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实验诊断学实验1 1 实验室规章制度 1 遵守纪律 穿白大褂 不准吃东西2 做好预习 严格按操作规程进行操作3 如实记录并分析实验中出现的现象以及问题4 认真分析实验结果5 保持室内安静 清洁 结束后搞好卫生6 认真做好实验报告 作为实验成绩7 认真做好个人防护 注意实验安全 2 内容 白细胞计数 红细胞计数 血红蛋白测定 目前实验室血细胞测定方法实验报告 3 微量吸管 4 部位指尖 耳垂 足根等用血量少 0 5ml 适用范围窄 细胞计数 Hb 结果不够稳定 不能重复一般较静脉血高影响因素多 部位 气候 采血技术 毛细血管采血法 5 器材 一次性采血针 微量吸管 10ul 20ul 酒精 棉球操作 1 准备试剂 器材2 选择采血部位消毒3 针刺 迅速 深度2 3mm 4 擦去第一滴血5 吸取一定量血液6 擦去管外余血7 加入试剂底部中 用上清液冲洗2 3次 毛细血管采血法 6 毛细血管采血法 注意事项 A 对严重烧伤患者 可选择皮肤完整处采血B 严格实行一人一针制 避免交叉感染C 注意穿刺的深度 切忌用力挤压 以免混入组织液 影响检验结果D 微量吸管应校正后使用 7 红细胞计数 显微镜法 试剂 可用生理盐水 操作 取一小试管 加红细胞稀释液1 99ml 用微量吸管采血10ul加入试管底部 用上清液吸洗2 3次 摇匀 充池后静置2 3分钟待红细胞下沉后用高倍镜计数5个中方格内的红细胞数 计算 5个中方格内红细胞数 5 10 106 200 红细胞数 L 注意事项 红细胞在计数池内分布不均匀时应重新冲池 8 白细胞计数 显微镜法 试剂 冰醋酸2 0ml 蒸馏水98ml 10g L亚甲蓝溶液3滴 操作 取一小试管 加白细胞稀释液0 38ml 用微量吸管采血20ul加入试管底部 用上清液吸洗2 3次 摇匀 充池后静置2 3分钟待白细胞下沉后用低倍镜计数4个大方格内的白细胞数 计算 白细胞数 L 4个大方格内的白细胞数 4 10 20 106 9 计数板 计数板 10 血球计数板的结构 计数池深度 0 100mm计数池大格 1mm 1mm白细胞计数中方格 1 16mm2红细胞计数中方格 1 25mm2载玻片尺寸 24 20 0 6 mm 11 12 13 参考范围 成人 4 10 109 L 4000 10000 ul 儿童 5 12 109 L 5000 12000 ul 新生儿 15 20 109 L 15000 20000 ul 临床意义 生物变异 人体体液物质围绕体内环境稳定调节点的自然波动过程 包括日 月 季节的生物变异 WBC是10 9 增高 生理性 新生儿 剧烈运动 妊娠晚期 极度恐惧与疼痛 病理性 大部分细菌性感染 尿毒症 烧伤 手术后 传染性单核细胞增多症 白血病等 减少 病毒性感染 伤寒 副伤害 疟疾 再生障碍性贫血 放疗 化疗 非白血性白血病 注意事项 1 一些贫血患者血液中出现有核红细胞会影响白细胞计数 应校正排除 2 加全血时 应檫去吸管外周血液 先吹入试管底部 再吸上清液回洗几次 3 滴入计数室内的混悬液 液量要适当 不得外溢或混有气泡 计数室内的细胞分布均匀 4 计数室边线的白细胞 可数上不数下 数左不数右 避免重复或漏计 14 15 血红蛋白测定 手工比色法 试剂 血红蛋白稀释液 文 齐氏液 原理 血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白 再与氰结合成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白 在540nm波长和液层厚度条件下 具有一定的吸光系数 根据吸光度 即可求得血红蛋白浓度 操作 取一试管 加血红蛋白稀释液5 0ml 用微量吸管采血20ul加入试管 用上清液吸洗2 3次 摇匀后静置5 10分钟待比色 计算 血红蛋白g L 吸光度 44 64458 251 吸光度 367 7 16 参考范围 RBC男 4 0 5 5 1012 L女 3 5 5 0 1012 LHB男 120 160g L女 110 150g L 红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义生理性增高 新生儿 高原居民 缺氧的应急反应等 病理性增高 真性红细胞增多症 心脏病 脱水等 减少 临床各类贫血 白血病 手术后 产后 月经期等 17 18 Coulter系列血细胞分析仪 19 Sysmex系列血细胞分析仪 20 Abbott系列血细胞分析仪 21 检测项目 二十多个参数 白细胞中性粒细胞百分数淋巴细胞百分数单核细胞百分数嗜酸细胞百分数嗜碱细胞百分数红细胞血红蛋白平均红细胞体积平均血小板体积血小板网织红细胞百分数 红细胞压积平均血红蛋白量平均血红蛋白浓度中性粒细胞绝对数淋巴细胞绝对数单核细胞绝对数嗜酸细胞绝对数嗜碱细胞绝对数红细胞分布宽度血小板压积 22 库尔特原理 负压 血细胞悬液 外电极 内电极 小孔 小孔管 小孔电流 样品杯 小孔近观 细胞悬液在负压的驱使下恒定流经小孔 不良导体血细胞通过小孔时引发瞬间电阻变化 将电阻变化转化为脉冲记录 脉冲的数量表示细胞数量 脉冲的大小表示细胞大小 库尔特原理三要素 小孔 负压 电极检测 细胞大小和数量 当一个不良导体颗粒 例如血细胞 通过两个电极之间时 导致电路的电阻抗发生变化 23 检测区域 白细胞 白细胞通过小孔 库尔特原理 示波镜 24 三次计数 延长计数 三次计数 统计补偿 监控计数过程的稳定性 延长计数 针对低浓度的标本 25 HGB测定 氰化高铁血红蛋白法 库尔特的HGB测定方法 改良的氰化高铁血红蛋白试剂 溶血剂令