酵母菌的计数方法和应用.pdf

微 一 酵 5 6 方敢 母 茵 羲 应 口 邵 江樵 一 计 数 原 理 酵母 菌是一 种在 适宜 条件下进 行 出芽生殖 的 单细胞真 核生物 个体 较大 能在 高倍显微 镜下 清 晰可见 酵母 菌的生长周期短 增殖速度快 在实验 室条件下 用液 体培养基 培养酵母 菌 可 以观察 酵 母菌种群数量随时问变化 的情况 对培养液中的酵 母菌逐个 计数是非常 网难 的 可以采用抽样检测 法 进行估算 利用血球计数板在显微镜下直接进行测 定 观察在一定 的容积 中酵母 菌的个体数 目 然后推 算 出含菌数 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微 生物的一种仪器 在血球计数板 的方格 网上刻有 9 个大方格 只有 中间的一个大方格为计数 室 供微生 物计数用 计 数室刻度有 2种 一种是 2 5中格x 1 6 小格 而另一种为 1 6中格x 2 5小格 如下 图 它们 都是 由 4 0 0 个小格组成 中间的小方格 网是计数室 2 5中格x 1 6小格计数板 l 6中格x 2 5小格计数板 每个计数室边长为 1 m m 则每个计数室面积为 1 m mz 盖上盖玻 片后 载玻片 与盖玻片之间高度 为 0 1 mm 所以每个计数室 的体积为 0 1 m m 计数时 如果使用 1 6中格x 2 5 小格规格 的计数 室 要按对角线位 取左 f 右上 左下 右下 4个 中 格 即 1 0 0小格 的酵母菌数 如果规格为 2 5中格X 1 6小格 的计数板 除 了取其 4个对角方 位外 还需 再数中央的一个 中格f 即 8 0 小方格 的酵母菌数 注 意 计数时中格的边界足双线 要 以内线为边界 每 毫升培养 液 中酵母 菌总数 每小格平 均菌 数x 4 O O x l 0 4 X 菌液稀释的倍数 二 取 样 制 片和 观 察 中的 几 个 要 求 1 看懂血球计数板上板 面数值的含义 I I O 1 m m XB K 2 5 1 同 I4 m m l J A 血 球计 数板的正 面 0 1 mm 两嵴 的表 面比两个平 台的表 面高 即载玻片与盖玻片之间高度 所加菌液的厚度 1 4 0 0 m mL 每个小格 的面积 K B K 一 2 5中的 2 5 计数室有 2 5个中格 2 从试管中吸取出培养液进行计数之前 建议 将试管轻 轻震荡几次 这是为什么 轻轻震 荡几 次是 为了使试 管 中酵母菌 分布 均 匀 减少实验误差 使实验更加 准确 3 制片时为什么不直接向计数室滴加酵母液 因为滴管的 1 滴体积远大于计数室的 0 1 m m 直 接滴加会使盖玻 片浮起 所 以需要摇匀稀释 的酵母 菌液 用无 菌滴管 吸取少量 菌液 从 盖片边 缘滴一 小滴 使菌液 自行 渗入计数室 注意 计数室内不能 有气泡 若有气泡 则重新制片 4 发现视野内酵母菌数 目太多 挤成一堆 无 法 进行计 数 应进行 怎样 的处 理后 才能进行 精确 地 计 数 用 1 1 0 稀释法处理 另取一试管 加入 9 m L的无 菌水 充分振 荡培养液后 量取 1 mL培养液 加入 9 m L无菌水的试管 中 完全混合后 使其稀 释 1 0倍 稀释后 取 0 1 m L进 行计 数 依次进行 稀释到每小 格 3 5个为宜 f 或所计数的几个 中格 内的酵母细胞 总数小于 3 0 0个1 5 对于带芽体的酵母怎样计数 活酵母有出芽生殖现象 若芽体达到母细胞大 小 的一 半时 即可作 为 2个 菌体 计数 若 芽体 小于 母 细胞 一半时为 1 个酵母细胞 6 对于正好位于 中格边框 的个体怎样计数 按左上原则 即位于 中格边 框上 的酵母菌 一般 只计 上方 线及左方线上的菌体 7 血球计 数板使用后如何清洗 血 球计 数板使 用 后 先 用 自来水 浸泡 然 后用 自来水 冲洗 切勿 用 硬物洗 刷 洗 后 自行 晾干或 用 盖玻 片 生 物 吹风机 吹干 或 用 9 5 的乙醇或 无水 乙醇 丙 酮 等 有机溶剂脱水 使其干燥 三 应 用 和巩 固 镛 利 用计数 板 可在 显微镜 下 对微 生 物 细胞进行 直接计数 计数 板是一个特制的可在显 微镜 下观察 的玻 片 样 品就 滴在 计数 室 内 计数 室 由 2 5 x1 6 4 0 0个 小 室 组 成 容 纳 液 体 的 总 体 积 为 0 1 mit t 现将 l mL酵母 菌样 品加 9 mL无菌水稀释 用无 菌吸 管吸取 少许使其 自行渗入 计数 室 盖上盖 玻 片并用滤纸 吸去 多余 菌液 计算板 计数室 现观察到图中所示 a b c d e 5个中格 8 0个 小室 内共有酵母 菌 4 4 0个 则上述 1 m L酵母茵样品 中约有 茵体一个 为获得较为准确的数值 减 少误 差 你认 为可采取的做法是 熊撩因为平均每个小格 的菌体数 4 4 0 8 0 5 5 个 体积 是 0 1 ram S 4 0 0 所 以 酵母 细 胞个 r m L 每小格平均菌数x 4 O O x l 0 X 稀释倍数 5 5 x 4 x 1 0 6 x 1 0 2 2 x 1 0 可采用重复取样求平均 值的 方法获得较为准确 的数值 减少误差 O 1 mm XB K一 2 5 400 ram SHANGHAI a b d e i i T l l I 镣纛 2 2 1 0 对样品重复计数 2 3 次 求平均值 为探究培养液 中酵母 菌种群数量 的动 态变化 甲 乙两 小组 同学 完成 了有 关 实验 定 期采用在显微 镜 下观察并 用血球计数 器计数 血球 计数 器是 一种 专 门用于计 算较 大单 细胞微 生 物的 一 种仪 器 它的形状如 图 A所 示 它的规 格有 两种 一 种 叫希利格 式 1 6 x 2 5型 另一种 叫 汤麦式 2 5 x 1 6型 如 图 B所 示 汤麦式 希利格式 图 A 血球计数板外观 图 侧视图 俯视 图 图 B 血球计数板数室放大 图 已知每毫升培养液 中酵母菌细胞 的计算公式 为 酵 母 细 胞 个 数 L 鑫 蒙 警 5 7毫 劈 材 略 5 8 两组 同学根 据计 算数 据绘制 出本组 酵母 菌细 胞 数 目变化 曲 线 图 如 图 C所 示 细胞密度 根 据 上 述 内容 回 答 下 列 问题 1 上述计 算公式 中 b值的含义是 2 两组同学在计数 时 将原液稀释成样液 取 出如 图 A所示的血球 计数器 盖好 清洁的 吸取 混合均 匀的样 液注入血球计数 器的计数 室 内 装满整个计数 室 若观察到有气泡 应 3 你 在做 该 实验 时 选 择 血球 计 数 板 的规 格 和相应 的计算酵母 菌细胞 个数 时的 a 值分别是 一 c 4 图 C中 甲组与 乙组酵母 茵中数 量达到的 最大值时培养液中酵母菌的增殖方式以一 为主 分析 甲组 曲线该数值 比 乙组大的原 因可能是 一 5 若 某个 同学在整 个实验过程 中 直接从静 置的培养瓶中取培养原液计数 我们说他的做法是 错 误 的 正确 的方 法是 和 纛撬每小格的体积是 O 1 m m 1 ra m 1 ra m 0 1 m m 一个计数室 由 4 0 0个小格 组成 所 以 每毫升 培养液是 中酵母 菌总数 每 小格平均 菌数 4 0 0 x 1 0 4 x 菌液稀释 的倍数 制片时 因为滴管的 1 滴 体积远 大于计数室的 0 1 m l n 3 需从盖片边缘滴一小 滴 使 菌液 自行 渗入计数室 若 有气泡则重新制片 计数室的规格有两种 一种叫希利格式 1 6 x 2 5型 另 一种 叫汤麦式 2 5 x 1 6型 具体实验 过程必定 是 其 中的一种 酵母菌数量最大 表明是在适宜 条件 下进行 出芽 生殖 并且用液体培养基培养 酵母 菌 种群 的增长 受培养基 的成分 空气 温度 酸碱度等 因素的影响 当培养到后期时 原液中的酵母密度 会变得很高 使计数室中酵母细胞太多 挤成一堆 无法进行计数 此时需要适当稀释 二 膏餐素 1 酵母菌原液稀释倍数 2 盖玻 片 重新 制片 3 希利格式 1 6 x 2 5型 1 0 0或汤麦式 2 5 x 1 6型 8 0 4 出芽生殖 或无性 生殖 A组的培 养温度 或 p H或有 更多的培养液 更适合酵母菌的繁殖 环境阻力小 5 摇匀培养液 后取样培养后期的样液应稀释后再计数 镧 3 某生物兴趣小组开展探究实验 课 题是 培养液 中酵母 茵种群数量与时间的变化关 系 实验 材料 菌种和无 菌马铃薯培 养液 试 管 血 球计数板 2 ra m 2 mm方格 滴管 显微镜等 酵母 菌的显微 计数 方法 血球 计数板 是 带有 微 小方格 刻度的玻璃 片 用于在显微镜 下对血细胞 微生物的计数 将含有酵母茵的培养液滴在计数板上 计数一 个小方格 内的酵母菌数量 再以此为根据 估算试管中 的酵母菌总数 连续观察 7 d 并记 录每天的数值 根据 以上叙述 回答下列问题 1 根据所学知识 该课题 的实验假设是 开始 在 资 源和 空 间无 限多的环 境 中 酵母 菌呈 J 型增 长 随 着时 间的推移 由于 S 型增 长 酵母茵呈 2 在 吸取培养液制片前 要 轻轻震 荡几次试 管 目的是 如 果一 个小格 内酵母 菌过 多 难以数清 应当采取的措施是 对于压在 中格界线上的酵母菌 应 当怎样计数 一 3 请设计表格 处理