糖氮测定方法及曲线表.doc

1 总糖样品检测 过程：吸管吸取均匀原样或离心上清液2.5ml于50ml刻度试管中，加入6.0mol/L盐酸3ml于上述50ml刻度试管中，轻轻摇匀，置沸水浴中加热水解20min,取出冷却，加纯化水（蒸馏）至刻度摇匀，取出1.0ml于容量约100ml的试管中，加入斐林混合试剂15ml充分摇匀，在沸水浴中加热10min,取出冷却，加入6mol/L盐酸4ml轻轻摇匀，用0.1000mol/L硫代硫酸钠滴定至接近终点时（淡黄色），加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml摇匀，继续滴定至蓝色消失为终点，读取硫代硫酸钠的滴定毫升数（VNa2S2O3样）。空白检测：于容量约100ml的试管中，加入斐林试剂15ml充分摇匀，在沸水浴中加热10min，取出冷却，加入6mol/L盐酸4ml轻轻摇匀，用0.1000mol/L硫代硫酸钠滴定至接近终点时（淡黄色），加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml摇匀，继续滴定至蓝色消失为终点，读取硫代硫酸钠的滴定毫升数（VNa2S2O3白）。计算糖（g/ml） VNa2S2O3白- VNa2S2O3样查表2.5250查表值 技术标准 测定误差0.5（g/ml）2 还原糖样品检测： 过程：吸取滤液或离心上清液1.0ml于容量约100ml的试管中，加斐林试剂15ml充分摇匀，在沸水浴中加热10min,取出冷却，加入6mol/L盐酸4ml轻轻摇匀，用0.1000mol/L硫代硫酸钠滴定至接近终点时（淡黄色），加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml摇匀，继续滴定至蓝色消失为终点，读取硫代硫酸钠的滴定毫升数（VNa2S2O3样）。空白检测： 于容量约100ml的试管中，加入斐林试剂15ml充分摇匀，在沸水浴中加热10min，取出冷却，加入6mol/L盐酸4ml轻轻摇匀，用0.1000mol/L硫代硫酸纳滴定至接近终点时（淡黄色），加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml摇匀，继续滴定至蓝色消失为终点，读取硫代硫酸钠的滴定毫升数（VNa2S2O3白）。结果计算还原糖（g/ml）（VNa2S2O3白- VNa2S2O3样）查表 查表值/10技术标准 测定误差0.05（g/ml）3 氨（胺）氮检测测定步骤样品：吸取滤液或离心上清液2ml于250ml三角瓶中，加入“三合一”混合指示剂50ml摇匀。放置2min后，用0.02857mol/L氢氧化钠调至橙黄色，加入18（g/ml）中性甲醛5ml，（氮在0.3以上样品加10ml甲醛）摇匀，放置5min,用0.02857mol/L氢氧化钠氢氧化钠滴至橙红色为终点，记录VNaOH样。空白：于250ml三角瓶中，加入“三合一”混合指示剂50ml摇匀。放置2min后，用0.02857mol/L氢氧化钠调至橙黄色，加入18（g/ml）中性甲醛5ml，（氮在0.3以上样品加10ml甲醛）摇匀，放置5min,用0.02857mol/L氢氧化钠氢氧化钠滴至橙红色为终点，记录VNaOH白。结果计算 氮（g/ml）CV0.014100吸取毫升数0.02857mol/L(VNaOH样-VNaOH白) 0.01410020.02(VNaOH样-VNaOH白) VNaOH（样）样品消耗氢氧化钠标准液的体积（ml）VNaOH（白）空白消耗氢氧化钠标准液的体积（ml）0.02857mol/L氢氧化钠摩尔浓度0.014氮的毫摩尔质量2ml吸样毫升数与糖氮有关的试剂配制及标化1 斐林A-30%(g/ml)CuSO41.1 配制 称取分析纯含五个结晶水的硫酸铜150g，（若为无水硫酸铜应称96g）,于搪瓷杯中加纯化水约300ml，加热并不断搅拌使其溶解，用中速滤纸过滤，加浓硫酸0.5ml，加纯化水至500ml摇匀，放置一天后标化。1.2 标化 用一等2ml吸管吸取2.0ml斐林A于250ml碘瓶中，加50ml纯化水，加30碘化钾5ml,摇匀，再加2ml冰醋酸，摇匀，封水，在暗处放置3min，用0.1000mol/LNa2S2O3滴定，被滴定液成为淡黄色时，加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml，滴至蓝色消失为终点，并将计算后的浓度结果记录在试剂配制记录上。1.3 计算： CV0.2497100 CuSO4（g/ml） 2.0 注：C硫代硫酸钠的摩尔浓度 V消耗硫代硫酸钠的体积（ml）。 0.2497CuSO45H2O的毫摩尔质量，克。 2.0取样体积（ml）。1.4 范围应在29.530.5（g/ml）之间。2 斐林B 2.1 配制 将150g分析纯氢氧化钠和200g分析纯酒石酸钾钠交叉加入溶解到盛有600ml纯化水的试剂瓶中，并不断搅拌，加纯化水至1000ml摇匀。2.2 注意：2.2.1 配制时，先加酒石酸钾钠；2.2.2 加试剂溶解时试剂瓶应放置在水池中进行，以防试剂瓶破裂灼伤人。3 30（g/ml）碘化钾液 配制 将150g分析纯碘化钾加入至1L棕色试剂瓶中，加纯化水振荡至完全溶解，补加纯化水至500ml摇匀。 浓度范围应在2931（g/ml）之间。4 斐林混合试剂4.1 配制 量取斐林A约208ml（205ml-212ml），倒入已加入少量纯化水的5000ml棕色试剂瓶中摇匀，再加入1000ml斐林B摇匀后，加30（g/ml）碘化钾500ml, 加纯化水至5000ml摇匀。4.2 标化 吸取斐林混合试剂15ml，于35190mm的粗试管中，加6mol/L盐酸4ml，摇匀，用0.1000mol/L硫代硫酸纳滴定，当被滴定溶液成为淡黄色时，加入0.5（g/ml）淀粉指示剂1ml摇匀，继续滴定至蓝色消失为终点，读取硫代硫酸钠消耗体积V(ml)，并将消耗体积记录在试剂配制记录上，要求平行标化两个。4.3 范围：硫代硫酸钠消耗体积应在7.37.5ml之间。4.4 注意：混合试剂配制时依次按斐林试剂A,B及KI加入，不得颠倒。5 6.0mol/L盐酸液5.1 配制 于1000ml试剂瓶中加纯化水500ml，慢慢加入化学浓盐酸至1000ml摇匀，放凉至室温后标化。5.2 标化 吸取配制好的近6.0mol/L盐酸5.0ml于50ml容量瓶中，加纯化水至刻度摇匀，取出2.0ml稀释液于250ml三角瓶中，加纯化水30ml,加入0.5（g/ml）酚酞3滴，用0.1000mol/L NaOH滴定至粉红色30s不褪色为终点。并将计算后的浓度结果记录在试剂配制记录上，要求平行标化两个。5.3 精度 0.2mol/L5.4 注意：盐酸液配制时，应将浓盐酸倒入水中，而不得颠倒。6 0.5（g/ml）淀粉指示剂6.1 配制 称取可溶性淀粉0.5g于干净的小烧杯中，加纯化水25ml左右调制成浆，倒入沸腾的75ml纯化水中搅拌，煮沸1min至澄清透明，取下冷却。6.2 注意6.2.1 煮沸时间不宜长6.2.2 出现混浊及长菌后不再继续使用，需重新配制。7 10（g/ml）碳酸钠溶液7.1 配制 称取10g分析纯无水碳酸钠，加纯化水溶解至100ml摇匀。7.2 范围：9.510.58 1.0mol/L硫代硫酸钠液8.1 配制 称取250g含五个结晶水的分析纯硫代硫酸钠和2g分析纯无水碳酸钠加入1L试剂瓶中，加纯化水溶解至1000ml摇匀，放一周后标化。8.2 标化 精密吸取1.0mol/L Na2S2O3液10.0ml于100ml容量瓶中，加水稀释至100ml刻度，摇匀。精密吸取0.01667mol/L KIO3标准溶液10.0ml于250ml碘瓶中，加纯化水30ml和30（g/ml）KI溶液5ml，再加入6.0mol/L HCl 3ml，盖好塞子封水摇匀后，于暗处凡放置3min，用稀释好的硫代硫酸钠滴定，0.5（g/ml）淀粉粉作指示剂，滴至蓝色消失为终点。并将计算后的浓度结果记录在试剂配制记录上，要求平行标化两个。8.3 精度 0.04 mol/L8.4 注意： 加碳酸钠作为碱性稳定剂，保持溶液pH值9109 0.5（g/ml）酚酞9.1 配制 称取2.5g酚酞于95分析纯乙醇中溶解至500ml摇匀。10 18（g/ml）中性甲醛液10.1 配制 量取500ml纯化水于1000ml试剂瓶中，加500ml 36（g/ml）分析纯甲醛摇匀，若混浊可过滤除去，加0.5（g/ml）酚酞3ml,用40（g/ml）氢氧化钠调至微红色。10.2范围17-20%11、三合一指示剂11.1、配制称取0.2g甲基红指示剂溶于200ml 95%乙醇中、称取2.5g酚酞试剂溶于500ml95%乙醇中、量取2.0mol/L盐酸20ml加纯化水至400ml，将上述三者在试剂瓶中混合均匀即成贮备液。量取贮备液110ml，加纯化水至5000ml摇匀，即为混合指示剂，若为直接量取的试剂溶液，在配制记录中应有该试剂溶液的批号；配制过程中直接使用固体试剂，应将固体试剂的批号记录在配制纪录中。11.2注意：试剂瓶要专用。12 0.1%(g/ml)甲基红12.1配制称取0.5g甲基红,加95%分析乙醇中溶解于500ml摇匀。13、0.02875 mol/L氢氧化钠溶液13.1 配制吸取20 mol/L氢氧化钠溶液17ml，加纯化水至1000ml摇匀，至室温。13.2标化精密吸取0.02875 mol/L邻苯二甲酸氢钾标准滴定液10.0ml于250ml三角瓶中，加0.5%酚酞三滴，用待标定的氢氧化钠滴定液滴至微红色30s不褪色为终点，记录滴定体积。平行标定三次，当三次滴定体积均在9.95ml-10.05ml，可进行计算，结果取平均值作为该滴定液的结果。否则，换人标化。13.3精度：0.00014mol/L14、0.1000mol/LNa2S2O3滴定液14.1 配制量取1mol/L Na2S2O3 1000ml，加10%(g/ml) Na2CO3 2ml，加纯化水稀释至10000ml摇匀。14.2标化精密吸取10.0ml 0.01667mol/L碘酸钾标准滴定液于250ml碘瓶中，加纯化水约30ml和30%(g/ml)碘化钾5ml，再加入6.0mol/L盐酸3ml，盖好塞子封水摇匀后，暗处放置3min，用待标定的硫带硫酸钠溶液滴定，0.5%(g/ml)淀粉作指示剂，滴至蓝色刚刚消失为终点，记录滴定体积。平行标定三次，当三次滴定体积均在9.95ml-10.05ml，可进行计算，结果取平均值作为该滴定液的结果。否则，换人标化。14.3精度：0.0005mol/L15、0.01667 mol/L碘酸钾溶液15.1配制分析天平精密称定1051烘箱干燥4h的优级碘酸钾1.7837g(0.0003g)于500ml容量瓶中,加纯化水溶解并稀释至刻度摇匀,新配标准滴定液与上次配制标准滴定液，同时吸取10.0ml，滴定同一硫带硫酸钠滴定液，二者滴定体积不得差0.05ml，将新配标准滴定液转移至棕色磨口试剂瓶中，放入冰箱冷藏室备用。15.2精度：0.0001mol/L15.3注意：纯化水用新鲜煮沸冷却的。16、0.50%糖标准溶液16.1配制 分析天平精密称定801干燥4h的注射级葡萄糖0.5000g于100mlA级容量瓶中，加纯化水溶解并稀释到刻度摇匀。16.2精度：0.0005%(g/ml)17、0.02857 mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液17.1配制分析天平精密称定1051烘箱干燥4h的优级邻苯二甲酸氢钾2.9174g于500ml 容量瓶中，加纯化水溶解并稀释至刻度摇匀，新配标准滴定液与上次配制标准滴定液，同时吸取10.0ml，滴定同一氢氧化钠滴定液，二者滴定体积不得差0.05ml，将新配标准滴定液转移至磨口试剂瓶中，放入冰箱冷藏室备用。17.2精度：0.00014mol/L糖曲线表01234567890.10.320.350.380.410.450.480.510.540.570.610.20.640.670.700.730.770.800.830.860.910.940.30.981.011.041.071.101.141.171.201.241.270.41.31.331.361.391.431.461.491.521.551.590.51.631.661.691.721.751.791.821.851.891.920.61.962.002.032.062.092.122.152.192.222.250.72.282.312.342.372.402.432.472.502.532.560.82.602.632.662.692.722.752.782.812.852.880.92.922.952.983.013.043.073.103.143.173.201.03.243.273.303.333.363.393.423.453.483.521.13.563.593.623.653.683.723.753.783.823.851.23.883.913.943.974.004.034.074.104.134.161.34.204.234.264.294.324.354.384.424.454.481.44.524.554.584.624.654.684.724.754.784.811.54.844.874.904.934.964.995.035.065.095.121.65.165.195.225.255.285.325.355.385.425.451.75.485.515.545.575.605.635.665.705.745.781.85.825.855.885.925.955.986.026.056.086.121.96.166.196.226.256.286.326.356.386.426.452.06.486.516.546.576.616.646.676.706.746.772.16.806.836.866.906.936.966.997.027.057.082.27.127.157.187.227.257.287.327.357.387.412.37.447.477.507.537.567.607.637.667.707.732.47.767.797.827.857.887.927.957.988.028.052.58.088.118.148.178.208.248.278.308.338.372.68.408.438.468.508.538.568.608.638.668.692.78.728.758.788.828.858.888.918.948.979.