《边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳》导学案2-1.doc

边做边学 血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳导学案课前自主导学知识1离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质1.细胞中蛋白质的释放在提取蛋白质时，可以采用研磨与超声波结合的方法将生物组织或细胞完全破碎，使蛋白质从细胞中释放出来，并使其溶解在适当的抽提液中。2抽提液的选择要根据蛋白质的特性而定，一般酸性蛋白质用偏碱性溶液抽提，碱性蛋白质用偏酸性溶液抽提，脂蛋白等则可用有机溶剂抽提。3离心沉降法分离蛋白质通过控制离心速度，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层，从而达到分离出不同种类蛋白质的目的。4薄膜透析法分离蛋白质利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与其他小分子化合物分离开的纯化蛋白质的方法。知识2凝胶色谱法分离蛋白质1.凝胶色谱法的概念是根据蛋白质分子的大小，对其进行有效分离的方法。2凝胶(1)组成：由胶体溶液凝结而成的固体物质。(2)成分：由葡聚糖、琼脂糖等多糖类化合物。(3)结构：小球体内部具有很细微的多孔网状结构。3分离蛋白质的原理大分子蛋白质不能进入凝胶内部而沿凝胶颗粒间的空隙移动，洗脱路程较短，移动速度较快，最先流出柱外。小分子蛋白质可以进入凝胶颗粒内部的多孔网状结构，洗脱路程较长，移动速度缓慢，以致较长时间流出柱外。知识3蒸馏1.蒸馏的概念将液体加热至沸腾，使液体变为蒸气，然后使蒸气冷却再凝结为液体，这两个过程联合操作称为蒸馏。2蒸馏分离物质的原理蒸馏可以将易挥发和不易挥发的物质分离开来，也可将液体混合物中沸点不同的物质分离开来。知识4血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验步骤操作方法平悬薄膜将点样端平贴在电泳槽负极支架的“滤纸桥”上，有记号的一面朝上，另一端平贴于正极，呈绷直状态实施电泳盖上电泳槽盖，电泳6090 min染色取下薄膜，放入染色液中浸泡510 min漂洗取出薄膜，在漂洗液中漂洗数次，直至蛋白质区底色脱净为止脱色用滤纸压平并吸干薄膜后，再浸入透明液中约5 min，取出后平贴于玻璃板上，待完全干燥后便成透明膜图谱，可长期保存知识5提取橘皮中的芳香油1.橘皮芳香油具有诱人的橘香味，其主要成分是柠檬烯。2水蒸气蒸馏法(1)适用范围：适用于能随水蒸气蒸馏而不被破坏的物质成分的提取。(2)操作步骤将橘皮切碎与适量的水放入蒸馏瓶点燃酒精灯，实施蒸馏用锥形瓶收集液体用分液漏斗分离芳香油3芳香油的提取方法提取植物芳香油一般根据植物原料的特点确定具体的提取方法。(1)对玫瑰油、薄荷油等是挥发性较强，能随水蒸气蒸发的植物芳香油通常利用蒸馏法提取。(2)柠檬油、甜橙油易受机械压力作用而直接榨出，一般采用压榨法制得。(3)如橘皮芳香油既可采用蒸馏法提取，也可采用压榨法制得。(4)如制取茉莉浸膏还可采用萃取法制取。正误判断1离心沉降法和薄膜透析法分离蛋白质的原理是一样的。()【提示】不一样，前者是离心沉降，后者是根据半透膜的透性。2凝胶色谱法是根据蛋白质分子的大小而对其进行有效分离的方法。()3醋酸纤维薄膜电泳是采用滤纸为支持物的电泳方法。()【提示】采用醋酸纤维薄膜为支持物。4振荡处理后，芳香油位于分液漏斗中液体的下部。()【提示】上部。课堂互动探究探究1蛋白质分子在凝胶中的运动情况分析【问题导思】凝胶色谱法分离蛋白质的原理是什么？蛋白质分子的大小不同在凝胶中的运动情况有什么不同？相对分子质量大相对分子质量小直径大小大于凝胶颗粒空隙直径小于凝胶颗粒空隙直径运动方式垂直向下运动不规则的扩散运动运动速度较快较慢运动路程较短较长洗脱次序先从凝胶柱中洗脱出来后从凝胶柱中洗脱出来名师点拨凝胶色谱的原理是相对分子质量小的蛋白质进入凝胶孔道，路程长，移动速度慢；而相对分子质量大的蛋白质在凝胶外部移动，路程短，移动快，这种现象又称分子筛效应。例1用凝胶色谱法分离蛋白质的实验中，相对分子质量不同的两种蛋白质在凝胶中的行进过程，可表示为图中哪一个()【思维导图】【精讲精析】如题图所示，相对分子质量较大的蛋白质容易通过凝胶间隙，先被洗脱出来；相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部，后被洗脱出来。答案为B。【答案】B变式训练1凝胶色谱法分离蛋白质的原理依据是()A根据蛋白质分子与凝胶的亲和力的大小B根据蛋白质相对分子质量的大小C根据蛋白所带电荷的多少D根据蛋白质溶解度的大小【解析】凝胶色谱法是根据蛋白质相对分子质量的大小分离蛋白质的一种方法。【答案】B探究2醋酸纤维薄膜电泳【问题导思】醋酸纤维薄膜电泳的特点是什么？如何消除电荷对蛋白质迁移速度的影响？1原理带电粒子在电场中向与其带电性相反的电极泳动的现象称为电泳。2. 过程配制试剂架滤纸桥浸泡薄膜细心点样平悬薄膜实施电泳染色漂洗脱色。3特点(1)电泳后区带界限清晰。(2)通电时间较短(6090 min)。(3)醋酸纤维薄膜对各种蛋白质都几乎完全不吸附，因此无拖尾现象。(4)醋酸纤维薄膜对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。名师点拨血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳中的注意事项1保持醋酸纤维薄膜的清洁，避免用手直接接触薄膜。2点样量要适量，2次左右即可，盖玻片的边缘应避免出现明显液滴。点样要尽量在一条直线上。3电泳时间不低于1 h。4点样处不要搭在滤纸上，以免血清渗入滤纸。5醋酸纤维薄膜应绷直，避免电泳槽隔离板的干扰。6不可同时接触正负极，防止触电。例2下图是人血清蛋白在以醋酸纤维薄膜为支持物，pH为8.6的巴比妥缓冲液电泳分离结果示意图，由此图不能得出的结论是()A在pH为8.6的巴比妥缓冲液中、2、1和清蛋白都带负电荷B在pH为8.6的巴比妥缓冲液中电泳时，、2、1和清蛋白迁移速率不同C球蛋白的相对分子质量一定比球蛋白的相对分子质量大D在pH为8.6的巴比妥缓冲液中球蛋白迁移速率最慢，清蛋白迁移速率最快【审题导析】电泳利用了分离样品中各种分子带电性质不同以及分子本身的大小、形状不同，使带电分子产生不同的迁移速率，从而实现样品中各种分子的分离。【精讲精析】带电粒子在电场中迁移的速率是带电粒子带电性质、带电量、粒子大小、粒子形状共同作用的结果。【答案】C变式训练2下列带电颗粒泳动速度最快的是()A直径大、球形、净电荷多B直径小、球形、净电荷多C直径大、方形、净电荷少D直径小、方形、净电荷多【解析】一般来说，带电颗粒直径越小，越接近于球形，所带净电荷越多，则在电场中的泳动速度越快；反之，则越慢。【答案】B探究3植物芳香油的提取【问题导思】植物芳香油的提取方法主要有哪几种？每种提取方法的原理、适用范围有什么不同？比较方法优点局限性实验原理适用范围压榨法生产成本低，易保持原料原来的结构和功能分离较为困难，出油率相对较低通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取萃取法产出率高，易分离使用有机溶剂处理不当会影响提取物的质量使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发溶剂后就可获得芳香油适用范围广，要求原料的颗粒要尽可能细小，能充分浸泡在有机溶剂中名师点拨1水蒸气蒸馏法有水中蒸馏、水上蒸馏和水气蒸馏三种方法，应根据不同的提取原料选择不同的蒸馏方法。2压榨法必须在常温条件下进行，否则会影响产物产量和质量。3萃取法就是根据相似相溶原理，根据不同物质的不同沸点来蒸发或分液。例3在植物有效成分的提取过程中，常用萃取法、蒸馏法和压榨法，下列关于这三种方法叙述错误的是()A蒸馏法的实验原理是利用水将芳香油溶解，然后把水蒸发掉，剩余部分即芳香油B压榨法的实验原理是通过机械加压，压榨出原料中的芳香油C萃取法的实验原理是使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉有机溶剂后就可以获得芳香油D蒸馏法适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油【思维导图】植物有效成分的提取方法关键是明确提取方法的原理【精讲精析】蒸馏法是利用水蒸气将挥发性较强的芳香油携带出来，适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油。压榨法通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油，适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取。萃取法使芳香油溶解在有机溶剂中，蒸发掉溶剂后就可获得芳香油，适用范围比较广。【答案】A变式训练3在蒸馏过程中，要提高产品质量，应该采取的措施是()A提高蒸馏温度，延长蒸馏时间B提高蒸馏温度，缩短蒸馏时间C降低蒸馏温度，缩短蒸馏时间D严控蒸馏温度，延长蒸馏时间【解析】用蒸馏法分离植物有效成分时，温度会影响其性质，如果温度过高则破坏其结构，温度过低则分离不出其有效成分。如果在一定温度范围内延长蒸馏时间，就可以得到较多的植物有效成分。【答案】D本 课 知 识