SOP-0014洁净室浮游菌监测规程-已改.doc

文件编号：SOP-QC-0014-00 页码：第 5 页 共 5 页洁净室浮游菌监测规程广西北部湾制药股份有限公司页码：第 1 页 共 5 页文件编号：SOP-QC-0014-00洁净室浮游菌检测规程部门：质量部文件类型： 工作标准/操作标准版本号：00 替代：第0次起草：审核：批准： 日期： 年 月 日日期： 年 月 日日期： 年 月 日颁发部门：质量部生效日期： 年 月 日分发部门： 洁净室浮游菌监测规程一、目的：建立一个洁净室浮游菌监测规程。 二、范围：洁净室三、职责：微生物质检员、质量保证部负责人。 四、依据：药品生产质量管理规范（2010年修订）及2015版药典 五、内容：1 测试方法本测试方法为计数浓度法，即通过收集悬浮在空气中的生物性粒子于专门的培养基（选择能证实其能够支持微生物生长的培养基），经若干时间和适宜的生长条件让其繁殖到可见的菌落计数，以判定该洁净室的微生物浓度。2 测试仪器、辅助设备浮游菌采样器、培养皿（选用与仪器相适应的培养皿）、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。3 培养条件采用大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）时，在3035培养箱中培养，时间3天；采用沙氏培养基（SDA）时，在2025培养箱中培养，时间7天。4 测试状态及测试时间4.1 静态和动态两种状态均可进行测试，静态测试时，室内测试人员不得多于2人。4.2 在静态a测试时，单向流洁净室（区），测试在净化空调系统正常运行时间不少于10分钟后开始；非单向流洁净室（区），测试在净化空调系统正常运行不少于30分钟后开始。在静态b测试时，单向流洁净室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过10分钟自净后开始；非单向流洁净室（区），测试在生产操作人员撤离现场并经过20分钟自净后开始。5 采样点的确定5.1 最少采样点数目见表1，每次最小采样量见表2。表1 最少采样点数目面积m2洁净度级别A级B级C级D级1023222102044222040882240100161642表2 最小采样量洁净度级别采样量（L/次）A级1000B级500C级500D级1005.2 采样点位置布置宜力求均匀，避免采样点在局部区域过于稀疏，采样点按照洁净区环境监控管理规程附件车间洁净度监测采样点布局图的要求布置，每个采样点一般采样一次。5.3 工作区采样点位置离地0.8m1.5m左右（略高于工作面），送风口测点位置离开送风面30cm左右，可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。6 测试准备6.1 采样器在进入被测区域前先清洁表面，然后用75%酒精消毒一遍或存放于被测区内，与被测试区域一起消毒（用于A级洁净室的采样器必须预先放在被测房间内）。6.2 A/B级区采用一次性培养皿，其它区域按无菌操作要求，在中检室洁净工作台上提前制备培养备用（将灭菌后的培养基用水浴溶解，冷却至约50-60，90mm培养皿每个倾注约20ml培养基，150mm培每个倾注约30ml培养基），培养皿加盖后在室温下放至凝固。自制好的培养皿在洁净室内存放不超过48小时，28保存的培养皿一般不超过1周，一次性培养皿在标注的有效期内使用，过期不得使用。6.3 A/B级区使用的培养皿在区域消毒前一次性传入，随环境一起消毒，在消毒液取用间架子上暂存，在有效期内使用。若需临时传入，则必须在前一天臭氧消毒前通过C级与B级传递窗传入B级区进行臭氧消毒，第二天使用。传入前表面也必须用75%酒精擦拭。其它区域用培养皿按物品传入要求当天传入使用。6.4 采样前，先用75%酒精清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面（FSC-IV便携式浮游微生物采样器用酒精清洗采样头）。6.5 测试具体操作见“FSC-IV便携式浮游微生物采样器标准操作规程”6.6 采样结束后，盖上培养皿盖子，在培养皿上标注所有信息（包括产品批号，放置位置等），将培养皿用适宜的方式捆扎，倒置于3035恒温培养箱中培养，培养时间不少于2天。6.7 培养结束后逐个检查培养皿，用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记，然后用510倍放大镜检查，有否遗漏。若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。7 测试记录应包含以下内容7.1 被测试区域名称、测试日期、测试依据、测试者姓名、测试仪器及测试方法的描述，测试时所采用的状态和室内测试人员数，采样点数目，测试次数、采样流量，测试结果（包括所有统计计算资料）等。7.2 若为动态测试，还应记录现场操作人员数量，现场设备运转情况等。8 结果计算8.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。8.2 每个测点的浮游菌平均浓度计算按下式进行9 结果评定9.1 每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。9.2 在静态测试时，若某测点的浮游菌平均菌浓度超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。9.3 若有超过规定者，必须及时与生产部门联系，对该区域进行消毒或其它处理，然后重新测试至合格。10 日常监控10.1 浮游菌日常监控设纠偏限度和警戒限度（限度范围及取样频次见洁净室监控管理规程），以保证洁净室（区）的微生物浓度受到控制，定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并作倾向分析。静态和动态的监控都可以采用该方法。10.2 对于浮游菌的取样频次，如果出现下列情况应考虑修改，在评估以下情况后，也应确定其他项目的检测频次连续超过纠偏限度和警戒限度；停工时间比预计延长；关键区域内发现有污染存在；在生产期间，空气净化系统进行任何重大的维修；日常操作记录反映出倾向性的数据；消毒规程的改变；引起生物污染的事故等；当生产设备有重大维修或增加设备时；当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时。11 注意事项11.1 FSC-IV便携式浮游微生物采样器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5分钟，检查流量并根据采样量调整设定采样时间。11.2 单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向，非单向流洁净室（区），采样口向上。11.3 测试时必须穿着与被测区域洁净度级别要求相适应并经高压灭菌后的无菌服。11.4 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。11.5 采样结束，需用75%酒精喷射采样器罩子的内壁和转盘（FSC-IV便携式浮游微生物采样器喷射采样头和保护盖）。11.6 应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。11.7 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染，可每批选定3只培养皿作为对照培养；培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱中培养，结果应无菌落生长。11.8 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。11.9 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。11.10