碱性果胶酶制剂.docx

lCS 67 18020备案号：41608201 3q日分类号；X69中华人民 共禾口 国轻工行业标准QBT 44822013碱性果胶酶制剂Alkaline pectinase preparations201 30722发布201312-01实施中华人民共和国工业和信息化部发布QBT 44822013日lJ舌本标准按照GBT 11-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会(SACTC64)归口。煮塑准起草单位：青岛蔚蓝生物集团有限公司、大连工业大学、中国科学院过程工程研究所、中国生物芨酵产业协会。本标准主要起草人：杜军、李晓燕、陈亮珍、李宪臻、陈洪章、刘捷、周英俊、王岚。QBT44822013碱性果胶酶制剂1范围本标准规定了碱性果胶酶制剂的术语和定义、要求、试验方法、检验规则及标志、包装、运输和贮存。本标准适用于微生物发酵法生产的工业用碱性果胶酶制剂。2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GBT 601化学试剂标准滴定溶液的制备GBT 603化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备(GBT 603-2002，ISO 63531：1982，NEQ)GBT 6543运输包装用单瓦楞纸箱和双瓦楞纸箱GB 6682实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，ISO 3696：1987，MOD)GBT 23527蛋白酶制剂3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。3 1碱性果胶酶alkaline peetinase能催化分解果胶质的，在碱性范围内具有较高活性的酶。3 2碱性果胶酶活力activity ofalkaline pectinase一定时间内，裂解聚半乳糖醛酸生成不饱和聚半乳糖醛酸物质的能力。注：1 g固体酶(或1 mL液体酶)，Y-45、pi-t 90条件下，1 min裂解聚半乳糖醛酸生成相当于1岬01不饱和聚半乳糖醛酸物质，即为一个酶活力单位，以“ug(umL)”表示。4产品分类 根据产品形态不同，可分为固体剂型碱性果胶酶制剂和液体剂型碱性果胶酶制剂。5要求5 1感官要求 应符合表1的规定。表1感官要求要求序号 项目固体剂型液体剂型1色泽白色至黄色 淡黄至黄褐色2外观 颗粒或粉状，无潮解、霉变、结块 液态，可有少量的凝聚物3气味 有特殊发酵气味，无异味有特殊发酵气味，无异味按GBT 23527规定的方法进行测定。6 4细度一按GBT 23527规定的方法进i7检验规则7 1批次的确定、同一品种的均一质量的产品为一7 2取样规7 2 1取样整个灌装过程印，或均匀分布于灌装7 2 2取样l宜的方法t擘证取样具有代表性，保证取样部t司7 2 3成6d 量见表3取样的样本量可按照估计的批量参照曲生产 和(或)相关方确定】不应小于oo g(或200mL)，不足按照比例适表3成品抽样的样本量51一-5004注：批量是指批巾所包含的?单啦尊品数，单位为桶或箱。样本量是指样本中所包含的扫礴囟位数，单位为桶或袋7 3出厂检验、7 3 1产品出，1前应经公司质检部门检验合格，并出具合格证明方可出厂。2201 3新取样进期、执行QBT 44822013附录A (规范性附录) 碱性果胶酶活力的测定A1原理碱性果胶酶一般指聚半乳糖醛酸裂解酶(Polygalacturonatelyase，PGL)，通过反式消去作用切割n-1，4一 糖苷键，在半乳糖醛酸非还原末端形成C。和Cs不饱和键，裂解聚半乳糖醛酸生成不饱和的聚半乳糖醛酸 物质，可用紫外分光光度法在235 nrfl波长下测定聚半乳糖醛酸的不饱和度即生成量，从而计算出来碱性 果胶酶活力。A 2试剂和溶液 本方法中所用试剂，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和符合规定的去离子水。A 2 1pH90甘氨酸一氢氧化钠(含有0 44 Mol儿的CaCID溶液A液：O 8 molL甘氨酸溶液(含有0 44 mmolL的CaCl2) B液：O8 moUL氢氧化钠溶液将A、B两液混合，配f#UpH为9 0的缓冲液，用pH计进行校准，以确保pH在9OOol的范围内，在室 温下放置，一周内有效。A2 2 0 03 molL磷酸溶液将85的磷酸稀释至003 molL后使用，在室温I、放置一周内有效。A2 3聚半乳糖醛酸(果胶酸)溶液 O22聚半乳糖醛酸，用甘氨酸氢氧化钠溶液(A21)，室温搅拌30min，使聚半乳糖醛酸充分溶解后再定容至100 mL。底物溶液在使用之前配制，若用量较少时可用50 mL容量瓶配制。A 3仪器和设备a)实验室常用仪器设备；b)恒温水浴：(4504-_0 1)；c)分光光度计：有10 rflln石英比色皿，在235 nn下测定吸光度；d)磁力搅拌器；e)涡流式混合器；f)酸度计：精确至小数点后2位。A 4分析步骤A 4 1样品制备固态酶制剂：称取酶粉1 g2 g，精确至0000 2 g，先用少量的甘氨酸缓冲液溶解，并用玻璃棒捣研 (或用磁力搅拌器搅拌)，直至固体全部溶解(约10 min15 min)，将上清液小心倾入容量瓶中，沉 渣部分再加入少量缓冲液，如此捣研34次，最后全部移入容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度，摇匀，通过4层纱布过滤，收集滤液供测定用。 液态酶制剂：直接用甘氨酸一氢氧化钠溶液(A21)配制。 最终样品OD值在0206之间。样品空白的制各：取稀释好的酶液1 mL，沸水浴20rain灭活，冷却至室温备用。4QB厂r 44822013A 4 2测定取20 mL磨沙口带塞子的试管按下面的反应顺序进行操作，每个样品3个平行样。在反应过程中，从 JJnA底物开始，向每支试管中加入试剂的时间间隔应一致，45反应15 rain。反应步骤及试剂用量见表A1。表A1反应步骤及试剂用量反应步骤 样品样品空白1加0 2聚半乳糖醛酸底物2 mL2 45预热5 rain3加入待反应液20 uL，混合445水反应1 5 min5依次加入003 mol磷酸试剂3 mL6 加入待反应液20血7 混合8总体积5 02mL9在235 nm下比色4 3结果计算在底物聚半乳糖醛酸(Sigma 81325，纯度95，分子量25 00050 000)浓度02 gmL、温度45、 pH90的条件下，每min裂解聚半乳糖醛酸产生相当于1 lamol不饱和低聚半乳糖醛酸物质所需的酶量，为 一个碱性果胶酶活性单位(u)。在分光光度计235 nm波长处测定样品空白(一o)和样品溶液(爿)的吸 光值。注：Sigma 81325是商品名，给出这一信息是为了给本标准的使用者一个相对标准。如果其他产品能有相同的效果， 则可使用这些等效的产品。样品中的碱性果胶酶活力按公式(A1)计算。l，一(爿一A。)10 6NV，10f4600b矿，式中： 工碱性果胶酶活力，ug(或umL)； A酶反应液的吸光度值：。酶空白样的吸光度值； 稀释倍数；反应体系的总体积，单位为毫升(mL)；n加入稀释后酶液的体积，单位为毫升(mL)；4600不饱和聚半乳糖醛酸在235 nm处的摩尔吸光系数，L tool-IClTI 1： t酶促反应时间(在酶反应的线性范围内)，单位为分钟(min)； b比色杯厚度，单位为厘米(cm)。A 4 4允许差 实验结果以平行测定结果的算术平均值为准。平行测定结果的绝对差值不应超过5。oNNCO寸中ho中华人民共和国 轻工行业标准 碱性果胶酶制剂QBT 4482-201 3*中国轻工业出版社出版发行 地址：北京东长安街6号 邮政编码：100740 发行电话：(010)65241695 网址：http：www chlipcom cn Email：clubc