郑州市不同草坪草品种根部入侵真菌研究.doc

河南农业大学牧医工程学院2011届草业科学专业毕业论文郑州市不同草坪草品种根部入侵真菌研究吴疆（2011届草业科学专业2班）摘要：为了提供郑州地区草坪病害防治和其他冷季型草坪病害防治时的参考。现将郑州地区冷季型草坪草入侵真菌种类进行调查分离研究。通过调查研究确诊郑州地区多年生黑麦草、草地早熟禾、高羊茅3种主要草坪草的植物病原真菌主要是立枯丝核菌、早熟禾德氏霉、香草黑粉菌、半裸镰刀菌、细交链孢、燕麦镰孢、腐皮镰孢、布氏禾白粉菌、匍柄霉、毛酶、青霉9属1 1种。其中早熟禾德氏霉和细交链孢出现的频率较高， 基本都在15 以上， 为优势病原菌；其次是青霉；其他病原菌如布氏禾白粉菌、毛酶和香草黑粉菌出现的频率相对较低 。几种禾本科草坪草根部病害病原真菌优势种类基本一致。关键词：郑州；冷季型草坪草；多年生黑麦草、草地早熟禾、高羊茅；真菌分离率The research of the invasion root diseases of different lawn in zhengzhouWujiangClass 2 of Pratacultural science, Graduated in 2011Abstract :In order to provide zhengzhou region lawn diseases prevention and other cold season type lawn diseases prevention and control reference. Zhengzhou region will now cold season lawn grass species of fungi investigation separation invasion. Through the investigation and study of zhengzhou region. Diagnosed early, Poapcatensis, Festuca arundinace, Lolium perenne, three main lawn grass plant pathogenic fungi main are 9 genera of 11 . there are Drechslera poae（Drechs）Shoem,Vstilago striiformis（Westend）,F.semitectum Berk.et Rav.,Alternarla,Fusarium avenaceum,F.solani,Powdery Mildew of Grasses,Stemphylium,mucor Micheli ex Fries and blue mold . One early Drechslera poae（Drechs）Shoem and Alternarla will appear the frequency is higher , basic are more than 15% .so they are the advantage pathogen. Second is blue mold.The Relative frequency of other bacterial pathogens are low,like Powdery Mildew of Grasses, mucor Micheli ex Fries, Vstilago striiformis（Westend）.The Dominant species of pathogenic fungi of lawn root diseases of Poapcatensis, Festuca arundinace and Lolium perenne are basic agreement.Key words:zhengzhou, Cold season type turf grass, Poapcatensis, Poapcatensis, Festuca arundinace 随着我国草坪业的迅速发展, 病害逐渐成为影响草坪质量、降低草坪利用年限的主要限制因素之一, 轻者可使草坪褪绿、黄化,形成枯死斑块, 影响观赏和利用价值; 重者可使整块草坪迅速衰败, 难以利用。发达国家在50 年代便有草坪草病害专著问世, 特别是在近10 余年来, 草坪草病害研究有了长足发展, 不断有新的著作出版1,2,3。我国有关草坪草病害的研究与报道甚少4,5,6,7。某些野生植物经过驯化、选育可能成为很好的坪用或地被植物, 还有一些则是草坪草病原真菌的寄主, 为病原真菌提供隐匿之处, 成为草坪草病害的重要侵染源。草地早熟禾(Poa pralensis)、多年生黑麦草( olium perenne)、高羊茅(Festuca arundinacea)是我国北方和南北过渡地带冷季型草坪的主要草种在我国种植区域很广。然而，草坪病害已成为严重影响草坪的观赏效果和使用寿命的一个重要问题 。我国一些学者对以上3种冷季型草坪草的真菌性病害已做了些研究报道，其中，报道草地早熟禾真菌性病害8种,报道多年生黑麦草真菌性病害7种，报道高羊茅草真菌性病害5种8,9,10,11,12,13,14,15,16；郑州未见有真菌性病害在3种草上的系统研究报道。为此现将郑州地区冷季型草坪草入侵真菌种类研究总结报道，以供郑州地区草坪病害防治和其他冷季型草坪病害防治时参考。1 材料与方法1.1 试验地点、时间本试验研究于2011年3月至5月间在河南农业大学畜牧楼408进行。1.2 实验草坪草种类和取材 草坪病害标本采自河南农业大学校园，文博广场，郑州市人民公园，郑州市紫金山公园。草坪草种类为：多年生黑麦草，高羊茅，早熟禾混播草坪或单一品种播种草坪。1.3 主要试剂1.4 主要仪器设备1.5 操作过程和方法1.5.1 真菌的分离 于2011年4月1日分别在河南农业大学校园，郑州市人民公园，郑州市紫金山公园取不同草坪草品种根部样品。取样方法：用铁锨将草坪草根部挖出，取好的各品种根样连同土壤装进自封塑料袋，编号后带回实验室置于4C冷藏箱中备测。根据Nan(1995)的方法进行草坪草根部入侵真菌的分离，具体方法是：将取自田间的草坪草品种根样在自来水下冲洗干净，在超净工作台上将其根部切取，于0.3%的次氯酸钠溶液中表面消毒，用无菌水冲洗3次，在无菌滤纸（130烘箱烘烤5h）上吸干沾附水分，然后在无菌滤纸上随机将根系切为2mm左右的根段置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）上培养，每皿10个根段，最后将培养皿移入20黑暗恒温培养箱中进行培养。从第3天起及时统计每皿带菌跟段数，并及时将分离到的真菌菌落分别转接到PDA培养基上于20恒温箱中纯化培养，获得纯培养，供进一步鉴定。待实验结束时，分别计算每皿的根段带菌率（%）及各真菌分离率（%）。 每培养皿的带菌根段数根段带菌率（%）= * 100 每培养皿的总根段数 一种真菌在每皿出现的次数之和真菌带菌率（%）= * 100 每培养皿的总根段数1.5.2 真菌的鉴定 对培养皿的每个真菌菌落，详细观察记载其菌落大小、形态及在PDA培养基上的颜色，逐一制片镜检，根据Barnett H.L和HunterB.B（沈崇尧译）（1997）半知菌属图解、张中义（1988）植物病原真菌学、邵力平等（1992）真菌分类学、王拱辰等（1996）常见镰刀菌鉴定指南、陆家云（2001）植物病原真菌学及Nelson et al.（1983）Fusarium Species ：an Illustrated Manual for Identification 等资料的描述，将其鉴定到种，个别真菌鉴定到属。1.6 数据统计分析用Microsoft Excel 进行数据处理及DPS6.55Patch软件对数据进行完全随机双因素有重复的统计分析和差异显著性测定。用Duncan多重比较检验不同草种及不同区域的差异，P0.05即认为有差异显著性，所有结果均以平均值和标准差来表示。2 结果与分析郑州主要草坪绿地植物病原真菌形态特征：立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）：无性子实体和缺乏孢子，菌核褐色，菌丝体的菌丝褐色。菌丝直角分枝，分枝处缢缩。早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem：菌落铺散状，褐色，表面绒状。孢子棒状、圆柱状、两端钝圆、倒棒状、椭圆形，5O80m1820 tan，淡褐色至深褐色，顶侧生，多数光滑，具假隔膜。香草黑粉菌Vstilago striiformis（Westend)：冬孢子球形飞近球形、偶有形状不规则的，暗榄褐色，壁有细刺，直径911微米。半裸镰刀菌（F.semitectum Berk.et Rav.）：气生菌丝絮状,色泽逐渐变为榛色甚至淡棕褐色, 分生孢子疏散, 孢子大多为3 5 隔, 弯曲,无分生孢子座,细交链孢（Alternarla）：菌落铺展，黑褐色。分生孢子倒棒状、倒梨状、椭圆形、卵形，1830 tan614 tan，褐色、少数透明；分生孢子常聚为长而且分枝链，纵隔数O2，横隔数38。燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）：菌落铺展，粉红色，表面具白色绒毛。大分生孢子镰刀形，足胞明显，菌丝不产生厚垣孢子，偶见大分生孢子。腐皮镰孢（F.solani）：子座蓝色或杂生绿斑，皮革质，菌核状；分生孢子散生或生于假头状体、分生孢子座或粘分生孢子团中，群集时呈褐白色至土黄色，或因子座得颜色而呈绿色至深褐色；大分生孢子梭行，略弯曲，两端圆或略缢缩，稍有或全无柄状小突起，35个隔膜，3隔孢子1950um*3.57um，5隔孢子3268um*47um；厚垣孢子顶生或间生，褐色，单生，球形或洋犁形，单细胞8um*8um，双细胞916um*610um，平滑或有小瘤。小型分生孢子产生在分枝不规则的分生孢子梗上，卵圆、长圆或短杆状，多为单胞很少双细胞。布氏禾白粉菌（Powdery Mildew of Grasses）：菌丝体无色，其上生出直立的分生孢子梗，不分枝，其顶端产生串生的孢子1020个，自顶端向下主次成熟脱落。分生孢子单胞，无色，椭圆形至柱形，大小2033（40）um*1016um，子囊果聚生或散生埋生于菌丝体间，球形或扁球形，出黄色或黄褐色，成熟时暗褐色至近黑色，直径138263um附属丝发育不全，一般不分枝，很短，其长度多为624um，少数可达150um，淡褐色至褐色。匍柄霉（Stemphylium）：孢子多胞，暗色，长圆形或棍棒形，有纵横隔膜，孢子单生，光滑，孢子梗匍匐状，孢子两端钝圆。毛酶（mucor Micheli ex Fries）：分枝顶端生球形孢子囊。囊壁上常带有针状的草酸钙结晶，大多数种的孢子囊成熟后其壁易消失或破裂。囊轴形状不一，囊轴与囊柄相连处无囊托。孢囊孢子球形、椭圆形、或其他形状。孢囊孢子单胞，大多无色、无线状条纹、璧薄而光滑。有性生殖多异宗配合，也有同宗配合的种类。胚子囊柄上无附属物。某些种产生厚垣孢子。青霉（blue mold）：多细胞，营养菌丝体无色、淡色或具鲜明颜色。菌丝有横隔，分生孢子梗亦有横隔，光滑或粗糙。基部无足细胞，顶端不形成膨大的顶囊，其分生孢子梗经过多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，形如扫帚，称为帚状体。分生孢子球形、椭圆形或短柱形，光滑或粗糙，大部分生长时呈蓝绿色。有少数种产生闭囊壳，内形成子囊和子囊孢子，亦有少数菌种产生菌核。通过对采集到的病害标本的病原鉴定，确诊的病原真菌为9属11种。（见表1、2、3 ） 引起草坪草根部病害的病原菌有立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）、早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem、香草黑粉菌Vstilago striiformis（Westend）、半裸镰孢（F.semitectum Berk.et Rav.）、细交链孢（Alternarla）、燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）、腐皮镰孢（F.solani）、布氏禾白粉菌（Powdery Mildew of Grasses）、匍柄霉（Stemphylium）、毛酶（mucor Micheli ex Fries）、青霉（blue mold）十一种病原菌。 引起草坪草早熟禾根部病害的病原菌有：早熟禾德氏霉、布氏禾白粉菌、腐皮镰刀菌青霉、半裸镰孢、香草黑粉菌、细交链孢立枯丝核菌、燕麦镰孢、匍柄霉10种。其中其中早熟禾德氏霉和细交链孢出现的频率较高， 在11 以上， 为优势病原菌。(见表1)引起草坪草高羊茅根部病害的病原菌有：早熟禾德氏霉、立枯丝核菌、香草黑粉菌、半裸镰刀菌、细交链孢、燕麦镰孢、腐皮镰孢、匍柄霉、青霉、毛霉10种。其中其中细交链孢和早熟禾德氏霉、出现的频率较高， 在15 以上， 为优势病原菌。（见表2）引起草坪草黑麦草根部病害的病原菌有：立枯丝核菌、早熟禾德氏霉、香草黑粉菌、半裸镰刀菌、细交链孢、燕麦镰孢、腐皮镰孢、匍柄霉、青霉、毛霉10种。其中其中早熟禾德氏霉、青霉和细交链孢、出现的频率较高， 在13 以上， 为优势病原菌。（见表3）不同草坪草根部的病原菌分离频率大致相同基本无显著性差异，可得出的结论是草坪草根部病害病真菌优势种类基本一致。（见表4）不同地点草坪草根部的病原菌分离频率大致相同基本无显著性差异，可能原因是各地的管理水平，农业管理措施大致相同。（见表5）通过对采集到的病害标本的病原鉴定，确诊的病原真菌为9属11种。 引起草坪草根部病害的病原菌有立枯丝核菌、早熟禾德氏霉、香草黑粉菌、半裸镰孢、细交链孢、燕麦镰孢、腐皮镰孢、布氏禾白粉菌匍柄霉、毛酶、青霉11种病原菌。其中早熟禾德氏霉和细交链孢出现的频率较高， 基本都在15 以上， 为优势病原菌；其次是青霉；其他病原菌如布氏禾白粉菌、毛酶和香草黑粉菌出现的频率相对较低。几种禾本科草坪草根部病害病真菌优势种类基本一致。（见表1，2.，3，4，5）表l 郑州市草坪草早熟禾根部病害病原种类及分离频率The separation frequency and the kind of lawn root disease,pathogen草坪草种类Kind of lawn分离到病原菌种类The king of lawn root disease,pathogen平均分离频率（%）separation frequency(%)早熟禾（Poapcatensis ）早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem15.67布氏禾白粉菌（Powdery Mildew of Grasses）0.33腐皮镰孢（F.solani） 4.00青霉（blue mold）10.00半裸镰孢（F.semitectum Berk.et Rav.）2.00香草黑粉菌Vstilago striiformis（Westend）1.67细交链孢（Alternarla）11.33立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）1.67燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）2.00匍柄霉（Stemphylium）4.33表2郑州市草坪草高羊茅根部病害病原种类及分离频率The separation frequency and the kind of lawn root disease,pathogen草坪草种类Kind of lawn分离到病原菌种类The king of lawn root disease,pathogen平均分离频率（%）separation frequency(%)高羊茅(Festuca arundinace)早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem15.41立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）3.75香草黑粉菌Vstilago striiformis（Westend)2.5半裸镰刀菌（F.semitectum Berk.et Rav.）4.85细交链孢（Alternarla）17.08燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）3.75腐皮镰孢（F.solani）5.41匍柄霉（Stemphylium） 1.67青霉（blue mold）7.50毛霉（mucor Micheli ex Fries） 1.25表3郑州市草坪草黑麦草根部病害病原种类及分离频率The separation frequency and the kind of lawn root disease,pathogen草坪草种类Kind of lawn分离到病原菌种类The king of lawn root disease,pathogen平均分离频率（%）separation frequency(%)黑麦草(Lolium perenne)立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）4.58早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem17.92香草黑粉菌Vstilago striiformis（Westend）0.42半裸镰刀菌（F.semitectum Berk.et Rav.）9.58细交链孢（Alternarla）13.75燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）10.83腐皮镰孢（F.solani）2.08匍柄霉（Stemphylium）2.08青霉（blue mold）14.17毛酶（mucor Micheli ex Fries）0.42表4 不同草坪草根部病害真菌分离物的分离结果The root disease,pathogen separation frequency of different kind of lawn草坪草种类（Kind of lawn）分离率 （%）Lsolating frequnecy（%）燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）半裸镰刀菌（F.semitectum Berk.et Rav.）早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem细交链孢（Alternarla）立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）布氏禾白粉菌（Powdery Mildew of Grasses）早熟禾0.10830.0585b0.10240.0658a0.17920.2262a0.13750.0927a0.04580.0459a0高羊茅0.01880.0142a0.02080.0315a0.10830.1658a0.10420.0975a0.02080.0315a0黑麦草0.03750.0438a0.12080.1536a0.0750.1075a0.17080.2654a0.03750.0366a0草坪草种类（Kind of lawn）分离率 （%）Lsolating frequnecy（%）匍柄霉（Stemphylium）腐皮镰孢（F.solani）青霉（blue mold）黑粉末Vstilago striiformis（Westend）毛霉（mucor Micheli ex Fries）早熟禾0.02080.0160a0.02080.0250a0.14170.0687a0.00420.0083a0高羊茅0.03540.0410a0.03330.0385a0.11040.0614a0.02080.0250a0黑麦草0.01670.2357a0.05420.0975a0.15410.1322a0.0250.0319a0注：同列字母不同表示差异显著(P0.05)。Note: Data in the same column with the different superscripts differ significantly (P0.05)表5 不同地点草坪根部病害真菌分离物的分离结果The root disease,pathogen separation frequency in different area草坪草种类分离率 （%）Lsolating frequnecy（%）（Kind of lawn）燕麦镰孢（Fusarium avenaceum）半裸镰刀菌（F.semitectum Berk.et Rav.）早熟禾德氏霉Drechslera poae（Drechs）Shoem细交链孢（Alternarla）立枯丝核菌（Rhizoctonia solani Kuhn）布氏禾白粉菌（Powdery Mildew of Grasses）文博广场0.03600.0174a0.02220.0255a0.36670.1424b0.08330.0577a0.03330.0441ab0河南农大0.08890.0838a0.12780.0585a0.03890.0536a0.02220.0385a0a0人民公园0.03330.0333a0.05000.0727a0.06110.0192a0.17220.0918a0.72220.0255b0紫金山0.06670.0727a0.12780.1797a0.01670.0289a0.27220.2658a0.03330.0289ab0草坪草种类（Kind of lawn）分离率 （%）Lsolating frequnecy（%）匍柄霉（Stemphylium）腐皮镰孢（F.solani）青霉（blue mold）黑粉末Vstilago striiformis（Westend）毛霉（mucor Micheli ex Fries）文博广场0.03610.0376ab0.04440.0255ab0.05280.0315a0.00560.0096a0a河南农大0.04500.1667b0a0.21110.1347b0.02780.0255a0a人民公园0.11110.0096ab0.1000.0882b0.12780.0254ab0.03330.0333a0.02000.0170a紫金山0a0a0.15000.0441ab0a0.01000.0100a注：同列字母不同表示差异显著(P0.05)。Note: Data in the same column with the different superscripts differ significantly (P0.05)3 讨论3.1 关于郑州地区草坪草真菌病害的预防建议通过实验我们得出郑州地区根部入侵真菌以早熟禾德氏霉和细交链孢出现的频率最高，通过查阅资料，我们了解到早熟禾德氏霉和细交链孢都可能引起的病害是叶融病和叶斑病。因此我建议郑州地区应注重叶融病与叶斑病的预防与防治。适当地给早熟禾草坪浇水和施肥会降低叶融病发生，重要的是要避免过量使用氮肥和傍晚浇水，并去除杂草。防治叶斑病需要使用杀菌剂，当草坪病害开始严重发生和小面积的草坪死亡时使用杀菌剂是最有效的防治方法。谢：本试验研究是在郭玉