苯甲酸钠的急性毒性实验.doc

防腐剂苯甲酸钠的急性毒性试验研究摘要: 本研究采用小鼠急性经口毒性试验方法对食品防腐剂苯甲酸钠进行了食品安全毒理学检测，结果显示： 1、小鼠急性经口毒性试验：苯甲酸钠对小鼠经口的LD_(50)为2512mgkg。结论：根据急性毒性分级标准，苯甲酸钠毒性为3级，属于低毒物质。中毒症状出现的时间与灌胃剂量存在直接线性关系：剂量越大，死亡就越快，死亡率就越高.。关键字：苯甲酸钠 急性毒性引言：1、 苯甲酸钠的用途:主要用作食品防腐剂，汽水、果汁等所有的饮料和绝大部分的食品如蛋糕、果脯、肉松、肉干等都使用没有苯甲酸钠的话，食品中微生物很快生长繁。也用于医药工业和植物遗传研究，也用作染料中间体、杀菌剂，也可作为饲料的防腐剂、医药工业的杀菌剂、染料工业的媒染剂、塑料工业的增塑剂，也用作香料等有机合成的中间体。2、急性毒性实验：急性毒性试验是指一次或24小时每多次染毒的试验，是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，以提供受试物质的急性毒性资料，确定毒作用方式、中毒反应，并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。实验动物染毒方法之一：经口染毒其接触目的是研究外来化合物能否经胃肠道吸收及求出经口接触的致死剂量(LD50)等。 灌胃是将液态受试化合物或固态、气态化合物溶于某种溶剂中，配制成一定浓度，装入注射器等定量容器，经过导管注入胃内。在每一试验系列中，同物种实验动物灌胃体积最好一致，即以单位体重计算所给予的毫升数应一致，即ml/kg或ml/g计。这是因为成年实验动物的胃容量与体重之间有一定的比例。按单位体重计算灌胃液的体积，受试化合物的吸收速度相对较为稳定。小鼠一次灌胃体积在0.21.0ml/只。二、实验材料1、 实验试剂（1）苯甲酸钠溶液150mgml。（2）苦味酸溶液（3）标准动物饲料2、 主要仪器：（1）电子天平 （2）灌胃器3、实验动物动物昆明种小白鼠,由青岛市动物实验研究中心提供，室温(242),相对湿度55%10%,自由饮水、摄食。三、小鼠经口急性毒性试验试验方法1、预实验（1）、将试验小鼠禁食、禁水12小时，取20只昆明种小鼠, 雌雄各半,体重1822 g,随机分5个剂量组,每组4只,分别灌胃，观察7 d,记录动物死亡数和中毒症状,逐步探索出得最大耐受质量浓度a(LD0)和最小绝对致死质量浓度b(LD100)分别约为1800mgkg和3400mgkg。2、急性毒性重点观察的中毒症状器官系统观察及检验项目中毒后反应中枢神经系统功能及躯体运动 行为与动作对刺激反应肌肉张力体位、叫声、活动异常，不安或卧倒。振颤、运动失调、麻痹、惊觉， 易兴奋，感觉迟钝或过敏。松弛或紧张自主神经系统瞳孔放大或缩小腺体分泌垂涎，流泪，出汗呼吸系统鼻呼吸表现鼻孔溢出液体呼吸徐缓或过速，困难或衰竭3、急性毒性试验:选50只1822 g小鼠,随机分5组,每组10只，雌雄各半, 用改良Karber法,确定组间剂量比值r log1(logbloga/n1)。将苯甲酸钠1次经口给小鼠灌服,连续观察7 d,记录中毒症状和病理变化,计算出LD50。化合物经口急性毒性指标毒性级别小鼠一次经口LD50(mgkg)大约相当于体重70kg人的致死剂量6级，极毒1150001050g四、 实验结果与分析1、 中毒症状主要表现（1）给药剂量较小的小鼠表现为：活动减少，趴卧不动，运步失调，对外界反映降低。呼吸减慢，采食量下降或不采食，体重减轻；未死亡的小鼠，给药2 d后恢复正常，继续观察7 d未发现异常，采食、活动恢复正常。（2）给药剂量较大的小鼠表现为：精神萎靡，呼吸急促，腹式呼吸，反射减少，反应迟钝，运动减少，步履蹒跚，肌颤，卧倒，蜷缩，不饮食，口鼻耳尾青紫，死前抽搐，呼吸困难，尿失禁。给药后0.514小时死亡。2、 小鼠急性毒性试验各组剂量及实验结果汇总表。组别剂量mgkg动物数只死亡数只死亡率P存活率 q118001010.10.9221001030.30.7324701050.50.5428901070.70.353380101010.03、 半数致死量LD50的计算(1)LgLD50=Xmi(p0.5)式中：Xm：最大剂量组剂量对数值 i：相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数(相邻两组对数剂量的差值) 即：Xm=lg3380=3.529 i=lg1.17=0.068 p=2.6代入公式得LgLD50=3.4则：LD50=2512 mgkg(2) Lg LD50的标准误差SLgLD50=0.016 (3) LD50的95%可信限 lg1(LD501.96SLgLD50)= 23392698 mgkg所以 LD50的95可信限为23392698 mgkg。五、讨论1、苯甲酸钠溶液灌胃小鼠对小白鼠的半数致死量为2512mgkg。95可信限为2339-2698 mgkg, 试验过程中小鼠出现少动、运步失调，呼吸减慢等中毒表现，也说明苯甲酸钠具有一定的毒性，应引起食品生产过程中防腐剂苯甲酸钠应用中的注意。 2、实验动物对试验的反应大致符合常态分布，有一半组的死亡率在050%之间，而另一半组的在50100%之间，而且还包括了死亡率为0和100%的试验组，再加上各组动物数目相等，此试验完全符合改良寇氏法的时间设计原则。通过本次实验可以看出，中毒症状出现的时间与灌胃剂量存在直接线性关系：剂量越大，死亡就越快，死亡率就越高。但由于试验过程中存在人为的操作误差，造成试验结果存在一定误差。本试验为急性毒性试验，急性中毒指机体在短时间内，一次或多次摄入较大剂量的毒物而引起的，通常症状严重，动物迅速死亡。因此，药品的安全试验及安全性的毒理学评价是非常重要。六、结论1、苯甲酸钠溶液灌胃小鼠对小白鼠的半数致死量为2512mgkg。95可信限为2339-2698 mgkg,所以根据急性毒性分级标准，苯甲酸钠毒性为3级，属于低毒物质。2、中毒症状出现的时间与灌胃剂量存在直接线性关系：剂量越大，死亡就越快，死亡率就越高。七、 参考文献：1、现代毒理学概论 主编：顾祖维 化学工业出版社2、毒理学原理和方法 主编：金泰肄 复旦大学出版