 婴儿确定感染HIV如果PCR检测结果阴性 婴儿视为未感染HIV考虑在婴儿满12月龄时进行HIV抗体检测 如有必要 在18月龄时再次进行检测 检测结果阴性的婴儿接受母乳喂养 必须在停止母乳喂养后6周再次进行PCR检测 以确保婴儿没有在母乳喂养期间感染HIV 42 婴儿HIV感染早期诊断流程 43 HIV暴露婴儿 儿童的HIV抗体检测 所有HIV感染母亲所生儿童 在出生后6周或3个月未接受早期感染检测者 应进行HIV抗体检测 检测时间 满12月龄和满18月龄 必要时 见HIV抗体检测流程 出生后3个月 接受早期感染检测者 检测结果为阴性的儿童也应接受HIV抗体检测 满18月龄HIV抗体检测阳性 可确认儿童HIV感染 44 HIV暴露儿童HIV抗体检测流程 45 HIV感染的实验室监测 46 HIV感染的实验室监测 实验室监测主要用于 决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物是否有抗病毒治疗指征 效果监测抗病毒治疗有效吗 毒性监测抗病毒药物是否引起了其他问题 47 CD4 T淋巴细胞是HIV病毒攻击的靶细胞CD4 T淋巴细胞检测用于 决定开始抗病毒治疗还是预防性应用抗病毒药物为判断抗病毒治疗成功或失败提供定量依据对调整抗病毒治疗方案提供指导孕期每3个月及产后4 6周应进行CD4 T淋巴细胞检测急性感染时可适当推迟检测 因为在急性感染期 CD4 T淋巴细胞通常会下降 CD4 T淋巴细胞检测 48 病毒载量测量血浆中的病毒数量病毒载量检测可用于 是抗病毒治疗失败早期 最可靠的标记物监测对抗病毒治疗的反应诊断HIV感染后和孕晚期各进行一次病毒载量检测 病毒载量 RNA PCR 检测 49 HIV感染孕产妇常规实验室监测 1 50 HIV感染孕产妇常规实验室监测 2 51 HBV感染的检测 52 妊娠期HBV感染筛查 所有孕产妇均应在孕期尽早接受HBsAg检测筛查是否感染HBV如果分娩前尚未有检测结果 应在分娩前尽快进行检测如果HBsAg检测阳性 有条件可考虑进行其他HBV标记物检测 注意 暴露婴儿的处置不受母亲其他HBV标记物检测结果的影响 53 乙肝标记物列表 54 HBV暴露婴儿的实验室检测 HBsAg阳性母亲所生婴儿 出生时高效免疫球蛋白应用以及接受乙肝疫苗接种 并在完成全部3剂乙肝疫苗接种后的6个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测 即出生后12个月时 结果解释 如果HBsAg阳性并持续6个月 婴儿慢性感染如果抗Hbs抗体阳性 1000IU ml 婴儿有免疫保护如果HBsAg阴性和抗HBs抗体 1000IU ml 婴儿应再次接受3剂乙肝疫苗接种 55 要点 HIV 使用快速筛查试验诊断HIV感染 筛查检测结果阳性进行确认试验以保证结果的准确性 HIV感染抗病毒治疗应根据 CD4 T淋巴细胞计数检测结果 反映HIV对免疫系统的影响HIV病毒载量检测结果 反映血液中HIV病毒的数量如果有条件 应用PCR方法检测HIV DNA诊断婴儿是否HIV感染儿童满12 18月龄 HIV抗体检测方可确认儿童是否感染 56 要点 HBV 通过筛查HBsAg诊断HBV感染如有条件 筛查HBsAg结果阳性 可进一步检测其他HBV标记物HBsAg阳性母亲所生婴儿 出生时接受乙肝疫苗接种 应在出生后12个月接受HBsAg和抗HBs抗体检测 57 婴儿艾滋病感染早期诊断检测标本采集 运输及保存的要求 临床检验中心 赵翠生 内容 干血斑标本的采集干血斑标本的制作干血斑标本的保存干血斑标本的运输合格和不合格的干血斑注意事项送样单的规范填写 什么是干血斑 DBS 干血斑是直接用滤纸收集一滴全血进行干燥用于血样本的长时间储存DBS是用HIVDNA PCR方法进行婴儿HIV感染早期诊断检测的最佳采血方法HIVDNA和HIV抗体可稳定地保存在干血斑中转运方便 无需冷藏 60 干血斑 DriedBloodSpotDBS 使用Whatman903滤纸片 患者的全血制备末梢血直接用于DBS的制作采集用EDTA抗凝的静脉血混匀滴在滤纸片上制备DBS 采集样本所需要的设备 末梢采血针或静脉采血酒精棉血样本采集卡片 滤纸片可密封的塑料袋湿度指示卡干燥剂 1 2g 袋 采集末梢血DBS 采集部位 足弓 幼儿采血点 采集末梢血DBS 成人或1岁以上儿童手指采血点中指或无名指手掌面 非指尖或侧面 采集末梢血DBS 用70 乙醇或酒精棉消毒采血部位用消过毒的针头小心刺破皮肤 采集末梢血DBS 弃去第一滴末梢血 采集末梢血DBS 将第二滴血直接点在滤纸片中央的圆圈而不是用毛细管转移血液 采集末梢血DBS 大约每孔需要60 80ul全血保证圆圈滴满每个样品应点满一张滤纸片的每个孔 采集抗凝静脉血DBS 静脉血充分与EDTA混合采集后立即制备DB血浆与血细胞分层的全血在制备干血斑前 应轻柔地上下颠倒采血管 避免血细胞破裂 血液混匀后制备 用移液枪加代滤芯枪头移取50 80ul血液枪头对准印圈的中心缓慢将血液滴于滤纸上避免有气泡应滴满一张滤纸片的每个孔 采集抗凝静脉血DBS 制作及干燥DBS 避免触摸或涂抹血斑室温空气中水平干燥至少4个小时 在潮湿气候下至少24小时 避免阳光直晒在干燥过程中不允许加热 叠加或将DBS接触其他物体表面DBS上标记受检者编号 姓名和收集日期 制作及干燥DBS DBS的保存方法 最好一个样本一个包装 多个样本一个包装时 样本间用称量纸隔开放入可密封塑料袋中加2包干燥剂加1片湿度指示卡标记包装中的内容物并密封 DBS的保存方法 避免阳关暴晒和加热完整包装的DBS样品可在室温下避光储存2周2周后的DBS样品必须存放在 20 或以下 NBS的包装及运输 第一层包装好的DBS放入结实的纸袋中放入对应的送样单将上述两样放入邮寄信封中并密封 NBS的包装及运输 包装运输时避免折压滤纸片干血斑样品如果DBS样品收集后存放在室温并在2周内运送 可常温下用特快专递运送已经保存在 20 或以下的样品 应在冷冻条件下运送 血液充分吸收透过滤纸 填满印圈 不要在一个圈上重复采血 避免触摸或涂抹血斑 合格的DBS 合格的DBS 原因 1 血液未渗透滤纸或未填满圆圈前将滤纸移走用毛细管转移血液在取样前或后用戴手套或不戴手套的手触摸滤纸 滤纸上粘有洗手液 原因 毛细管或其他锐器移取血液 不合格DBS 样本在干燥小于4小时前即寄出 吸附血液过多双面贴 用力挤压针刺点周围采血前或后滤纸面沾染洗手液 滑石粉 酒精 化学试剂 杀毒剂 水等将血斑直接加热 在针刺之前未将采血处酒精擦干4 用毛细管转移血液滤纸沾染酒精 洗手液5 过分挤压采血处不正确地干燥滤纸 同一采血圈多次滴血双面贴 不合格DBS 注意事项 仅在滤纸的一面采血在一个印圈上不可追加滴血采末梢血时不要将滤纸片压迫针刺部位采血2个充分吸附的血液的印圈要比5个不完全吸附的印圈要好 早期诊断检测标本送样单 此处由标本采集机构填写标本采集机构名称 省 直辖市 自治区 地 市 州 县 市 区 婴儿编号 同个案登记卡编号 婴儿母亲姓名 婴儿姓名 性别 出生日期 年 月 日采样情况 第次采血采血时月龄采血日期 年 月 采血人 标本制备人 送样人联系电话 送样人签字标本送出日期 指标本送至辖区妇幼保健机构的日期 年 月 日 送样单的填写 标本采集机构 婴儿编号共计17位 个案登记卡编号 A B C D E A 地区行政编码 共6位B 单位机构代码 共3位C 年份 共4位D 个人编码 共3位E 婴儿单双胎 1位 单胎为1 双胎为2 早期诊断检测标本送样单 此处由送检妇幼保健机构填写标本送检机构名称 省 直辖市 自治区 地 市 州 县