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HBSAg Anti HCV确认试验及HCV感染诊断现状 王菊英 确认试验 特异抗原确认 中和试验 HBSAg 特异抗体确认 免疫印迹或荧光抗体试验 抗 HCV 假阳性 为什么要做确认试验 导致假阳性原因 Cut off的设定内源性干扰外源性干扰试剂质量和实验操作的不精密度 CUTOFF CUTOFF值是鉴别样品 作为判断特定疾病 状态或被测量存在或不存在的界限的量值 测量结果高于临界值判断为阳性 低于临界值判断为阴性 测量结果接近临界值判断为非确定性 临界值的选择决定检验的诊断特异性和诊断敏感性 CUTOFF及灰区的确定 5000份非HBV感染者血清标本均值0 06标准差0 019Cut off0 11 0 06 2 58 0 019 2000份随机选取的HBsAg阳性血清标本均值1 50标准差0 628Cut off0 08 1 50 2 58 0 628 使用正态分布u检验 根据99 5 单侧的可信限 可分别得到决定反应性和非反应性的两个Cut off值 处于该两个Cut off值之间的值归为 灰区 HBsAg 确认实验或追踪检测来确定 CUTOFF值验证 验证方法1 采用临界浓度的标准品 可要求厂家提供 连续检测20次 95 的结果落在临界范围即可 验证方法2 连续统计一段时间的检测结果 处于临界范围的结果比例小于5 即可 验证方法3 临界值 20 浓度样本阴阳性符合率 95 即可验证方法4 阴 阳性样本的CUTOFF值验证 阳性样本的CUTOFF值验证 选择弱阳性 CUTOFF值 20 附近 新鲜血清或质控血清共120份 分3 5批3 5天进行检测 计算均值 X 标准差 SD CUTOFF验证值为 X 3s 设定的CUTOFF值小于验证的CUTOFF值 即为验证通过 阴性样本的CUTOFF值验证 选择60份健康人新鲜血清和60份目标标志物阴性而有其他免疫标志物阳性的患者新鲜血清共120份 分3 5批3 5天进行检测计算均值 X 标准差 SD CUTOFF验证值为 X 3SD设定的CUTOFF值大于验证的CUTOFF值 即为验证通过 内源性因素 类风湿因子补体高浓度的非特异性免疫球蛋白异嗜性抗体某些自身抗体 外源性因素 标本溶血 血红素基团有类似过氧化物的活性标本污染 细菌的内源性酶会产生非特异性干扰标本贮时间过长 IgG可聚合成多聚体 导致本底过深 甚至造成假阳性标本凝固不全 残留部分纤维蛋白原试剂盒原材料的纯度 组合 来源等也会造成结果的假阳性或假阴性 其它因素 测定方法的不精密度实验操作 样本采集 样本前处理 HBsAg的确认 HBsAg测定中的问题 敏感性 献血员中所发现的HBsAg携带者最低含量为0 2ng ml 而国产ELISA试剂的敏感性水平多为0 5ng ml左右 钩状效应 血液中HBsAg含量最高2000000ng ml 而HBsAg各种检测方法的线性检测范围上限均不超过50ng ml 定量测定 Dane颗粒中存在乙肝病毒 但其仅占所有HBsAg的0 2 所以HBsAg和乙肝病毒之间缺乏正相关 特异性 目前的各种检测方法均有出现假阳性结果的可能性 这种情况在弱反应性的标本中更为常见 HBsAg确认试验的基本原理 在阳性样本中加入抗HBs特异抗体试剂 与相应未加入特异抗体的相同样本的检测结果作比较 如果出现A值明显降低 则表明样本含有HBsAg 即为真正的阳性 A值没有明显降低的 则为假阳性 HBsAg确证试验 强生HBsAg确认试剂盒 试剂 1 HBsAg确认试剂盒2小瓶冻干确认抗体试剂2瓶标本稀释液2 配套使用强生HBsAgES试剂包 强生HBsAg确认试剂盒操作步骤 1 分别取200 l经HBsAgES反复测试有反应性的标本血清或血浆 肝素抗凝 加到两个样品杯中 做标记A和B2 加50 l样本稀释液于A中 加50 l试剂抗体于B 混匀3 均置于15 30摄氏度孵育至少15分钟 最多不超过8小时 孵育超过2小时应该给样品杯加上防蒸发盖 4 在样本编程中选取HBCON 分别编辑特殊ID给A和B 点击开始运行标本 强生HBsAg确认试剂盒结果判定 为什么国内不做HBsAg确认试验 进口确认试剂太贵没有国产确认试剂HBsAg阳性样本太多 Anti HCV的确认 抗 HCV检测和结果报告程序 HCV筛查及确认试验结果的解释 HCV感染诊断现状 检测方法均存在缺陷 筛查 非特异性反应 窗口期长易漏检 抗体检测确证 费用昂贵 不确定结果 抗原检测 敏感度低 漏检 HCVRNA检测 一次检测结果不能排除 本实验室针对弱反应结果样本采取措施 离心后复检 与临床联系 输血史 吸毒史 婴儿母亲进行抗体检测 检测报告添加备注 已复检 检测结果S CO值低 呈弱反应性 建议检测HCV RNA 一月后复检Anti HCV Anti HCV为初筛试验 单独不能作为诊断依据 患者定期复检结果稳定性 S CO值 0 9阴性结果稳定 95 在0 01 0 09之间S CO值在0 9 8 8有少部分有反应性可转阴S CO值 8 8有反应性结果稳定 CV较大 肾内科18例抗 HCV有反应性及临界值病例HCVRNA 肝功检测结果 追踪验证结果 有反应性 阴性 追踪验证结果 有反应性 有反应性 追踪验证结果 阴性 有反应性 殷切期望 正确解读抗 HCV检测报告重视抗 HCV追踪验证沟通 医生的正确解释和进一步的确认实验 可减少不必要的医疗纠纷 0 9 S Co值 1 0为边界值即 灰区 结果 说明书 1 0 S Co值 8 8为弱反应性结果 可能存在HCV感染S Co 8 8为有反应性 阳性的可能性 95 仍有5 的可能性是假阳性 S Co 26 0为有反应性 100 为阳性 有 反应性 Reactiv