安图TORCH抗体亲和力检测.ppt

TORCH IgG抗体亲和力检测 郑州安图生物工程股份有限公司 提纲 抗体亲和力定义TORCH抗体亲和力检测的意义TORCH抗体亲和力检测的现状安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒 抗体亲和力是整个抗体分子与抗原表位之间结合强度 即抗体的结合部位与相应抗原决定簇之间的非共价引力与斥力之和 抗体亲和力 Avidity 的定义 抗体亲和力成熟理论 初次感染产生的抗体为低亲和力抗体 随着时间的推移 体内抗体逐渐成熟为高亲和力的抗体 一般需要3 6个月时间 模板学说 Templatetheory 克隆选择学说 Clonalselectiontheory 模板学说 Templatetheory 免疫系统在按照抗原 模版 来制造更高亲和力的抗体 体细胞高频突变 原发感染 克隆选择学说 Clonalselectiontheory 免疫系统对高亲和力抗体的筛选过程 TORCH抗体亲和力检测的意义 胎儿出生缺陷的风险与原发感染 复发感染 感染发生的时间 孕周密切相关判断原发感染或复发感染判断原发感染发生的时间TORCH规范化检测流程的重要环节 对于巨细胞病毒IgM抗体阳性的样本 需要结合IgG抗体亲和力的结果进行分析 IgM抗体阳性 同时IgG抗体低亲和力 有较高风险 美国帕洛艾尔托医疗基金会弓形虫确认实验室 将弓形虫IgG亲和力抗体检测列为确认方法之一 用于排除假阳性及非急性感染 对IgM抗体阳性或可疑的样本 进行IgG抗体亲和力检测很有价值 如果IgG抗体为低亲和力 再进行羊水穿刺PCR检测是合适的选择 对生殖器疱疹患者的单纯疱疹病毒IgG抗体亲和力检测可以区分原发和复发感染 案例分析1 MunroSC etal JClinmicrobiol 2005 43 4713 4718 案例分析2 MunroSC etal JClinmicrobiol 2005 43 4713 4718 TORCH抗体亲和力检测现状 试剂盒检测原理 解离剂法和抗原中和法 解离剂法是主流方法 试剂盒检测方法 酶联免疫法 自动化化学发光法 酶联免疫法较多 国内 对TORCH亲和力研究较少 仅有少量的文献报道了IgG亲和力检测的临床意义 在临床上还没有得以真正运用 国外 对TORCHIgG亲和力强弱与感染时间的关系做了许多研究工作 雅培 索林和梅里埃等很多厂家的抗体亲和力试剂盒都获得了FDA或CE认证 用于TORCH感染的辅助诊断 巨细胞病毒和弓形虫抗体亲和力检测应用普遍 各厂家试剂盒的检测结果存在差异 抗体亲和力检测方法 通过解离剂将低亲和力抗体解离掉 通过中和抗原将高亲和力抗体中和掉 国内获得批准文号的产品及方法 2012年以后批准上市 国外批准上市的主要厂家及方法 巨细胞病毒亲和力试剂盒检测结果比较 Radim Euroimmun与临床的符合率优于其他厂家 安图产品研发以Radim为参比试剂盒 弓形虫亲和力试剂盒检测结果比较 各厂家检测结果差异不大低亲和力结果可能不是急性感染高亲和力结果可以排除急性感染 第一个国产TORCH五项抗体亲和力检测试剂盒 2013年获得批准文号 国家十二五规划863课题项目之一产品设计兼顾IgG检测灵敏度和高值样本OD值不超限产品原理 解离剂法产品方法 ELISA样本稀释 1 100孔外稀释反应模式 30分钟 10分钟 30分钟 10分钟加样量 稀释后样本 对照缓冲液 解离缓冲液 酶结合物均100ul 孔 波长设置 450 620nm双波长读数 如果样本OD值 3 0 用405 620nm双波长读数 结果计算 亲和力指数 解离缓冲液孔OD值 对照缓冲液孔OD值 100 安图TORCH抗体亲和力检测试剂盒 加样模式 BIOMEX血清转化盘48份样本的亲和力与感染时间的关系 BIOMEX48份血清转化盘的感染时间小于80天 其中33份样本为IgG阳性 均为低亲和力 灵敏度为100 RV血清转化盘 图1 安图试剂盒CMV IgG抗体亲和力水平随感染时间的变化 图2 AbbottATCHIT试剂盒CMV IgG抗体亲和力水平随感染时间的变化 CMV血